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抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白在毕赤酵母中的表达及其活性鉴定

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中国药科大学学报 2005年第1期36卷 63-68页

作者：苏志坚吴晓萍郑青黄亚东庞实锋冯雅李校堃暨南大学药学院暨南大学医药生物技术研究开发中心广州510632

目的 :构建和表达一种抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,在创伤皮肤表面应用时能裂解成有功能的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子 ,预防伤口感染和促进皮肤修复。方法 :利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素... 详细信息

目的 :构建和表达一种抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,在创伤皮肤表面应用时能裂解成有功能的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子 ,预防伤口感染和促进皮肤修复。方法 :利用PCR技术分别扩增出带有凝血酶切割位点的天蚕素杂合肽基因和人酸性成纤维细胞生长因子基因。再将两者作为模板 ,用PCR方法扩增出编码融合蛋白的DNA。将该DNA片段插入到载体pPICZαA中 ,并利用电转法将质粒转入毕赤酵母smd116 8中 ,Zeocin抗性筛选重组转化子。甲醇诱导 96h ,SDS PAGE电泳检测融合蛋白的表达 ,并用Western blot杂交检测融合蛋白的免疫原性。利用肝素亲和层析纯化融合蛋白 ,同时检测融合蛋白的抑菌和促3T3Bal/b细胞分裂活性。结果 :筛选出能表达相对分子质量约为 19kD融合蛋白的重组转化株 ,SDS PAGE电泳检测显示甲醇诱导 96h后 ,融合蛋白表达量达到最高 ,且能与人酸性成纤维细胞生长因子抗体产生免疫反应。融合蛋白没有抑菌活性 ,而裂解产物则具有抑菌活性。此外 ,融合蛋白的促细胞分裂活性与野生型人酸性成纤维细胞生长因子相比没有明显的降低。结论 :获得含凝血酶切割位点的抗菌肽和人酸性成纤维细胞生长因子的融合蛋白 ,并在毕赤酵母中实现了表达。融合蛋白的裂解产物具有抑菌活性。

关键词：抗菌肽人酸性成纤维细胞生长因子融合蛋白毕赤酵母构建表达

南水北调中线总干渠浮游植物群落结构特征及其影响因素

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南水北调中线总干渠浮游植物群落结构特征及其影响因素

环境激素三氯卡班与雌二醇对大型溞的复合干扰效应

中国水利学会2019学术年会

作者：张春梅朱宇轩梁建奎宋高飞米武娟毕永红大连海洋大学中国科学院水生生物研究所淡水生态与生物技术国家重点实验室南水北调中线干线工程建设管理局

为认识南水北调中线总干渠浮游植物群落结构,2018年8月至2019年5月对总干渠11个样点进行4个季度的采样调查,共检出浮游植物7门83属145种,其中硅藻、绿藻、蓝藻种类分别占总种类数的46.89%、32.41%、11.03%,不同季节的物种数排序为春季>... 详细信息

为认识南水北调中线总干渠浮游植物群落结构,2018年8月至2019年5月对总干渠11个样点进行4个季度的采样调查,共检出浮游植物7门83属145种,其中硅藻、绿藻、蓝藻种类分别占总种类数的46.89%、32.41%、11.03%,不同季节的物种数排序为春季>秋季>冬季>夏季;优势种包括极小曲壳缝、桥弯藻、空星藻、衣藻等(Y>0.02);浮游植物全年平均密度为(6.79×10±7.15×10)cell/L,叶绿素a平均含量为(4.09±2.89)μg/L,与细胞密度变化趋势一致;夏季浮游植物细胞密度显著高于其他季节(P<0.05),以绿藻、蓝藻为主,春秋冬季以硅藻、绿藻为主;空间上,细胞密度从南到北呈递增趋势,穿黄工程后显著高于穿黄工程前(P<0.05)。RDA分析表明,水温和营养盐是影响群落结构的主要因子,其次是流量和浊度。聚类分析显示,时间变化对于群落结构产生的影响比空间变化更为显著。结果显示,跨流域长距离输水的中线干渠,浮游植物群落显示明显的时空异质性;鉴于浮游植物群落结构与水质间的密切相互关系,需要高度关注浮游植物的群落演变及其对水质的影响。

关键词：南水北调中线浮游植物群落结构环境因子

来源： cnki会议评论

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环境激素三氯卡班与雌二醇对大型溞的复合干扰效应

作者：李根暨南大学

学位级别：硕士

环境激素(Environmental hormones)是一类干扰生物体内分泌功能外源性污染物质，能影响生物体内源激素的分泌、释放、代谢、排泄及细胞响应等生理过程，从而破坏生物体内稳态的维持和对生长发育的调控。复合干扰效应，是两种或多于两种... 详细信息

环境激素(Environmental hormones)是一类干扰生物体内分泌功能外源性污染物质，能影响生物体内源激素的分泌、释放、代谢、排泄及细胞响应等生理过程，从而破坏生物体内稳态的维持和对生长发育的调控。复合干扰效应，是两种或多于两种的化合物短时间内作用于生物体而导致的综合毒性现象。三氯卡班（triclocarban，TCC）是在国际上广泛使用的抗菌剂。由于化学性质稳定，TCC存在于各种环境介质。雌二醇（estradiol，E2）主要存在于水环境中，被认为是雌激素效应最强的环境激素。TCC和E2具有疏水性、脂溶性和生物富集性，可严重干扰生态环境和人类健康。为深入研究TCC和E2联合暴露对枝角类浮游的干扰效应，论文以大型溞（Daphnia magna）为实验对象，研究了TCC和E2单独暴露以及复合暴露下对大型溞的急慢性毒性效应。结果表明：（1）E2对大型溞24h EC50值为2.57mg·L-1。E2单独高浓度（1.285mg·L-1）暴露对大型溞的生长和繁殖造成显著抑制，而中低浓度暴露对大型溞的抑制作用不显著。E2暴露下，母体首次繁殖时体长、首胎幼体初生体长和母体平均繁殖次数分别比对照减少了0.8%-10%、-1.5%-9%和3%-22%;E2暴露浓度与大型溞的过氧化氢酶（CAT）活性存在低促高抑的对应关系，与丙二醛（MDA）含量呈正相关关系。（2）TCC对大型溞24hEC50值为5.2μg·L-1。TCC暴露使大型溞的生长及繁殖受到显著危害，母体首次繁殖时体长、首胎初生幼体体长和平均繁殖次数分别比对照减少了2%-19.6%、3.5%-24.2%和4.9%-37.2%。TCC暴露浓度与大型溞的CAT和超氧化物氧歧化酶（SOD）活性均呈现低促高抑的对应关系;MDA含量随TCC暴露浓度的增加而升高。（3）E2和TCC联合暴露对大型溞的生长及繁殖过程造成了明显的干扰，表现为协同效应，它们的24h EC50值是0.8TU。对比E2和TCC单独暴露，联合暴露下大型溞的受毒害程度显著加深，母体首次繁殖时体长减少了2.5%-13.3%，1.3%-3.7%、首胎初生幼体体长减少了10.5%-24.3%，5.5%-9.1%、平均繁殖次数下降了8.7%-25%，6.8%-9.8%、死亡率上升了33.2%-44.6%，33.2%-24.6%、SOD和谷胱甘肽硫转移酶（GST）受到更为显著的抑制、MDA含量明显升高。研究结果可为科学评估环境激素对浮游生物的危害效应提供参考。

关键词：环境激素三氯卡班雌二醇大型溞复合干扰效应

双亲性壳聚糖仿生衍生物的合成、自组装及其生物学评价

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双亲性壳聚糖仿生衍生物的合成、自组装及其生物学评价

作者：过凯暨南大学

学位级别：硕士

本论文从细胞膜仿生角度出发，以壳聚糖为基材，通过化学改性分别引入亲水性细胞仿生性磷酸胆碱基团和疏水性脱氧胆酸基团，制备了一种新型的双亲性壳聚糖仿生衍生物，并研究了其在水溶液的自组装、生物安全性以及药物包载与释放行为。... 详细信息

本论文从细胞膜仿生角度出发，以壳聚糖为基材，通过化学改性分别引入亲水性细胞仿生性磷酸胆碱基团和疏水性脱氧胆酸基团，制备了一种新型的双亲性壳聚糖仿生衍生物，并研究了其在水溶液的自组装、生物安全性以及药物包载与释放行为。我们首先对100%脱乙酰度的壳聚糖改性获得6-O-三苯基甲醚化壳聚糖中间体，再基于Antherton-Todd反应制备磷酸胆碱化壳聚糖（PCCs）,然后与经1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）和N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活化的脱氧胆酸反应，最终获得双亲性壳聚糖仿生衍生物：脱氧胆酸-磷酸胆碱-壳聚糖（DCA-PC-Cs），并采用核磁共振、红外光谱、紫外吸收光谱对聚合物的结构进行了表征。基于双亲性共聚物的自组装原理，选择所制备的双亲性壳聚糖仿生衍生物DCA3.3-PC42-Cs（DCA取代度=3.3%，PC取代度=42%），通过超声振荡法，在水溶液中自组装形成具有核/壳结构的纳米胶束。动态光散射测定其粒径约280nm，PDI=0.217，粒径分布较窄，Zeta电位=5.67mV;而透射电镜观察表明干态的DCA3.3-PC42-Cs纳米胶束呈球形，粒径介于100-130nm之间。采用荧光探针技术测得DCA3.3-PC42-Cs具有较小的临界胶束浓度（1.77×10-2mg/mL），且稳定性较好，4℃下放置30天，动态光散射测得其粒径基本保持不变。细胞毒性实验表明，双亲性壳聚糖仿生衍生物DCA3.3-PC42-Cs纳米胶束对小鼠胚胎成纤维细胞（3T3）的半数抑制浓度IC50约为3.0mg/mL;而体外血液相容性评价（与红细胞共孕育实验、溶血实验、C3a补体激活实验）表明DCA3.3-PC42-Cs纳米胶束具有良好的血液相容性，可见DCA3.3-PC42-Cs纳米胶束具有良好的生物安全性。对小牛血清白蛋白（BSA）的吸附实验结果表明，表面磷酸胆碱基团的引入可以有效抑制DCA3.3-PC42-Cs纳米胶束的蛋白吸附作用，有利于胶束实现长循环。以槲皮素为疏水性药物模型，通过旋转蒸发法制备了载药纳米胶束DCA3.3-PC42-Cs/QU。动态光散射测得其粒径约为297nm;透射电镜观察表明载药纳米胶束呈球形。采用高效液相色谱测得包封率和载药量分别为41.6%与4.38%，在生理盐水中的体外释放实验表明，槲皮素释放平稳，没有爆释现象，48h时，累积释放量为77.56%。表明DCA-PC-Cs纳米胶束可以用于构建疏水性药物纳米传输系统，实现药物在体内的长效缓释。

关键词：双亲性壳聚糖仿生衍生物聚合物胶束磷酸胆碱脱氧胆酸药物释放

灭活HIV-1颗粒引发小胶质细胞钙离子内流和NF-κB核转位的研究

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中国病理生理杂志 2014年第5期30卷 825-831页

作者：黄秀艳曾耀英暨南大学免疫生物学系广东广州510632

目的:探讨灭活的1型人类免疫缺陷病毒颗粒(HIVp)对人小胶质细胞钙离子内流和转录因子NF-κB核转位的作用,对比不同亚型(HIVp-X4型与HIVp-R5型)的灭活HIVp所引发的钙离子内流强度差异。方法:将小胶质细胞接种到圆形盖玻片上,用钙离子探针... 详细信息

目的:探讨灭活的1型人类免疫缺陷病毒颗粒(HIVp)对人小胶质细胞钙离子内流和转录因子NF-κB核转位的作用,对比不同亚型(HIVp-X4型与HIVp-R5型)的灭活HIVp所引发的钙离子内流强度差异。方法:将小胶质细胞接种到圆形盖玻片上,用钙离子探针Fluo-4进行染色,用共聚焦显微镜以荧光强度为指标实时观察不同刺激条件下细胞内钙离子水平的变化;联合胞内染色技术,用共聚焦显微镜记录不同处理条件下的小胶质细胞NF-κB核转位。结果:共聚焦显微镜检测结果显示HIVp所引发的钙内流效应明显强于gp120;在gp120同时存在的情况下,HIVp激发的钙离子内流效应会被其部分阻断;另外,HIVp-X4所引发的钙离子内流和NF-κB核转位要比HIVp-R5明显。结论:HIVp表面既有自身基因组编码的gp120蛋白,又有出胞时所携带的宿主蛋白,由于HIVp引发的钙内流效应明显强于gp120,因而推测HIVp表面的宿主蛋白在活化小胶质细胞中起了一定的协同作用;而HIVp-X4对小胶质细胞的刺激性明显强于HIVp-R5,提示X4型病毒是HIV相关性失智症的重要致病因素。

关键词：小胶质细胞人类免疫缺陷病毒1型核因子κB 核转位

珠江河口水体和沉积物中壬基酚和辛基酚的分布特征及风险评价

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珠江河口水体和沉积物中壬基酚和辛基酚的分布特征及风险评价

作者：陈茹暨南大学

学位级别：硕士

壬基酚（Nonylphenol，NP）和辛基酚（Octylphenol，OP）是一类持久性有机污染物，同时也是典型的酚类内分泌干扰物，具有难降解性，毒性，生物累积性和雌激素活性。NP和OP是两种广泛应用于工业生产的人工合成化合物，是最常见的市售长... 详细信息

壬基酚（Nonylphenol，NP）和辛基酚（Octylphenol，OP）是一类持久性有机污染物，同时也是典型的酚类内分泌干扰物，具有难降解性，毒性，生物累积性和雌激素活性。NP和OP是两种广泛应用于工业生产的人工合成化合物，是最常见的市售长链烷基酚，同时也是烷基酚聚氧乙烯醚的主要降解产物。NP和OP在环境中的分布特征、迁移转化规律以及生态风险评价现已成为近年来环境科学领域的研究热点。珠江河口区经济发达，自然环境复杂，人口密集，人类活动的干扰对河口的生态环境造成巨大的影响，同时河口也是陆源污染物输入与太平洋相连的南海的主要通道。我国关于NP和OP的环境分布的研究已有展开，但是珠江河口环境中的研究仍较少。本文以珠江河口为研究区域，采用高效液相-质谱联用（HPLC-MS）方法测定了NP和OP的含量，分析其在珠江河口表层水和沉积物中的时空分布和污染特征，初步讨论其可能产生的不良生物效应，并在此基础上，结合欧盟对NP的风险评估报告和美国EPA对NP的环境水质标准以及基于物种敏感性分布（Species Sensitivity Distribution, SSD）特征构建NP和OP的风险评价模型，利用风险商法对珠江河口NP和OP的污染现状进行了生态风险评价，并就其对人类健康的风险进行了初步评价。研究结果表明：（1）珠江河口表层水中NP和OP的浓度分别为30.4-16.2×103ng/L和1.7-15.7×103ng/L。夏季表层水中各站位NP和OP的浓度水平均高于春季、秋季和冬季，原因可能与夏季水温较高，导致微生物加剧对NPEs和OPEs的分解有关;NP和OP的浓度在虎门最高，主要受工业废水、市政污水以及生活污水排放的影响。表层沉积物中，NP和OP的浓度分别为1.2-91.7ng/g dw和＜LOD-8.8ng/g dw，其季节分布与表层水的分布相似。NP在表层沉积物中的最高含量出现在磨刀门，主要受河流输入的影响;而OP的含量在崖门最高，其原因可能是OPEs在该区域有较高的使用量。与世界其它地区河流和近海岸海域的研究结果相比，珠江河口表层水和沉积物中NP和OP的浓度均处于中等水平。（2）珠江河口表层水和沉积物中大部分站位的NP和OP浓度已超过了产生不良生物效应的起始浓度，水生生物和底栖生物都有可能已经受到危害。以欧盟的评估报告为评价标准，NP在水体和沉积物中的风险商RQwater和RQsediment分别为0.11-49和0.03-2.4，水体中NP风险高于沉积物。需对NP在珠江河口的污染状况进行继续观察，并采取相应的风险消减措施。（3）基于SSD模型计算得到的PNEC值，利用风险商对NP和OP的生态风险进行定量化表征。结果表明，珠江河口表层水中NP和OP的RQwater分别为0.082-44和0.0059-55;表层沉积物中，NP的RQsediment为0.022-1.7，OP的,为0.081-0.27，大部分站位的RQsediment值介于0.1-1之间。该结果表明需对NP和OP的污染状况进行继续观察，并采取相关的风险消减措施。（4）对于人类健康的风险评价，NP在研究区域成年人和婴儿NP暴露的风险指数（RI）分别为0.1和0.3，OP暴露的RI分别为0.0005和0.002。RI值均小于1，表明目前珠江三角洲居民通过饮用水途径摄入的NP和OP量较少，风险较低。

关键词：珠江三角洲壬基酚辛基酚分布特征风险评价

高/低吸收累积品种菜心根系分泌物对土壤中环丙沙星环境行为的影响

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高/低吸收累积品种菜心根系分泌物对土壤中环丙沙星环境行为的影响

作者：姜元能暨南大学

学位级别：硕士

抗生素作为新型污染物在肉奶蛋等动物性食品中已广泛研究，但有关土壤-作物系统中抗生素的环境行为与归宿的研究鲜有报道。深入研究根系分泌物对土壤环境中抗生素的环境行为的影响及其机制，对促进农业环保学科发展和确保农产品安全具... 详细信息

抗生素作为新型污染物在肉奶蛋等动物性食品中已广泛研究，但有关土壤-作物系统中抗生素的环境行为与归宿的研究鲜有报道。深入研究根系分泌物对土壤环境中抗生素的环境行为的影响及其机制，对促进农业环保学科发展和确保农产品安全具有重要的理论和现实意义。本研究选用对喹诺酮类抗生素具有高、低吸收累积的菜心（Brassica parachinensis）品（分别为油青四九和油绿粗苔）作为研究对象，以土壤中普遍检出且含量较高的环丙沙星（CIP）为喹诺酮类抗生素代表化合物，通过水培试验调查两种菜心根系分泌物中低分子有机酸、总有机碳（TOC）的含量特征;探讨低分子有机酸对土壤中CIP环境行为（吸附、解吸、降解）的影响及其作用机理，进而从根系分泌物的角度阐明两种菜心高/低吸收累积环丙沙星差异的机理。主要研究结果如下：（1）根系分泌物中低分子有机酸（酒石酸、甲酸、草酸、乙酸、马来酸、苹果酸和柠檬酸）测定结果表明：马来酸浓度最高（6.47~52.27mg/L），且一般情况下油青四九菜心（高累积品种）的马来酸含量均显著高于油绿粗苔菜心（低累积品种）。（2）CIP在土壤中的吸附过程符合二级动力学方程，吸附平衡时间为8h。低分子有机酸作用下CIP的吸附等温线中Freundlich模型拟合效果最好，吸附属于物理吸附。此外，低浓度的有机酸作用能够促进土壤表面对CIP的吸附，高浓度时则抑制CIP的吸附，且大多数情况下马来酸的抑制作用较混合酸（ARE）强。低分子有机酸通过改变溶液的pH值，进而改变土壤表面和CIP分子的带电状态来影响CIP的吸附，同时溶出土壤中CIP的架桥离子尤其是Cu2+，降低CIP在土壤中的吸附作用。（3）低浓度的有机酸能够抑制CIP的解吸，而高浓度的有机酸能够极大的促进CIP的解吸。有机酸影响CIP解吸的作用机理与吸附过程的作用机理相似。（4）马来酸对土壤CIP降解作用影响试验结果表明：CIP在土壤中的残留浓度随培养时间延长而显著降低，降解过程符合一级动力学方程。0.5g/L马来酸作用下，CIP降解速率常数最大（0.0216），半衰期最短（32.09d），培养40d后降解率为60.49%;其余浓度处理下降解速率常数为0.0161~0.0185，半衰期为37.47~43.05d，与不添加马来酸处理间显著不差异。T-RFLP分析表明，添加马来酸培养较短时间内（5d），CIP污染土壤中细菌的优势种群以及能鉴别的细菌种类均发生变化，但培养20d后，细菌种类以及细菌群落多样性基本无差异。因此，马来酸对土壤中细菌群落多样性影响较小，不能改变土壤中CIP的降解速率。吸附、解吸试验表明马来酸可显著减少CIP在土壤中的吸附作用;而油青四九菜心（高累积）根系分泌物中马来酸含量显著高于油绿粗苔菜心（低累积），前者更有利于提高土壤中CIP的生物有效性，从而利于其吸收。可见，分泌马来酸含量的差异是导致菜心高/低累积CIP的重要原因。

关键词：环丙沙星菜心根系分泌物吸附解吸降解

牛大力多糖对小鼠T淋巴细胞增殖的双向调节作用

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广东药学院学报 2008年第1期24卷 58-61页

作者：郑元升蒲含林麻建军暨南大学生物工程研究所广东广州510632

目的从牛大力(Millettia Speciosa Champ.)提取纯化多糖,流式细胞术检测多糖对刀豆蛋白A(Con A)刺激引起的小鼠T淋巴细胞增殖的影响,探讨牛大力多糖对免疫系统的调节作用机制,为临床用牛大力治疗多种慢性疾病提供理论和实验依据。方法... 详细信息

目的从牛大力(Millettia Speciosa Champ.)提取纯化多糖,流式细胞术检测多糖对刀豆蛋白A(Con A)刺激引起的小鼠T淋巴细胞增殖的影响,探讨牛大力多糖对免疫系统的调节作用机制,为临床用牛大力治疗多种慢性疾病提供理论和实验依据。方法提取、纯化牛大力多糖,利用CFDA-SE染色,流式细胞术检测多糖对Con A刺激引起的小鼠T淋巴细胞增殖的影响。结果终浓度为160μg/mL、800μg/mL、4 mg/mL、20 mg/mL的多糖对小鼠T淋巴细胞增殖呈剂量依赖性抑制,而终浓度为5、25、50、125μg/mL的多糖对小鼠T淋巴细胞增殖起促进作用,剂量依赖关系不明显。结论牛大力多糖对小鼠T淋巴细胞的增殖呈双向调节作用。

关键词：牛大力多糖 T淋巴细胞 CFDA-SE

HLA-A^＊2402-BSP在大肠杆菌中的优化表达及其四聚体的制备和鉴定

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生物工程学报 2007年第2期23卷 284-291页

作者：贾仟涛徐丽慧李丰耀查庆兵何贤辉暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广州510632 暨南大学附属第一医院临床实验中心广州510632

HLA-A*2402是中国人群中最常见的等位基因之一,为研究该基因型人群的人巨细胞病毒(HCMV)特异性细胞毒T细胞(CTL)免疫应答,需要制备负载相应抗原肽的HLA-A*2402四聚体。以RT-PCR方法克隆HLA-A*2402重链基因的cDNA,并构建了羧基端融合生... 详细信息

HLA-A*2402是中国人群中最常见的等位基因之一,为研究该基因型人群的人巨细胞病毒(HCMV)特异性细胞毒T细胞(CTL)免疫应答,需要制备负载相应抗原肽的HLA-A*2402四聚体。以RT-PCR方法克隆HLA-A*2402重链基因的cDNA,并构建了羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A*2402重链胞外域融合蛋白(HLA-A*2402-BSP)的表达载体,但该载体不能在大肠杆菌(E.coli)中有效表达HLA-A*2402-BSP融合蛋白;通过对氨基端(N端)区域编码区的密码子进行优化,构建了同义突变的HLA-A*2402-BSP表达载体,融合蛋白在E.coli中获得了高效表达。进而制备了负载HLA-A*2402限制性HCMVpp65341-349抗原肽(QYDPVAALF,QYD)的可溶性HLA-A*2402-QYD单体分子和四聚体,获得的四聚体具有与HLA-A24+供者抗原特异性CTL的结合活性,特异性CTL的频率为总CD8+T细胞的0·09%～0·37%。这些结果为进一步研究HLA-A*2402限制性的特异性CTL免疫应答规律奠定基础。

关键词：四聚体 HLA-A^＊2402 巨细胞病毒密码子优化原核表达包涵体