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构建皮肤组织中特异表达HPV16-E6基因的小鼠模型

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中国生物工程杂志 2015年第10期35卷 27-31页

作者：汤俊明赵彦平刘奇盛青松吴黎明乔国洪宜兴市人民医院宜兴214200 无锡市申瑞生物制品有限公司无锡214200

目的:构建特异在皮肤表达乳头瘤病毒(HPV16)E6基因的真核表达载体,并鉴定其在转基因小鼠体内的表达。方法:通过PCR方法扩增皮肤特异启动子p INV及HPV16-E6,将以上片段通过酶切连接,插入去掉CMV启动子的pc DNA3.1(-)载体,获得dpc DNA3.1(... 详细信息

目的:构建特异在皮肤表达乳头瘤病毒(HPV16)E6基因的真核表达载体,并鉴定其在转基因小鼠体内的表达。方法:通过PCR方法扩增皮肤特异启动子p INV及HPV16-E6,将以上片段通过酶切连接,插入去掉CMV启动子的pc DNA3.1(-)载体,获得dpc DNA3.1(-)-p INV-E6载体;并显微注射制备其转基因小鼠,利用RT-PCR、Western blot及免疫组化技术检测获得的阳性小鼠体内E6的表达水平。结果:dpc DNA3.1(-)-p INV-E6载体测序正确;经鉴定31只实验小鼠中,有2只小鼠携带外源基因,将其与野生型小鼠交配获得的F1代中又有2只阳性小鼠;且在获得阳性小鼠的皮肤组织中RT-PCR检测有E6的转录本,Western blot检测有E6蛋白表达,且免疫组化检测结果显示有E6在皮肤表达且引起皮肤微增生。结论:成功构建了p INV-E6转基因模型小鼠,HPV16-E6基因在小鼠皮肤中特异表达,为进一步研究HPV16-E6在癌症中的作用奠定了基础。

关键词：乳头瘤病毒(HPV) 转基因小鼠历基因特异表达

国产与进口DMEM培养基培养CHO-C28细胞效果比较

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中国生物制品学杂志 2007年第3期20卷 219-222页

作者：李建平周长军王宇田静刘成赵小琳李宏涛长春生物制品研究所疫苗一室长春130062 无锡市美迪生物制品有限公司无锡214262

目的比较国产与进口DMEM培养基培养CHO-C28细胞的效果。方法采用国产DMEM培养基与进口DMEM培养基培养同批CHO-C28细胞,收集培养上清,检测HBsAg表达水平。采用相同条件纯化培养上清中的HBsAg,比较二者的层析图谱及纯化抗原的电泳图谱。... 详细信息

目的比较国产与进口DMEM培养基培养CHO-C28细胞的效果。方法采用国产DMEM培养基与进口DMEM培养基培养同批CHO-C28细胞,收集培养上清,检测HBsAg表达水平。采用相同条件纯化培养上清中的HBsAg,比较二者的层析图谱及纯化抗原的电泳图谱。并用其抗原制备疫苗,进行异常毒性和效力试验。结果培养上清中HBsAg表达水平,国产培养基略好于进口培养基,二者纯化图谱和抗原电泳图谱一致。两种培养基制备的疫苗异常毒性试验均合格,小鼠效力试验结果差异无显著意义。结论国产培养基在细胞培养中安全、有效,达到进口培养基水平,可用于规模化生产。

关键词： DMEM CHO细胞乙型肝炎疫苗

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高强度铁基粉末冶金ORT齿圈的研制

粉末冶金技术 2008年第5期26卷 374-377页

作者：王季林无锡市南方粉末冶金制品有限公司江苏无锡214161

密度为7.2g/cm3(相对密度93%)的Fe-Cu-Ni-Mo-WC-C铁基粉末冶金结构钢制成的洗衣机零件ORT齿圈,在可控气氛下碳氮共渗淬火、低温回火后,其组织为针状马氏体,细小的WC硬质颗粒均匀分布在基体中,抗拉强度达到980MPa。其综合力学性能优越,... 详细信息

密度为7.2g/cm3(相对密度93%)的Fe-Cu-Ni-Mo-WC-C铁基粉末冶金结构钢制成的洗衣机零件ORT齿圈,在可控气氛下碳氮共渗淬火、低温回火后,其组织为针状马氏体,细小的WC硬质颗粒均匀分布在基体中,抗拉强度达到980MPa。其综合力学性能优越,耐磨性优于GCr15轴承钢件。

关键词：双动力洗衣机零件ORT齿圈粉末冶金结构钢力学性能耐磨性 GCr15轴承钢件

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舒他西林的反相离子对高效液相色谱分析法

中国抗生素杂志 1997年第3期22卷 182-186页

作者：胡昌勤刘巍杨敏智金少鸿中国药品生物制品检定所无锡市药品检验所

为有效分离分析舒他西林及其杂质在稳定性考察中的变化情况，利用ＯＤＳ柱和腈基柱分别建立了２种反相离子对高效液相色谱分析系统，前者流动相为甲醇—四丁基氢氧化胺／三乙胺水溶液（含０．４％三乙胺的０．０１８ｍｏｌ／Ｌ四丁基氢... 详细信息

为有效分离分析舒他西林及其杂质在稳定性考察中的变化情况，利用ＯＤＳ柱和腈基柱分别建立了２种反相离子对高效液相色谱分析系统，前者流动相为甲醇—四丁基氢氧化胺／三乙胺水溶液（含０．４％三乙胺的０．０１８ｍｏｌ／Ｌ四丁基氢氧化胺水溶液，用磷酸调ｐＨ４．０）＝２８７２；后者为乙腈—四丁基氢氧化胺水溶液（０．００５ｍｏｌ／Ｌ四丁基氢氧化胺水溶液，用磷酸调ｐＨ３．５）＝１９９。ＯＤＳ反相离子对色谱系统适合于准确测定稳定性考察中舒他西林含量的变化情况，而腈基柱反相离子对色谱系统则更适用于对舒他西林稳定性考察中诸相关物质的变化情况进行跟踪分析。利用建立的２种色谱系统，对舒他西林溶液的稳定性进行了考察，并对其水解过程进行了讨论。

关键词：舒他西林高效液相色谱法稳定性

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全球应对流行性感冒大流行的疫苗策略

中华预防医学杂志 2009年第10期43卷 849-851页

作者：尹卫东公雪杰高虹北京科兴生物制品有限公司 100085

2009年4月墨西哥出现一种新的甲型H1N1流行性感冒（简称流感）暴发，并在短短的2个月内传播到全球。6月11日世界卫生组织（WHO）把流感大流行警戒级别提升为最高的6级，表明世界正处在2009年流感大流行的开端。面对这场21世纪的第1次流... 详细信息

2009年4月墨西哥出现一种新的甲型H1N1流行性感冒（简称流感）暴发，并在短短的2个月内传播到全球。6月11日世界卫生组织（WHO）把流感大流行警戒级别提升为最高的6级，表明世界正处在2009年流感大流行的开端。面对这场21世纪的第1次流感大流行，人类历史上首次在流感大流行来临之前进行了充分的政策、技术、物资、药品等各方面的准备。笔者着重介绍WHO与各国政府应对流感大流行的疫苗策略。

关键词：流行性感冒疫苗策略甲型H1N1流感免疫力

免疫增强剂CVC1302介导Tfh细胞分化机制分析

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中国农业大学学报 2025年第1期 179-187页

作者：杜露平鲁海燕李明举侯立婷于晓明程海卫张元鹏秦竹李兰张浩明杨利王义伟陈瑾郑其升侯继波江苏省农业科学院动物免疫工程研究所/国家兽用生物制品技术创新中心/江苏省食品质量安全重点实验室兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心烟台市动物疾病预防与控制中心

为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞（Tfh）分化的机制，本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞（DC）,CVC1302刺激后，分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平；利用体外细胞共培养试验，检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子... 详细信息

为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞（Tfh）分化的机制，本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞（DC）,CVC1302刺激后，分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平；利用体外细胞共培养试验，检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子Bcl-6、T-bet、GATA3和RORγt的转录水平，STAT3信号通路活化水平，Tfh细胞占CD4+T细胞比例及STAT3信号通路抑制后反向验证Tfh细胞占CD4+T细胞比例。结果表明：1)免疫增强剂CVC1302极显著促进小鼠骨髓DC分泌IL-6和IL-21。2)细胞共培养试验显示，CVC1302可显著促进STAT3磷酸化水平，表明STAT3信号通路被激活。3)利用STAT3信号通路抑制剂后，CD4+T细胞分化为Tfh细胞的水平显著降低，表明CVC1302依赖STAT3信号通路激活介导初始CD4+T细胞分化为Tfh细胞。综上，本研究推断CVC1302通过促进DC分泌IL-6和IL-12，并激活STAT3信号通路介导Tfh细胞的分化，旨在为后续免疫增强剂的开发提供思路。

关键词： CVC1302 DC STAT3 Tfh细胞

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免疫复合物型乙型肝炎疫苗的免疫原性分析

中华微生物学和免疫学杂志 2013年第11期33卷 813-818页

作者：徐静王娟吴刚周嘉琪单璞李计来许丽锋北京生物制品研究所有限责任公司 101111 北京天坛生物制品股份有限公司

目的：分析免疫复合物型乙型肝炎疫苗在小鼠体内和食蟹猴体内的免疫原性。方法免疫复合物型乙型肝炎疫苗单次免疫小鼠，不同时间点采血进行anti-HBs滴度动态检测；不同免疫程序免疫小鼠，进行anti-HBs滴度检测；肌肉注射5μg/只免疫小鼠... 详细信息

目的：分析免疫复合物型乙型肝炎疫苗在小鼠体内和食蟹猴体内的免疫原性。方法免疫复合物型乙型肝炎疫苗单次免疫小鼠，不同时间点采血进行anti-HBs滴度动态检测；不同免疫程序免疫小鼠，进行anti-HBs滴度检测；肌肉注射5μg/只免疫小鼠，ELISPOT方法检测IFN-γ形成斑点数并进行阳转率统计；测定稳定性试验样品的ED50；分别以20μg/只和100μg/只剂量免疫食蟹猴，不同时间点采血检测anti-HBs滴度。结果免疫复合物型乙型肝炎疫苗动态检测anti-HBs滴度均高于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）；免疫复合物型乙型肝炎免疫2针次anti-HBs滴度可达到重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）免疫3针次水平；免疫复合物型乙型肝炎疫苗细胞免疫检测IFN-γ斑点形成细胞（ SFC）及阳转率高于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）及酿酒乙型肝炎疫苗国家参考品；免疫复合物型乙型肝炎疫苗长期稳定性优于酿酒酵母乙肝疫苗，ED50值低于后者，高低两种剂量免疫食蟹猴，均可诱导高滴度anti-HBs，且持续性良好。结论免疫复合物型乙型肝炎疫苗有较好的免疫原性，其体液免疫和细胞免疫水平均优于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）。

关键词：免疫复合物乙型肝炎疫苗免疫原性

重组酵母表达HBsAgP24亚基结合程度对抗原性的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第2期26卷 132-136页

作者：李津苏锦锋张德有星海许毅孙玉杰朱亭玉石男周根喜赵铠北京天坛生物制品股份有限公司 100024 北京生物制品研究所

目的观察HBsAg P24亚基结合紧密程度对其抗原性的影响。方法3批重组酵母表达纯化的P24亚基松弛结合型HBsAg经半转型和转型处理后，成为混合和紧密结合型HBsAg，用HPLC法检测P24亚基结合紧密程度，松弛型和紧密型HBsAg免疫小鼠后，检测N... 详细信息

目的观察HBsAg P24亚基结合紧密程度对其抗原性的影响。方法3批重组酵母表达纯化的P24亚基松弛结合型HBsAg经半转型和转型处理后，成为混合和紧密结合型HBsAg，用HPLC法检测P24亚基结合紧密程度，松弛型和紧密型HBsAg免疫小鼠后，检测NK细胞杀伤活性及抗原特异性脾淋巴细胞增殖活性。将HBsAg吸附于佐剂Al（OH）3凝胶，免疫小鼠后用半数有效剂量法（ED50）检测所诱导的体液免疫应答，用体外相对效力法（RP）检测抗原的反应原性。结果3批松弛型、混合型和紧密型共9组HBsAg P24亚基紧密结合型比率分别在23．00％～32．00％、38．43％～50．98％和39．65％～52．76％之间，混合型组P24亚基紧密结合程度接近紧密型组；3批紧密型HBsAg免疫小鼠后可比松弛型HBsAg诱导更强的NK细胞活性，松弛型HBsAg免后4周内诱导抗原特异性脾淋巴细胞活性高于紧密型HBsAg，但总体上HBsAg仅诱导较弱的特异性脾淋巴细胞应答；紧密型HBsAg组比松弛型组诱导较强的体液免疫应答，1批混合型抗原体液免疫应答低于同批松弛型和紧密型组，2批松弛型组和其同批紧密型组的体液免疫应答程度接近；混合型HBsAg RP平均值显着高于松弛型组（P〈0．01），紧密型组RP平均值小于混合型组。结论重组酵母表达P24亚基结合程度不同的HBsAg均保持一定程度的抗原性。紧密型HBsAg免疫可诱导较强的非特异性NK细胞和体液免疫应答，混合型HBsAg的免疫反应原性较高。

关键词：乙型肝炎表面抗原(HBsAg) 半数有效剂量(ED50) 体外相对效力(RP)

创伤性脑损伤大鼠皮质神经元中Lnx1表达及参与继发性脑损伤的机制

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中国组织工程研究 2025年第1期29卷 24-30页

作者：马艳霞杨严伟马宇航李迪王晓燕邹明明韦善文苏州大学附属第一医院骨科江苏省苏州市215000 苏州大学骨科研究所江苏省苏州市215006 苏州大学附属第二医院江苏省苏州市215004 苏州大学附属张家港市第一人民医院江苏省张家港市215600 兰州生物制品研究所有限责任公司质量鉴定室甘肃省兰州市730046 解放军总医院第一医学中心神经外科医学部北京市100853

背景:细胞凋亡在继发性脑损伤中发挥重要作用。探究创伤性脑损伤后促进神经细胞存活的病理生理机制,将为防治创伤性脑损伤提供新的方向和理论依据。目的:探究Lnx1分子在哺乳动物脑损伤后皮质神经元中的表达变化及参与继发性脑损伤的可... 详细信息

背景:细胞凋亡在继发性脑损伤中发挥重要作用。探究创伤性脑损伤后促进神经细胞存活的病理生理机制,将为防治创伤性脑损伤提供新的方向和理论依据。目的:探究Lnx1分子在哺乳动物脑损伤后皮质神经元中的表达变化及参与继发性脑损伤的可能机制。方法:80只成年SD大鼠平均分成假手术组和创伤性脑损伤组,每组雌雄各20只。采用重物坠落方法建立创伤性脑损伤大鼠模型,分别在脑损伤后6,12,24,48,72 h,通过RT-qPCR、Western blot和免疫荧光染色等技术分析相关分子在受损皮质神经元中的表达情况。结果与结论:(1)创伤性脑损伤组大鼠损伤部位脑组织出血,可观察到明显的组织损伤,脑组织含水量升高;(2)与假手术组相比,创伤性脑损伤组皮质神经元中Lnx1表达在损伤24 h开始显著升高;(3)创伤性脑损伤后与Lnx1相结合的PBK和BCR蛋白表达降低,促存活因子ctgf的表达升高;(4)结果表明:脑损伤后神经元中Lnx1表达上调,其通过降低靶分子PBK和BCR的表达,进一步上调促成活因子ctgf的表达,对受损神经元具有保护作用。

关键词：创伤性脑损伤继发性脑损伤神经元 SD大鼠 Lnx1 PBK BCR ctgf