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乳铁蛋白在临床领域应用的研究进展

中国生物制品学杂志 2024年第2期37卷 245-250页

作者：马小梅彭乔烽(综述) 张海霞马忠仁(审校) 西北民族大学生物医学研究中心生物工程与技术国家民委重点实验室甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730030

乳铁蛋白(lactoferrin,LF)作为一类功能广泛的铁结合型天然转铁糖蛋白,成为近年来国内外研究热点。LF广泛应用在治疗及预防等领域,具有多种生物活性,本文就LF近年来在免疫调节、抗肿瘤、调节发胖机制、抗菌、抗阿兹海默症(Alzheimer dis... 详细信息

乳铁蛋白(lactoferrin,LF)作为一类功能广泛的铁结合型天然转铁糖蛋白,成为近年来国内外研究热点。LF广泛应用在治疗及预防等领域,具有多种生物活性,本文就LF近年来在免疫调节、抗肿瘤、调节发胖机制、抗菌、抗阿兹海默症(Alzheimer disease,AD)及骨再生机制等方面临床作用的研究作一综述,为后续LF的临床应用及研究提供方向。

关键词：乳铁蛋白免疫调节炎性反应抗感染抗菌

球状脂联素对卵巢微血管内皮细胞增殖、迁移及管状结构形成的影响

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南方医科大学学报 2017年第5期37卷 614-621页

作者：陈雷卢小圣李雅兰毛周飞肖銮娟禹艳红暨南大学附属第一医院麻醉科广东广州510632 暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系广东广州510632

目的分离并鉴定小鼠卵巢微血管内皮细胞,并利用卵巢微血管内皮细胞研究球状脂联素对小鼠卵巢血管新生的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠卵巢微血管内皮细胞,并采用免疫荧光检测细胞表面的卵泡刺激素受体、黄体生成素... 详细信息

目的分离并鉴定小鼠卵巢微血管内皮细胞,并利用卵巢微血管内皮细胞研究球状脂联素对小鼠卵巢血管新生的影响。方法采用Percoll密度梯度离心法分离纯化小鼠卵巢微血管内皮细胞,并采用免疫荧光检测细胞表面的卵泡刺激素受体、黄体生成素受体以及血管内皮细胞标记v WF;通过血管生成因子(VEGFA)处理检测卵巢微血管内皮细胞在Matrigel上的毛细管形成特性。重组的球状脂联素蛋白处理卵巢微血管内皮细胞,通过MTS检测细胞增殖;细胞划痕愈合法检测细胞迁移;Matrigel基质胶的血管形成,Western blot检测单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化激活。结果分离出的细胞表现为卵泡刺激素受体阴性,黄体生成素受体阳性,v WF阳性,且VEGFA能够促进血管生长,具有卵巢特异的血管内皮生长特性。高剂量浓度(1μg/m L和3μg/m L)的重组的脂联素球状结构域蛋白处理后卵巢微血管内皮细胞数量分别增加(158.72±14.50)%和(186.50±4.20)%,促进细胞增殖(P<0.01);高剂量浓度(1μg/m L和3μg/m L)的重组的脂联素球状结构域蛋白处理后卵巢微血管划痕愈合率分别为(49.43±3.43)%(P<0.05)和(69.67±1.2)%(P<0.01);3μg/m L的脂联素处理卵巢微血管内皮细胞形成的毛细管状长度为对照组的7.63±0.66倍(P<0.01)。3μg/m L的球状脂联素蛋白处理饥饿处理后的卵巢微血管内皮细胞培养15 min后p AMPK/AMPK、30 min后p AMPK/AMPK显著高于未加入蛋白处理的对照(P<0.01)。Compound C抑制了球状脂联素促进的卵巢微血管内皮细胞的管状结构形成及AMPK磷酸化激活。结论成功分离了卵巢微血管内皮细胞,球状脂联素蛋白能够通过激活AMPK信号途径促进卵巢微血管内皮细胞的血管新生。

关键词：球状脂联素卵巢血管新生血管内皮细胞 AMPK

慢病毒干扰小鼠附睾特异的meClps基因可降低精子的运动能力

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南方医科大学学报 2014年第9期34卷 1359-1364页

作者：廉滋珍曹佐武陈冉陈雷薛樱子秦俊文齐绪峰张春雪禹艳红暨南大学再生医学教育部重点实验室广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院发育与再生生物学系广东广州510632 暨南大学附属第一医院麻醉科广东广州510632

目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表... 详细信息

目的筛选能有效干扰小鼠附睾特异的类辅脂酶meClps基因表达的RNA靶点,并通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后分析对精子运动的影响。方法构建真核表达载体pDsRed2.0-C1-meClps中并转染NIH-3T3细胞,用meClps抗血清检测meClps蛋白的表达。针对meClps基因的序列设计并合成3对靶向干扰meClps表达的寡核苷酸序列,构建重组慢病毒载体pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251、224和286。将重组慢病毒干扰质粒分别与pDsRed2.0-C1-meClps共转染到NIH-3T3细胞,半定量PCR和Western blotting检测meClps基因在mRNA和蛋白水平的变化。将筛选得到的干扰效果最好的慢病毒载体包装慢病毒,注射到小鼠附睾头部组织后分析对附睾尾部精子运动性能的影响。结果构建了体外表达meClps蛋白的pDsRed2.0-C1-meClps表达载体和靶向meClps基因的慢病毒RNAi载体。靶向meClps的RNA干扰载体对转染pDsRed2.0-C1-meClps后的NIH-3T3细胞中的meClps的mRNA和蛋白表达都有抑制,但以转染pRNAT-U6.2/lenti-RNAi-251对meClps的抑制效果最明显。包装后的慢病毒注射到小鼠附睾头部后附睾尾部组织中的精子运动速率降低(P<0.05)。结论筛选出RNAi-251能有效干扰meClps表达,通过慢病毒介导的RNAi敲低meClps表达后精子运动性能降低。

关键词： RNA干扰附睾特异表达蛋白 meClps 慢病毒精子运动

胡椒碱对脂多糖和金黄色葡萄球菌抑制人结肠腺癌细胞系表达防御素的拮抗作用

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2015年第2期36卷 102-107页

作者：侯小凤潘浩徐丽慧何贤辉欧阳东云暨南大学生命科学技术学院免疫生物学系广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系广东广州510632

目的:研究胡椒碱(piperine,PIP)对脂多糖(LPS)和灭活金黄色葡萄球菌(SAC)菌体抑制人结肠腺癌HT-29和Caco-2细胞表达防御素(Defensin)的影响.方法:WST-1法检测PIP对HT-29和Caco-2细胞增殖的作用;定量PCR(qRT-PCR)检测人α防御素DEFA5(HD5)和DEFA6(HD6),人β防御素HBD-1以及胰岛再生源蛋白(Reg)Reg IIIγ等mRNA的表达水平.结果:PIP处理可剂量依赖性地抑制HT-29和Caco-2细胞的增殖,半数抑制浓度IC50分别为328.5μmol/L和155.1μmol/L,表明PIP对细胞的毒性较小;定量PCR检测显示,PIP处理对LPS或SAC下调HT-29和Caco-2细胞DEFA5和DEFA6 mRNA表达水平具有显著的拮抗作用,对DEFB1和Reg IIIγmRNA的表达没有明显影响.结论:胡椒碱可能通过拮抗病原体诱导细胞表达防御素的抑制作用,进而发挥其抗肠炎作用.

关键词：胡椒碱 HT-29 细胞 Caco-2 细胞 LPS SAC 人防御素抗菌肽

多壁碳纳米管固定化生物酶修饰电极检测杂色曲霉素的初步研究

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生物工程学报 2004年第4期20卷 601-606页

作者：姚冬生文圣梅刘大岭谢春芳白燕冉艳红暨南大学生命科学技术学院生物技术室暨南大学生命科学技术学院化学系分析化学教研室广州510632

杂色曲霉素 (ST)是一种致癌致畸的真菌毒素 ,已报道的检测ST的技术有TLC、HPLC、ELISA以及毒素基因的PCR检测技术。初步探索了酶生物传感器三电极系统对ST的电化学分析。在实验中 ,应用多壁碳纳米管作为分子识别元件ADTZ的固定化基质和... 详细信息

杂色曲霉素 (ST)是一种致癌致畸的真菌毒素 ,已报道的检测ST的技术有TLC、HPLC、ELISA以及毒素基因的PCR检测技术。初步探索了酶生物传感器三电极系统对ST的电化学分析。在实验中 ,应用多壁碳纳米管作为分子识别元件ADTZ的固定化基质和传感器的电子传递体构建了Au工作电极 ,对ST进行CV和DPV分析 ,结果表明 :ST在 - 6 0 0mV位置有一明显的特征还原峰电位 ,线性检测范围是 8 32× 1 0 - 5～ 6 6 5 6× 1 0 - 5mg mL ,检测下限为8 32× 1 0 - 5mg mL ,响应时间 1 0s。

关键词：杂色曲霉素多壁碳纳米管酶传感器

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mPem蛋白相作用分子的筛选与鉴定

生物工程学报 2006年第1期22卷 125-130页

作者：罗志文郭芬李月琴李实骞张欣李弘剑周天鸿暨南大学生命科学技术学院广州510632

mPem是同源异型框基因,其C末端编码同源异型域。为进一步研究mPem蛋白在胚胎发育和生殖组织发育过程中的作用,利用GAL4酵母双杂交系统筛选小鼠7d胚胎cDNA文库,共获得3个与mPem蛋白相作用的分子。其中之一为Mdfic,一种新的转录调控因子... 详细信息

mPem是同源异型框基因,其C末端编码同源异型域。为进一步研究mPem蛋白在胚胎发育和生殖组织发育过程中的作用,利用GAL4酵母双杂交系统筛选小鼠7d胚胎cDNA文库,共获得3个与mPem蛋白相作用的分子。其中之一为Mdfic,一种新的转录调控因子。进一步的酵母双杂交和体外GST_Pulldown试验再次确认两者之间的相互作用。Mdfic与mPem蛋白之间的相互作用暗示两者有可能组成转录调控复合体,共同参与胚胎分化的调控,为两种蛋白功能的研究提供新的思路。

关键词： mPem GAL4酵母双杂交系统 Mdfic

LTQ-FT-MS技术结合生物信息学筛选与HBV Polymerase存在潜在相互作用的宿主蛋白

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病毒学报 2014年第6期30卷 636-644页

作者：凌梦婷宫君原李君武周天鸿暨南大学生命科学技术学院广州510632

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是慢性肝病的一个主要致病因素,易导致肝炎、肝硬化,并最终导致肝癌。乙型肝炎病毒聚合酶(HBV Polymerase,Pol)在HBV复制过程中起着关键作用,并有可能参与肝癌的发生。Pol的这些生理功能很有可能是... 详细信息

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是慢性肝病的一个主要致病因素,易导致肝炎、肝硬化,并最终导致肝癌。乙型肝炎病毒聚合酶(HBV Polymerase,Pol)在HBV复制过程中起着关键作用,并有可能参与肝癌的发生。Pol的这些生理功能很有可能是通过与蛋白质之间的相互作用来行使的。本文通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation)结合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术,筛选、鉴定与Pol存在潜在相互作用的蛋白。用构建好的pcDNA3.1-POL-flag重组质粒转染HeLa细胞,LC-MS/MS技术筛选能与融合flag标签的Pol发生免疫共沉淀的蛋白,共得到45个蛋白,其中11个蛋白被报道能与Pol发生相互作用。Ingenuity Pathway Analysis(IPAR○)软件进一步分析45个蛋白与Pol的功能及相应的细胞网络,发现这些蛋白涉及三个大分子网络,其中4个蛋白可能参与协助Pol在细胞网络中行使其生理功能,对这4个蛋白的进一步研究将有助于为攻克乙型肝炎病提供线索。

关键词： LTQ-FT-MS 乙型肝炎病毒聚合酶相互作用

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玉米秸秆浸出液对大型蟤生长繁殖的影响

生态学杂志 2017年第3期36卷 695-701页

作者：唐雅丽杨小琴暨南大学生命科学技术学院生态学系广州510632

陆源溶解性有机碳(t-DOC)是湖泊碳库的恒定组分,对湖泊食物网产生重要的影响。以往的野外调查结果显示,陆源有机碳占浮游动物食物总碳量的均值为53%,能显著贴补浮游动物。然而陆源有机碳直接作为食物时,并不能支持浮游动物的生长和繁殖... 详细信息

陆源溶解性有机碳(t-DOC)是湖泊碳库的恒定组分,对湖泊食物网产生重要的影响。以往的野外调查结果显示,陆源有机碳占浮游动物食物总碳量的均值为53%,能显著贴补浮游动物。然而陆源有机碳直接作为食物时,并不能支持浮游动物的生长和繁殖。那这个贴补从何而来?针对该问题,本文提出假设:t-DOC能经由异养微食物网的转化,形成浮游动物的优质食物,最终贴补浮游动物。为验证假设,本文采用稳定同位素示踪,以玉米秸秆浸出液代表t-DOC,进行黑暗腐烂实验,并设置5种食谱(栅藻、未腐烂和腐烂的t-DOC、以及腐烂实验中分离的细菌、纤毛虫、鞭毛虫)喂养大型蟤。结果表明:大型蟤存活率、最大体长和累积繁殖量表现为t-DOC腐烂组和栅藻组最高,鞭毛虫组和纤毛虫组次之,细菌组和t-DOC组最低,且腐烂t-DOC喂养的大型蟤δ13C与t-DOC基本一致。由此我们提出t-DOC贴补浮游动物的一条可能途径:细菌、鞭毛虫和纤毛虫共同完成了t-DOC食物质量提升,并最终贴补浮游动物。本研究结果可为揭示陆生生态系统对水生态系统的影响和完善水生态系统的保护与管理提供理论依据。

关键词：陆源溶解性有机碳微食物网鞭毛虫纤毛虫浮游动物

色氨酸羟化酶2理性设计提高大肠埃希菌5-羟基色氨酸产量

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微生物学杂志 2024年第4期44卷 23-30页

作者：李春辉杨志彬崔金旺郝晋博田俊波胡江林吕志堂河北大学生命科学学院河北省微生物多样性研究与应用实验室河北保定071002 河北维达康生物科技有限公司河北保定072152 保定保利瑞合生物科技有限公司河北保定072152

色氨酸羟化酶(TPH)可催化色氨酸羟化为5-羟基色氨酸(5-HTP),是5-HTP生物合成过程中的关键酶。为了提高大肠埃希菌细胞工厂合成5-HTP的效率,通过酶的理性设计和定点突变技术构建了人色氨酸羟化酶2(TPH2)的系列突变体,并在高产L-色氨酸且... 详细信息

色氨酸羟化酶(TPH)可催化色氨酸羟化为5-羟基色氨酸(5-HTP),是5-HTP生物合成过程中的关键酶。为了提高大肠埃希菌细胞工厂合成5-HTP的效率,通过酶的理性设计和定点突变技术构建了人色氨酸羟化酶2(TPH2)的系列突变体,并在高产L-色氨酸且含有TPH辅酶四氢生物蝶呤(BH_(4))合成与再生模块的大肠埃希菌中表达。发现适当降低酶和色氨酸、酶和BH_(4)间结合的氢键数目有助于提高5-HTP产量;酶和底物色氨酸结合情况不变,辅酶BH_(4)与酶间氢键数目越多,5-HTP产量越低。5-HTP产量最高的细胞工厂是由突变酶V195A/V197I构建的,5-HTP产量较野生酶构建的细胞工厂产量提高54%,1 L补料摇床发酵48 h,5-HTP产量达16.17 g/L。理性设计是提高TPH2酶活,突破5-HTP合成限速步骤的有效途径,TPH2和底物色氨酸、辅酶BH_(4)间氢键连接太多或太少都不利于其催化活性的发挥。

关键词：色氨酸羟化酶2 理性设计定点突变 5-羟基色氨酸细胞工厂