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哺乳动物细胞单抗生产的载体策略

中国生物工程杂志 2024年第5期44卷 66-77页

作者：黄超宾申会涛杨立元孟思刘泽高辉中逸安科生物技术股份有限公司研发中心天津300409

抗体药物在生物医药行业所占比重持续增加,抗体高效表达需要在合适的系统中进行,载体在这一过程中尤其重要,可以参与一系列抗体生产步骤:搭配合适的元件来筛选阳性、高表达克隆,选择轻重链的最优表达比例,稳定基因转录,增强翻译效率,对... 详细信息

抗体药物在生物医药行业所占比重持续增加,抗体高效表达需要在合适的系统中进行,载体在这一过程中尤其重要,可以参与一系列抗体生产步骤:搭配合适的元件来筛选阳性、高表达克隆,选择轻重链的最优表达比例,稳定基因转录,增强翻译效率,对抗体进行正确的翻译后修饰等。对哺乳动物细胞表达载体构建所涉及的启动子、增强子、绝缘子、支架/基质附着区、信号肽、多顺反子策略、筛选系统、加尾信号以及用于增强目的基因表达所涉及的遗传工具等研究进展进行讨论,以期全面了解哺乳动物细胞重组抗体表达所涉及关键点,克服与之相关的挑战,进而推动抗体疗法发展。

关键词：单抗启动子增强子绝缘子支架/基质附着区信号肽内部核糖体进入位点 2A肽筛选系统加尾信号遗传工具

一种“绿电”熔盐储能系统的建模与动态特性研究

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动力工程学报 2024年第3期44卷 455-461页

作者：李应保罗润洪黄杰中控技术股份有限公司杭州310000

提出一种“绿电”熔盐储能系统,同时对熔盐储热系统的关键设备进行了机理模型分析,并进行了数学模型辨识实验和动态特性分析。结果表明:熔盐储热系统普遍具有大惯性的特点,通过设计多级加热和换热装置可以有效控制熔盐系统中熔盐和蒸汽... 详细信息

提出一种“绿电”熔盐储能系统,同时对熔盐储热系统的关键设备进行了机理模型分析,并进行了数学模型辨识实验和动态特性分析。结果表明:熔盐储热系统普遍具有大惯性的特点,通过设计多级加热和换热装置可以有效控制熔盐系统中熔盐和蒸汽的温度、流量和压力等参数的变化,提高供热蒸汽的品质,保证整套系统的运行稳定性,满足工业现场供热与发电需求。

关键词：熔盐储能绿电电网谷段机理模型动态特性

基于生物反应器的猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)悬浮培养工艺研究

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黑龙江畜牧兽医 2024年第7期 11-17页

作者：查银河王芳何玉龙李肖梁舒建洪杭州洪晟生物技术股份有限公司杭州310002 浙江大学杭州310058

为了优化生物反应器全悬浮培养技术制备猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)的工艺,试验首先通过摇瓶培养对病毒接种时的细胞密度、胰酶浓度、接毒剂量和收毒时间等培养条件进行优化;之后按照摇瓶培养确认的工艺进行生物反应器全悬浮培养工艺验证... 详细信息

为了优化生物反应器全悬浮培养技术制备猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)的工艺,试验首先通过摇瓶培养对病毒接种时的细胞密度、胰酶浓度、接毒剂量和收毒时间等培养条件进行优化;之后按照摇瓶培养确认的工艺进行生物反应器全悬浮培养工艺验证,同时对pH值、溶氧值(DO)、转速等培养参数进行优化,以病毒含量(TCID_(50))为指标,最终筛选出在15L生物反应器中培养猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)的最优条件,并进一步在50L生物反应器中进行工艺验证,将病毒液灭活后稀释至1×10^(7).0TCID_(50)/mL免疫怀孕75~90d的健康易感初怀母猪,在分娩当日,采集母猪和仔猪血清,并对分娩的3日龄仔猪攻毒进行免疫原性试验。结果表明:猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)在摇瓶上的最适培养条件为当细胞密度达到6×10^(6)个/mL以上时,用含胰酶(终浓度为20μg/mL)的无血清培养基将细胞密度稀释至2×10^(6)个/mL,按感染复数(MOI)=0.1接毒,130 r/min摇床振荡培养36h可收获病毒液,病毒含量可稳定达到1×10^(7.5)TCID_(50)/mL以上;猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)在15L生物反应器上的最适培养条件为pH值7.0~7.2、DO值50%、转速80~100 r/min,培养36h收获的病毒液含量可稳定在1×10^(7.5)TCID_(50)/mL以上;在50L生物反应器上放大培养收获的病毒液含量为1×10^(7).8TCID_(50)/mL。母猪和仔猪中和抗体效价均≥1∶32,免疫保护力为100%。说明本试验条件下成功建立并优化了生物反应器全悬浮培养制备猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)的工艺,生产的猪流行性腹泻病毒(ZJ/15株)的免疫原性较好。

关键词：猪流行性腹泻病毒悬浮细胞培养生物反应器工艺放大免疫原性

同位素稀释液相色谱-串联质谱法测定血清皮质醇候选参考方法的建立及评价

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中华检验医学杂志 2024年第8期47卷 927-935页

作者：黄昌发林丹付晓雅翁旭琦孙雅玲李伟广州万孚生物技术股份有限公司广州510663

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清中皮质醇浓度的候选参考方法。方法方法学建立。将样本与皮质醇内标混匀后加入碳酸钠溶液碱化处理, 正己烷/乙酸乙酯进行液液萃取, 流动相采用甲醇水溶液等度洗脱, 质谱采... 详细信息

目的建立同位素稀释液相色谱-串联质谱法(ID-LC/MS/MS)测定血清中皮质醇浓度的候选参考方法。方法方法学建立。将样本与皮质醇内标混匀后加入碳酸钠溶液碱化处理, 正己烷/乙酸乙酯进行液液萃取, 流动相采用甲醇水溶液等度洗脱, 质谱采用电喷雾电离源正离子模式(ESI+)及多反应监测(MRM)分析方法, 标准溶液及内标的配制、样本与内标的混合均采用重量法进行控制, 括号法计算皮质醇浓度。参照美国临床实验室标准化协会C62-A、C50-A及国内专家共识文件《液相色谱-质谱临床应用建议》《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》等对方法正确度、精密度、特异性、线性、检测限和定量下限等性能进行系统评价。数据经Excel2019进行处理, 最小二乘法进行线性回归分析。结果方法准确精密, 测定有证标准物质ERM-DA192、ERM-DA193以及2021—2023年RELA样本的相对偏倚均<2%, 加标回收率98.2%~101.1%, 批内及批间不精密度均<2%, 检测结果不受其他结构类似物干扰, 在25~1 600 nmol/L范围内呈现出良好线性, 方法检测限和定量下限分别为0.5和1.0 nmol/L。经溯源后的皮质醇测定试剂盒(化学发光免疫分析法)与该候选参考方法同时测定46例临床血清样本的相关性良好。结论建立了一种灵敏、准确且操作简便的血清皮质醇浓度测定候选参考方法, 可为临床常规测定方法的量值溯源及正确度评价提供参考。

关键词：氢化可的松同位素稀释液相色谱-串联质谱候选参考方法

反义寡核苷酸药物AD00510-AS在小鼠、大鼠、猴、人肝S9和血浆中的代谢产物研究

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中国新药杂志 2024年第2期33卷 151-158页

作者：柳庆龙纪海霞李伦张云祁佳琦刘添浩梁柳艺陶桂勇周绍联益诺思生物技术南通有限公司南通226133 上海益诺思生物技术股份有限公司上海201203 上海舶望制药有限公司上海201203

目的:建立反义寡核酸药物AD00510-AS的LC-UV-Q-TOF方法,并探索小核酸药物AD00510-AS在体外肝S9和血浆中的代谢产物和代谢途径.方法:基于固相萃取的方法对孵育24h后的肝S9和血浆样品进行处理,采用SCIEX OS进行数据采集,采用Molecule Prof... 详细信息

目的:建立反义寡核酸药物AD00510-AS的LC-UV-Q-TOF方法,并探索小核酸药物AD00510-AS在体外肝S9和血浆中的代谢产物和代谢途径.方法:基于固相萃取的方法对孵育24h后的肝S9和血浆样品进行处理,采用SCIEX OS进行数据采集,采用Molecule ProfilerTM软件分析空白样品和给药后孵育24h样品的提取离子流图(XIC)的差异,得到可能的代谢产物,并推测代谢途径.结果:AD00510-AS分别与小鼠、大鼠、猴、人肝S9孵育24h后,共检测到3个代谢产物(M1,M4和M5),母药的相对丰度分别为73.9%,87.1%,78.4%和81.3%;AD00510-AS分别与小鼠、大鼠、猴、人血浆孵育24h后,共检测到4个代谢产物(M2,M3,M4和M5),母药的相对丰度分别为69.1%,94.5%,67.8%和68.1%;通过MS及MS/MS的测定,鉴定的代谢产物如下:M1:3'末端丢失9个核苷酸代谢产物(MW=4544);M2:3'末端丢失2个核苷酸代谢产物(MW=6857);M3:3'末端丢失1个核苷酸代谢产物(MW=7232);M4:双脱硫代谢产物(MW=7559);M5:脱硫代谢产物(MW=7575).结论:采用确认的LC-UV-Q-TOF方法可以检测到AD00510-AS及其5个代谢产物,AD00510-AS在体外肝S9和血浆中主要通过降解(丢失核苷酸)和脱硫进行代谢.

关键词：反义寡核苷酸肝S9 血浆代谢产物鉴定固相萃取

国产轮状病毒疫苗接种安全性的真实世界Meta分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第5期44卷 431-440页

作者：苏峰时云志徐敏黎慕陈军霍怡菲陈毅锋赵杰苏锦锋中国生物技术股份有限公司人用疫苗事业部北京100024

目的评价国产口服轮状病毒减毒活疫苗(简称轮状病毒疫苗)的安全性。方法检索中国知网(CNKI)、中文期刊服务平台、万方数据库、PubMed、Medline和Embase,筛选2020年1月1日—2023年7月31日发表的关于中国疑似预防接种异常反应(adverse eve... 详细信息

目的评价国产口服轮状病毒减毒活疫苗(简称轮状病毒疫苗)的安全性。方法检索中国知网(CNKI)、中文期刊服务平台、万方数据库、PubMed、Medline和Embase,筛选2020年1月1日—2023年7月31日发表的关于中国疑似预防接种异常反应(adverse event following immunization,AEFI)的研究,从中抽取有关国产轮状病毒疫苗AEFI监测数据。采用R语言对轮状病毒疫苗接种后的安全性进行Meta分析,并对不同区域和不同时间段的AEFI报告发生率进行亚组分析。结果共纳入36篇文献,涉及样本2533.2万剂。国产轮状病毒疫苗AEFI发生率为19/10万剂(95%CI:15/10万剂~24/10万剂);北方和南方地区AEFI发生率分别为26/10万剂(95%CI:17/10万剂~39/10万剂)和16/10万剂(95%CI:11/10万剂~23/10万剂);2017年前为24/10万剂[95%CI:12/10万剂~45/10万剂],2017年后为27/10万剂[95%CI:18/10万剂~39/10万剂]。结论国产轮状病毒疫苗AEFI发生率在预期范围内,真实世界应用中安全性良好。

关键词：口服轮状病毒减毒活疫苗疑似接种异常反应真实世界研究 Meta分析

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犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡制备与评价

现代畜牧兽医 2024年第3期 7-11页

作者：王汝锦孙晓笛吴银河杭州奥泰生物技术股份有限公司浙江杭州310018

试验旨在快速检测犬巴贝斯虫抗体,利用胶体金免疫层析技术制备犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡并评价其功能性。将羊抗鼠免疫球蛋白G (IgG)和犬巴贝斯虫表面抗原Bg P47重组蛋白(Bg P47 Ag)包被于NC膜上分别做为质控线和检测线,胶体金标记的... 详细信息

试验旨在快速检测犬巴贝斯虫抗体,利用胶体金免疫层析技术制备犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡并评价其功能性。将羊抗鼠免疫球蛋白G (IgG)和犬巴贝斯虫表面抗原Bg P47重组蛋白(Bg P47 Ag)包被于NC膜上分别做为质控线和检测线,胶体金标记的鼠IgG和鼠抗犬IgG均匀喷点在聚酯纤维膜上作为标记垫,将化学品配制的玻纤溶液均匀涂在样品垫上,并用吸水纸和PVC底板制备犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡,对其特异性、灵敏度、均一性、加速稳定性、实时稳定性进行评价,并与ELISA、PCR检测结果进行对比。结果显示,该检测卡不与犬莱姆抗体(lyme Ab)阳性犬血清、犬瘟热病毒抗体(CDV Ab)阳性犬血清、犬细小病毒抗体(CPV Ab)阳性犬血清、犬无形体抗体(Anaplasma Ab)阳性犬血清、犬三联疫苗阳性免疫犬血清样本发生交叉反应;可检测浓度稀释至1∶256倍的样本;有效期可达到24个月。研究表明,该检测卡可快速、准确地检测犬巴贝斯虫抗体,为动物临床诊断和治疗提供参考。

关键词：犬巴贝斯虫病犬巴贝斯虫抗体胶体金检测卡血液寄生虫病

犬利什曼抗体胶体金免疫层析试纸的制备与性能评价

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现代畜牧兽医 2024年第4期 12-16页

作者：高萌孙晓笛杭州奥泰生物技术股份有限公司浙江杭州310018

试验旨在建立一种快速检测犬利什曼原虫病的方法,采用利什曼重组抗原63 kDa糖蛋白(gp63)和鼠免疫球蛋白G(IgG)抗体,以信号放大技术制备胶体金免疫层析检测试纸,通过测试犬艾利希(Ehrlichia)、犬莱姆(Lyme)、犬巴贝斯(Babesia)、犬心丝虫... 详细信息

试验旨在建立一种快速检测犬利什曼原虫病的方法,采用利什曼重组抗原63 kDa糖蛋白(gp63)和鼠免疫球蛋白G(IgG)抗体,以信号放大技术制备胶体金免疫层析检测试纸,通过测试犬艾利希(Ehrlichia)、犬莱姆(Lyme)、犬巴贝斯(Babesia)、犬心丝虫(CHW)和犬利什曼(LSH)的阳性样本,对该方法的灵敏度、特异性、重复性和稳定性进行了验证。结果显示,该检测试纸测试Ehrlichia、Lyme、Babesia和CHW阳性样本均为阴性,对已确定的LSH阳性样本的检测最高稀释梯度达到1∶480。该检测试纸与ELISA试剂盒的检测结果符合率为98.08%,与rk28利什曼抗体试纸条检测结果进行对比,阳性检出率更高。研究表明,LSH抗体胶体金免疫层析试纸的灵敏度高,特异性好,适用于犬利什曼原虫病的现场快速诊断。

关键词：犬利什曼原虫病利什曼原虫胶体金免疫层析试纸

生物医药企业生物资产会计核算与信息披露中的特殊问题探讨

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财务与会计 2024年第10期 43-45,50页

作者：姚方珏冯蕊陈哲范钦上海益诺思生物技术股份有限公司

与其他资产不同,医药企业的生物资产具有明显的特殊属性,其同时具有自然再生产和经济再生产的特性。本文从生物医药企业的生物资产管理实务出发,以实验动物为例,根据生物资产的特殊性,对生物资产的划分、计量模式、后续支出及减值测试... 详细信息

与其他资产不同,医药企业的生物资产具有明显的特殊属性,其同时具有自然再生产和经济再生产的特性。本文从生物医药企业的生物资产管理实务出发,以实验动物为例,根据生物资产的特殊性,对生物资产的划分、计量模式、后续支出及减值测试、信息披露等普适性强但容易出现错漏的问题进行探讨,以切实有效地提升生物资产会计核算和信息披露的质量和管理水平,为同类生物医药企业提供一定的参考。

关键词：生物资产医药企业会计核算信息披露