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趋化因子受体CXCR3在狂犬病病毒感染中的作用研究

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中国农业大学学报 2024年第11期 120-130页

作者：廖曦蓝黄伟涛罗永文罗均郭霄峰华南农业大学兽医学院复旦大学生命科学学院

为分析CXC趋化因子受体3(CXC chemokine receptor 3, CXCR3)在狂犬病病毒（Rabies virus, RABV）感染中发挥的作用，首先将RABV强毒株CVS-11和弱毒株HEP-Flury分别滴鼻感染小鼠，以实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qPCR)检测不同时间点RABV感染的小鼠脑内CXCR3相关配体的转录水平，以及蛋白质印迹法（Western blot）检测CXCR3的蛋白表达水平；此外，将C57BL/6小鼠和CXCR3-/-小鼠分别滴鼻感染RABV街毒株GD-SH-01、强毒株CVS-11和弱毒株HEP-Flury，检测小鼠血清中和抗体水平及记录临床表现，同时以qPCR检测鼠脑白细胞分化抗原、细胞因子和RABV基因组等的转录水平。结果表明：1）感染强毒株CVS-11可极显著提高鼠脑趋化因子CXCL9、CXCL10和CXCL11的转录水平（P0.05），但显著增加了弱毒株HEP-Flury感染后第9天鼠脑内的病毒载量（P0.05）。综上，趋化因子受体CXCR3通过调控鼠脑免疫应答，即CD4、IL-2和IL-6的表达以抵抗RABV感染，但其不是唯一的决定因素。本研究为预防和治疗狂犬病提供理论基础。

关键词：狂犬病病毒 CXC趋化因子受体3 致病机理

茶树精油对断奶仔猪生长性能、抗氧化能力、免疫功能以及肠道屏障功能的影响

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动物营养学报 2024年第4期36卷 2246-2261页

作者：唐歆李晓冰田颖李鸿喜李佳铠曹翀邱龙新龙岩学院生命科学学院福建省预防兽医学与生物技术高校重点实验室龙岩364000 福建农林大学动物科学学院(蜂学学院) 福州350002

本试验旨在研究茶树精油(TTO)对断奶仔猪生长性能、抗氧化能力、免疫功能及肠道屏障功能的影响。选取21日龄断奶仔猪150头,随机分为5组,每组3个重复,每个重复10头。对照组饲喂基础饲粮,各TTO组分别在基础饲粮中添加25、50、100、200 mg/... 详细信息

本试验旨在研究茶树精油(TTO)对断奶仔猪生长性能、抗氧化能力、免疫功能及肠道屏障功能的影响。选取21日龄断奶仔猪150头,随机分为5组,每组3个重复,每个重复10头。对照组饲喂基础饲粮,各TTO组分别在基础饲粮中添加25、50、100、200 mg/kg TTO,饲喂28 d后测定其生长性能指标、血浆抗氧化和免疫指标。而后根据生长性能与血浆抗氧化和免疫指标结果选择对照组和50 mg/kg TTO组进行肠黏膜抗氧化与免疫指标的检测,苏木精-伊红(HE)染色切片观察肠道组织结构,16S rDNA测序分析肠道菌群结构。结果显示:1)各TTO组的料重比均极显著低于对照组(P0.05),但以50 mg/kg TTO组料重比最低。2)与对照组相比,25、50、100、200 mg/kg TTO组血浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量极显著升高(P<0.01),丙二醛(MDA)的含量极显著降低(P<0.01)。3)50、100、200 mg/kg TTO组血浆中免疫球蛋白G(IgG)的含量极显著高于对照组(P<0.01);25、200 mg/kg TTO组血浆中免疫球蛋白M(IgM)的含量极显著高于对照组(P<0.01),同时100 mg/kg TTO组显著高于对照组(P<0.05)。4)与对照组相比,50 mg/kg TTO组回肠绒毛隐窝比极显著升高(P<0.01)。5)与对照组相比,50 mg/kg TTO组十二指肠、回肠黏膜中还原型谷胱甘肽(GSH)的含量极显著升高(P<0.01),十二指肠、空肠黏膜中GSH-Px的含量极显著升高(P<0.01),回肠黏膜中超氧化物歧化酶(SOD)的含量极显著升高(P<0.01),空肠、回肠黏膜中MDA的含量极显著降低(P<0.01)。6)50 mg/kg TTO组十二指肠及回肠黏膜中分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的含量极显著高于对照组(P<0.01)。7)在门水平上,50 mg/kg TTO组十二指肠中厚壁菌门(Firmicutes)的相对丰度显著高于对照组(P<0.05),变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度显著低于对照组(P<0.05);在属水平上,50 mg/kg TTO组十二指肠和回肠中梭状芽孢杆菌属(Clostridium)的相对丰度极显著高于对照组(P<0.01),十二指肠、回肠和盲肠中克雷伯氏菌属(Klebsiella)的相对丰度均显著低于对照组(P<0.05);50 mg/kg TTO组在氨基酸代谢、辅因子和维生素代谢、萜类化合物和聚酮酸的代谢等功能上较对照组极显著增强(P<0.01)。综上可知,在饲粮中添加TTO可以提高断奶仔猪的生长性能,提升机体的抗氧化能力和免疫功能,增强肠道屏障功能,提升仔猪的健康水平。

关键词：茶树精油断奶仔猪生长性能抗氧化能力肠道屏障

非洲猪瘟病毒结构蛋白与宿主蛋白相互作用研究进展

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畜牧兽医学报 2024年

作者：张素孙丽芳李兰兰吴琳娇陈磊清吴允昆福建师范大学生命科学学院

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）感染所引起的一种家猪和各种野猪急性出血的传染性疾病，由于高发病率和高致死性的特性对全球家猪养殖产业造成严重的经济损失。ASFV编码蛋... 详细信息

非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）感染所引起的一种家猪和各种野猪急性出血的传染性疾病，由于高发病率和高致死性的特性对全球家猪养殖产业造成严重的经济损失。ASFV编码蛋白高达150多种，而ASFV结构蛋白作为病毒粒子的主要组成部分，在协助病毒吸附入侵宿主细胞、促进子代病毒颗粒复制、组装以及释放等过程发挥着重要作用。研究表明，病毒结构蛋白可通过与宿主蛋白的相互作用，促进病毒入侵、增殖、影响病毒毒力以及拮抗宿主免疫反应等。因此，本文通过概述ASFV结构蛋白与宿主蛋白的相互作用及其机制，为研究ASFV的致病机制以及ASF的防治提供参考。

关键词：非洲猪瘟病毒结构蛋白宿主蛋白蛋白相互作用

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母猪繁殖力基因遗传育种研究进展

畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 438-450页

作者：钟欣张晖张充刘小红中山大学生命科学学院广州510275

我国是世界上最大的生猪生产国和猪肉消费国,但仍存在着母系猪繁殖力普遍较低的重要问题,选育具有高繁殖性状的母系猪已成为当前研究的焦点和热点。目前,已明确多个影响母猪产仔数的已知基因,包括雌激素受体(estrogen receptors,ESR)基... 详细信息

我国是世界上最大的生猪生产国和猪肉消费国,但仍存在着母系猪繁殖力普遍较低的重要问题,选育具有高繁殖性状的母系猪已成为当前研究的焦点和热点。目前,已明确多个影响母猪产仔数的已知基因,包括雌激素受体(estrogen receptors,ESR)基因、泌乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因、视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein 4,RBP4)基因、瘦素(leptin,LEP)基因、备解素(complement factor b,BF)基因、胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein,IGFBP)基因、连环蛋白阿尔法样蛋白1(catenin alpha-like protein 1,CTNNAL1)、无翼型MMTV结合位点家族10B(wingless-type mmtv integration site family member 10B,WNT 10B)基因、转录因子12(transcription factor 12,TCF12)基因、无精症样删除基因家族(deleted in azoospermia-like,DAZL)、无名指蛋白4(ring finger protein 4,RNF4)基因以及骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)家族等基因。这些基因通过复杂的相互作用网络影响母猪的繁殖力性状表现,但少数几个基因的位点效应对母猪的繁殖力表型影响较为有限,因此在母猪繁殖性能方面的育种遗传进展相对较小。全基因组关联分析(genome-wide association studies,GWAS)技术基于全基因组策略,利用覆盖全基因组的遗传标记信息,分析整个基因组中的全部遗传变异多态性作为分子遗传标记,并与表型和系谱信息进行对照和统计分析,从而加速了重要单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点、数量性状位点(quantitative trait locus,QTLs)和候选基因的发现过程。全基因组选育(genomic selection,GS)利用系谱信息、表型数据以及全基因组的SNP分型信息,为母猪繁殖性能等低遗传力性状的育种工作提供了更快速、准确的个体全基因组估计育种值(genomic estimated breeding value,GEBV),从而显著加快了育种遗传进展。

关键词：母猪繁殖力遗传育种基因全基因组关联分析全基因组选择

转录组测序筛选牛卵泡发育偏差和优势卵泡选择相关基因

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畜牧兽医学报 2024年

作者：周宏泰闫俊蓉李鹏飞山西农业大学生命科学学院

旨在筛选牛卵泡发育偏差和优势卵泡（dominant follicle， DF）选择相关基因。本研究选取6头10月龄健康海福特青年母牛，同期发情后平均分为两组，第一组采集第一个卵泡发育波出现偏差前第一大卵泡（the largest follicle at predeviat... 详细信息

旨在筛选牛卵泡发育偏差和优势卵泡（dominant follicle， DF）选择相关基因。本研究选取6头10月龄健康海福特青年母牛，同期发情后平均分为两组，第一组采集第一个卵泡发育波出现偏差前第一大卵泡（the largest follicle at predeviation， PDF1）和第二大卵泡（the second largest follicle at predeviation， PDF2），第二组采集第一个卵泡发育波出现偏差后第一大卵泡（the largest follicle at onset of deviation， ODF1）和第二大卵泡（the second largest follicle at onset of deviation， ODF2），提取卵泡颗粒细胞（granule cells， GCs）RNA进行转录组测序，测序结果对照参考基因组，PDF1-VS-PDF2组筛选影响卵泡发育偏差的差异表达基因（differentially expressed genes， DEGs），ODF1-VS-ODF2组、ODF1-VS-PDF1组和ODF1-VS-PDF2组筛选影响优势卵泡选择的DEGs并进行GO和KEGG富集分析、PPI分析筛选关键基因，通过RT-qPCR和Western Blotting验证筛选基因的准确性。结果显示，PDF1-VS-PDF2组发现220个DEGs，179个上调，41个下调，GO和KEGG分析显示富集在PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路与卵泡发育相关，PPI显示MYC、BRCA1、EZH2、ARID1A、SMARCA4为中枢基因；ODF1-VS-ODF2组发现184个DEGs，93个上调，91个下调，GO和KEGG分析显示富集在PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路、mTOR信号通路、TNF信号通路和Jak-STAT信号通路与卵泡发育相关，PPI显示POLR2A、FOS、HIF1A、KIT、SOCS3为中枢基因；ODF1-VS-PDF1组和ODF1-VS-PDF2组共发现837个DEGs，360个上调，477个下调，GO和KEGG分析显示富集在mTOR信号通路、TNF信号通路、TGF-β信号通路、PI3K-Akt信号通路和孕激素(Progestin， P4)介导的卵母细胞成熟通路与卵泡发育相关，PPI显示HIF1A、RPS9、COL1A2、PIK3R1、COL4A1、ITSN1、GNB1、RPL3、ESPL1、CUL7为中枢基因。RT-qPCR结果表明BRCA1、ARID1A、EZH2在PDF1表达量高于PDF2，POLR2A在ODF1表达量高于ODF2。Western Blotting结果表明BRCA1和EZH2在PDF1表达量高于PDF2。本研究筛选出MYC、BRCA1、EZH2、ARID1A、SMARCA4可能在牛卵泡发育偏差发挥作用，POLR2A、FOS、HIF1A、KIT、SOCS3、RPS9、COL1A2、PIK3R1、COL4A1、ITSN1、GNB1、RPL3、ESPL1和CUL7可能在牛DF选择过程发挥作用，试验证实筛选的基因翻译为蛋白质发挥作用。研究结果为探索牛卵泡发育偏差和优势卵泡选择基因调控理论奠定基础。

关键词：牛转录组卵泡发育基因

利用1型糖尿病小鼠模型分析犬成纤维生长因子21的长效降糖效果

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 770-784页

作者：郭云鹏牛顿李爽姜兴昊张立夏任桂萍尹杰超东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030

本研究分别将Fc片段、穿膜肽R11和穿膜肽TAT与犬成纤维生长因子21(canine fibroblast growth factor 21,cFGF-21)相连构建了3种融合蛋白,旨在探讨cFGF-21对1型糖尿病的长效降糖作用。用链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,随后分别用... 详细信息

本研究分别将Fc片段、穿膜肽R11和穿膜肽TAT与犬成纤维生长因子21(canine fibroblast growth factor 21,cFGF-21)相连构建了3种融合蛋白,旨在探讨cFGF-21对1型糖尿病的长效降糖作用。用链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病小鼠模型,随后分别用cFGF-21、R11-cFGF-21、Fc-cFGF-21和TAT-cFGF-21治疗。治疗分为3个阶段:1)每天给药一次(第1~14天);2)每3 d给药一次(第15~29天);3)每5 d给药一次(第30~44天)。在治疗过程中,每隔3 d检测一次小鼠血糖,在每阶段结束时检测试验小鼠12 h内血糖波动。试验结束前,对所有小鼠进行口服葡萄糖耐量试验。通过ELISA法检测小鼠血清中炎症相关因子IL-10、IL-1β、IL-17A和抗炎因子IL-10表达水平。通过Real-time PCR检测肝、脂肪、肠和肾等组织中的糖代谢相关因子的转录水平。试验结束后,对所有小鼠进行糖基化血红蛋白(HbA1c)、血脂四项和肝功能、血清胰岛素和HbA1c检测并对小鼠胰腺组织进行病理分析。结果显示:在治疗的第一阶段,与cFGF-21组相比,TAT-cFGF-21降糖效果明显降低,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组没有显著差异;在治疗的第二、三阶段,与cFGF-21组相比,TAT-cFGF-21组血糖明显上升,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组可在给药3~5 d内能将血糖控制在更低的水平。治疗8周后,与cFGF-21组相比,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组口服葡萄糖耐量(OGTT)和血脂紊乱明显改善,糖化血红蛋白(HbA1c)接近正常水平,肝损伤明显修复,而TAT-cFGF-21组与cFGF-21组没有明显差距。此外,ELISA检测和HE染色结果显示,相较cFGF-21和TAT-cFGF-21组,R11-cFGF-21和Fc-cFGF-21组氧化应激和炎症反应得到显著改善且胰岛β细胞修复效果明显。经R11和Fc修饰的cFGF-21长效降糖能力的显著增加,而TAT-cFGF-21长期的降血糖能力较弱。此外,经R11和Fc修饰的cFGF21能显著改善氧化应激、胰腺炎症和脂质代谢,修复肝损伤和胰岛β细胞,治疗效果明显优于cFGF21。

关键词：犬糖尿病成纤维细胞生长因子-21 cFGF-21 Fc 穿膜肽长效性

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牛支原体体外肺精准切片感染模型的建立

畜牧兽医学报 2024年第10期 4638-4645页

作者：张慧路豆昆张怡秋赵刚陈颖钰陈曦胡长敏郭爱珍西南民族大学畜牧兽医学院华中农业大学动物医学院宁夏大学生命科学学院

本研究旨在建立一种牛支原体体外感染模型-牛肺组织精准切片（precision-cut lung tissue slices, PCLS）感染模型。采集2月龄犊牛新鲜肺脏，经低熔点琼脂糖灌注、固定后，使用振动切片机制成厚度为250μm的牛PCLS,利用牛支原体野毒株HB... 详细信息

本研究旨在建立一种牛支原体体外感染模型-牛肺组织精准切片（precision-cut lung tissue slices, PCLS）感染模型。采集2月龄犊牛新鲜肺脏，经低熔点琼脂糖灌注、固定后，使用振动切片机制成厚度为250μm的牛PCLS,利用牛支原体野毒株HB0801（P1）及其传代致弱株P150以108CFU·孔-1的剂量进行体外感染，分别经qRT-PCR、乳酸脱氢酶（LDH）细胞毒性试验、3D荧光显微镜全景扫描、免疫组化等技术评估牛支原体在PCLS中的感染效果。结果显示正常PCLS在体外培养72 h后，细胞活力可维持在60%以上，组织形态学观察PCLS边缘清晰，肺泡结构正常；qRT-PCR检测牛支原体强、弱菌株在PCLS中的基因拷贝数，发现二者均可存活和增殖，免疫组化观察牛支原体主要定位于PCLS的肺泡腔周围以及支气管间隙，LDH试验检测发现牛支原体强、弱菌株感染18 h出现细胞毒性反应，二者均可诱导PCLS产生促炎因子IL-1β和IL-8,且强毒株诱导水平显著高于弱毒株（P<0.05）。本研究初步建立了牛支原体PCLS体外感染模型，提供了一种可模拟牛支原体体内感染试验的离体模型，为今后研究牛支原体与宿主相互作用提供借鉴和参考。

关键词：牛支原体肺组织精准切片模型体外感染炎性反应

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基于CRISPR技术构建发光噬菌体及其在大肠埃希菌鉴定中的应用

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中华检验医学杂志 2024年第4期47卷 437-443页

作者：李民伟颜菁李航逸郝治云倪忠胡朝阳王笑蓉许梦寒王驰李芮冰王成彬温州医科大学检验医学院生命科学学院温州325035 剑桥大学兽医系英国剑桥CB30ES 解放军总医院第一医学中心检验科北京100853 江苏大学生命科学学院镇江212013

目的构建针对大肠埃希菌的重组发光噬菌体(HT7),并评估其对大肠埃希菌的鉴定能力。方法首先通过基因工程构建小向导RNA表达质粒pCRISPR-sg(1~10)和PFN-1000同源重组质粒菌株,并用双层平板筛选切割效率最高的小向导RNA(sgRNA);采用同源... 详细信息

目的构建针对大肠埃希菌的重组发光噬菌体(HT7),并评估其对大肠埃希菌的鉴定能力。方法首先通过基因工程构建小向导RNA表达质粒pCRISPR-sg(1~10)和PFN-1000同源重组质粒菌株,并用双层平板筛选切割效率最高的小向导RNA(sgRNA);采用同源重组与规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)系统联合介导的基因编辑技术,将Nanoluc萤光素酶基因整合入T7噬菌体10A基因下游的非编码区,并成功构建发光噬菌体HT7;通过噬菌斑实验和液体扩增实验评估HT7噬菌体与T7噬菌体生物特性差异;此外用2022年1月至2023年6月解放军总医院第一医学中心临床采集分离的51株大肠埃希菌、20株肺炎克雷伯菌、14株金黄色葡萄球菌、6株屎肠球菌、5株粪肠球菌、3株鲍曼不动杆菌和1株铜绿假单胞菌评估HT7噬菌体的检测专一性和检出限。结果构建的10个CRISPR靶向切割系统中,sgRNA8靶标的切割效率最高,成斑效率为0.18;噬菌体经pCas9/pCRISPR/PFN-10003质粒系统3轮重组筛选后,PCR验证均为2798 bp的重组噬菌体条带,说明成功构建了HT7噬菌体。重组噬菌体在裂解效率(P<0.001)、一步生长曲线(P=0.001)、感染复数(P=0.031)的生物特性分析中,均有显著差异,裂解暴发点和对数生长节点均延长了10 min,最佳感染复数为0.1;临床样本测试,可识别裂解6株大肠埃希菌,其余菌株均不裂解,4.5 h内可检出低于10 CFU/ml的病原菌。结论成功开发了一种高效的噬菌体基因编辑系统,并成功构建发光噬菌体HT7,该噬菌体在4.5 h内能特异性检测出低于10 CFU/ml的大肠埃希菌,且对其他菌株无裂解作用,显示出良好的检测专一性和低检出限。

关键词：细菌噬菌体基因编辑大肠杆菌萤光素酶类同源重组

一株鸡源唾液乳杆菌的分离鉴定及其对育雏早期蛋鸡肠道健康的影响

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 4161-4171页

作者：于秀菊胡燕姣刘佳悦王海东朱芷葳范阔海王蓉蓉段承昊石佳炜杨丽华山西农业大学动物医学学院太谷030801 山西农业大学生命科学学院太谷030801

旨在从健康海兰褐鸡肠道中分离鉴定乳酸菌,并研究其对育雏早期蛋鸡肠道健康的影响。本研究采用细菌培养技术、16S rRNA测序和牛津杯扩散法,分离、筛选、鉴定可产细菌素的乳酸菌菌株,检测其对高温、pH和胆盐的耐受性;动物试验选取240只1... 详细信息

旨在从健康海兰褐鸡肠道中分离鉴定乳酸菌,并研究其对育雏早期蛋鸡肠道健康的影响。本研究采用细菌培养技术、16S rRNA测序和牛津杯扩散法,分离、筛选、鉴定可产细菌素的乳酸菌菌株,检测其对高温、pH和胆盐的耐受性;动物试验选取240只1日龄健康、体重相近的海兰褐鸡,随机分为4组,每组60只鸡,包括对照组(C)、低剂量唾液乳杆菌CL09组(L)、中剂量唾液乳杆菌CL09组(M)和高剂量唾液乳杆菌CL09组(H),研究该乳酸菌菌株对育雏早期蛋鸡生长性能、免疫器官指数及肠道健康相关指标的影响。试验周期为21 d。结果表明:分离菌为可产细菌素的革兰阳性菌,结合16S rRNA鉴定结果将其命名为唾液乳杆菌CL09,该菌的无细胞上清液可抑制大肠杆菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌和李斯特菌的生长。该菌的耐受温度为60℃,具有耐酸、耐胆盐的特性。动物试验结果显示:与对照组相比,灌服唾液乳杆菌CL09可以增加雏鸡体重和免疫器官重量;H组十二指肠、空肠的隐窝深度变化最为显著,L和M组十二指肠绒毛高度显著增加,且H组十二指肠绒毛呈“波浪形”;M和H组肠道干细胞标记基因Lgr 5和Bmi1表达水平升高极显著(P<0.001);H组的黏膜屏障基因Zo-1和Ocln的mRNA表达水平升高极显著(P<0.01);M组潘氏细胞标记性基因Lyz的mRNA表达水平最高。L、M和H组的杯状细胞标记基因Muc的mRNA表达水平均升高,且差异极显著(P<0.01)。综上所述,源自健康海兰褐鸡肠道的唾液乳杆菌CL09,通过促进雏鸡肠道干细胞分化为潘氏细胞和杯状细胞,增加绒毛高度,降低隐窝深度,从而增大肠道的黏膜面积。该菌具有调节育雏早期鸡肠道健康的良好特性,可作为益生菌的备选菌株。

关键词：蛋鸡唾液乳杆菌肠道健康绒毛高度隐窝深度