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乳岩内消霜通过调控Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路促进乳腺癌前病变细胞铁死亡的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：张昊天邱叶贝苏燃颜显欣马民暨南大学中医学院暨南大学附属第一医院

目的：探讨乳岩内消霜（Ruyanneixiao Cream，RUc）诱导乳腺癌前病变（Breast premalignant lesion，BPL）细胞铁死亡的作用机制，丰富乳岩内消霜治疗乳腺癌前病变的理论基础。方法：通过细胞增殖与活性检测法（CCK-8）实验、克隆形成... 详细信息

目的：探讨乳岩内消霜（Ruyanneixiao Cream，RUc）诱导乳腺癌前病变（Breast premalignant lesion，BPL）细胞铁死亡的作用机制，丰富乳岩内消霜治疗乳腺癌前病变的理论基础。方法：通过细胞增殖与活性检测法（CCK-8）实验、克隆形成实验检测1%、2%和4%浓度乳岩内消霜透皮液（Ruyanneixiao Cream transdermal solution，RUt）对细胞增殖的抑制情况；使用DCFH-DA探针对活性氧（Reactive oxygen species，ROS）进行检测，使用相应试剂盒检测细胞内亚铁离子(Fe2+)、谷胱甘肽（Glutathione，GSH）和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）含量；采用脂质过氧化荧光探针C11-BODIPY581/591检测脂质过氧化；通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核因子E2相关因子2（Nuclear factor E2-related factor 2，Nrf2）、溶质载体家族7成员11（Solute carrier family 7 member 11，SLC7A11）和谷胱甘肽过氧化物酶4（Glutathione peroxidase 4，GPX4）蛋白的表达情况。使用二甲基苯并蒽(2，2'-bis（hydroxymethyl）butyric acid，DMBA)联合雌孕激素构建BPL大鼠模型，同时使用RUc外用治疗，第十二个周期后安乐死大鼠，通过苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin staining，HE）染色观察乳腺组织病理学改变，使用相应试剂盒检测乳腺组织Fe2+和MDA含量；通过免疫组化法（Immunohistochemistry，IHC）和蛋白免疫印迹法检测BPL大鼠乳腺组织Nrf2、SLC7A11和GPX4蛋白的表达情况。结果：与基质组比较，1%、2%和4% RUt组MCF-10AT细胞活性显著降低（P＜0.05），具有浓度依赖性，24小时半数抑制浓度(IC50)为2.23%；与4% RUt组比较，RUt+Fer-1组细胞活性显著提高（P＜0.05）。与基质组比较，1%、2%和4% RUt组MCF-10AT细胞克隆形成率显著降低（P＜0.05）；与4% RUt组比较，RUt+Fer-1组细胞克隆形成率显著增高（P＜0.05）。与基质组比较，1%、2%和4% RUt组细胞内ROS和Fe2+水平显著增高（P＜0.05），GSH水平显著降低（P＜0.05），MDA和脂质过氧化水平显著增高（P＜0.05）；与4% RUt组比较，RUt+Fer-1组细胞内ROS和Fe2+水平显著降低（P＜0.05），GSH水平显著增高（P＜0.05），MDA和脂质过氧化水平显著降低（P＜0.05）。与基质组比较，1%、2%和4% RUt组MCF-10AT细胞内Nrf2、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）；与4% RUt组比较，RUt+Fer-1组细胞内Nrf2、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平显著增高（P＜0.05）。在体内实验中，与基质组比较，RUc组BPL大鼠乳腺组织病理状态有效改善，乳腺导管扩张程度低且导管排列有序，未见浸润性癌的病理形态。与基质组比较，RUc组大鼠乳腺组织中Fe2+和MDA水平显著增高（P＜0.05）。与基质组比较，RUc组大鼠乳腺组织中Nrf2、SLC7A11和GPX4蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论：乳岩内消霜可能通过抑制Nrf2/SLC7A11/GPX4信号通路，提高Fe2+积累并通过脂质过氧化反应诱导乳腺癌前病变细胞发生铁死亡。

关键词：乳腺癌前病变乳岩内消霜铁死亡脂质过氧化核因子E2相关因子2(Nrf2)

人参皂苷Rd通过下调DRP1介导的线粒体分裂缓解哮喘

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中国病理生理杂志 2024年第7期40卷 1237-1243页

作者：李祎马立光延边大学医学院吉林延吉133002 延边大学医学院口腔教研室吉林延吉133002

目的:探讨人参皂苷Rd通过发动蛋白相关蛋白1(DRP1)介导的线粒体分裂缓解蟑螂提取物(CRE)诱导的哮喘小鼠气道炎症的分子机制。方法:动物(BALB/c小鼠)和细胞(人气道上皮BEAS-2B细胞)实验均设置对照组、模型组(CRE组)、CRE+低剂量人参皂苷R... 详细信息

目的:探讨人参皂苷Rd通过发动蛋白相关蛋白1(DRP1)介导的线粒体分裂缓解蟑螂提取物(CRE)诱导的哮喘小鼠气道炎症的分子机制。方法:动物(BALB/c小鼠)和细胞(人气道上皮BEAS-2B细胞)实验均设置对照组、模型组(CRE组)、CRE+低剂量人参皂苷Rd组、CRE+高剂量人参皂苷Rd组和CRE+地塞米松组。利用HE染色法观察肺组织病理改变;ELISA及流式细胞术检测辅助性T细胞(Th1/Th2)因子水平;Western blot和荧光染色法检测活性氧(ROS)产生、线粒体分裂蛋白及线粒体形态。结果:人参皂苷Rd显著减轻CRE诱导的小鼠气道周围炎症细胞浸润,降低血清总免疫球蛋白E(IgE)和CRE特异性IgE水平(P<0.05),以及支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞比例(P<0.05),纠正Th1/Th2失衡(P<0.05)。人参皂苷Rd还可降低模型小鼠肺组织和CRE诱导的BEAS-2B细胞中DRP1、p-DRP1(Ser616)和线粒体分裂蛋白1(FIS1)水平(P<0.05),改善线粒体形态,抑制ROS产生。结论:人参皂苷Rd通过下调DRP1介导的线粒体分裂,减轻CRE诱导的哮喘气道炎症。本研究对人参皂苷Rd在哮喘模型中的免疫药理作用提出了新的见解。

关键词：人参皂苷Rd 发动蛋白相关蛋白1 线粒体哮喘

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免疫治疗在胃癌中的应用研究进展

中国肿瘤临床 2024年第7期51卷 359-365页

作者：熊德君丁晓凌周晓荣南通大学医学院免疫系教研室江苏省南通市226001 南通大学附属医院消化内科

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,由于胃癌筛查率低和早期症状轻微,多数患者在晚期才被确诊,影响预后。近年来,随着研究深入,胃癌的免疫治疗取得显著进展,尤其对不可切除和转移性病例效果显著,使其成为继手术、化疗、放疗和靶向治疗后... 详细信息

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,由于胃癌筛查率低和早期症状轻微,多数患者在晚期才被确诊,影响预后。近年来,随着研究深入,胃癌的免疫治疗取得显著进展,尤其对不可切除和转移性病例效果显著,使其成为继手术、化疗、放疗和靶向治疗后的有效治疗方法。免疫治疗通过人为调控免疫系统生效,包括过继细胞疗法、免疫检查点抑制剂和肿瘤疫苗等。目前,免疫治疗虽然前景广阔,但在临床应用中仍面临诸多挑战和问题。本文就胃癌免疫治疗的临床应用以及存在的问题进行综述。

关键词：胃癌免疫治疗过继细胞疗法免疫检查点抑制剂肿瘤疫苗

缺氧对宫颈癌SiHa细胞中Gli1与Sox2表达的影响

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吉林大学学报（医学版） 2024年第2期50卷 442-450页

作者：朱长吉刘兴哲玄延花延边大学医学院病理教研室吉林延吉133002

目的:分析胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)和性别决定区Y框蛋白2(Sox2)在宫颈癌细胞中的表达及其病理学意义,探讨Gli1与宫颈癌干性特征的相关性。方法:采用免疫组织化学染色方法检测159例宫颈癌组织中Gli1、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、S... 详细信息

目的:分析胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)和性别决定区Y框蛋白2(Sox2)在宫颈癌细胞中的表达及其病理学意义,探讨Gli1与宫颈癌干性特征的相关性。方法:采用免疫组织化学染色方法检测159例宫颈癌组织中Gli1、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、Sox2、性别决定区Y框蛋白9(Sox9)、分化簇44(CD44)、八聚体结合转录因子4(OCT4)和赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)的表达并分析其相关性;使用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)明确Gli1对宫颈癌状细胞患者预后的影响及其与干细胞标志物的相关性;缺氧条件下检测SiHa细胞的球体形成能力及其干细胞标志物表达。结果:免疫组织化学染色,在宫颈癌组织中Gli1表达率与HIF-1α(r=0.374,P<0.001)和Sox2表达水平(r=0.176,P<0.05)呈正相关关系;GEPIA数据库分析,宫颈癌中Gli1阳性表达的患者预后差(P<0.05)。缺氧条件下SiHa细胞中Gli1、HIF-1α和Sox2的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P<0.001),且具有较强的球体形成能力。结论:缺氧上调宫颈癌细胞Gli1和Sox2 mRNA及蛋白表达水平,促进癌细胞的干性特征形成。

关键词：宫颈肿瘤胶质瘤相关癌基因同源物1 缺氧干性缺氧诱导因子1a

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纳米硒联合聚维酮碘对手术感染杀菌效果的实验研究

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中山大学学报(医学科学版) 2024年

作者：何晓娟罗学仕陈金莺余广超钟敬祥侯利环暨南大学附属第一医院眼科暨南大学化学与材料学院暨南大学附属第一医院手术室暨南大学附属第六医院眼科

【目的】负载多功能纳米硒聚维酮碘（PVP-I@Se）消毒剂对金黄色葡萄球菌（SA）、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的杀菌效果，为皮肤手术部位消毒提供实验依据。【方法】实验分为PVP-I组（对照组）与PVPI@Se组（实验组），两组的碘浓... 详细信息

【目的】负载多功能纳米硒聚维酮碘（PVP-I@Se）消毒剂对金黄色葡萄球菌（SA）、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的杀菌效果，为皮肤手术部位消毒提供实验依据。【方法】实验分为PVP-I组（对照组）与PVPI@Se组（实验组），两组的碘浓度梯度相同，分别为50、75、100、200和400μg/mL，实验组硒浓度2μg/mL，对照组不添加硒，比较两组不同的消毒液对SA、MRSA的消毒效果，检测指标包括最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）；碘浓度50μg/mL时的最短杀菌时间；碘浓度200μg/mL、400μg/mL时的抑菌圈大小。【结果】对照组对SA、MRSA的MIC均为79.17μg/mL、实验组分别为54.17和70.83μg/mL。而对照组对SA、MRSA的MBC分别为129.17和150.00μg/mL，实验组分别为70.83和87.50μg/mL。碘浓度50μg/mL时，对照组对SA、MRSA的最短杀菌时间为130 s、140 s，实验组分别为65 s、75 s。碘浓度200μg/mL时，对照组对SA、MRSA的抑菌圈直径分别为7.67 mm、8.33 mm，实验组均为9.50 mm。碘浓度400μg/mL时，对照组对SA、MRSA的抑菌圈直径分别为9.00 mm、9.33 mm，实验组分别为11.67 mm、12.00 mm。【结论】在聚维酮碘浓度为50、75、100、200和400μg/mL时，分别加入浓度为2μg/mL的硒，可增强其对SA、MRSA的杀菌效果、缩短作用时间。硒（SeNPs）加入PVP-I对SA、MRSA的杀菌效果均有增效作用。但增敏效果SA较MRSA显著。MRSA的增效作用对碘浓度（400μg/mL）需求较高。为临床精准选用消毒剂的浓度和作用时间，降低临床皮肤手术部位感染提供理论依据。

关键词：聚维酮碘纳米硒金黄色葡萄球菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌杀菌效果

IL-17信号通路在高原低氧诱导小鼠脾脏炎症反应的作用机制

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四川大学学报（医学版） 2024年第1期55卷 118-124页

作者：永胜郭玉静陈晓晨许玉珍胡英青海大学医学院基础医学部免疫学教研室西宁810016

目的探究高原低氧环境诱导小鼠脾脏组织炎症反应发生的作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为平原常氧组和高原低氧组,每组5只。其中,平原常氧组饲养于海拔400 m(氧浓度19.88%)常氧浓度环境,高原低氧组小鼠置于海拔4200 m(氧浓度14.23%)... 详细信息

目的探究高原低氧环境诱导小鼠脾脏组织炎症反应发生的作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为平原常氧组和高原低氧组,每组5只。其中,平原常氧组饲养于海拔400 m(氧浓度19.88%)常氧浓度环境,高原低氧组小鼠置于海拔4200 m(氧浓度14.23%)高原环境,构建高原低氧动物模型。第30天取脾脏组织检测脾脏指数,HE染色观察小鼠脾脏组织病理学改变,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测小鼠脾脏组织白细胞介素(IL)-6、IL-12、IL-1β的mRNA和蛋白表达量;使用RNA测序(RNA-sequencing,RNA-seq)技术进行高通量转录组学测序,将差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行KEGG富集分析,对关键通路中的DEGs进行RT-qPCR验证。结果与平原常氧组相比,高原低氧环境下,小鼠脾脏指数降低(P<0.05),并出现白髓减少,生发中心扩大,边缘模糊,静脉充血等病理学改变;高原低氧组小鼠脾脏组织IL-6、IL-12、IL-1β的mRNA和蛋白表达量均上调(P<0.05)。经转录组测序,KEGG通路富集分析示,4218个DEGs共富集到178个富集通路(P<0.05),DEGs在T细胞受体信号通路、TNF信号通路和IL-17信号通路等多个与免疫、炎症相关通路中显著富集(P<0.05);其中,IL-17信号通路和下游炎症因子高度上调表达(P<0.05);与平原常氧组相比,高原低氧组小鼠脾脏组织IL-17信号通路中关键基因IL-17、IL-17R、MAPKs(mitogen-activated protein kinase genes)等和下游炎症因子MMP9(matrix metallopeptidase 9)、S100A8(S100 calcium binding protein A8 gene)、S100A9(S100 calcium binding protein A9 gene)、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factorα,TNF-α)等基因的mRNA表达量均出现上调或下调差异表达(P<0.05)。经RT-qPCR验证,DEGs的mRNA表达量与RNA-seq结果一致。结论高原低氧环境可通过激活IL-17信号通路,促进下游炎症因子释放,诱导小鼠脾脏组织炎症反应发生。

关键词：高原低氧转录组学 IL-17信号通路脾脏组织炎症 RNA测序生物信息学

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伊伐布雷定抑制瑞芬太尼诱导的小鼠痛觉过敏

中山大学学报(医学科学版) 2024年

作者：肖力王晓娥黄文起崔宇中山大学附属第一医院麻醉科中山大学医学院生理教研室

【目的】探讨外周超极化激活环核苷酸门控（HCN）离子通道抑制剂伊伐布雷定（Ivabradine）对瑞芬太尼诱导的痛觉过敏的作用。【方法】成年雄性C57/BL6小鼠尾静脉输注瑞芬太尼2μg/（kg·min）1 h建立痛觉过敏模型。在瑞芬太尼输注前30 ... 详细信息

【目的】探讨外周超极化激活环核苷酸门控（HCN）离子通道抑制剂伊伐布雷定（Ivabradine）对瑞芬太尼诱导的痛觉过敏的作用。【方法】成年雄性C57/BL6小鼠尾静脉输注瑞芬太尼2μg/（kg·min）1 h建立痛觉过敏模型。在瑞芬太尼输注前30 min皮下注射伊伐布雷定（5 mg/kg），观察对瑞芬太尼诱导痛觉过敏的作用。40只小鼠被平均随机分成4组：生理盐水组（Saline）、瑞芬太尼组（Remifentanil）、瑞芬太尼+溶剂组（Remifentanil+Vehicle）、瑞芬太尼+伊伐布雷定组（Remifentanil+Ivabradine）。其中，每组取6只小鼠用于观察瑞芬太尼或生理盐水输注前1d (Baseline)，输注后1 d、3 d和5 d机械和热痛阈值。每组取4只小鼠，采用免疫荧光法检测瑞芬太尼或生理盐水输注后1 d脊髓背角c-Fos阳性细胞的数量。【结果】与生理盐水组相比，瑞芬太尼输注后1 d和3 d机械痛和热痛阈值显著降低（P<0.001），同时瑞芬太尼输注后1 d脊髓背角c-Fos阳性神经元数量显著增加（P<0.001）。与溶剂组相比，皮下注射伊伐布雷定有效抑制瑞芬太尼诱导的痛觉过敏（P<0.001），并且抑制瑞芬太尼输注后1 d脊髓背角cFos阳性神经元数量的增加（P<0.001）。【结论】伊伐布雷定可能通过抑制外周伤害性初级感觉神经元到脊髓的兴奋性传入，有效抑制瑞芬太尼诱导的小鼠痛觉过敏。

关键词：瑞芬太尼痛觉过敏伊伐布雷定小鼠 c-Fos 环核苷酸门控

西黄丸抑制卵巢癌细胞线粒体能量代谢的效应及机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第1期30卷 70-76页

作者：颜显欣洪守亿马瑞瑞王艳秋布筠艺马民暨南大学中医学院广州510632

目的:研究西黄丸浸提液对卵巢癌SKOV3和HEY细胞线粒体能量代谢的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3和HEY细胞,分别加入不同质量浓度(0、5、10、15、20 g·L^(-1))西黄丸浸提液干预SKOV3和HEY细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法... 详细信息

目的:研究西黄丸浸提液对卵巢癌SKOV3和HEY细胞线粒体能量代谢的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3和HEY细胞,分别加入不同质量浓度(0、5、10、15、20 g·L^(-1))西黄丸浸提液干预SKOV3和HEY细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测西黄丸浸提液对SKOV3和HEY细胞存活率的影响;用蛋白质量检测SKOV3和HEY细胞三磷酸腺苷(ATP)浓度;流式细胞术检测SKOV3和HEY细胞活性氧(ROS)含量;用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测西黄丸浸提液对SKOV3和HEY细胞线粒体相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC1α)、线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体外膜转位酶20(TOMM20)及印迹抑癌基因Ras同源家族Ⅰ(ARHⅠ)的表达;Mito-Tracker Green染色观察SKOV3和HEY细胞线粒体形态学变化。结果:与空白组比较,不同浓度西黄丸浸提液给药24、48 h能明显抑制卵巢癌SKOV3和HEY细胞存活率(P<0.05,P<0.01),呈浓度依赖关系。与空白组比较,西黄丸浸提液组(10、15、20 g·L^(-1))的ATP水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与西黄丸浸提液组(10、15 g·L^(-1))比较,西黄丸组(20 g·L^(-1))ATP浓度明显降低(P<0.05)。与空白组比较,西黄丸浸提液组(10、15、20 g·L^(-1))SKOV3和HEY细胞内ROS含量明显增加(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性;与西黄丸浸提液组(10 g·L^(-1))比较,西黄丸浸提液组(20 g·L^(-1))ROS含量明显增加(P<0.05)。与空白组比较,西黄丸浸提液组(10、15、20 g·L^(-1))SKOV3和HEY细胞的ARHⅠ蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),且随着西黄丸浸提液浓度升高,ARHⅠ蛋白表达逐渐升高;与西黄丸组(10、15 g·L^(-1))比较,西黄丸浸提液组(20 g·L^(-1))ARHⅠ蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与空白组比较,西黄丸浸提液组(10、15、20 g·L^(-1))SKOV3和HEY细胞的PGC1α、TFAM、TOMM20蛋白表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性;与西黄丸浸提液组(10、15 g·L^(-1))比较,西黄丸浸提液组(20 g·L^(-1))HEY细胞TFAM、TOMM20蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与空白组比较,西黄丸浸提液组(20 g·L^(-1))SKOV3和HEY细胞Mito-Tracker荧光强度明显降低(P<0.05)。结论:西黄丸能破坏卵巢癌SKOV3和HEY细胞线粒体功能并降低细胞能量代谢,从而抑制SKOV3和HEY细胞增殖,其机制可能是通过上调ARHⅠ,抑制PGC1α/TFAM信号轴实现的。

关键词：西黄丸印迹抑癌基因Ras同源家族Ⅰ(ARHⅠ) 卵巢癌线粒体能量代谢

黄芩素对MC3T3-E1体外成骨分化及对口腔常见菌的抑菌作用

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中山大学学报（医学科学版） 2024年第4期45卷 602-612页

作者：王越林芳辰苏琦黄霞周志迎暨南大学口腔医学院广东广州510632 暨南大学附属第一医院口腔中心广东广州510630

【目的】研究不同浓度黄芩素对MCT3-E1增殖及生物学行为的影响,以及其对口腔常见菌的抑菌作用,并探讨其相关机制。【方法】将MC3T3-E1细胞分别培养在0、6、12、18、24µmol/L的黄芩素浓度下,通过CCK-8实验检测黄芩素处理后MC3T3-E1的增... 详细信息

【目的】研究不同浓度黄芩素对MCT3-E1增殖及生物学行为的影响,以及其对口腔常见菌的抑菌作用,并探讨其相关机制。【方法】将MC3T3-E1细胞分别培养在0、6、12、18、24µmol/L的黄芩素浓度下,通过CCK-8实验检测黄芩素处理后MC3T3-E1的增殖活性;对成骨诱导培养后的MC3T3-E1进行ALP活性检测;RT-PCR法检测RunX2、BMP2、Osterix基因的表达差异。K-B纸片法检测黄芩素处理24 h对大肠杆菌,金黄色葡萄球菌,血链球菌的抑菌效果。【结果】黄芩素可在一定程度降低细胞增殖活力,但不影响其继续增殖。18µmol/L的黄芩素可以提高MC3T3-E1的ALP活性,并有效上调BMP2与Osterix的表达,下调RunX2的表达,能有效抑制金黄色葡萄球菌与血链球菌的增殖(P<0.05)。【结论】适宜浓度的黄芩素(18µmol/L)对MC3T3-E1细胞成骨分化有促进作用,并且可有效抑制口腔常见菌(金黄色葡萄球菌与血链球菌)的增殖。

关键词：前成骨细胞黄芩素成骨作用抑菌分化增殖

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