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海南省玛瑙螺物种鉴定及其感染广州管圆线虫的调查

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热带医学杂志 2024年第4期24卷 480-485,489,I0002页

作者：高素真舒畅吕鑫焦惠生周云飞吕志跃海南医学院公共卫生学院海南海口571199 海南医学院基础医学与生命科学学院海南海口571199 中山大学中山医学院寄生虫学教研室广东广州510080

目的结合野外调查和实验室分析,了解海南现存玛瑙螺物种多样性及其携带广州管圆线虫的情况。方法采用分层随机抽样的调查方法,于2022年12月-2023年10月在海南省18个市县53个采样点采集玛瑙螺样本1060份,根据形态特征对样本进行初步鉴定... 详细信息

目的结合野外调查和实验室分析,了解海南现存玛瑙螺物种多样性及其携带广州管圆线虫的情况。方法采用分层随机抽样的调查方法,于2022年12月-2023年10月在海南省18个市县53个采样点采集玛瑙螺样本1060份,根据形态特征对样本进行初步鉴定,并取形态特征有差异的部分样本进行DNA提取和COI基因扩增,通过GenBank数据库内序列比对确定物种,并使用Mega 11软件构建进化树。同时采用肺检法和消化法了解其感染广州管圆线虫的情况并分析影响因素。结果在采集的1060份玛瑙螺样本中,通过形态学鉴定和分子鉴定确定海南存在两种玛瑙螺,其中褐云玛瑙螺占70.57%(748/1060),虎纹玛瑙螺占29.43%(312/1060)。形态学区分主要在胼胝部颜色上;分子鉴定显示,与褐云玛瑙螺处于同一支的样本,COI基因序列一致性在99.84%~100.00%;采集的未定种样本与虎纹玛瑙螺在同一进化分支上,COI基因一致性为90.75%~95.97%。二者与亲缘关系最近的物种间平均遗传距离分别为0.000~0.003和0.043~0.102。海南省玛瑙螺整体广州管圆线虫感染率为5.85%。褐云玛瑙螺和虎纹玛瑙螺的广州管圆线虫感染率分别为5.08%(38/748)和7.69%(24/312),差异无统计学意义(χ^(2)=2.728,P>0.05);二者感染度中位数分别为107.70条/g和37.32条/g,差异有统计学意义(Z=2.067,P0.05)。结论存在未定种玛瑙螺,高度疑似虎纹玛瑙螺,为岛内入侵物种玛瑙螺生物多样性提供相关研究依据。岛内玛瑙螺广州管圆线虫感染率无下降,但区域间感染率差异较大,防控措施应因地制宜。

关键词：玛瑙螺 COI基因广州管圆线虫

海南省不同地形白纹伊蚊线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因遗传多样性

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中国热带医学 2024年第8期24卷 931-935页

作者：潘晓臧传慧张也公茂庆刘宏美山东第一医科大学附属消化病医院山东省寄生虫病防治研究所山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东济宁272033

目的研究海南省平原、丘陵、山地地区白纹伊种群遗传多样性,分析海南省不同地形区白纹伊蚊种群遗传结构。方法于海南省三亚和海口的平原地区,儋州和屯昌的丘陵,白沙的山区采集白纹伊蚊,单只蚊子提取DNA,储存于-80℃冰箱中备用,用聚合酶... 详细信息

目的研究海南省平原、丘陵、山地地区白纹伊种群遗传多样性,分析海南省不同地形区白纹伊蚊种群遗传结构。方法于海南省三亚和海口的平原地区,儋州和屯昌的丘陵,白沙的山区采集白纹伊蚊,单只蚊子提取DNA,储存于-80℃冰箱中备用,用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因(mitochondrial cytochrome C oxidase subunitⅠgene,mtDNA-COⅠ)并测序,在美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)上进行比对,DnaSP v6计算遗传多样性参数、PopART 1.7绘制单倍型网络图,Arlequin 3.5计算分子方差分析(analysis of molecular variance,AMOVA)值,分析种群间的差异。结果5个地区白纹伊蚊种群mtDNA-COⅠ测序共获得414条序列,长度均为663 bp,全部序列有5个突变位点,G+C含量为32.86%,A+T含量为67.14%,符合线粒体DNA的特征,与其他种群相比,平原地区的三亚和丘陵地区的儋州、屯昌种群核苷酸多样性较高,平均核苷酸差异数较高,单倍型分析共获得6个单倍型,单倍型H02为优势单倍型,三亚和屯昌种群单倍型数量最多,平原地区海口和三亚种群有独享的单倍型,丘陵和山地白纹伊蚊种群单倍型数量较少,中性结果和错配分布图显示所有地区白纹伊蚊种群近期均有种群扩张。AMOVA值显示种群间差异大于种群内差异。结论mtDNA-COⅠ基因可以作为研究白纹伊蚊种群遗传多样性的分子标志,平原地区的三亚种群显示出较高的遗传多样性,丘陵地区的2个种群遗传多样性也较高,但单倍型数量只有平原地区的三亚和丘陵地区的儋州种群较高。

关键词：白纹伊蚊 mtDNA-COⅠ基因遗传多样性

幽门螺杆菌空泡细胞毒素A蛋白的生物信息学分析

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寄生虫病与感染性疾病 2024年第2期22卷 86-93页

作者：李桂玲张东军李娜万秀菊山东省寄生虫病防治研究所山东第一医科大学附属消化病医院山东济宁272033

目的了解幽门螺杆菌空泡细胞毒素A(VacA)的结构和功能,并对其抗原表位进行分析。方法采用生物信息学软件ORF Finder、Protpapram、ProtScale、Cell-PLoc 2.0、SignalP-6.0、TMHMM-2.0、NetNGlyc-1.0、NetPhos-3.1、SOPMA、SWISSMODEL、IEDB、SYFPEITHI、STRING等对VacA蛋白的理化性质及亚细胞定位、二级结构、三级结构、抗原蛋白B细胞、细胞毒性T淋巴细胞表位等进行预测。结果 VacA蛋白由747个氨基酸组成,分子式为C_(3549)H_(5597)N_(1009)O_(1111)S_(9),原子总数为11 275,其编码基因全长3 867 bp,等电点9.33,不稳定指数18.53,脂肪族氨基酸指数82.40,平均疏水性为-0.342。该蛋白有跨膜区无信号肽,有12个糖基化位点和71个磷酸化位点。该蛋白以无规则卷曲(占44.03%)为主,属于稳定的亲水性蛋白。VacA蛋白含有9个B细胞表位,多个T细胞表位。结论 VacA能够磷酸化,并与多种蛋白相互作用,可作为抗幽门螺旋杆菌疫苗的候选蛋白。

关键词：幽门螺旋杆菌 VacA 生物信息学结构

一氧化氮供体对弓形虫速殖子DNA含量的影响

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2001年第6期19卷 344-347页

作者：彭碧文胡建石赵蓉蒋明森林建银福建医科大学分子医学教研室武汉大学医学院寄生虫教研室武汉430071

目的　探讨亚硝基铁氰化钠 (SNP)对弓形虫速殖子DNA含量的影响。　方法　采用SNP与影响胞内 /胞外钙离子浓度的试剂作用于RH株刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)速殖子 ,流式细胞仪检测其DNA含量的变化。　结果　①SNP导致弓形虫速殖子DNA... 详细信息

目的　探讨亚硝基铁氰化钠 (SNP)对弓形虫速殖子DNA含量的影响。　方法　采用SNP与影响胞内 /胞外钙离子浓度的试剂作用于RH株刚地弓形虫 (Toxoplasmagondii)速殖子 ,流式细胞仪检测其DNA含量的变化。　结果　①SNP导致弓形虫速殖子DNA的损伤 ,并呈时间和剂量依赖性 ;② 2mmol/L胞外钙离子螯合剂EGTA ,2 5 μmol/L胞内钙离子螯合剂BAPTA/AM及 5 0 μmol/L钙离子拮抗剂verapamil单独处理弓形虫速殖子 ,其DNA含量与对照组相比无显著变化 ;③ 2mmol/LEGTA ,2 5 μmol/LBAPTA/AM及 5 0 μmol/Lverapamil明显减少 2mmol/LSNP所致的速殖子亚二倍体峰的比例。　结论　SNP通过改变弓形虫速殖子胞浆游离钙离子浓度 ,诱导其亚二倍体峰的出现。

关键词：刚地弓形虫速殖子亚硝基铁氰化钠一氧化氮 DNA含量流式细胞术

Toll样受体2(TLR2)与结核分枝杆菌感染的相关研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第4期40卷 367-372页

作者：陈瑞枫王瑄马枫茜周鑫沛吴利先大理大学基础医学院微生物学与免疫学教研室云南大理671000 南昌大学玛丽女王学院江西南昌330031 大理大学基础医学院人体解剖学教研室云南大理671000

Toll样受体2(TLR2)是白细胞表面表达的一种模式识别受体,已发现多种配体可以激动或抑制TLR2的活化,进而调控免疫细胞的炎症和凋亡状态。结核分枝杆菌(MTB)通常寄生在巨噬细胞中,但MTB感染机体后,包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞表面的T... 详细信息

Toll样受体2(TLR2)是白细胞表面表达的一种模式识别受体,已发现多种配体可以激动或抑制TLR2的活化,进而调控免疫细胞的炎症和凋亡状态。结核分枝杆菌(MTB)通常寄生在巨噬细胞中,但MTB感染机体后,包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞表面的TLR2都可与其相互作用,释放细胞因子,影响MTB在体内的状态和增殖。在分子层面,TLR2的多态性有待更多探索,目前研究的大部分TLR2的多态性被认为与MTB的易感性无关。文中总结了TLR2与配体、感染后免疫调节活动、多态性与MTB易感性等方面的研究进展。

关键词：结核分枝杆菌(MTB) Toll样受体2(TLR2) 细胞因子多态性综述

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淡色库蚊细胞色素P450基因研究

生物化学与生物物理进展 2001年第1期28卷 61-66页

作者：朱昌亮李建民高晓红田海生李秀兰沈波吴观陵南京医科大学寄生虫学教研室南京210029

采用一对昆虫细胞色素P45 0简并引物 ,以反转录聚合酶链反应从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系成虫RNA扩增到约 485bp和 5 10bp两个片段 ,将这两个片段与PinPointTMXa 1T质粒重组 ,然后克隆至大肠杆菌JM 10 9菌株 ,筛选获得 6 ... 详细信息

采用一对昆虫细胞色素P45 0简并引物 ,以反转录聚合酶链反应从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系成虫RNA扩增到约 485bp和 5 10bp两个片段 ,将这两个片段与PinPointTMXa 1T质粒重组 ,然后克隆至大肠杆菌JM 10 9菌株 ,筛选获得 6 8个阳性克隆 ;其中 2 4个阳性克隆测序后与GenBank资料对照 ,显示为细胞色素P45 0新序列 ;分子系统学研究显示 ,2 4个新基因 (等位基因 )分别属CYP4家族CYP4C、CYP4D、CYP4H和CYP4J等 4个亚家族 ,其已由细胞色素P45 0命名委员会命名和GenBank登录上网 ;其中CYP4C2 3可能是一个假基因 ,CYP4H13具有一段 5 8个碱基长度的内含子 ,CYP4J4V1在近 3′端具有一个终止密码子TAG .

关键词：淡色库蚊库药性细胞色素P450 反转录-聚合酶链反应基因克隆

单克隆抗体对间日疟原虫子孢子入侵培养细胞及侵入后发育的影响(英文)

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1995年第4期13卷 284-289页

作者：罗树红刘多叶炳辉舒衡平付冉定湖南医科大学寄生虫学教研室南京医科大学寄生虫学教研室

本文在体外观察了抗间日疟原虫子孢子的单克隆抗体２Ｆ２，ＮＶＳ３和２Ｅ１０以及抗间日疟原虫红内期单克隆抗体４Ｂ２，８Ｅ３对日疟原虫子孢子入侵入肝癌细胞（ＨｅｐＧ２—Ａ１６）以及侵入后的进一步发育的影响。在浓度为２５μｇ... 详细信息

本文在体外观察了抗间日疟原虫子孢子的单克隆抗体２Ｆ２，ＮＶＳ３和２Ｅ１０以及抗间日疟原虫红内期单克隆抗体４Ｂ２，８Ｅ３对日疟原虫子孢子入侵入肝癌细胞（ＨｅｐＧ２—Ａ１６）以及侵入后的进一步发育的影响。在浓度为２５μｇ／ｍｌ时，２Ｆ２，ＮＶＳ３和２Ｅ１０抑制子孢子入侵的百分率分别为１００％，７６％，１０．５％。部分子孢子未抑制而侵入肝癌细胞后，发育为红外期裂殖体，后者发育不良，提示抗体还影响红外期的进一步发育。４Ｂ２和８Ｅ３的抑制百分率分别为４．５％和３．４％，与对照组相比无显著性差异，Ｐ＞０．０５。本研究为进一步分析保护性抗体提供实验手段。

关键词：间日疟原虫红外期环子孢子蛋白单克隆抗体

环形泰勒虫SHERLOCK-LF检测方法的建立与初步应用

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中国兽医科学 2024年第9期54卷 1182-1187页

作者：苏书晓赵帅阳刘军龙张楚晗朱浩瀚关贵全殷宏罗建勋中国农业科学院兰州兽医研究所动物疫病防控全国重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学江苏扬州225009

为快速、准确、简便地对环形泰勒虫感染进行检测,选取环形泰勒虫子孢子表面抗原基因作为靶标分子,设计特异性RPA引物及crRNA(CRISPR RNA)序列,建立环形泰勒虫的特异性高灵敏酶报告基因解锁(specific high-sensitive enzymatic reporter ... 详细信息

为快速、准确、简便地对环形泰勒虫感染进行检测,选取环形泰勒虫子孢子表面抗原基因作为靶标分子,设计特异性RPA引物及crRNA(CRISPR RNA)序列,建立环形泰勒虫的特异性高灵敏酶报告基因解锁(specific high-sensitive enzymatic reporter unlocking,SHERLOCK)-LF检测方法,并分析该方法的特异性、敏感性和符合率。结果显示:该方法可特异性检测环形泰勒虫基因组,与中华泰勒虫、东方泰勒虫、牛巴贝斯虫和双芽巴贝斯虫基因组均无交叉反应,且检测灵敏度达到1.42 copies/μL;与行业标准PCR方法检测结果相比,其符合率达到86.96%。本研究建立的SHERLOCK-LF检测方法可在1.5 h内完成对环形泰勒虫的检测,为该病的现场诊断及防控提供了技术支撑。

关键词：环形泰勒虫 RPA Cas13a crRNA 侧向流试纸条

Generation and analysis of 113 adult stage Schistosoma japonicum (Chinese strain) expressed sequence tags

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Chinese Medical Journal 2002年第10期115卷 77-80,150-151页

作者：卞国武余新炳吴忠道中山医科大学寄生虫教研室广州510089

To rapidly and economically obtain knowledge about adult stage Schistosoma japonicum (Chinese strain) expressed genes using expressed sequence tag (EST) Methods A directional cDNA library constructed from Schistosoma japonicum (Chinese strain ) adult stage RNA was used to generate expressed sequence tags(ESTs) These were compared against an EMBL parasites database and GENBANK database by BLASTn and BLASTx Results A total of 314 phage clones were randomly selected for generating expressed sequence tags(ESTs) From these clones, 132 EST quality sequence were obtained Among these EST quality sequences,113 ESTs were successfully submitted to the dbEST at GenBanK A total of 7 6% of these EST quality sequences were previously identified sequence of Schistosoma japonicum, while 4 5% were putatively identified sequences of Schistosoma japonicum A total of 23 5% of these EST quality sequences were putatively identified sequence of Schistosoma mansoni or other organisms 57 6% had no matches in the database and were classified as unknown sequences Most ESTs with the putative protein identified belonged to housekeeping proteins Information about several interesting genes was found Conclusion Partial cDNA sequencing to generate expressed sequence tags (ESTs) has the potential to rapidly and economically increase our knowledge about adult stage Schistosoma japonicum(Chinese strain) expressed genes

关键词： Schistosoma japonicum (Chinese strain) · expressed sequence tags (ESTs) · cDNA library