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矩阵热转移技术鉴定有机酸类代谢物的结合蛋白质

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色谱 2024年第7期42卷 702-710页

作者：李柯佳叶玉莹张晓磊周家华李亚楠叶明亮中国科学院大连化学物理研究所中国科学院分离分析化学重点实验室辽宁大连116023 中国科学院大学北京100049

有机酸类代谢物在表观遗传、肿瘤发生和发展以及细胞内信号转导等方面发挥着重要作用,对这类代谢物在体内的结合蛋白质进行鉴定,将有助于从分子学层面理解和揭示它们的功能。本研究采用矩阵热转移技术(mTSA),在HeLa细胞裂解液中系统鉴定... 详细信息

有机酸类代谢物在表观遗传、肿瘤发生和发展以及细胞内信号转导等方面发挥着重要作用,对这类代谢物在体内的结合蛋白质进行鉴定,将有助于从分子学层面理解和揭示它们的功能。本研究采用矩阵热转移技术(mTSA),在HeLa细胞裂解液中系统鉴定了3种有机酸类代谢物(琥珀酸、富马酸和乳酸)的结合蛋白质。首先,向细胞裂解液中加入一系列不同浓度的琥珀酸、富马酸或乳酸,在52℃下加热3 min,离心并收集上清蛋白质,进行酶解及后续质谱分析。在数据非依赖性采集(DIA)模式下,本研究在琥珀酸、富马酸和乳酸的mTSA实验中分别鉴定到5870、5744和5816个蛋白质;通过对蛋白质热稳定性的显著性差异值(p)和皮尔森相关系数平方值(R^(2))进行考察,该研究鉴定到了多个高可信度的有机酸类代谢物结合蛋白质。此外本研究发现,虽然富马酸和琥珀酸均能够与α-酮戊二酸依赖的双加氧酶(FTO)结合,但琥珀酸是FTO更强的竞争性抑制剂。除此之外,本研究还鉴定到了两个先前未曾报道过的乳酸结合蛋白质,即鸟氨酸转氨酶(OAT)和3-巯基丙酮酸硫转移酶(MPST),并通过溶剂诱导沉淀技术(SIP)和两种数据检验方法证明了其可信度;同时,OAT和MPST的发现有助于揭示乳酸在氨基酸合成和细胞内氧化还原平衡调节方面的重要作用。

关键词：矩阵热转移技术有机酸类代谢物琥珀酸富马酸乳酸结合蛋白质

基于干细胞记忆和中央记忆细胞的CAR-T细胞抗肿瘤治疗策略

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细胞与分子免疫学杂志 2024年

作者：刘伟华王艺斐孙晓婷王志斌中国科学院深圳先进技术研究院生物医药与技术研究所癌症免疫研究中心中国科学院大学深圳理工大学药学院生物制药学系人类环境表观遗传组实验室

免疫治疗包括免疫检查点抑制剂和过继细胞疗法在血液瘤的治疗中取得了革命性临床进展，但在实体瘤的治疗中却不尽人意。比如，嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法在治疗B细胞恶性肿瘤患者中展现出良好的效果和治愈潜能。但是，CAR-T细胞针... 详细信息

免疫治疗包括免疫检查点抑制剂和过继细胞疗法在血液瘤的治疗中取得了革命性临床进展，但在实体瘤的治疗中却不尽人意。比如，嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法在治疗B细胞恶性肿瘤患者中展现出良好的效果和治愈潜能。但是，CAR-T细胞针对实体肿瘤的抗肿瘤治疗仍然面临着艰难挑战。内源性或过继转移的肿瘤特异性T细胞的抗肿瘤活性高度依赖于其分化状态。早期分化的T细胞比处于完全分化状态的效应T细胞具有更好的抗肿瘤疗效。在癌症患者中，具有干性记忆或前体表型的肿瘤特异性T细胞的存在与治疗结局改善呈现显著的相关性。过继移植具有干细胞记忆（Stem cell memory）或中央记忆（Central memory）表型的CAR-T细胞可获得更优的抗肿瘤治疗效果。本文聚焦于体外优化扩增培养体系以获取具有干细胞记忆或中央记忆表型的CAR-T进行综述。

关键词：肿瘤免疫治疗嵌合抗原受体T细胞过继细胞疗法干细胞记忆T细胞代谢适应性表观遗传调控综述

城镇污水处理厂抗生素抗性基因的环境传播途径与机制

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给水排水 2024年第5期50卷 153-160页

作者：李俊谊孙喆强志民贲伟伟中国科学院生态环境研究中心饮用水科学与技术重点实验室北京100085 中国科学院大学资源与环境学院北京100190 中国科学院生态环境研究中心环境水质学国家重点实验室北京100085

城镇污水处理厂是抗生素抗性基因(ARGs)发生转移、传播的重要场所,同时也是环境中ARGs污染的主要来源。对城镇污水处理厂中ARGs向环境介质中的传播途径、影响因素与传播机制进行了综述。结果表明,ARGs可通过出水排放、污泥土地施用、再... 详细信息

城镇污水处理厂是抗生素抗性基因(ARGs)发生转移、传播的重要场所,同时也是环境中ARGs污染的主要来源。对城镇污水处理厂中ARGs向环境介质中的传播途径、影响因素与传播机制进行了综述。结果表明,ARGs可通过出水排放、污泥土地施用、再生水灌溉、气溶胶逸散等途径迁移至环境介质(如受纳水体、土壤、空气)中;ARGs在环境介质中的扩散和存留行为受介质理化性质影响;ARGs在环境介质中主要通过可移动遗传元件(MGEs)介导的水平基因转移(HGT)传播耐药性。

关键词：城镇污水处理厂抗生素抗性基因环境介质传播途径传播机制

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桃苗圃适用除草剂的筛选、混配与安全性评价

中国农业科学 2024年第9期57卷 1734-1747页

作者：郭磊黄晨艳宋宏峰沈志军张斌斌马瑞娟孙朦何鑫俞明亮江苏省农业科学院果树研究所/江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室

【目的】杂草防治是果树生产中的重要环节，论文旨在评价不同除草剂对桃的安全性并筛选适于桃苗圃和生产园利用的除草剂，为桃产业中化学除草的应用提供理论依据。【方法】采用盆栽试验方法，选用毛桃苗以及黑麦草、狗牙根、空心莲子草... 详细信息

【目的】杂草防治是果树生产中的重要环节，论文旨在评价不同除草剂对桃的安全性并筛选适于桃苗圃和生产园利用的除草剂，为桃产业中化学除草的应用提供理论依据。【方法】采用盆栽试验方法，选用毛桃苗以及黑麦草、狗牙根、空心莲子草、白三叶草和黄花苜蓿5种草为试材，对13种除草剂的安全性进行初步筛选。根据各除草剂药害等级结果，选择10%精喹禾灵和60%二氯喹啉酸进行混配。按照精喹禾灵有效剂量25、50、75 m L·hm-23个水平，二氯喹啉酸有效剂量150、300、450 g·hm-23个水平，共设置形成9个除草剂混配制剂。茎叶喷施处理后7、14、21 d，调查计算杂草抑制率，处理30 d后测定桃苗株高、茎粗、地上和地下部生物量、叶片和根尖细胞电解质渗透率、根系总根长、总根表面积、根体积和根尖数的变化，并基于主成分分析对不同处理的安全性和杂草抑制率进行综合评价。【结果】茎叶喷施处理后，有11种除草剂对桃苗产生药害，桃苗出现不同程度的失绿、萎蔫、枯死等症状，精喹禾灵和二氯喹啉酸对桃苗生长无显著影响。利用精喹禾灵单剂喷施杂草后，处理21 d对禾本科杂草的抑制率为100%，但对阔叶杂草无抑制作用。相反，喷施二氯喹啉酸对禾本科杂草的抑制率为0，对黄花苜蓿、白三叶草、空心莲子草的抑制率范围为80%—100%。精喹禾灵与二氯喹啉酸混配后，9个混配制剂在处理21 d后的杂草总抑制率可达90%以上，同时各制剂对桃苗株高、地上和地下部生物量、叶片和根尖细胞电解质渗透率无显著性影响。综合分析显示，精喹禾灵有效剂量对混配制剂的综合评价D值有较大影响，当精喹禾灵有效剂量提升至75 m L·hm-2时，混配制剂的综合评价D值超过0.563，但D值未出现随二氯喹啉酸有效剂量提升而增大的趋势。【结论】桃苗对多数除草剂敏感，混配是提高精喹禾灵和二氯喹啉酸杂草综合抑制率的有效措施。有效剂量75 m L·hm-2精喹禾灵与300g·hm-2二氯喹啉酸混配后，制剂的综合评价D值最高，可在保证桃苗安全的基础上达到最佳除草效果。

关键词：精喹禾灵二氯喹啉酸桃苗除草剂综合评价

莱茵衣藻活细胞制剂缓解小麦幼苗镉胁迫的效应与机制

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环境科学 2024年

作者：雷春燕李亚男梁梦静杨泽孙岩季春丽张春辉李润植孙希平崔红利山西农业大学农学院山西省特用作物遗传与代谢工程研究中心中国科学院烟台海岸带研究所海岸带生物学与生物资源利用重点实验室

重金属镉(Cd)污染不仅导致农作物减产，而且可通过食物链传递和积累，对人类健康构成威胁。减少作物对Cd吸收和富集，以及提高Cd胁迫抗性是绿色健康农业可持续发展的重要议题。为建立应用微藻防控Cd污染和提高作物抗逆性的新农艺技术，... 详细信息

重金属镉(Cd)污染不仅导致农作物减产，而且可通过食物链传递和积累，对人类健康构成威胁。减少作物对Cd吸收和富集，以及提高Cd胁迫抗性是绿色健康农业可持续发展的重要议题。为建立应用微藻防控Cd污染和提高作物抗逆性的新农艺技术，选用莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhartii)和小麦(Triticum aestivum)开展系统研究，以期阐明微藻阻滞Cd迁移和增强作物Cd胁迫抗性的效果及作用机制。供试作物为冬小麦品种晋麦182(JM182)和春小麦品种津春6号(JC6)。水培试验设置2个剂量的Cd胁迫即50 mg·L-1(Cd50)和100 mg·L-1(Cd100)。制备2种剂量的莱茵衣藻活细胞制剂即藻液D680为1.0 (A1.0)和D680为2.0 (A2.0)。测定小麦幼苗生长、生理响应、Cd吸收、转运和积累，以及重金属转运相关基因转录表达等参数。结果表明，Cd胁迫严重抑制小麦幼苗生长。施用莱茵衣藻活细胞制剂可显著增加小麦幼苗光合色素含量和激活抗氧化酶系统活性，显著减轻Cd胁迫对小麦幼苗的伤害。此外，莱茵衣藻活细胞制剂A1.0和A2.0处理均能下调小麦幼苗重金属吸收和转运相关基因(TaHMA2、TaHMA3、TaNramp1和TaLCT1)的转录表达。小麦幼苗Cd含量测定显示，Cd50和Cd100胁迫分别导致JC6春小麦幼苗Cd富集量达185.01 mg·kg-1和342.11 mg·kg-1，Cd在JM182冬小麦幼苗积累量达176.76 mg·kg-1和317.65 mg·kg-1。显然，与JM182品种相比，JC6小麦品种易于吸收和富集Cd。重要的是，微藻活细胞制剂处理则显著减少2个品种小麦幼苗Cd积累量。与Cd50处理的JC6品种小麦幼苗相比，A2.0处理的JC6品种小麦幼苗根部和茎叶部的Cd积累量分别下降了76.80%和66.91%，且Cd从根部向茎叶部转移率减低了27.58%。结果显示，莱茵衣藻活细胞制剂通过调控重金属吸收和转运相关基因的表达，显著减少小麦幼苗对Cd的吸收和从根部向茎叶器官的转运与积累。莱茵衣藻活细胞制剂亦可通过激活抗氧化系统及增强光合作用等，有效缓解Cd对小麦幼苗的伤害，进而促进小麦生长发育。研究发现可为微藻活细胞制剂用作生物肥或生物刺激剂以阻滞重金属污染物的迁移和增强植物对重金属的抗逆性提供了科学依据和新策略。

关键词：镉(Cd)胁迫小麦幼苗微藻活细胞制剂抗氧化系统光合作用重金属吸收和积累

SETD7对三阴性乳腺癌阿霉素化疗耐药的作用机制

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上海理工大学学报 2024年

作者：高丽丽高丝陈洋孔宪明上海理工大学健康科学与工程学院上海交通大学医学院附属仁济医院中国科学院大连物理化学研究所

探讨蛋白赖氨酸甲基化转移酶SETD7在介导三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）阿霉素化疗耐受中的作用机制。首先利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建SETD7敲除的TNBC细胞系，然后通过细胞功能实验：CCK8实验检测药物敏感... 详细信息

探讨蛋白赖氨酸甲基化转移酶SETD7在介导三阴性乳腺癌（triple-negative breast cancer,TNBC）阿霉素化疗耐受中的作用机制。首先利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建SETD7敲除的TNBC细胞系，然后通过细胞功能实验：CCK8实验检测药物敏感性，克隆形成实验检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡，最后通过Western blotting实验检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达变化。SETD7敲除对TNBC增殖活性无明显影响，但是SETD7敲除或者SETD7选择性抑制剂（R）-PFI-2增加了TNBC对遗传毒性药物阿霉素的敏感。SETD7敲除在阿霉素处理组中TNBC细胞增殖活性明显降低、凋亡程度更高，并且凋亡相关蛋白Bax表达增加而Bcl-2表达降低，综上，SETD7通过调节Bax和Bcl-2蛋白表达增加TNBC阿霉素化疗耐受敏感。

关键词： SETD7 三阴性乳腺癌阿霉素化疗耐药

雌激素介导circZNF423作为ceRNA调控oar-miR-541-3p/CALM3通路促进绵羊成肌细胞增殖

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中国农业科学 2024年第3期57卷 597-612页

作者：池润清韩海银王鹏李凯扬储明星刘玉芳河北工程大学生命科学与食品工程学院中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/农业农村部动物遗传育种与繁殖重点实验室北京市畜牧总站

【背景】雌激素是雌性哺乳动物卵巢组织分泌的主要激素，其对肌肉的生长发育起着重要的调控作用，circRNA已被发现参与多种与肌肉生长发育相关的信号通路。【目的】根据团队前期卵巢摘除苏尼特羊与假手术苏尼特羊全转录组整合分析发现ci... 详细信息

【背景】雌激素是雌性哺乳动物卵巢组织分泌的主要激素，其对肌肉的生长发育起着重要的调控作用，circRNA已被发现参与多种与肌肉生长发育相关的信号通路。【目的】根据团队前期卵巢摘除苏尼特羊与假手术苏尼特羊全转录组整合分析发现circZNF423可作为内源性竞争RNA(ceRNA)调控oar-miR-541-3p/CALM3的表达。为进一步探究雌激素在绵羊肌肉生长中分子机制，通过体外培养绵羊原代成肌细胞，检测成肌细胞中外源添加雌激素介导circZNF423调控oar-miR-541-3p/CALM3对成肌细胞增殖的影响，为进一步研究雌激素及circRNA在绵羊生长发育性状中的作用机制提供理论依据，为绵羊分子设计育种提供新的研究思路。【方法】采集绵羊背最长肌组织，对绵羊原代成肌细胞进行体外分离培养，通过免疫荧光染色、RNA原位杂交（FISH）和核质分离试验确定circZNF423在成肌细胞中的表达位置；RNAhybrid在线软件预测circZNF423、oar-miR-541-3p和CALM3存在结合关系，通过双荧光素酶活性检测和生物素标记的miRNA下拉试验验证circZNF423和oar-miR-541-3p、oar-miR-541-3p和CALM3结合情况；体外构建合成circZNF423过表达或干扰载体、oar-miR-541-3p的模拟物（mimics）或抑制剂（inhibitor）、CALM3过表达或干扰载体，在绵羊原代成肌细胞中进行转染，利用RT-qPCR、Western blot、EdU和CCK-8检测绵羊成肌细胞增殖标志因子的表达和成肌细胞增殖情况；为进一步明确雌激素在绵羊肌肉生长发育中的作用，体外添加不同浓度的外源性雌二醇（E2），利用RT-qPCR、Western blot、CCK-8和EdU检测绵羊肌细胞增殖标志基因的表达变化。【结果】免疫荧光染色显示分离的原代细胞为绵羊成肌细胞，可用于后续功能验证；RNA原位杂交和核质分离试验表明，circZNF423主要在绵羊成肌细胞质中表达。RNAhybrid、双荧光素酶活性检测和生物素标记的miRNA下拉试验结果表明，circZNF423与oar-miR-541-3p、oar-miR-541-3p与CALM3 3’UTR之间均存在显著的结合关系；抑制circZNF423/CALM3表达或过表达oar-miR-541-3p后，绵羊成肌细胞增殖标志因子PCNA、CDK2和Pax7 mRNA与蛋白表达水平一致，均显著上调（P<0.05或P<0.01）;EdU和CCK8结果表明，抑制circZNF423/CALM3表达或过表达oar-miR-541-3p后，绵羊成肌细胞增殖率显著上升（P<0.05）；过表达circZNF423/CALM3或抑制oar-miR-541-3p后则相反。添加不同浓度外源雌二醇（E2）后，在浓度为10 nmol·L-1时绵羊成肌细胞增殖标志因子表达最高，显著高于1和100 nmol·L-1的添加浓度（P<0.05或P<0.01）；绵羊肌细胞增殖标志因子PCNA、CDK2和Pax7mRNA和蛋白表达水平一致，均显著上调，circZNF423和CALM3的表达量显著降低，oar-miR-541-3p的表达量显著升高（P<0.05或P<0.01）;EdU和CCK8结果显示，体外添加雌二醇后绵羊成肌细胞增殖率显著升高（P<0.05）。【结论】绵羊成肌细胞中circZNF423作为ceRNA调控oar-miR-541-3p和CALM3的结合及表达，添加外源雌激素可通过抑制circZNF423/oar-miR-541-3p/CALM3通路促进绵羊肌肉细胞的增殖。这些结果为揭示雌激素及circZNF423在绵羊骨骼肌发育性状中的分子机制提供理论基础。

关键词：绵羊肌肉发育雌激素 circZNF423 oar-miR-541-3p CALM3

橡胶树棒孢霉落叶病菌酵母单杂交cDNA文库及CcCas5启动子诱饵载体的构建

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植物保护 2024年第5期50卷 205-212页

作者：胡国豪杨子平刘铜张荣意侯巨梅海南大学热带农林学院海南省农用生物制剂创制工程研究中心海口570228 中国热带农业科学院南亚热带作物研究所湛江市热带作物遗传改良重点实验室湛江524091 中国热带农业科学院三亚研究院三亚572025

为了筛选出与CcCas5启动子结合的转录因子,本研究构建了橡胶树棒孢霉落叶病菌的酵母单杂交cDNA表达文库和CcCas5启动子诱饵载体,并对3-氨基-1,2,4-三唑(3-amino-1,2,4-triazole,3-AT)的最佳抑制浓度进行了筛选。结果显示,构建的酵母单杂... 详细信息

为了筛选出与CcCas5启动子结合的转录因子,本研究构建了橡胶树棒孢霉落叶病菌的酵母单杂交cDNA表达文库和CcCas5启动子诱饵载体,并对3-氨基-1,2,4-三唑(3-amino-1,2,4-triazole,3-AT)的最佳抑制浓度进行了筛选。结果显示,构建的酵母单杂交cDNA表达文库总容量为3.49×10^(6)cfu,插入片段主要分布于750~2000 bp之间,重组率为95.8%;克隆了CcCas 5基因2600 bp的启动子序列,预测获得真菌主要的10大类转录因子的结合位点165个;构建了分别携带1500 bp和1000 bp启动子序列的酵母单杂交启动子诱饵载体,10 mmol/L的3-AT能抑制pHis2.1-pCcCas5-1000和pHis2.1-pCcCas5-1500的背景表达。试验结果为通过酵母单杂交筛选与CcCas5启动子结合的转录因子和进一步研究转录因子对CcCas5表达的调控作用奠定基础。

关键词：橡胶树多主棒孢 CcCas5 启动子酵母单杂交 cDNA文库

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中国实验猴产业的历史、现状、挑战与机遇

实验动物与比较医学 2024年第4期44卷 343-356页

作者：孙强中国科学院脑科学与智能技术卓越创新中心

实验动物在基础科学和临床医学研究中扮演着重要角色，常用的非人灵长类实验动物恒河猴和食蟹猴因与人类高度相似，长期以来备受关注。中国的非人灵长类实验动物产业经过半个多世纪的发展，已从初期的无序扩张逐渐迈向标准化和精细化的... 详细信息

实验动物在基础科学和临床医学研究中扮演着重要角色，常用的非人灵长类实验动物恒河猴和食蟹猴因与人类高度相似，长期以来备受关注。中国的非人灵长类实验动物产业经过半个多世纪的发展，已从初期的无序扩张逐渐迈向标准化和精细化的成熟阶段。然而，近年来全球生物医药研发势头迅猛，导致对非人灵长类实验动物的需求急剧上升，加之一些非人灵长类实验动物生产企业缺少长远考虑而致繁殖种群老化严重，繁殖力急剧下降，非人灵长类实验动物的供给缺口进一步扩大。在需求上升和供给下降的双重压力下，非人灵长类实验动物的价格急剧上涨。虽然近年来随着生物医药产业周期性下调，非人灵长类实验动物被需求的趋势有所放缓，其价格已有较大回落，但仍处于高位。同时，在价格高企的大背景下，非人灵长类实验动物产业内出现了种群繁殖能力退化加剧、微生物质量控制要求降低、遗传质量控制缺失和盲目投资建场等问题。本研究系统地回顾了中国非人灵长类实验动物（重点是实验猴）产业发展的历史与现状，探讨了当前行业格局的成因，以及面临的潜在挑战与机遇，期望能为中国非人灵长类实验动物产业的未来发展提供一些参考和启示。

关键词：非人灵长类实验动物生物制剂实验猴产业

来源：博看期刊