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OsAOS2基因在水稻抗稻瘟病菌和白叶枯病菌中的作用

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福建农林大学学报(自然科学版) 2024年

作者：周永林庄小倩王朝露林巧霞李正康许丹洁陈晓婷福建农林大学生命科学学院生物农药与化学生物学教育部重点实验室福建省教育厅植物微生物互作重点实验室

【目的】研究OsAOS2在水稻抵抗稻瘟病菌和白叶枯病菌中的作用，为水稻抗病育种工作提供依据。【方法】采用同源重组方法和CRISPR-Cas9系统分别构建OsAOS2的过表达载体和敲除载体，遗传转化获得转基因水稻，筛选得到过表达株系（OsAOS2-O... 详细信息

【目的】研究OsAOS2在水稻抵抗稻瘟病菌和白叶枯病菌中的作用，为水稻抗病育种工作提供依据。【方法】采用同源重组方法和CRISPR-Cas9系统分别构建OsAOS2的过表达载体和敲除载体，遗传转化获得转基因水稻，筛选得到过表达株系（OsAOS2-OE）和纯合敲除株系（OsAOS2-KO）。将野生型水稻日本晴（NPB）植株接种稻瘟病菌和白叶枯病菌后，通过qRT-PCR检测OsAOS2表达量的变化情况；将OsAOS2转基因水稻和NPB接种稻瘟病菌和白叶枯病菌后，观察植株表型的变化；在稻瘟病菌侵染下，对OsAOS2转基因水稻和NPB进行抗病相关基因的qRT-PCR分析；在几丁质和flg22诱导下，检测水稻活性氧（ROS）积累情况；同时，分析接种稻瘟病菌24 h后OsAOS2-KO和NPB的转录组数据。【结果】qRT-PCR分析表明，NPB接种稻瘟病菌48 h和白叶枯病菌8 d时，OsAOS2表达量显著上调。对OsAOS2转基因水稻和NPB喷雾接种稻瘟病菌7 d后，NPB病斑面积显著大于OsAOS2-OE且小于OsAOS2-KO；剪叶法接种白叶枯病菌14 d后，NPB病斑面积显著小于OsAOS2-KO。对OsAOS2转基因水稻接种稻瘟病菌后，抗病相关基因OsPBZ1、OsPR1a、OsPAL1、OsLOX5在OsAOS2-OE中的表达量显著上调。在几丁质和flg22诱导下，OsAOS2-KO中的ROS的积累量显著低于NPB，但是起峰时间比野生型有所提前。转录组数据分析表明，上调基因和下调基因分别有1605个和1151个。上调差异基因主要富集在金属离子结合和核糖体通路中，下调差异基因主要富集在翻译通路和细胞外区域。韦恩图显示，52个基因在NPB中受稻瘟病菌诱导，但在OsAOS2-KO中受到抑制；11个基因在NPB中受抑制，但在OsAOS2-KO中受诱导。对这63个表达模式相反的差异基因进行GO和KEGG分析发现，参与应激反应和植物激素信号转导通路的基因数最多。【结论】稻瘟病菌和白叶枯病菌可以诱导OsAOS2的表达，OsAOS2通过病原菌分子模式触发的免疫（PTI）途径和茉莉酸（JA）、水杨酸（SA）介导的抗病反应正调控水稻对稻瘟病菌的抗性，同时，OsAOS2在水稻抵御白叶枯病菌中起重要作用。

关键词： OsAOS2 茉莉酸抗病性稻瘟病白叶枯病转录组分析

OsOPR10正调控水稻对稻瘟病和白叶枯病的抗性

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中国水稻科学 2024年第4期38卷 364-374页

作者：许丹洁林巧霞李正康庄小倩凌宇赖美玲陈晓婷鲁国东福建农林大学生命科学学院福州350002 福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室福州350002 福建省教育厅植物微生物互作重点实验室福州350002

【目的】茉莉酸(Jasmonic acid,JA)在植物生长发育和应对(非)生物胁迫中发挥重要功能,12-氧-植物二烯酸还原酶(12-oxo-phytodienoic acid reductase,OPR)是JA生物合成途径中的关键酶。创制OsOPR10转基因水稻,进行稻瘟病和白叶枯病抗性分... 详细信息

【目的】茉莉酸(Jasmonic acid,JA)在植物生长发育和应对(非)生物胁迫中发挥重要功能,12-氧-植物二烯酸还原酶(12-oxo-phytodienoic acid reductase,OPR)是JA生物合成途径中的关键酶。创制OsOPR10转基因水稻,进行稻瘟病和白叶枯病抗性分析,揭示OsOPR10调控水稻抗病的分子机制,有望为水稻抗病育种提供种质资源。【方法】构建OsOPR10的CRISPR/Cas9敲除载体和过表达载体,并分别利用农杆菌介导转化野生型水稻日本晴(Nipponbare,NPB),获得OsOPR10敲除和过表达转基因水稻。对转基因后代进行抗病性、活性氧(ROS)许丹洁等:OsOPR10正调控水稻对稻瘟病和白叶枯病的抗性365爆发、水杨酸(salicylic acid,SA)与茉莉酸(JA)途径基因表达模式分析。利用激光共聚焦显微镜观察OsOPR10的亚细胞定位,酵母双杂交实验和荧光素酶互补实验获取OsOPR10的互作蛋白。【结果】获得OsOPR10纯合的敲除和过表达植株。接菌试验结果表明,OsOPR10过表达植株对稻瘟病和白叶枯病抗性更强。在几丁质(chitin)和细菌鞭毛蛋白(flg22)诱导后,OsOPR10过表达植株的ROS积累量明显高于野生型。qRT-PCR结果显示,在接种稻瘟菌12 h后,OsOPR10过表达植株中JA通路基因(OsAOS2、OsAOC)和SA通路基因(OsPR1a、OsPAL1)较NPB表达上调。亚细胞定位结果显示,OsOPR10蛋白定位于叶绿体。通过酵母双杂交试验获取OsOPR10的互作蛋白OsCYP28。【结论】OsOPR10受稻瘟病菌和白叶枯菌以及外源茉莉酸甲酯与SA诱导。OsOPR10参与了病原菌分子模式触发的免疫途径(PTI),并且正调控水稻对稻瘟病和白叶枯病的抗性。此外,OsOPR10可能通过JA和SA途径介导水稻抗病反应。OsOPR10蛋白定位于叶绿体,与OsCYP28蛋白存在互作。

关键词：水稻茉莉酸 OsOPR10 CRISPR/Cas9 过表达稻瘟病白叶枯病

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基于文献计量法分析后生元研究现状

中国食品学报 2024年第6期 466-478页

作者：周敏齐千慧贺霞霞王瑾瑜刘月高洁张国华山西大学生命科学学院浙江大学未来食品实验室山西大学生物医学研究院河北农业大学食品科技学院

近年来，具有健康作用的灭活菌体、菌体成分或代谢产物引起国内外研究者的关注，并相继提出后生元（Postbiotics）的术语定义。本文以2022年中国食品科学技术学会益生菌分会提出的后生元定义为依据，采用文献计量方法统计分析中国知网（... 详细信息

近年来，具有健康作用的灭活菌体、菌体成分或代谢产物引起国内外研究者的关注，并相继提出后生元（Postbiotics）的术语定义。本文以2022年中国食品科学技术学会益生菌分会提出的后生元定义为依据，采用文献计量方法统计分析中国知网（CNKI）、PubMed、Web of Science(WoS)数据库中关于后生元的研究文献，基于WoS数据库分析国家分布和研究热点。结果显示，在PubMed和WoS数据库中，近3年的发文量超过近20年（2000-2018年）的发文总量，在2021年发文量达到最大值，分别有223篇和248篇，后生元的研究热度不断上升。日本是后生元研究文献数量最多的国家。CNKI数据库中关于后生元的发文量呈波动线性增长，年均增长率为21.76%。本文从体外、动物和临床研究等方面综述后生元的健康作用，分析表明后生元促进肠道健康和调节免疫方面的研究居多。国内外研究表明采用不同微生物灭活工艺制备的后生元，其成分组成和健康作用具有差异性。本文对比分析不同灭活方式的后生元的功效成分、健康作用机制等，为不同菌种/菌株制备后生元提供一定的参考。

关键词：后生元文献计量肠道健康免疫调节灭活方式

小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第5期40卷 447-454页

作者：薛潘董阳超武福星陈洋张剑元航武苏闪袁若栋李宝莉雷迎峰延安大学医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表... 详细信息

目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表达,经过变性、复性和超滤获得纯化的蛋白。将Eecto蛋白3次免疫后,获得多克隆抗体血清,进行效价测定,并利用ZIKV prME真核表达质粒转染的HEK293T细胞进行Western blot法和免疫荧光法分析。取效价较高的小鼠脾脏制备脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法获取分泌抗体的杂交瘤细胞,并进一步制备腹水。对腹水进行抗体效价测定、亚类分析。以ZIKV同属病毒日本脑炎病毒(JEV)、黄热病病毒(YFV)、登革病毒1-4(DENV1-4)、蜱传脑炎病毒(TBEV)的Eecto为包被抗原,利用ELISA分析ZIKV单克隆抗体的交叉反应性,进一步对效价高、特异性强的抗体进行特异性分析。结果成功构建了原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,并获得纯化的Eecto蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性;制备筛选得到1D6、4F11、4H7、4F8四株单克隆抗体,其中三株(1D6、4H7、4F8)为IgGκ型抗体,一株(4F11)为IgMκ,1D6腹水效价大于1∶108;其中1D6和4H7为ZIKV特异性抗体,与其他黄病毒无交叉反应。结论成功制备了小鼠抗ZIKV Eecto单克隆抗体,为后续建立ZIKV检测方法及致病机制研究提供了实验材料。

关键词：寨卡病毒(ZIKV) 包膜蛋白胞外区(Eecto) 原核表达单克隆抗体

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日本心血管疾病患者的安宁疗护及启示

中华护理杂志 2024年第5期59卷 533-539页

作者：彭梦云原田奈穂子齋藤信也岡山大学保健学研究科日本岡山市7008558 岡山大学医学部保健学科日本岡山市7008558

WHO呼吁全球医疗保健工作者重视非癌症患者的安宁疗护实践,目前国内安宁疗护主要以癌症患者为中心,在心血管疾病等慢性病人群中的实践和发展相对薄弱。近年来,日本开展的心血管疾病安宁疗护经实践验证可有效缓解患者的终末期症状,提高... 详细信息

WHO呼吁全球医疗保健工作者重视非癌症患者的安宁疗护实践,目前国内安宁疗护主要以癌症患者为中心,在心血管疾病等慢性病人群中的实践和发展相对薄弱。近年来,日本开展的心血管疾病安宁疗护经实践验证可有效缓解患者的终末期症状,提高患者及家庭成员的生活质量。该文介绍了日本心血管疾病患者安宁疗护的发展历程、规模及需求、团队成员及协作、介入时间、评估与筛查、服务内容与流程、质量评价及困境等,提出对国内心血管疾病患者实施安宁疗护的启示,为开展心血管疾病患者的安宁疗护提供借鉴。

关键词：心血管疾病安宁疗护姑息护理

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我国食药用菌灰树花物种名称修订

菌物学报 2024年第3期43卷 38-59页

作者：谢雪娇吴芳李守勉 Vlasák Josef 张旭田景花李明李国杰河北农业大学园艺学院河北省蔬菜种质创新与利用重点实验室河北省蔬菜产业协同创新中心河北保定071001 北京林业大学生态与自然保护学院微生物研究所北京100083 捷克科学院生物中心植物分子生物学研究所捷克布杰约维采37005

灰树花是中国具有较高食药用价值的大型真菌,国内外学界过去多认定其学名为Grifola frondosa。本研究结合形态学和多基因分子系统发育分析,对分离自东亚、欧洲和北美洲的45份样本进行分类研究。多基因联合分析的研究显示了对应各大洲灰... 详细信息

灰树花是中国具有较高食药用价值的大型真菌,国内外学界过去多认定其学名为Grifola frondosa。本研究结合形态学和多基因分子系统发育分析,对分离自东亚、欧洲和北美洲的45份样本进行分类研究。多基因联合分析的研究显示了对应各大洲灰树花菌种的高支持率分支,表明不同地域灰树花的遗传信息存在一定程度的差异,分离自我国的灰树花菌种均属于东亚分支,欧洲和北美分支的成员在中国尚未发现分布。因此,东亚分支应代表了一个独立的物种。东亚地区的灰树花过去在日本曾经被描述为白树花G.albicans,而且该种曾经被认为是欧洲灰树花G.frondosa的同物异名,因此,东亚分支的物种学名应该是白树花G.albicans。由于中国多数野生和栽培灰树花菌盖颜色较深,故将其命名为白树花的一个新变型G.albicans f.huishuhua,并指定了该变型的模式标本和菌种(凭证标本HBAU15778,凭证菌株HBAU LM502)。

关键词：担子菌多基因复合种分类系统发育

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基于光谱技术的食品质量快速检测方法

食品安全导刊 2024年第11期 164-166页

作者：肖婷长滨生物大学生物科学研究生院日本滋贺526-0829

光谱技术凭借快速、无损、高通量等优势,在食品质量检测领域展现出广阔的应用前景。本文系统综述了近红外光谱、拉曼光谱、高光谱成像、荧光光谱和紫外-可见光谱等光谱技术在食品质量快速检测中的原理、方法和应用进展,重点阐述了各种... 详细信息

光谱技术凭借快速、无损、高通量等优势,在食品质量检测领域展现出广阔的应用前景。本文系统综述了近红外光谱、拉曼光谱、高光谱成像、荧光光谱和紫外-可见光谱等光谱技术在食品质量快速检测中的原理、方法和应用进展,重点阐述了各种光谱技术的特点、数据处理方法和应用范围,并对其在食品质量快速检测领域的发展趋势进行了展望。

关键词：食品质量快速检测光谱技术

生物钟蛋白Bmal1对实验性牙周炎相关肾损伤的影响

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华西口腔医学杂志 2024年第2期42卷 163-171页

作者：马浩楠李琼商雅琦辛禧瑞刘歆婵武洲于维先吉林大学口腔医院牙周病科长春130021 吉林大学口腔医院种植科长春130021 日本九州大学齿学研究院日本福冈812-8582 吉林大学口腔医院老年口腔科长春130021 吉林省口腔生物医学国际联合研究中心长春130021

目的通过建立大鼠牙周炎模型,探讨生物钟蛋白Bmal1对慢性牙周炎相关肾损伤的影响。方法将12只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和牙周炎组,每组6只。采用正畸结扎丝对牙周炎组大鼠双侧上颌第一磨牙进行结扎处理,对照组大鼠不进行任何干预... 详细信息

目的通过建立大鼠牙周炎模型,探讨生物钟蛋白Bmal1对慢性牙周炎相关肾损伤的影响。方法将12只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和牙周炎组,每组6只。采用正畸结扎丝对牙周炎组大鼠双侧上颌第一磨牙进行结扎处理,对照组大鼠不进行任何干预措施。8周后,检测2组大鼠的牙周临床指标,包括牙周探诊深度、牙龈出血指数和牙齿松动度。采用Micro-CT对大鼠上颌骨进行扫描和三维图像重建,评估牙槽骨吸收情况。采用苏木精-伊红(HE)和过碘酸雪夫(PAS)染色对牙周组织和肾组织进行病理学观察。采用生化试剂盒检测肾脏功能指标肌酐、白蛋白、血尿素氮的水平,以及氧化应激指标超氧化物歧化酶、谷胱甘肽和丙二醛的水平。MitoSOX red染色检测肾组织内活性氧(ROS)含量。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和免疫组织化学染色检测大鼠肾组织中Bmal1、核因子-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)的基因及蛋白表达水平。结果与对照组相比,牙周组织Micro-CT及HE染色结果显示,牙周炎组上颌第一磨牙区出现明显的骨吸收和附着丧失;肾组织HE及PAS染色结果表明,牙周炎组大鼠肾组织有显著的组织病理损伤;肾功能和氧化应激指标结果显示,牙周炎组的氧化应激水平出现异常而肾功能指标无明显异常;MitoSOX red结果显示,牙周炎组肾组织内ROS含量升高;RT-qPCR和免疫组织化学结果显示,牙周炎组肾组织内Bmal1、Nrf2和HO-1表达水平降低。结论生物钟蛋白Bmal1在牙周炎大鼠肾脏的氧化损伤过程中发挥重要作用。

关键词：牙周炎肾损伤昼夜节律氧化应激生物钟蛋白Bmal1

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日本综合海洋安全战略的调整及影响

现代国际关系 2024年第3期 61-77,134页

作者：房迪北京外国语大学北京日本学研究中心

2023年4月第四期《海洋基本计划》作为日本新版《国家安全保障战略》出台后首个更新的中长期战略性文件,对日本综合海洋安全保障作出方向性调整,明确要推动海上防务一体化,大力推动海洋民用技术的军事化利用和军民两用技术研发,加紧对... 详细信息

2023年4月第四期《海洋基本计划》作为日本新版《国家安全保障战略》出台后首个更新的中长期战略性文件,对日本综合海洋安全保障作出方向性调整,明确要推动海上防务一体化,大力推动海洋民用技术的军事化利用和军民两用技术研发,加紧对民用土地、设施的利用与控制,扩大与所谓“同志国”的海洋安全合作,并首次将中国定位为“前所未有的严重威胁和风险”。日本综合海洋安全保障更加凸显对外军事遏制力和武力攻击能力的一面,这将使地区海洋安全形势更趋复杂,也将对中日政治互信及海洋合作带来消极影响。

关键词：日本综合海洋安全保障海洋基本计划中日关系