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基于Nrf2/HO-1/GPX4通路探讨大戟脂总三萜抗类风湿性关节炎的作用

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中国中药杂志 2023年第18期48卷 4834-4842页

作者：周茂杰谭为哈木拉提·哈斯木徐磊顾政一赵军新疆医科大学药学院新疆乌鲁木齐830011 新疆药物研究所维吾尔药重点实验室新疆乌鲁木齐830004

旨在探讨大戟脂总三萜对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的防治作用及其作用机制。采用完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,FCA)诱导大鼠关节炎模型,将雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为对照组,模型组,雷公藤多苷(7.... 详细信息

旨在探讨大戟脂总三萜对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的防治作用及其作用机制。采用完全弗氏佐剂(complete Freund′s adjuvant,FCA)诱导大鼠关节炎模型,将雄性大鼠随机分为6组,每组10只,分别为对照组,模型组,雷公藤多苷(7.5 mg·kg^(-1))组,大戟脂总三萜低、中、高剂量组(32、64、128 mg·kg^(-1));除对照组大鼠外,在大鼠右后足趾注射0.2 mL FCA。给药组灌胃给予药物,对照组和模型组给予相应体积0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液,每日1次,期间测量大鼠后足肿胀度并进行关节炎评分至第30天。给药结束后,采用HE染色观察大鼠关节组织病理学改变。采用生化比色法检测关节组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)因子和Fe^(2+)的含量以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性。采用RT-PCR法检测关节组织中核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(gluta-thione peroxidase 4,GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)mRNA的含量,Western blot法检测大鼠关节组织中Nrf2、Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1[NAD(P)H quinone oxidoreductase 1,NQO1]、超氧化物歧化酶(SOD2)、GPX4、ACSL4蛋白的表达。结果显示,与模型组比较,经雷公藤多苷(7.5 mg·kg^(-1))和大戟脂总三萜(32、64、128 mg·kg^(-1))治疗后,大鼠双侧后肢肿胀程度明显减轻,关节炎评分显著下降,关节组织病变程度减轻;关节组织中MDA和Fe^(2+)含量降低,GSH含量和SOD活性增加;氧化因子Nrf2、GPX4的蛋白表达和mRNA水平显著增加,ACSL4的蛋白表达和mRNA相对含量显著降低;Nrf2/HO-1/GPX4通路的Keap1、NQO1、HO-1、SOD2蛋白表达水平也显著升高。综上所述,大戟脂总三萜可通过抑制脂质过氧化从而抑制细胞异常铁死亡发挥抗RA作用,作用机制可能与其对Nrf2/HO-1/GPX4信号通路的调控相关。

关键词：大戟脂总三萜类风湿性关节炎抗类风湿性关节炎活性 Nrf2/HO-1/GPX4信号通路

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阿尔泰金莲花有效成分抗炎作用的研究

中药药理与临床 2021年第5期37卷 49-54页

作者：司丽君王林林黄华赵军新疆药物研究所维吾尔药重点实验室乌鲁木齐830004

目的:研究阿尔泰金莲花总黄酮及其成分荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷(OGA)的抗炎作用。方法:以环氧合酶1/2(COX 1/2)及5-脂氧酶(5-LO)抑制剂筛选试剂盒检测阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对COX 1/2和5-LO的抑制作用;脂多糖... 详细信息

目的:研究阿尔泰金莲花总黄酮及其成分荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷(OGA)的抗炎作用。方法:以环氧合酶1/2(COX 1/2)及5-脂氧酶(5-LO)抑制剂筛选试剂盒检测阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对COX 1/2和5-LO的抑制作用;脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞建立炎症细胞模型,采用MTS法检测阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对RAW264.7细胞活力的影响,Griess试剂检测一氧化氮(NO)的分泌量,用2’,7’-氯荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)释放情况,ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和前列腺素E;(PGE;)的分泌量,RT-qPCR法测定炎症因子Tnf-α、Il-1β和Il-6的mRNA表达。结果:阿尔泰金莲花总黄酮对COX-1、COX-2酶的半数抑制浓度分别106.66μg/mL,6.94μg/mL;荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对COX-1、COX-2的半数抑制浓度分别为140.34μg/mL,5.01μg/mL,阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对5-LO无明显影响;阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷在1.95μg/mL~125μg/mL条件下对RAW264.7细胞不产生毒性作用。与正常对照组比较,模型对照组细胞中NO、ROS、TNF-α、IL-6、MCP-1和PGE;含量显著升高(P<0.01),Tnf-α、Il-1β和Il-6 mRNA表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷呈剂量依赖性地降低细胞中NO、ROS、TNF-α、IL-6、MCP-1和PGE;的分泌(P<0.05或P<0.01),下调Tnf-α、Il-1β和Il-6的mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。结论:阿尔泰金莲花总黄酮具有良好的抗炎作用,荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷是其发挥抗炎作用的物质基础之一,其作用机制可能是通过抑制COX-2活性,减少RAW 264.7细胞NO、PGE;、MCP-1及炎性因子的分泌,下调Tnf-α、Il-6、Il-1βmRNA的表达有关。

关键词：阿尔泰金莲花荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷抗炎 RAW264.7 环氧合酶-2

维药新塔花(Ziziphora bungena)zbHDS基因克隆及组织表达分析

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基因组学与应用生物学 2019年第6期38卷 2686-2691页

作者：程波何江地力努尔·吐尔逊江杨伟俊满尔哈巴·海如拉刘冲新疆维吾尔自治区药物研究所新疆维吾尔药重点实验室

对维药新塔花(Ziziphora bungena)萜类化合物生物合成途径中,关键酶1-羟基-2甲基-2-(E)-丁烯基-4-二磷酸合成酶HDS基因克隆,进行组织表达特异性分析,为研究新塔花萜类化合物生物合成途径与基因调控提供基础。结合新塔花转录组数据库,根... 详细信息

对维药新塔花(Ziziphora bungena)萜类化合物生物合成途径中,关键酶1-羟基-2甲基-2-(E)-丁烯基-4-二磷酸合成酶HDS基因克隆,进行组织表达特异性分析,为研究新塔花萜类化合物生物合成途径与基因调控提供基础。结合新塔花转录组数据库,根据编码区序列设计引物,通过RT-PCR方法对Z. bungena基因HDS (zbHDS)的编码区cDNA进行克隆,对其进行相关生物信息学分析,通过Real-Time进一步分析其组织表达特异性。RT-PCR扩增了一个长2 465 bp的zbHDS (登录号:MG065856)基因片段,含一个2 229 bp的开放阅读框,编码742个氨基酸。进化树分析结果显示,与丹参(Salvia miltiorrhiza)具有较近的亲缘关系。Real-Time PCR结果显示zbHDS基因在各器官中均有表达,在茎和叶中表达量较高,根和花中表达量相对较低。本研究首次从新塔花中克隆HDS基因并获得其编码区序列,zbHDS基因具有组织表达特异性,为进一步研究新塔花中萜类化合物生物合成途径提供数据支持。

关键词：新塔花(Ziziphora bungena) 羟甲基丁烯基-4-磷酸合成酶基因克隆组织表达

HPLC同时测定新疆不同产地新塔花中3种有效成分的含量

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中国中药杂志 2018年第9期43卷 1769-1773页

作者：地力努尔·吐尔逊江何江满尔哈巴·海如拉程波杨伟俊迪丽努尔·艾力阿吉新疆维吾尔自治区药物研究所新疆乌鲁木齐830004 新疆维吾尔药重点实验室新疆乌鲁木齐830004

为更加全面的反映维吾尔族药材新塔花的内在质量,对新塔花中的多种成分进行HPLC同步测定,比较不同产地新塔花中咖啡酸、迷迭香酸、蒙花苷的含量。样品制备采用回流提取,选用ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5.0μm）;流动相为甲醇... 详细信息

为更加全面的反映维吾尔族药材新塔花的内在质量,对新塔花中的多种成分进行HPLC同步测定,比较不同产地新塔花中咖啡酸、迷迭香酸、蒙花苷的含量。样品制备采用回流提取,选用ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5.0μm）;流动相为甲醇（A）-0.2%冰醋酸溶液（B）,梯度洗脱,检测波长340 nm,柱温30℃,流速1.0 m L·min-1。咖啡酸、迷迭香酸、蒙花苷分别在240 mg·L-1（r=0.999 9）,360 mg·L-1（r=1）,7140 mg·L-1（r=0.999 9）呈良好的线性关系,平均回收率分别为100.9%（RS 1.3%）,98.25%（RSD 2.0%）,101.2%（RSD 1.5%）。测得13批新塔花中咖啡酸质量分数在0.081.07mg·g-1、迷迭香酸质量分数在1.233.59 mg·g-1、蒙花苷质量分数在2.0810.90 mg·g-1。该方法结果准确、重复性好,可用于测定新塔花药材中咖啡酸、迷迭香酸、蒙花苷的含量;3种成分在不同批次的新塔花药材中的含量差异显著,其内在质量差异较为明显。

关键词：新塔花咖啡酸迷迭香酸蒙花苷含量测定 HPLC

基于miRNA155-5p介导的MAPK/NF-κB通路探讨尿石素A的抗炎机制

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中国药理学通报 2024年第6期40卷 1066-1074页

作者：乌里盼·托乎达阿里孙媛丁宛婷赵军新疆医科大学药学院新疆乌鲁木齐830011 新疆药物研究所维吾尔药重点实验室新疆乌鲁木齐830000

目的以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7炎症细胞模型为研究对象,基于miRNA155-5p调控的TLR4/MAPK/NF-κB通路探讨尿石素A(urolithin A,Uro A)的抗炎机制。方法通过转染过表达miR-155-5p-mimics及miR-NC至LPS诱导的RAW264.7细胞中,RT-qPCR法检测各组细胞miR-15-5p、p38 MAPK、JNK和ERK的mRNA表达。MTT法检测Uro A对细胞活力的影响;Griess法检测细胞上清液NO的含量;ELISA法检测细胞上清液PGE 2、IL-6、IL-1β和TNF-α的表达水平;Western blot法检测iNOS、COX-2、TLR4以及MAPK/NF-κB通路相关蛋白的表达水平。结果与miR-NC组比较,miRNA155-5p过表达组p38 MAPK、JNK和ERK mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,Uro A能明显抑制LPS诱导的miRNA155-5p、NO、PGE 2和TNF-α、IL-1β、IL-6(P<0.01),降低iNOS、COX-2蛋白表达水平(P<0.01),且呈浓度依赖性;此外,Uro A明显抑制TLR4蛋白的表达水平以及p38 MAPK、JNK、NF-κB p65、IκBα蛋白的磷酸化水平(P<0.05),并呈浓度依赖性;但对ERK1/2蛋白磷酸化没有显示出明显的抑制作用。结论Uro A能够明显抑制LPS诱导的炎症反应,机制与miRNA155-5p介导的TLR4/MAPK/NF-κB信号通路有关。

关键词：尿石素A RAW264.7 炎症反应 microRNA155-5p MAPK通路 NF-κB通路

HPLC指纹图谱和多成分定量结合化学模式识别法评价不同生长期刺山柑果质量

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中草药 2023年第7期54卷 2235-2242页

作者：周雯雯史银基何江杨伟俊新疆医科大学药学院新疆乌鲁木齐830004 新疆维吾尔自治区药物研究所新疆维吾尔药重点实验室新疆乌鲁木齐830004

目的建立不同生长期刺山柑Capparis spinosa果实的HPLC指纹图谱及多成分含量测定,结合化学模式识别法评价不同生长期刺山柑果的质量,为其进一步研究和开发提供依据。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,以0.1%磷酸溶液(A)-乙腈(B)为... 详细信息

目的建立不同生长期刺山柑Capparis spinosa果实的HPLC指纹图谱及多成分含量测定,结合化学模式识别法评价不同生长期刺山柑果的质量,为其进一步研究和开发提供依据。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,以0.1%磷酸溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为310 nm,柱温为25℃,进样量为10μL。采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》建立18批次不同生长期刺山柑果的HPLC指纹图谱并分析相似度。使用SPSS 25.0和SIMCA-P 14.1软件进行聚类分析、主成分分析和偏最小二乘法-判别分析(partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA)。通过对照品比对指认化学成分并进行定量测定。结果18批次刺山柑果HPLC指纹图谱共匹配出14个共有峰,分别指认出2号峰为原儿茶酸、13号峰为芦丁、14号峰为山柰酚-3-O-芸香糖苷,指纹图谱相似度范围为0.924~0.991。聚类分析将18批次刺山柑果分为3类;主成分分析得刺山柑成熟果质量较好;经PLS-DA分析筛选出了芦丁和山柰酚-3-O-芸香糖苷等4个差异成分。样品中原儿茶酸、芦丁、山柰酚-3-O-芸香糖苷含量分别为0.0323~0.0594、0.1157~0.4640、0.0629~0.3307 mg/g。结论建立的刺山柑果HPLC指纹图谱操作简便、结果可靠,原儿茶酸、芦丁和山柰酚-3-O-芸香糖苷可以作为刺山柑果质量评价的指标性成分。

关键词：刺山柑指纹图谱原儿茶酸芦丁山柰酚-3-O-芸香糖苷化学模式识别主成分分析

维医传统牛奶浸渍炮制工艺对马钱子镇痛作用及毒性的影响

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中药材 2015年第2期38卷 267-270页

作者：地力努尔·吐尔逊江史玉柱杨巧丽刘燕薛文采阿米娜·阿巴斯杨伟俊新疆维吾尔自治区药物研究所新疆乌鲁木齐830004 新疆维吾尔药重点实验室新疆乌鲁木齐830004

目的:通过研究不同炮制方法对马钱子镇痛作用及其毒性的影响,为传统维吾尔医采用牛奶浸渍炮制工艺处理毒性药材的合理性提供科学依据。方法:小鼠分别灌胃给予生马钱子、中医砂烫法炮制的马钱子、维医牛奶冷渍炮制的马钱子和维医牛奶热... 详细信息

目的:通过研究不同炮制方法对马钱子镇痛作用及其毒性的影响,为传统维吾尔医采用牛奶浸渍炮制工艺处理毒性药材的合理性提供科学依据。方法:小鼠分别灌胃给予生马钱子、中医砂烫法炮制的马钱子、维医牛奶冷渍炮制的马钱子和维医牛奶热渍炮制的马钱子混悬液,观察小鼠14 d内的活动情况及中毒反应。采用改良寇氏法计算马钱子及其炮制品对小鼠的半数致死量(LD50);采用小鼠扭体试验观察灌胃不同剂量各组马钱子炮制品的扭体反应次数,评价镇痛作用。结果:生马钱子及中医砂烫法炮制的马钱子、维医牛奶冷渍炮制的马钱子和维医牛奶热渍炮制的马钱子对小鼠的LD50分别为273.0、289.3、289.3和339.2 mg/kg。与模型组比较,维医牛奶热渍炮制的马钱子低剂量组以及维医牛奶冷渍炮制的马钱子高、低剂量组小鼠醋酸所致扭体反应次数显著减少(P维吾尔医牛奶热渍法和冷渍法炮制工艺能够增强马钱子对小鼠的镇痛作用,提高其对小鼠的LD50。研究结果阐释了维医牛奶浸渍炮制马钱子增效减毒的药理学机制。

关键词：马钱子牛奶浸渍炮制 LD50 镇痛作用

哈萨克医经典名方吾孜德克治疗肠炎的物质基础及作用机制

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中国药房 2023年第13期34卷 1577-1583页

作者：贾丽萍程波史玉柱何江王雪杨伟俊新疆农业大学食品科学与药学学院乌鲁木齐830004 新疆维吾尔自治区药物研究所新疆维吾尔药重点实验室乌鲁木齐830004 新疆维吾尔自治区药物研究所药理Ⅱ实验室乌鲁木齐830004

目的探讨哈萨克医经典名方吾孜德克(WZDK)治疗肠炎的物质基础及潜在作用机制。方法利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术分析WZDK中的化学成分。通过网络药理学和分子对接技术筛选WZDK的主要化学成分并进行靶点预测,通过体内实验验证WZD... 详细信息

目的探讨哈萨克医经典名方吾孜德克(WZDK)治疗肠炎的物质基础及潜在作用机制。方法利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术分析WZDK中的化学成分。通过网络药理学和分子对接技术筛选WZDK的主要化学成分并进行靶点预测,通过体内实验验证WZDK对急性肠炎的治疗作用及作用靶点。采用葡聚糖硫酸钠诱导构建小鼠急性肠炎模型,给药期间观察小鼠一般状况并计算疾病活动指数(DAI)评分,通过苏木素-伊红染色、实时荧光定量PCR验证各组小鼠肠道病理改变及核心靶点mRNA的表达。结果通过LC-MS/MS技术分析共得到316种化学成分;通过网络药理学分析,核心靶点主要包括白细胞介素1β(IL-1β)、蛋白激酶B1(AKT1)、肿瘤蛋白p53(TP53)、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)等;分子对接结果显示,白桦脂酸、lappadilactone、木香烃内酯、去氢木香内酯等化学成分与核心靶点结合稳定。体内实验结果显示,与模型组比较,高剂量(5.00 g/kg)WZDK能显著降低小鼠的DAI评分(P<0.05),改善其结肠组织炎症细胞浸润、黏膜组织损伤,显著下调其结肠组织中IL-6、TNF-α、IL-1β和TP53 mRNA的表达(P<0.05或P<0.01)。结论WZDK中的白桦脂酸、lappadilactone、木香烃内酯、去氢木香内酯等多种化学成分可能通过下调结肠组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、TP53 mRNA表达,发挥改善肠道局部炎症因子失衡、修复结肠黏膜组织损伤的作用。

关键词：吾孜德克哈萨克医经典名方网络药理学分子对接肠炎

基于网络药理学、分子对接和实验验证探讨肉苁蓉治疗肝纤维化的作用机制

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天然产物研究与开发 2022年第4期34卷 677-686页

作者：张博锐马倩倩王雯艺张石蕾刘涛赵军马龙新疆医科大学公共卫生学院乌鲁木齐830054 新疆药物研究所维吾尔药重点实验室乌鲁木齐830004

从药物、疾病、靶点角度研究肉苁蓉中活性成分治疗肝纤维化的作用机制。通过中药数据库(TCMSP)、中医药百科全书数据库(ETCM)、中医药研究综合数据库(TCMID)、CNKI数据库、PubMed等数据库收集肉苁蓉的有效成分,利用Uniprot数据库获取肉... 详细信息

从药物、疾病、靶点角度研究肉苁蓉中活性成分治疗肝纤维化的作用机制。通过中药数据库(TCMSP)、中医药百科全书数据库(ETCM)、中医药研究综合数据库(TCMID)、CNKI数据库、PubMed等数据库收集肉苁蓉的有效成分,利用Uniprot数据库获取肉苁蓉活性成分对应的靶标基因,通过GeneCards数据库和OMIM数据库收集肝纤维化疾病基因做映射,将有效成分靶点与肝纤维化靶点取交集,并绘制中药-有效成分-疾病网络;通过String数据库及Cytoscape 3.7.1软件构建蛋白相互作用网络(PPI);通过DAVID数据库对交集靶点进行GO功能富集与KEGG通路富集;建立动物肝纤维化模型,采用ELISA试剂盒检测小鼠肝组织中LN、HA、PCIII、Col IV含量变化,并进行HE和Masson染色观察肝病理组织学变化,通过实时荧光定量PCR法检测PI3K、AKT mRNA的转录情况。收集并筛选肉苁蓉有效成分8个,靶点157个,肝纤维化疾病靶点1 005个,二者交集靶点92个,涉及5条主要信号通路,包括癌症信号通路、乙肝病毒信号通路、PI3K-AKT信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、蛋白多糖与癌症。动物实验表明:与模型组相比,肉苁蓉苯乙醇总苷高、中、低剂量组(700、350、175 mg/kg)能显著降低肝纤维化小鼠肝组织LN、HA、PCIII、Col IV含量(P实验为进一步深入探讨肉苁蓉的中药药理作用奠定基础。

关键词：肉苁蓉网络药理学分子对接肝纤维化靶点