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肝细胞内补体活化对疟原虫红外期发育影响的研究

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年

作者：谭涅焦世铭丁艳朱成宇徐文岳陆军军医大学基础医学院病原生物学教研室重庆大学医学院

目的探讨肝细胞局部补体对疟原虫红外期发育的影响。方法首先采用反转录PCR扩增和蛋白质免疫印迹分析观察C57BL/6小鼠来源的Hepa1-6细胞和人肝癌细胞来源的HepG2-CD81细胞内是否存在补体C3、C5,以及是否表达C3aR和C5aR。随后,将约氏... 详细信息

目的探讨肝细胞局部补体对疟原虫红外期发育的影响。方法首先采用反转录PCR扩增和蛋白质免疫印迹分析观察C57BL/6小鼠来源的Hepa1-6细胞和人肝癌细胞来源的HepG2-CD81细胞内是否存在补体C3、C5,以及是否表达C3aR和C5aR。随后,将约氏疟原虫BY265-RFP子孢子与HepG2-CD81细胞孵育,在6、12或24 h后,利用激光共聚焦显微镜观察肝细胞局部补体C3、C5是否活化,以及纳虫空泡膜上是否表达C5aR。最后,观察活化的肝细胞局部补体及其受体在疟原虫红外期感染中的作用。先将小鼠分为对照组、眼镜蛇毒因子(cobra venom factor,CVF)特异耗竭血清C3组和C3全基因敲除组,用伯氏疟原虫ANKA株(Plasmodium berghei ANKA,***)子孢子攻击48 h后定量PCR查肝脏虫荷,观察系统性补体对疟原虫红外期感染的影响;尔后,用子孢子攻击C3aR全基因敲除小鼠和C5aR全基因敲除小鼠,制备血涂片查红内期出现时间,观察补体受体在疟原虫红外期感染中的作用;最后,再用约氏疟原虫BY265株(Plasmodium yoelii BY265,***265)子孢子攻击野生型小鼠(对照组)、C5aR全基因敲除小鼠和肝脏C5aR条件性敲除小鼠,查红内期出现时间,观察肝细胞局部补体受体在疟原虫红外期感染中的作用。结果 Hepa1-6细胞和HepG2-CD81细胞内存在补体C3、C5及其受体C3aR、C5aR;子孢子感染能活化补体C3、C5,且活化的C3a、C5a、C5aR主要集中在纳虫空泡周围。***子孢子攻击后,野生型小鼠、CVF处理小鼠和C3全基因敲除小鼠的肝脏虫荷之间差异无统计学意义(P>0.05);C3aR全基因敲除小鼠和C5aR全基因敲除小鼠红内期出现时间与对照组相比,差异均无统计学意义(P>0.05);***265子孢子攻击后,对照组小鼠、C5aR全基因敲除小鼠和肝脏C5aR条件性敲除小鼠红内期出现时间差异无统计学意义(P> 0.05)。结论肝细胞局部补体活化对疟原虫红外期发育无显著影响。

关键词：疟原虫红外期肝细胞局部补体

齐墩果酸通过miR-18a-5p/STK4轴抑制白血病K562细胞恶性进展

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第5期40卷 708-720页

作者：谢波来永巍韩旭徐岩王迪迪张鹏霞佳木斯大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江佳木斯154007

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是由于骨髓造血干细胞的恶性增生导致的疾病。虽然酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKI)对慢性粒细胞性白血病的治疗取得长足进展,但耐药问题仍未解决。因此,寻找新的治疗... 详细信息

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是由于骨髓造血干细胞的恶性增生导致的疾病。虽然酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKI)对慢性粒细胞性白血病的治疗取得长足进展,但耐药问题仍未解决。因此,寻找新的治疗药物和靶点十分关键。有研究表明,miRNAs与慢性粒细胞白血病在内的多种肿瘤有密切联系,齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对白血病细胞有较好的抑制效果。通过对转录物组测序结果发现,齐墩果酸可以显著上调丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶4(serine/threonine-protein kinase 4,STK 4)的水平,而miR1a-5p是STK 4的靶miRNA。因此,本文旨在探究齐墩果酸是否可以通过miR-18a-5p/STK4影响K562细胞恶性进展。K562细胞经齐墩果酸处理后差异表达基因富集在凋亡相关通路上。EdU实验和CCK-8实验结果发现,齐墩果酸降低K562细胞增殖能力(P<0.05)。qRT-PCR,免疫荧光和Western印迹结果显示,齐墩果酸处理后,K562细胞中STK 4蛋白质水平表达显著上调(P<0.05),miR-18a-5p表达下调(P<0.05)。在细胞中转染miR-18a-5p mimics,能显著抑制STK 4的表达(P<0.05);转染miR-18a-5p inhibitor能显著增加STK 4的表达(P<0.05)。活性氧(reactive oxygen species、ROS)检测和线粒体膜电位检测结果显示,齐墩果酸可以促进K562细胞中ROS的增加,降低线粒体膜电位。过表达STK 4后,与Vector组相比,细胞的线粒体膜电位下降;敲降STK 4可以逆转齐墩果酸组导致的线粒体膜电位下降。流式细胞术检测显示,齐墩果酸能明显促进细胞凋亡的发生,而转染miR-18a-5p mimics后凋亡率显著下调(P<0.05);过表达STK 4可以促进细胞从早期凋亡向晚期凋亡转化,而同时转染miR-18a-5p mimics可以抑制这一现象。我们的研究结果证实,齐墩果酸可以通过维持miR-18a-5p的低表达和保持STK 4的高表达状态来促进K562细胞的凋亡。

关键词：齐墩果酸 K562 miR-18a-5p 丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶4 细胞凋亡

弹性蛋白酶调节中性粒细胞炎性募集的功能研究

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中国免疫学杂志 2024年第3期40卷 449-455页

作者：刘洋孟玲范思佳任春光张欢重庆医科大学基础医学院细胞与遗传教研室发育生物学研究室重庆400016

目的:探索中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对中性粒细胞炎性募集的影响。方法:采用外源性弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠盐预处理小鼠骨髓来源的中性粒细胞,通过腹膜炎过继性迁移、细胞体外趋化、流动室黏附、免疫荧光染色、细胞伸展等实验,检测N... 详细信息

目的:探索中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对中性粒细胞炎性募集的影响。方法:采用外源性弹性蛋白酶抑制剂西维来司钠盐预处理小鼠骨髓来源的中性粒细胞,通过腹膜炎过继性迁移、细胞体外趋化、流动室黏附、免疫荧光染色、细胞伸展等实验,检测NE的抑制对中性粒细胞体内炎性募集、体外趋化、牢固黏附、细胞极化与伸展能力的影响;利用流式细胞术及鲁米诺化学发光系统检测NE的抑制对中性粒细胞吞噬及活性氧(ROS)释放能力的影响。结果:西维来司钠盐预处理显著减弱了中性粒细胞体内炎性募集(P<0.001);减弱了中性粒细胞在体外趋化过程中对催化剂方向性的感知(P<0.05),减慢了趋化速率(P<0.05),降低了趋化距离(P<0.05);减少了中性粒细胞在炎性内皮细胞表面形成牢固黏附的能力(P<0.000 1),抑制了中性粒细胞对细菌的吞噬能力(P<0.01);但对中性粒细胞的伸展、极化及ROS的释放均无显著影响。结论:NE的抑制显著损害了中性粒细胞在体内外的炎性募集级联反应及吞噬作用,但对中性粒细胞的伸展、极化、ROS释放等功能无显著影响。

关键词：中性粒细胞弹性蛋白酶西维来司钠盐炎性募集

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国际病毒分类委员会及其在线报告现状及发展

中国生物化学与分子生物学报 2024年第3期40卷 274-280页

作者：熊芮高文轩彭宜红北京大学医学部基础医学院病原生物学系北京100083

面对日益增长的新病毒种类和数量,及其复杂的内在关系,现有的病毒分类方法已凸显出其局限性。2019年,病毒分类和命名的权威机构国际病毒分类委员会(the International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV),基于病毒的系统进化关系... 详细信息

面对日益增长的新病毒种类和数量,及其复杂的内在关系,现有的病毒分类方法已凸显出其局限性。2019年,病毒分类和命名的权威机构国际病毒分类委员会(the International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV),基于病毒的系统进化关系提出了一种全新的、包含15个分类等级或阶元的病毒分类系统,并已经在ICTV的官方网站https://***/上线发布,公众可以在线免费查找动态的病毒分类信息。新的病毒分类系统能更好地揭示病毒错综复杂的内在关系以及群体进化机制,使我们能以更客观及系统的方法对病毒进行分类和命名。本文就ICTV网站有关病毒分类的主要概况,特别是最新的病毒分类和ICTV报告进展作一综述。

关键词：国际病毒分类委员会病毒分类国际病毒分类委员会报告分类学

肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2的免疫原性和保护效果评价及保护机制初步研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第1期44卷 2-10页

作者：王晓琼明光阳陈致富苟强袁月赵莉群章金勇胡仁建重庆理工大学药学与生物工程学院重庆400054 陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室重庆400038

目的采用肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2为抗原制备重组蛋白疫苗,在小鼠肺炎模型中评价疫苗的免疫原性、保护效果和保护机制。方法利用大肠埃希菌原核表达系统表达肺炎克雷伯菌KPC-2蛋白,经GST亲和层析对目的蛋白进行纯化;采用KPC-2蛋白制... 详细信息

目的采用肺炎克雷伯菌耐药靶标KPC-2为抗原制备重组蛋白疫苗,在小鼠肺炎模型中评价疫苗的免疫原性、保护效果和保护机制。方法利用大肠埃希菌原核表达系统表达肺炎克雷伯菌KPC-2蛋白,经GST亲和层析对目的蛋白进行纯化;采用KPC-2蛋白制备疫苗,经皮下注射免疫新西兰兔,心脏采血分离血清,用Protein G亲和层析纯化多克隆抗体,同时运用调理吞噬杀菌试验检测抗体的体外杀菌活性。采用KPC-2疫苗免疫雌性BALB/c小鼠3次,间接ELISA检测血清中特异性IgG抗体滴度。末次免疫后7 d,通过气管插管构建小鼠肺炎克雷伯菌肺部感染模型,感染1 h后尾静脉给予0.1 mg美罗培南治疗,通过比较免疫组与佐剂组的生存率、细菌定植量和组织病理学差异,以及给药组与生理盐水组生存率的差异评价疫苗的保护效果。采用KPC-2多克隆抗体被动免疫评价抗体的保护效果。结果KPC-2免疫组小鼠血清特异性IgG水平显著高于对照组(t=4.325,P<0.05),免疫组生存率显著高于对照组[70%(7/10)vs 10%(1/10),P<0.05];免疫组小鼠肺组织炎性程度及细菌定植量显著低于对照组(t=3.127,P<0.05);疫苗主动免疫与被动免疫均具有良好的保护效果,且对抗生素治疗有明显的增效性;KPC-2多克隆抗体在体外表现出明显的吞噬杀菌活性(t=5.427,P<0.05)。结论KPC-2疫苗具有良好的免疫原性和保护效果,体液免疫应答在其保护中发挥了重要作用,证明采用耐药靶标作为抗原制备疫苗具有可行性。

关键词：肺炎克雷伯菌 KPC-2 细菌耐药疫苗

ADAR1 p150和p110参与肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

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重庆医科大学学报 2024年第7期49卷 820-829页

作者：巩雪柳静蹇文文崔易红涂增重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室重庆400016

目的:研究腺苷脱氨酶1(adenosine deaminase acting on RNA 1,ADAR1)对肝细胞癌(liver hepatocellular carcinoma,LIHC)增殖、迁移与侵袭的影响。方法:利用基因表达谱交互式分析网站GEPIA检测ADAR1在LIHC中的表达水平和预后价值;提取人体肝癌标本的蛋白,通过Western blot实验检测ADAR1的表达情况。将ADAR1 p150和p110过表达质粒和靶向ADAR1 p150和p110的小干扰RNA分别转染进HepG2和Huh7细胞,利用Western blot和qPCR检测转染后细胞的ADAR1表达情况。通过CCK-8实验检测ADAR1对肝癌细胞增殖能力的影响。通过细胞划痕实验和Transwell实验检测ADAR1对肝癌细胞迁移和侵袭的影响。最后,在DAVID在线数据库中分析与ADAR1相关的信号通路,利用Western blot实验检测信号通路中相关蛋白的表达。结果:肝癌组织中ADAR1蛋白质水平明显高于癌旁组织,这与生物信息学的预测一致,且高表达的ADAR1与肝癌的不良预后相关;通过CCK-8实验,本研究发现过表达ADAR1可以促进肝癌细胞的增殖能力(P<0.05),敲低ADAR1使肝癌细胞增殖能力下降(P<0.05)。通过划痕和Transwell实验,本研究发现ADAR1的过表达促进了肝癌细胞的迁移和侵袭(P<0.05),敲低ADAR1后,肝癌细胞迁移和侵袭能力受到抑制(P<0.05)。DAVID在线分析结果显示,ADAR1主要富集在Wnt信号通路中。Western blot结果提示,过表达ADAR1抑制GSK3β表达和β-catenin的磷酸化水平,敲低ADAR1后GSK3β表达和β-catenin的磷酸化水平升高。结论:本研究结果表明,ADAR1在肝癌中处于高表达水平,可激活Wnt/β-catenin信号通路,从而促进肝癌的增殖、迁移和侵袭。

关键词：腺苷脱氨酶1 肝癌增殖迁移侵袭 Wnt/β-catenin信号通路

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上海市崇明区猪—土壤界面微生态与抗生素耐药性相关性分析

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中国微生态学杂志 2024年第2期36卷 135-146页

作者：钱璟吴哲元朱泳璋张彦郭晓奎刘畅上海交通大学医学院—国家热带病研究中心全球健康学院上海200025 上海交通大学医学院免疫学与微生物学系

目的探究养殖场内育肥猪粪便与土壤的微生物组成和抗生素耐药基因构成,并挖掘之间的关联。方法选择上海市崇明区5家猪养殖场,采集猪粪便和土壤样本,使用Illumina NovaSeq 6000高通量测序平台进行全基因组鸟枪法测序。通过主坐标分析、LE... 详细信息

目的探究养殖场内育肥猪粪便与土壤的微生物组成和抗生素耐药基因构成,并挖掘之间的关联。方法选择上海市崇明区5家猪养殖场,采集猪粪便和土壤样本,使用Illumina NovaSeq 6000高通量测序平台进行全基因组鸟枪法测序。通过主坐标分析、LEfSe分析、共现网络分析和统计学检验,探究样本微生物组成、多样性特征和抗生素耐药基因之间的关系。结果猪粪便中的主要微生物包括拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门和放线菌门,主要耐药基因类型包括多药耐药类、四环素类、糖肽类、肽类、氟喹诺酮类和β-内酰胺类等。来自同一养猪场的样本在微生物丰度和耐药基因多样性上存在相关性。此外,研究还发现养猪场运作因素如饲料成分、饲养密度和卫生环境等,导致了不同养猪场之间的微生物组成和耐药基因的差异。在猪粪—土壤界面,一些有益微生物之间存在共生关系,具有抑制潜在病原微生物的生长能力,并对土壤微生态产生影响。不同类型的耐药基因之间也存在共生关系。结论通过宏基因组学方法研究了猪粪便与土壤中的微生物和耐药基因,揭示了微生物与抗生素耐药基因之间的相关性,提出微生物群是耐药基因谱的重要驱动因素。这一发现为通过微生态调控来预防和控制抗生素耐药性提供了科学依据。

关键词：肠道微生物群土壤微生态微生物多样性抗生素耐药性宏基因组学

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人工智能融入医学微生物学教学的现状与前景

基础医学教育 2024年第4期26卷 323-329页

作者：何茂章刘承忠丁瑞培张聪徐可瀚安徽医科大学基础医学院微生物学教研室合肥230032 安徽医科大学第二临床医学院影像医学教研室

人工智能与医学微生物学的深度融合既是医学高等院校病原微生物学教学现代化的内在要求,也是新时代高校医学类课程教学创新发展的必然选择。文章旨在阐述人工智能在医学微生物学教学中的应用现状,分析实际面临的困难,阐述未来的发展前... 详细信息

人工智能与医学微生物学的深度融合既是医学高等院校病原微生物学教学现代化的内在要求,也是新时代高校医学类课程教学创新发展的必然选择。文章旨在阐述人工智能在医学微生物学教学中的应用现状,分析实际面临的困难,阐述未来的发展前景。通过结合实际教学案例和研究成果,重点探讨人工智能在医学微生物学教学中的应用领域、创新教学优势和局限性,进而将人工智能技术合理并多样化融入教学实践中,最终在医学微生物学理论和实验教学实施中不断完善相关的教育教学评价机制。

关键词：医学微生物学人工智能教学改革医学教育临床医学

结核分枝杆菌双组分系统PhoP蛋白的免疫学特性

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中国人兽共患病学报 2024年第4期40卷 352-358页

作者：李雪宁唤唤康健徐铭泽崔若囡代婷路延之薛飒柏银兰西北大学生命科学学院西安710069 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032 空军军医大学军事医学创新中心西安710032

目的探究结核分枝杆菌双组分系统PhoP蛋白的免疫学特性。方法采用生物信息学方法预测PhoP蛋白的B细胞和T细胞表位。将Mtb H37Rv phoP基因克隆到pET-28a(+)原核表达载体上,并将重组质粒转化到*** BL21菌株中,经IPTG诱导表达及亲和层析法... 详细信息

目的探究结核分枝杆菌双组分系统PhoP蛋白的免疫学特性。方法采用生物信息学方法预测PhoP蛋白的B细胞和T细胞表位。将Mtb H37Rv phoP基因克隆到pET-28a(+)原核表达载体上,并将重组质粒转化到*** BL21菌株中,经IPTG诱导表达及亲和层析法纯化获得PhoP重组蛋白。用ELISA分析Mtb感染小鼠和TB患者血清中PhoP特异性抗体水平。PhoP重组蛋白经肌肉注射途径免疫小鼠,分离小鼠多抗血清,用ELISA和Western blot分别检测抗体效价和抗体特异性。分离小鼠脾细胞,用ELISpot和ELISA法分别检测分泌IFN-γ细胞频数及其分泌水平。结果经生物信息学预测发现PhoP含有24个B细胞抗原表位和11个优势T细胞表位。成功构建PhoP原核表达载体并获得纯化的PhoP蛋白。Mtb感染小鼠和TB患者血清中的PhoP特异性抗体显著升高,查准率分别为99.9%和82.5%,特异度均为100%。PhoP免疫小鼠诱导产生高水平特异性抗体,免疫小鼠脾细胞经抗原体外刺激后,IFN-γ的分泌水平和细胞频数均显著增加,IL-2和IL-10分泌水平上调。结论PhoP蛋白可诱导体液免疫应答和Th1型为主的细胞免疫。PhoP蛋白有良好的免疫原性,且具有一定的TB诊断效能。本研究为阐明PhoP在Mtb感染中的作用及其用于TB诊断奠定了一定的基础。

关键词：结核分枝杆菌双组分系统 PhoP 体液免疫应答细胞免疫应答

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