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抗丁香酚单克隆抗体的研制及胶体金试纸条检测方法的建立

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核农学报 2025年第2期39卷 339-350页

作者：董晓涵翟璐黄雅丽杨加成陈青舟廖杰金仁耀浙江工商大学海洋食品研究院浙江杭州310012 杭州博岳生物技术有限公司浙江杭州310018 杭州医学院公共卫生学院浙江杭州310013 杭州南开日新生物技术有限公司浙江杭州310000 浙江华才检测技术有限公司浙江绍兴311800

为制备高特异性和高灵敏度的抗丁香酚(Eugenol)单克隆抗体,建立检测丁香酚的胶体金免疫层析法,本研究采用亲核取代法合成丁香酚半抗原(Eugenol-COOH)并进行质谱(HRMS)鉴定;采用碳二亚胺法制备丁香酚免疫抗原(Eugenol-BSA)和包被抗原(Eug... 详细信息

为制备高特异性和高灵敏度的抗丁香酚(Eugenol)单克隆抗体,建立检测丁香酚的胶体金免疫层析法,本研究采用亲核取代法合成丁香酚半抗原(Eugenol-COOH)并进行质谱(HRMS)鉴定;采用碳二亚胺法制备丁香酚免疫抗原(Eugenol-BSA)和包被抗原(Eugenol-OVA),进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和紫外扫描鉴定;利用免疫抗原Eugenol-BSA免疫小鼠,经细胞融合、筛选和克隆,最终得到1株能稳定分泌抗丁香酚单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3D9),并准备腹水,利用间接竞争ELISA(icELISA)方法测定腹水效价;对获得的单克隆抗体进行鉴定,经条件优化建立胶体金免疫层析试纸条检测方法,对试纸条的灵敏度和稳定性进行评价。结果表明,Eugenol-BSA偶联比约为16∶1,Eugenol-OVA偶联比约为10∶1,完全抗原偶联成功;3D9细胞株的抗体类型及亚类均为免疫球蛋白G(IgG1),轻链为κ链;单克隆抗体效价达1×10^(-6);丁香酚浓度与抑制率之间的线性回归方程为y=9.671lnx+10.539(R^(2)=0.998),半数抑制浓度(IC_(50))为59.2 ng·mL^(-1),表明制备的抗丁香酚单克隆抗体具有较高的检测灵敏度。所制备的胶体金免疫试纸条优化参数为:胶体金标记最适pH值9、0.2 mol·L^(-1)K2CO3添加量12μL、抗体最佳标记量7μg·mL^(-1)、胶体金试纸条的T线消失浓度1.8μg·mL^(-1),该参数下的裸眼检出限0.3μg·mL^(-1)。本研究可为丁香酚的现场检测提供有效方法。

关键词：丁香酚单克隆抗体人工抗原胶体金试纸条

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LC-MS/MS测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分的含量

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中国实验方剂学杂志 2020年第8期26卷 213-218页

作者：朱希陈佳傅素华绍兴市食品药品检验研究院浙江绍兴312071 杭州汉库医学检验所有限公司杭州310000

目的:建立液相色谱串联质谱法测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分(左旋紫草素,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸)的含量,用于紫草的质量控制。方法:采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(4.6 mm×... 详细信息

目的:建立液相色谱串联质谱法测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分(左旋紫草素,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸)的含量,用于紫草的质量控制。方法:采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱(4.6 mm×50 mm,1.8μm),以0.1%甲酸乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~3 min,5%~95%A;3~7 min,95%A;7~7.01 min,95%~5%A;7.01~8.50 min,5%A);流速0.2 mL·min^-1,柱温35℃,进样量5μL;采用负离子电离模式,MRM扫描模式进行定量。结果:左旋紫草素,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸分别在10.12~1012μg·L^-1(r=0.9981),10.88~1088μg·L^-1(r=0.9912),10.08~806.4μg·L^-1(r=0.9976),20.32~1016μg·L^-1(r=0.9966),10.37~1037μg·L^-1(r=0.9996),10.26~1026μg·L^-1(r=0.9978)均有良好线性关系(r≥0.9912);平均加样回收率分别为95.8%(RSD 3.2%),103.5%(RSD 2.3%),105.3%(RSD 2.1%),96.1%(RSD 3.3%),98.9%(RSD 2.7%),100.8%(RSD 3.4%)。13批次紫草样品中6个种成分含量存在较大差异。结论:所建立的方法合理可行,为综合评价紫草质量提供一定依据。

关键词：紫草醇溶性成分水溶性成分左旋紫草素 β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁 β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁紫草酸

液相色谱-串联质谱法快速检测干血点样品中尿酸

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质谱学报 2018年第2期39卷 250-256页

作者：李广林韩吉春王小臣赵雅君骆亦奇杭州量康医学检验所浙江杭州310052

建立了一种高通量液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测干血点(DBS)样品中尿酸(UA)的方法。采用自动液体操作平台对样品进行高通量自动化前处理,首先用含有UA-1,3-15 N2稳定同位素内标的Tris水溶液进行萃取,然后用含有0.1%甲酸、0.05%三氟... 详细信息

建立了一种高通量液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测干血点(DBS)样品中尿酸(UA)的方法。采用自动液体操作平台对样品进行高通量自动化前处理,首先用含有UA-1,3-15 N2稳定同位素内标的Tris水溶液进行萃取,然后用含有0.1%甲酸、0.05%三氟乙酸的乙腈溶液沉淀蛋白质。处理后的样品经CN色谱柱分离,多反应监测(MRM)模式进行LC-MS/MS分析。结果表明,在DBS样品中,UA在7.8~1 000μmol/L浓度范围内的线性关系良好(R2=0.999);检出限为3.1μmol/L(S/N=3);定量限为12.5μmol/L(S/N=10);平均回收率为95%~101%;日内相对标准偏差(RSD)为4.2%~12%;日间RSD为5.3%~14%。以样品中UA检测结果的总体RSD不超过15%来考察样品稳定性,分别将样品在-20℃保持30天、在37℃保持7天、反复冻融5次,样品中UA检测结果总体RSD小于10%,表明样品稳定性良好。将该方法与传统生化分析方法相比较,并分析了204份血样,相关性较好(R2=0.946)。此方法可为有限采血条件下UA的检测及UA相关疾病的大规模筛查提供新途径。

关键词：液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS) 干血点自动液体操作平台尿酸

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多学科交叉的检验医学的现状与进展

中国科学基金 2025年 1018-1032页

作者：方冬杜林勇梁国新王晨辉何彦方合志吕建新杨正林尚红窦豆闫章才国家自然科学基金委员会医学科学部温州医科大学检验医学院(生命科学学院) 中国医科大学附属第一医院国家医学检验临床医学研究中心电子科技大学附属医院/四川省人民医院南方医科大学珠江医院广东省医学检验临床研究中心温州医科大学浙江省医学遗传学重点实验室浙江省人民医院/杭州医学院附属人民医院

近年来,检验医学已经成为当前生命科学、医学、工学以及各类技术学科交叉的前沿阵地,也是基础研究向临床转化的重要出口。国家自然科学基金委员会从标志物发现、检验新技术与新方法建立等多个角度开展资助,积极推动了我国检验医学的发... 详细信息

近年来,检验医学已经成为当前生命科学、医学、工学以及各类技术学科交叉的前沿阵地,也是基础研究向临床转化的重要出口。国家自然科学基金委员会从标志物发现、检验新技术与新方法建立等多个角度开展资助,积极推动了我国检验医学的发展。其他学科的蓬勃发展,也为检验医学的进一步发展与面临的挑战带来了更多的思考。围绕国家自然科学基金委员会召开的第356期“双清论坛”的研讨成果,本文从“检验医学研究的范式——现状与发展趋势”“新技术与新方法促进检验医学发展”“多学科交叉推动检验医学创新”“新时代检验医学临床转化面临的挑战”四个方面对检验医学的学科交叉现状、进展以及所面临的挑战展开深入讨论,旨在推动我国检验医学学科的高质量发展。

关键词：检验医学研究范式新技术与新方法多学科交叉生物标志物临床转化研究

液相色谱-串联质谱法检测干血点样本中25-羟基维生素D2和25-羟基维生素D3

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分析化学 2017年第3期45卷 448-454页

作者：韩吉春王小臣李广林赵雅君骆亦奇杭州量康医学检验所

建立了一种高通量液相色谱-串联质谱技术检测干血点(DBS)样本中25-羟基维生素D[25(OH)D]和25-羟基维生素D[25(OH)D]的方法。以DBS为样本,以4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)为试剂进行分析物衍生化,所需样本量仅约相当于6μL全血当量... 详细信息

建立了一种高通量液相色谱-串联质谱技术检测干血点(DBS)样本中25-羟基维生素D[25(OH)D]和25-羟基维生素D[25(OH)D]的方法。以DBS为样本,以4-苯基-1,2,4-三唑啉-3,5-二酮(PTAD)为试剂进行分析物衍生化,所需样本量仅约相当于6μL全血当量的DBS样本;使用甲醇直接超声提取分析物,避开了通常情况下DBS样本前处理中的全血复溶和蛋白质沉淀等繁琐步骤;整个前处理过程使用自动化液体处理平台实现自动化操作和高检测通量;以25(OH)D-D6和25(OH)D-D为同位素内标,消除基质效应的影响。前处理后的样本进行LC-MS/MS分析,使用C柱进行分离,流动相为甲醇(含5 mmol/L甲酸铵)-水(含5 mmol/L甲酸铵)(75∶25,V/V),洗脱时间为4 min,使用多反应监测模式(MRM)定量。结果表明:25(OH)D和25(OH)D的检出限为0.12 ng/m L(S/N=3),定量限为0.94 ng/m L(S/N=10)。25(OH)D和25(OH)D在0.94~120.00 ng/m L范围内线性关系良好,日内相对标准偏差(RSD)分别为1.4%~8.6%和3.7%~15.5%,日间RSD分别为4.0%~5.3%和3.8%~14.9%,平均回收率分别为91.7%±7.9%~108.5%±6.5%和94.8%±6.8%~101.3%±2.9%。DBS样本在不同温度(-20℃,22℃,37℃)下储存不同时间(0,1,2,3,5,7,14天)后的稳定性实验显示样本总体RSD<15%。以25(OH)D参考物质NIST SRM 972a中的Level 3制备标准DBS样本,25(OH)D和25(OH)D的回收率分别为110.3%和103.0%。

关键词：液相色谱-串联质谱 25-羟基维生素D2 25-羟基维生素D3 自动化液体处理平台干血点样本

猪瘟弱毒标记疫苗候选株RecC-M1垂直传播可能性评价

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动物医学进展 2025年第1期46卷 1-8页

作者：许翰坤曹统王作欢张鹏超蓝胜芝吴桃芬杨香林李肖梁方维焕浙江大学动物预防医学研究所浙江杭州310058 浙江诗华诺倍威生物技术有限公司浙江杭州310058 正大集团正大猪业(余姚)有限公司浙江宁波315460

为探究猪瘟病毒(CSFV)弱毒标记疫苗候选株RecC-M1在猪群中的垂直传播能力,采用二次免疫方案,以5.0×10^(3.5)TCID_(50)的RecC-M1经颈部肌肉注射接种12头后备母猪,另从试验猪场随机挑选20头按常规免疫程序以750 RID剂量给后备母猪接种猪... 详细信息

为探究猪瘟病毒(CSFV)弱毒标记疫苗候选株RecC-M1在猪群中的垂直传播能力,采用二次免疫方案,以5.0×10^(3.5)TCID_(50)的RecC-M1经颈部肌肉注射接种12头后备母猪,另从试验猪场随机挑选20头按常规免疫程序以750 RID剂量给后备母猪接种猪瘟弱毒C株疫苗作为对照。接种后观察试验母猪临床症状并记录其产仔情况;首免后3、5、7、14 d采集母猪鼻拭子和肛拭子样品,并于母猪妊娠中期和分娩当日进行尾静脉采血,qPCR检测各组猪的病毒血症及排毒情况,ELISA检测猪血清中分别针对BVDV1和CSFV相应抗原的抗体水平;所有接种RecC-M1的母猪在生产当天留取2头新生仔猪(共24头)并在其吮吸初乳前安乐死后剖检,观察主要脏器大体病变情况,采集扁桃体、淋巴结、脾脏和膀胱组织用于组织病理学观察,血液样品用于猪瘟病毒抗体和核酸检测。结果表明,所有母猪免疫后均未出现临床症状,接种后2周内的拭子样品中未检测到病毒核酸,妊娠中期和分娩时血清中的RecC-M1 E2和BVDV1-E rns特异性抗体均维持在较高水平,RecC-M1接种母猪的胎均仔数、死胎数和弱仔数与对照组无显著差异。对RecC-M1接种母猪所产24头新生仔猪的剖检发现,扁桃体、淋巴结、脾脏、肾脏和膀胱均未见出血、肿大等病变;组织学结果显示,扁桃体、淋巴结、脾脏和肾脏的组织结构正常,均未见有出血性变化;仔猪血样和组织样品均无病毒核酸检出,亦未见抗体阳性。结果表明,CSFV弱毒标记疫苗候选株RecC-M1对母猪及仔猪都是安全的,不发生病毒的垂直传播,为该疫苗后选株的产业化开发奠定了基础。

关键词：猪瘟弱毒标记疫苗垂直传播

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胃孤立性朗格汉斯细胞组织细胞增生症1例

临床与实验病理学杂志 2018年第9期34卷 1028-1029页

作者：陈红梅叶林朱良俊陶凌怡夏成青杭州千麦医学检验所有限公司病理实验室杭州311100

目的探讨胃孤立性朗格汉斯细胞组织细胞增生症(Langerhans cell histiocytosis,LCH)的组织形态和免疫表型及鉴别诊断。方法胃体大弯黏膜隆起性病灶活检组织石蜡包埋HE切片及免疫组化EnV ision两步法染色,进行形态学和免疫表型分析。结... 详细信息

目的探讨胃孤立性朗格汉斯细胞组织细胞增生症(Langerhans cell histiocytosis,LCH)的组织形态和免疫表型及鉴别诊断。方法胃体大弯黏膜隆起性病灶活检组织石蜡包埋HE切片及免疫组化EnV ision两步法染色,进行形态学和免疫表型分析。结果胃体大弯黏膜隆起性病灶,胃壁固有层和黏膜下层可见单一、无特别组织结构的细胞聚集。细胞体积比较大,胞质淡红色;核椭圆形,高倍镜下核呈咖啡豆样,有一条纵向核沟,免疫组化标记CD1a、S-100均阳性;背景炎症反应明显,主要为中性粒细胞、小淋巴细胞、浆细胞及一些嗜伊红细胞。结论 LCH的诊断主要依赖形态学及免疫组化标记,胃孤立性LCH预后显著好于系统性病变。

关键词：胃肿瘤朗格汉斯细胞组织细胞增生症免疫表型

基于LC/MS的女性月经周期体内激素检测及在临床中的意义

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基于LC/MS的女性月经周期体内激素检测及在临床中的意义

血清胆汁酸成分的分析及在急性肝炎和肝癌中的应用

2016年浙江省检验医学学术年会

作者：童鸿斌杭州汉库医学检验所有限公司

目的:建立基于LC-MS的同时检测15种激素的方法,并运用该方法分析了女性完整周期内各种激素的波动情况。方法:2015年9月-10月25例年龄为22-47周岁的女性志愿者。研究从女性月经来潮第一天开始计算,从第3天开始每3天进行一次样本采集,共...

目的:建立基于LC-MS的同时检测15种激素的方法,并运用该方法分析了女性完整周期内各种激素的波动情况。方法:2015年9月-10月25例年龄为22-47周岁的女性志愿者。研究从女性月经来潮第一天开始计算,从第3天开始每3天进行一次样本采集,共收集样本10次。所收集的血清经处理后进样分析。实验数据处理使用MeV进行聚类分析,并对滤泡期及黄体期的激素水平通过主成分分析(PCA)、偏最小二乘法—判别分析(PLS-DA)和t-test检验考察两个时期的激素差异。同时,通过计算获得连续3次采样时间的激素差总和的最小值,考察最佳采样时间。

关键词：

来源： cnki会议评论

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血清胆汁酸成分的分析及在急性肝炎和肝癌中的应用