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一株林麝源丙二酸盐克罗诺杆菌的分离鉴定及其全基因组序列分析

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微生物学通报 2024年第10期 4212-4229页

作者：丁慧伍茜程建国吴杰龚杭刘洁杨凯惟周磊付文龙罗燕四川农业大学动物医学院四川养麝研究所

【背景】克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)作为食源性致病菌，常出现在新生儿患病的报道中，目前尚无在林麝中检出克罗诺杆菌的报道。【目的】对分离自林麝肾脏的一株丙二酸盐克罗诺杆菌(C. malonaticus)进行鉴定和全基因组测序，为林麝相... 详细信息

【背景】克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)作为食源性致病菌，常出现在新生儿患病的报道中，目前尚无在林麝中检出克罗诺杆菌的报道。【目的】对分离自林麝肾脏的一株丙二酸盐克罗诺杆菌(C. malonaticus)进行鉴定和全基因组测序，为林麝相关疾病的预防治疗奠定基础。【方法】将病原菌分离纯化后，依次进行生化试验、药敏试验、小鼠致病性试验及全基因组测序，以测序结果为基础，进一步分析群体进化、物种分型及基因功能注释。【结果】该病原菌经过平均核苷酸一致性(average nucleotide identity, ANI)分类和系统发育树分析可知属于丙二酸盐克罗诺杆菌，生化结果符合克罗诺杆菌的一般特性。该菌株被命名为Dcc0527，对部分喹诺酮类药物、酰胺醇类药物、氨基糖苷类药物和β-内酰胺类药物敏感，对部分磺胺类药物和大环内酯类药物耐药；全基因组测序结果表明该菌株包含1个环状染色体和4个环形质粒，全基因组大小为1 257 547 026 bp,G+C含量为57.08%，多位点序列分型显示该菌株属于ST211序列类型。在菌株Dcc0527基因组内存在阿尔法霉素、氟喹诺酮、四环素等多种耐药基因，同时该菌株还存在Type IV pili、kpsD、iroN等多种毒力基因。菌株Dcc0527基因组的染色体和质粒中还存在3个比较完整的噬菌体区域。【结论】从林麝肾脏分离得到一株丙二酸盐克罗诺杆菌，并获得了该ST211型菌株的全基因组序列，为林麝细菌性疾病的防治提供参考。

关键词：林麝丙二酸盐克罗诺杆菌全基因组序列分析

不同基因编辑类型对FGF5基因编辑羊羊毛性状的影响

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新疆农业科学 2024年第3期61卷 734-741页

作者：岳成广李忠慧刘晨曦贺三刚马海叶刘璇李婧平李文蓉新疆畜牧科学院生物技术研究所乌鲁木齐830011 新疆维吾尔自治区动物生物技术重点实验室乌鲁木齐830011 新疆农业大学动物科学学院乌鲁木齐830052

【目的】分析不同基因编辑类型对成纤维生长因子5(FGF5)基因编辑细毛羊羊毛性状的影响,为开展基因编辑细毛羊的羊毛性状遗传参数评估提供理论依据。【方法】收集181只FGF5周岁基因羊,分析编辑细毛羊羊毛自然长度、伸直长度、羊毛纤维直... 详细信息

【目的】分析不同基因编辑类型对成纤维生长因子5(FGF5)基因编辑细毛羊羊毛性状的影响,为开展基因编辑细毛羊的羊毛性状遗传参数评估提供理论依据。【方法】收集181只FGF5周岁基因羊,分析编辑细毛羊羊毛自然长度、伸直长度、羊毛纤维直径和剪毛量等性状的数据。【结果】FGF5基因编辑细毛羊羊毛自然长度平均值为10.49 cm,变异系数为11.82%。FGF5-InDel和FGF5-HDR基因编辑细毛羊羊毛自然长度和剪毛量均极显著高于野生型(PT)的羊毛自然长度和伸直长度均极显著长于wt(P野生型(P<0.01)。【结论】不同基因编辑类型的FGF5基因编辑细毛羊均可显著提高羊毛自然长度和剪毛量,可利用表型性状突出的后代组建核心编辑羊群体,促进FGF5基因编辑细毛羊选育扩繁。

关键词： FGF5基因编辑细毛羊编辑类型羊毛自然长度剪毛量基因型突变类型

林麝缓慢葡萄球菌和大肠杆菌混合感染的病原分离鉴定及致病性

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微生物学通报 2024年第10期 4195-4211页

作者：吴杰伍茜程建国付文龙周磊刘洁丁慧罗燕杜荣胜张海玫四川养麝研究所四川农业大学动物医学院

【背景】林麝是我国特殊经济动物，细菌性疾病在圈养麝种群中高发，研究相关病原对林麝疾病防控具有重要意义。【目的】探究导致1例林麝死亡的病原微生物的耐药性和致病性。【方法】对死亡林麝进行细菌分离鉴定、药敏试验、小鼠致病性... 详细信息

【背景】林麝是我国特殊经济动物，细菌性疾病在圈养麝种群中高发，研究相关病原对林麝疾病防控具有重要意义。【目的】探究导致1例林麝死亡的病原微生物的耐药性和致病性。【方法】对死亡林麝进行细菌分离鉴定、药敏试验、小鼠致病性试验、耐药基因及毒力基因检测。【结果】该林麝为缓慢葡萄球菌（Staphylococcus lentus）和大肠杆菌（Escherichia coli）混合感染，两株分离菌分别命名为菌株23HYSL和菌株23HYEC。药敏试验显示菌株23HYSL对氨曲南、林可霉素、四环素和磺胺异噁唑耐药，而菌株23HYEC为产超广谱β-内酰胺酶的多重耐药大肠杆菌。小鼠致病性试验显示菌株23HYSL的LD50为1.39×10～8 CFU，菌株23HYEC的LD50为8.97×10～7 CFU，病理切片结果显示混合感染组的脾脏病变程度更严重，并且混合感染能帮助菌株23HYEC在小鼠的心脏和肝脏定殖。两种菌均检出耐药基因sul2、tetA、tetC、blaTEM和blaCTX-M。同时检出菌株23HYSL携带毒力基因clfa，菌株23HYEC携带包括astA在内的5个毒力基因。【结论】分离到林麝源缓慢葡萄球菌，同时进行了该菌与混合感染的astA+大肠杆菌的耐药性和致病性研究，为相关疾病的防治和合理用药提供了依据。

关键词：林麝缓慢葡萄球菌大肠杆菌致病性

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兔出血症病毒2型浙江株鉴定及致病性研究

农业生物技术学报 2024年第11期 2649-2661页

作者：郝方姣季权安黄叶娥崔雪梅胡子喆宋厚辉鲍国连刘燕浙江农林大学动物科技学院.动物医学院浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江农林大学动物科技学院·动物医学院

兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus type 2, RHDV2)严重威胁家兔(Oryctolagus cuniculus)养殖生产安全。本研究旨在鉴定浙江省某肉兔养殖场疑似RHDV2感染疫情的病原，明确分离株的致病特性及其对兔肠道菌群结构的影响... 详细信息

兔出血症病毒2型(Rabbit hemorrhagic disease virus type 2, RHDV2)严重威胁家兔(Oryctolagus cuniculus)养殖生产安全。本研究旨在鉴定浙江省某肉兔养殖场疑似RHDV2感染疫情的病原，明确分离株的致病特性及其对兔肠道菌群结构的影响。首先采集病死兔肝脏样品，采用RT-PCR技术扩增RHDV2的衣壳蛋白基因VP60 (capsid protein)，通过测序及系统进化树分析进行病原鉴定；进一步通过动物回归试验明确分离毒株的感染和致病特性，采用16S r DNA测序技术分析空白对照组和RHDV2攻毒组的组间盲肠菌群结构变化。结果显示，测序及同源性分析证实RT-PCR扩增获得的目的片段为RHDV2的VP60部分序列(GenBank No. PQ215520)，与国内的RHDV2毒株(GenBank No. OQ570964.1)同源，一致性为98.66%。动物回归试验显示，50日龄幼兔在感染48 h内全部死亡，呈现口鼻出血等典型临床症状；组织切片染色可见肝脏组织结构紊乱，肝实质内有明显的肝细胞片状坏死，肺泡壁有较多炎性细胞侵润，出现大范围肺水肿；提取感染兔肝脏RNA，经RT-PCR扩增及测序，发现目的片段与发病兔场的分离毒株一致。基于16S rDNA的高通量测序结果表明，RHDV2感染组家兔的肠道菌群结构和相对丰度与健康对照组比较存在显著差异，在属水平上筛选出13个差异显著的物种，表明RHDV2感染改变了兔肠道原有的微生态。本研究首次对浙江省RHDV2分离株进行了致病性研究，为RHDV2防控和诊治提供参考依据。

关键词：兔出血症病毒2型(RHDV2) RT-PCR 病理学观察肠道菌群

使用优化的信号肽和密码子在Expi293F细胞中高表达重链抗体可变区抗体

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生物工程学报 2024年

作者：谭书桢董虎潘颂佳穆素雨陈永杰张韵孙世琪郭慧琛中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃农业大学动物医学院甘肃省病原生物学基础学科研究中心

重链抗体可变区抗体（variable domain of heavy-chain antibody， VHH）已被广泛用于药物治疗、诊断和研究。大肠杆菌是生产VHH最常用的表达系统，但可能会导致VHH的生物活性降低。哺乳动物细胞是目前最理想的VHH表达宿主之一。本研究... 详细信息

重链抗体可变区抗体（variable domain of heavy-chain antibody， VHH）已被广泛用于药物治疗、诊断和研究。大肠杆菌是生产VHH最常用的表达系统，但可能会导致VHH的生物活性降低。哺乳动物细胞是目前最理想的VHH表达宿主之一。本研究分别通过优化VHH的信号肽（signal peptide， SP）和密码子，以期提高VHH在Expi293F细胞中的产量。VHH1-Fc被用于筛选SP，通过酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）筛选出的SP IFN-α2分泌效果最佳；通过提高基因的GC3和GC含量，VHH1的产量提高了约1倍，且不明显影响VHH1与A型塞内卡病毒（Senecavirus A， SVA）的结合活性；其他5种重组VHHs分别连接SP IFN-α2并进行密码子优化，其平均产量大于191.6 mg/L。此外，这些VHHs在培养上清中具有高纯度和高回收率。本研究证实了SP IFN-α2和密码子优化可以在Expi293F细胞高效表达VHH，为VHH的大规模生产提供参考。

关键词：重链抗体可变区抗体信号肽密码子优化表达

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绿色农药-农用喷洒油的研究与应用

环境昆虫学报 2024年第1期46卷 43-51页

作者：陈逢浩欧阳革成广东省科学院动物研究所广东省动物保护与资源利用重点实验室广东省野生动物保护与利用公共实验室广州510260 华南农业大学植物保护学院广州510642

农用喷洒油是一类不易引起害虫抗性的绿色农药,通常用于防控体型微小的害虫与害螨。在现代害虫管理中,农用喷洒油尤其是植物源喷洒油的有效性与可协调性越来越受到认可,可有力推动其它生物防治或绿色防控技术的规模化应用,显著提高防治... 详细信息

农用喷洒油是一类不易引起害虫抗性的绿色农药,通常用于防控体型微小的害虫与害螨。在现代害虫管理中,农用喷洒油尤其是植物源喷洒油的有效性与可协调性越来越受到认可,可有力推动其它生物防治或绿色防控技术的规模化应用,显著提高防治效果与拓展应用范围。本文概述了农用喷洒油研究与应用的背景和意义、历史与现况及其组成成分、作用方式与机理,并展望了农用喷洒油的应用前景。

关键词：植物源农药矿物源农药非挥发性油物理防控抗药性微小害虫害螨

猪繁殖与呼吸综合征病毒GS15株NSP2蛋白多位点缺失病毒的拯救与体外生长特性分析

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微生物学报 2024年第7期64卷 2307-2322页

作者：张兴民张婧孙普李娇阳崔占鼎李国秀王健李平花袁红李坤曹轶梅付元芳李冬赵志荀曾巧英卢曾军甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所/兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室甘肃兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心甘肃兰州730046

【目的】本实验室前期在高致病性毒株PRRSV/GSWW/2015的感染性克隆上,拯救获得了非结构蛋白(non-structural protein 2,NSP2)第519-565位和第628-747位氨基酸双缺失的工程病毒(r GS15-?2)。本研究旨在在双缺失病毒的感染性克隆上,构建... 详细信息

【目的】本实验室前期在高致病性毒株PRRSV/GSWW/2015的感染性克隆上,拯救获得了非结构蛋白(non-structural protein 2,NSP2)第519-565位和第628-747位氨基酸双缺失的工程病毒(r GS15-?2)。本研究旨在在双缺失病毒的感染性克隆上,构建拯救获得NSP2三个位点缺失的工程病毒。【方法】在前期双缺失病毒感染性克隆的基础上,利用融合PCR方法分别构建缺失NSP2第323-364位和第372-433位优势抗原表位的两个3个位点缺失的重组质粒。经脂质体介导,转染Marc-145细胞拯救病毒,通过电子显微镜观察、免疫荧光实验、测定病毒滴度、绘制生长曲线等方法对缺失病毒的生长特性进行分析。【结果】成功获得拯救病毒r GS15-?3-1和r GS15-?3-2。电子显微镜下可以观察到直径大小为50-80 nm的病毒粒子;免疫荧光实验检测表明,拯救病毒与亲本病毒GS15一致,都能检测到PRRSV N蛋白表达;缺失区域RT-PCR扩增鉴定,拯救病毒传至40代缺失标记稳定存在;r GS15-△3-1与r GS15-△3-2病毒滴度分别为2.00×10^(6.0)TCID_(50)/m L和2.25×10^(5.8)TCID50/m L,与亲本病毒相比病毒滴度差异显著(P研究通过对PRRSV基因2型非结构蛋白NSP2多位点缺失病毒的体外生长特性分析,为研制新型PRRSV标记疫苗奠定了基础,也为猪繁殖与呼吸综合征的防控提供新的策略。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆非结构蛋白2(NSP2) 缺失标记生长特性

氨氮对幼鲫鳃组织及其非特异性免疫指标的影响

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淡水渔业 2024年第5期54卷 59-68页

作者：胡雅菲贾欣耿志远陈晨张月刘少贞宋晶山西农业大学动物科学学院山西晋中030801 山西大学应用生物学研究所太原038000

为探究氨氮对鲫(Carassius auratus)幼鱼的慢性毒性效应,以及对鳃组织结构和非特异性免疫指标的影响,本实验选用健康幼鲫,随机分为8组,分别饲养于自来水(对照组)与NH 4Cl质量浓度为160~720 mg/L的水环境中,进行急性毒性实验,得出96 h半... 详细信息

为探究氨氮对鲫(Carassius auratus)幼鱼的慢性毒性效应,以及对鳃组织结构和非特异性免疫指标的影响,本实验选用健康幼鲫,随机分为8组,分别饲养于自来水(对照组)与NH 4Cl质量浓度为160~720 mg/L的水环境中,进行急性毒性实验,得出96 h半致死浓度(LC 50)和安全浓度(SC),并以此为基础进行慢性毒性实验,NH 4Cl质量浓度分别为0、6、15、24 mg/L,实验期为60 d。结果显示:(1)氨氮对幼鲫96 h的LC 50为289.29 mg/L(95%置信区间264.08~316.90 mg/L),SC为28.90 mg/L。(2)鳃组织的病理变化主要为鳃丝充血,鳃小片变短变粗、卷曲,泌氯细胞增生,柱状细胞变形,氨氮对鳃组织的损伤程度具有剂量效应和时间效应。(3)各氨氮组的鳃组织酸性磷酸酶(ACP)活性高于对照组但差异不显著,氨氮组的碱性磷酸酶(AKP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性均显著高于对照组。随着暴露时间延长,相同浓度组ACP、AKP酶活性呈升高趋势,ALT、AST、SOD、CAT呈先升高后降低趋势。综上结果表明,氨氮胁迫会抑制幼鲫生长,损伤鳃组织,并伤害抗氧化系统和非特异性免疫功能。

关键词：氨氮鲫(Carassius auratus) 鳃组织结构非特异性免疫

非洲猪瘟病毒D1133 L蛋白单克隆抗体抑制其复制

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畜牧兽医学报 2024年第2期55卷 854-859页

作者：闫文倩侯景杨金柯郝雨杨行史喜绢张大俊别鑫恬陈国辉陈玲玲何路赵美玉赵思越郑海学张克山中国农业科学院兰州兽医研究所兰州大学动物医学与生物安全学院动物疫病防控全国重点实验室兰州730000 甘肃省病原生物学基础学科研究中心兰州730046

旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)D1133L单克隆抗体对病毒复制的调控效应。在制备了ASFV D1133L单克隆抗体的基础上,将ASFV和不同浓度的单克隆抗体同时接种于PAMs,通过红细胞吸附试验(HAD 50)、实时荧光定量PCR(RT... 详细信息

旨在探究非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)D1133L单克隆抗体对病毒复制的调控效应。在制备了ASFV D1133L单克隆抗体的基础上,将ASFV和不同浓度的单克隆抗体同时接种于PAMs,通过红细胞吸附试验(HAD 50)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹(Western blot)和荧光观察分析D1133L单克隆抗体对病毒复制的影响。结果显示:不同浓度的单克隆抗体在不同的感染时间对ASFV的病毒效价(P所述,D1133L单克隆抗体可显著抑制ASFV的复制,试验结果在ASFV药物靶点的选择上具有一定的参考意义。

关键词：非洲猪瘟病毒 D1133 L蛋白单克隆抗体