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响应面优化绿色产色链霉菌发酵产阿维拉霉素

中国食品学报 2017年第9期17卷 108-115页

作者：李红梅陈敏浙江工商大学食品与生物工程学院杭州310018 杭州睿岂生物科技有限公司杭州310018

对绿色产色链霉菌生产阿维拉霉素的发酵条件进行优化。在单因素试验的基础上,用Plackett-Burman试验设计筛选影响阿维拉霉素发酵的重要参数。先采用最陡爬坡试验逼近阿维拉霉素最大生产区域,再利用Box-Behnken设计确定重要参数的最佳水... 详细信息

对绿色产色链霉菌生产阿维拉霉素的发酵条件进行优化。在单因素试验的基础上,用Plackett-Burman试验设计筛选影响阿维拉霉素发酵的重要参数。先采用最陡爬坡试验逼近阿维拉霉素最大生产区域,再利用Box-Behnken设计确定重要参数的最佳水平。试验结果表明:油酸添加量、油酸添加时间、培养基初始p H值对阿维拉霉素的合成影响显著。通过响应面分析得到一元二阶方程,对方程求解得到优化的参数值,即油酸添加量0.43%,添加时间71.28 h,培养基初始p H 6.98。在该参数值下进行阿维拉霉素发酵,阿维拉霉素产量达1 207.76μg/m L,较对照提高了109.97%,与模型预测值差异不显著,说明建立的模型是有效的。

关键词：油酸氧载体阿维拉霉素响应面

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固态胶原基材料在医疗器械中的应用

中国组织工程研究 2025年第16期29卷 3503-3512页

作者：胡张捷张宝贯张智武浙江崇山生物制品有限公司浙江省杭州市311100 上海市光明中学上海市200021

背景:胶原蛋白是细胞外基质的主要构成成分,具有稳定的三螺旋结构特性、良好的生物学特性和可加工性,是一种理想的生物医用材料,已被广泛应用于医疗器械领域。目的:分析固态胶原基材料的主要产品形态、技术特点、制备工艺和临床应用。方... 详细信息

背景:胶原蛋白是细胞外基质的主要构成成分,具有稳定的三螺旋结构特性、良好的生物学特性和可加工性,是一种理想的生物医用材料,已被广泛应用于医疗器械领域。目的:分析固态胶原基材料的主要产品形态、技术特点、制备工艺和临床应用。方法:应用计算机检索PubMed和中国知网数据库收录的有关固态胶原基材料在医疗器械领域应用的研究,英文检索词为“collagen,collagen sponge,collagen membrane,collagen powder,collagen gel,decellularized extracellular martix,medical device,clinical application”,中文检索词为“胶原,胶原海绵,胶原膜,胶原粉,胶原凝胶,脱细胞基质,医疗器械,临床应用”。根据纳入与排除标准对所有文章进行初筛后,保留质量和相关性较高的92篇文献进行综述。结果与结论:以动物源来源固态胶原基材料作为医疗器械制备材料,已在原料提取、制备工艺及临床应用等方面取得显著进展,海洋生物胶原和重组胶原增加了胶原来源的可选择性。固态胶原基医疗器械产品类型丰富,制备方法多样,其中交联改性是提升材料性能的重要途径,值得被深入研究。在产品开发思路上,固态胶原基医疗器械产品研究正朝着立体化和仿生化方向发展,与其他生物材料、药物复合的研究也展现出巨大潜力。尽管国内已有不少胶原基医疗器械应用于临床,但在人工皮肤、软骨修复和神经损伤修复等领域的产品开发仍显不足,需在技术和产业化上进一步突破与创新。

关键词：胶原蛋白固态胶原生物学特性医疗器械制备工艺临床应用

交联透明质酸钠凝胶对近距离放射治疗中危及器官的隔离防护作用

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中国组织工程研究 2025年第4期29卷 700-706页

作者：刘建建张燕崔志伟王东方刘旭杨盛林柴谦刘凤林华熙生物科技股份有限公司山东省济南市250000 山东省食品药品审评查验中心山东省济南市250000

背景:交联透明质酸钠凝胶具备良好的力学性能、生物相容性与降解性,可作为肿瘤放射治疗中的隔离防护材料,用于保护危及器官免受多余辐照剂量的损伤。目的:探究交联透明质酸钠凝胶在近距离放射治疗中减少危及器官受照剂量等方面的安全性... 详细信息

背景:交联透明质酸钠凝胶具备良好的力学性能、生物相容性与降解性,可作为肿瘤放射治疗中的隔离防护材料,用于保护危及器官免受多余辐照剂量的损伤。目的:探究交联透明质酸钠凝胶在近距离放射治疗中减少危及器官受照剂量等方面的安全性及有效性。方法:取周龄相同、体质量相近的无特定病原体级昆明小鼠作为实验对象,共16只,采用随机数字表法分为实验组与对照组,每组8只。在实验组小鼠背部皮下植入125Ⅰ放射性粒子,随后环绕放射性粒子周边注射交联透明质酸钠凝胶,在对照组小鼠背部皮下仅植入125Ⅰ放射性粒子。注射完成后,采用螺旋CT扫描测量放射性粒子与表皮的距离,采用辐射剂量仪检测体表辐射剂量;注射后10周内,观察小鼠生长状态及存活率、皮肤放射损伤情况及凝胶存留量。结果与结论:①螺旋CT扫描显示植入的凝胶相对集中,并且使放射性粒子与表皮之间产生有效的间隔距离。实验组小鼠体表辐射剂量明显低于对照组(P<0.01)。②在实验观察期内,两组小鼠均存活,对照组小鼠在实验观察后期出现明显烦躁等不稳定表现,部分实验组小鼠出现类似行为;两组小鼠日摄食量无明显变化,体质量呈现相同的增长趋势。植入放射性粒子后两组小鼠均出现不同程度的放射性皮肤损伤,自注射后第23天开始至实验结束,实验组小鼠皮肤放射损伤评分均低于对照组(P<0.01)。植入后第10周,实验组6只小鼠皮下无明显凝胶残留,2只小鼠皮下存在极少量散在的凝胶状样品。③结果表明,注射交联透明质酸钠凝胶可通过物理占位作用增加125Ⅰ放射性粒子放射靶区和靶外危及器官的间隔空间,有效降低危及器官的受照剂量,对危及器官起到隔离防护作用。

关键词：交联透明质酸钠凝胶 125I粒子危及器官隔离防护动物实验近距离放射治疗

滇黄精多糖对肥胖小鼠脂代谢紊乱及脑功能损伤的改善作用

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食品科学 2025年第1期46卷 64-73页

作者：许云聪闫巧娟朱春华杨绍青李后江江正强中国农业大学食品科学与营养工程学院食品生物工程重点实验室(中国轻工业联合会)北京100083 中国农业大学工学院北京100083 怒江昂可达生物科技开发有限公司云南怒江673100 北京捷安特技术服务有限公司北京101403

为研究滇黄精多糖(Polygonatum kingianum polysaccharides,PKP)对肥胖小鼠脂代谢紊乱及脑功能损伤的作用效果,采用酶法辅助提取的PKP干预肥胖小鼠12周,观察小鼠体质量和血脂变化以及肝脏和脂肪组织的病理形态变化,并通过行为学检测小... 详细信息

为研究滇黄精多糖(Polygonatum kingianum polysaccharides,PKP)对肥胖小鼠脂代谢紊乱及脑功能损伤的作用效果,采用酶法辅助提取的PKP干预肥胖小鼠12周,观察小鼠体质量和血脂变化以及肝脏和脂肪组织的病理形态变化,并通过行为学检测小鼠自主活动性和焦虑样行为变化,进一步检测肝脏、脂肪、血清和脑组织炎症水平及脑组织病理形态变化。结果表明:PKP(1500 mg/kg)减少高脂饮食诱导肥胖小鼠的体质量增量29.6%,有效改善血脂水平异常及肝脏和脂肪的组织形态,并促进肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体α(46.0%)和脂肪解偶联蛋白1表达(59.0%),同时明显增加肥胖小鼠的自主活动性并改善焦虑行为;肝脏和脂肪F4/80表达水平分别减少55.0%和67.2%,血清中促炎因子白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α水平分别减少22.9%、44.6%和7.8%,而抗炎因子白细胞介素10水平增加27.1%;大脑海马和皮层区离子钙结合衔接分子1表达水平分别减少16.0%和28.6%,改善了海马和皮层区域结构损伤。PKP有效改善了肥胖小鼠脂代谢紊乱及脑功能损伤,为其作为抗肥胖及改善肥胖诱导脑损伤的功能性食品配料提供了科学依据。

关键词：滇黄精多糖肥胖焦虑行为脑损伤

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杭州地区春大白菜豫艺迎春栽培技术

长江蔬菜 2025年第01期 24-25页

作者：陈永锋张帅王建科杭州富惠现代农业有限公司河南豫艺农业科技发展有限公司

简述了杭州地区春大白菜种植现状，包括春大白菜生产总体情况，春大白菜品种豫艺迎春特征特性及栽培技术，为杭州地区大白菜产业发展提供参考。

关键词：杭州地区春大白菜栽培

普通烟草PYL基因家族成员鉴定及干旱胁迫下基因表达分析

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核农学报 2025年第1期39卷 47-58页

作者：扈佳慧徐腾航刘杰王雨果刘红峰王世泽余世洲王丰贵州大学农学院贵州贵阳550025 贵州省烟草科学研究院贵州贵阳550081 河北科技师范学院农学与生物科技学院河北秦皇岛066004 贵州省烟草公司贵阳市公司贵州贵阳550001

PYR/PYL/RCAR(PYL)蛋白作为脱落酸(ABA)的直接受体,在ABA信号转导途径中发挥着关键调控作用。为探究PYL基因在烟草中的系统发育和表达模式,本研究利用生物信息学手段在普通烟草品种K326全基因组范围内进行了鉴定分析,并利用实时荧光定量... 详细信息

PYR/PYL/RCAR(PYL)蛋白作为脱落酸(ABA)的直接受体,在ABA信号转导途径中发挥着关键调控作用。为探究PYL基因在烟草中的系统发育和表达模式,本研究利用生物信息学手段在普通烟草品种K326全基因组范围内进行了鉴定分析,并利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测了各基因在遭受干旱胁迫0、1、3、6、12、24、36和48 h的基因表达量。结果共鉴定到26个烟草PYL基因,依据系统发育和结构特点可划分为3个亚家族(Ⅰ~Ⅲ),成员数目分别为9、11和6。蛋白理化性质分析结果表明,所有烟草PYL蛋白都呈亲水性,氨基酸长度在173~586 aa之间,相对分子量在16 763.26~65 709.39 Da之间,等电点(pI)在4.73~9.05之间。顺式作用元件分析结果发现,烟草PYL基因启动子区含有MYB、NAC、WARKY、TCP、ZF-HD等逆境胁迫响应相关元件。基因表达结果显示,烟草PYL基因在遭受干旱胁迫后,除NtPYL8、NtPYL9、NtPYL17和NtPYL21基因外、其余基因表达量整体表现为上调趋势,但各亚家族成员间基因表达具有明显差异。其中亚家族Ⅱ中NtPYL1、NtPYL2、NtPYL4基因和亚家族Ⅲ中NtPYL25基因在遭受干旱胁迫6~12 h后基因表达量达到最高,且相对表达量较0 h上升显著,可作为烟草应答干旱胁迫的重要候选基因。本研究为进一步开展烟草候选抗旱PYL基因功能研究及育种利用奠定了基础。

关键词：烟草 PYL家族干旱胁迫基因表达分析脱落酸

体外培养时间对诱导多能干细胞源性心肌细胞成熟度的影响

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中国组织工程研究 2025年第25期29卷 5304-5310页

作者：熊挺淋张丽莎王德伟曹海平杨燕南充市中心医院心内科•川北医学院第二临床医学院四川省南充市637000 四川驰鼎盛通生物科技有限公司四川省成都市610041

背景:研究已证实诱导多能干细胞能够定向分化为心肌细胞,但目前很少有分化心肌细胞成熟度的研究报道。目的:探讨延长诱导分化时间对诱导多能干细胞源性心肌细胞的形态、肌节长度、双核细胞含量、心脏基因表达、心脏蛋白表达和线粒体功... 详细信息

背景:研究已证实诱导多能干细胞能够定向分化为心肌细胞,但目前很少有分化心肌细胞成熟度的研究报道。目的:探讨延长诱导分化时间对诱导多能干细胞源性心肌细胞的形态、肌节长度、双核细胞含量、心脏基因表达、心脏蛋白表达和线粒体功能的影响。方法:使用骨形态发生蛋白4、CHIR 99021和IWR1诱导多能干细胞向心肌细胞分化,分别在第20天和第40天收集分化心肌细胞;采用RT-PCR和免疫荧光检测分化心肌细胞中心脏基因和蛋白的表达水平;LAS X图像分析软件分析分化心肌细胞形态和肌节长度;MitoTracker Green FM线粒体染色检测线粒体总量,JC-1线粒体染色检测线粒体膜电位。结果与结论:与第20天的分化心肌细胞相比,第40天的分化心肌细胞的细胞周长和肌节长度更长、细胞面积更大(P<0.05);多核细胞比例从第20天的16%左右大幅上升至第40天的29%左右(P<0.05);第40天的分化心肌细胞具有与原代心肌细胞更相近的基因表达水平,SERCA2A、Cx-43和α-MHC基因表达水平明显高于第20天的分化心肌细胞(P<0.05);与第20天的分化心肌细胞相比,第40天的分化心肌细胞中TNNT2和α-MHC蛋白表达水平较高,线粒体分布密度更大,且功能性线粒体数量增加(P<0.05)。结果表明:延长诱导分化时间,可以通过增加肌节长度和功能性线粒体数量以及升高心脏基因和蛋白表达水平而提高分化心肌细胞的成熟度。

关键词：诱导多能干细胞分化心肌细胞线粒体心脏基因心脏蛋白成熟度

抗丁香酚单克隆抗体的研制及胶体金试纸条检测方法的建立

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核农学报 2025年第02期 339-350页

作者：董晓涵翟璐黄雅丽杨加成陈青舟廖杰金仁耀浙江工商大学海洋食品研究院杭州博岳生物技术有限公司杭州医学院公共卫生学院杭州南开日新生物技术有限公司浙江华才检测技术有限公司

为制备高特异性和高灵敏度的抗丁香酚（Eugenol）单克隆抗体，建立检测丁香酚的胶体金免疫层析法，本研究采用亲核取代法合成丁香酚半抗原（Eugenol-COOH）并进行质谱（HRMS）鉴定；采用碳二亚胺法制备丁香酚免疫抗原（Eugenol-BSA）和... 详细信息

为制备高特异性和高灵敏度的抗丁香酚（Eugenol）单克隆抗体，建立检测丁香酚的胶体金免疫层析法，本研究采用亲核取代法合成丁香酚半抗原（Eugenol-COOH）并进行质谱（HRMS）鉴定；采用碳二亚胺法制备丁香酚免疫抗原（Eugenol-BSA）和包被抗原（Eugenol-OVA），进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和紫外扫描鉴定；利用免疫抗原Eugenol-BSA免疫小鼠，经细胞融合、筛选和克隆，最终得到1株能稳定分泌抗丁香酚单克隆抗体的杂交瘤细胞株（3D9），并准备腹水，利用间接竞争ELISA（ic ELISA）方法测定腹水效价；对获得的单克隆抗体进行鉴定，经条件优化建立胶体金免疫层析试纸条检测方法，对试纸条的灵敏度和稳定性进行评价。结果表明，Eugenol-BSA偶联比约为16∶1,Eugenol-OVA偶联比约为10∶1，完全抗原偶联成功；3D9细胞株的抗体类型及亚类均为免疫球蛋白G（Ig G1），轻链为κ链；单克隆抗体效价达1×10-6；丁香酚浓度与抑制率之间的线性回归方程为y=9.671lnx+10.539（R2=0.998），半数抑制浓度(IC50)为59.2 ng·m L-1，表明制备的抗丁香酚单克隆抗体具有较高的检测灵敏度。所制备的胶体金免疫试纸条优化参数为：胶体金标记最适p H值9、0.2 mol·L-1K2CO3添加量12μL、抗体最佳标记量7μg·m L-1、胶体金试纸条的T线消失浓度1.8μg·m L-1，该参数下的裸眼检出限0.3μg·m L-1。本研究可为丁香酚的现场检测提供有效方法。

关键词：丁香酚单克隆抗体人工抗原胶体金试纸条

抗CD33单克隆抗体肽图分析方法的建立与验证

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中国药学杂志 2024年第16期59卷 1495-1503页

作者：白露叶日平刘蒙蒙李雪琪张秀真赵永新杭州多禧生物科技有限公司杭州310018

目的建立抗CD33单克隆抗体肽图分析方法并对方法进行验证。方法分别使用不同类型设备和不同流动相体系进行抗CD33抗体肽图检测。通过合成抗体CDR区域肽段进行特征肽段定位,并用质谱法对定位结果进行确认。以相对保留时间作为判断依据... 详细信息

目的建立抗CD33单克隆抗体肽图分析方法并对方法进行验证。方法分别使用不同类型设备和不同流动相体系进行抗CD33抗体肽图检测。通过合成抗体CDR区域肽段进行特征肽段定位,并用质谱法对定位结果进行确认。以相对保留时间作为判断依据,根据《中国药典》2020年版完成方法验证。结果超高效液相色谱法(ultraperformance liquid chromotograph,UPLC)进行肽图检测比高效液相色谱法(high performance liquid chromotograph,HPLC)时间更短,三氟乙酸流动相体系相比甲酸流动相体系分离度更高。使用合成肽段的定位结果与质谱鉴定结果一致。方法专属性验证结果显示制剂空白、样品溶液空白对肽图特征峰检测无干扰,不同抗体肽图谱之间存在明显差异;重复性验证结果显示6份平行样品间特征肽段相对保留时间相对标准偏差(RSD)为0.01%~0.05%;中间精密度验证结果显示不同分析人员特征肽段相对保留时间RSD为0.04%~0.32%;耐用性验证结果显示不同酶处理条件[胰蛋白酶量为(1±0.2)μg、酶解温度为(37±1)℃、酶解时间为(4±1)h]特征肽段相对保留时间RSD为0.02%~0.09%,不同色谱条件[三氟乙酸占比(0.08±0.02)%、流速(0.3±0.05)mL·min^(-1)、柱温(40±2)℃]、不同批次色谱柱特征肽段相对保留时间RSD为0.36%~1.43%。样品溶液在25 h内检测,特征肽段相对保留时间RSD为0.01%~0.04%。结论本研究采用合成肽段对液相肽图检测中的肽段进行定位,同时采用相对保留时间进行检测结果的判定,为生物药肽图检测提供了新的思路。

关键词：肽图分析超高效液相色谱法三氟乙酸质谱