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山羊Notch1基因的表达及细胞定位

中国兽医学报 2022年第1期42卷 114-119页

作者：王玉婷张成柳璇高娜杨勇飞李有文塔里木大学动物科学学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室/新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

为了进一步了解Notch1蛋白,本研究用BLAST方法对不同动物Notch1基因的同源性及遗传进化情况进行了分析,通过PCR扩增获得Notch1基因,并构建了与GST标签融合表达的原核表达载体、与GFP标签融合表达的真核表达载体。将双酶切和测序鉴定的... 详细信息

为了进一步了解Notch1蛋白,本研究用BLAST方法对不同动物Notch1基因的同源性及遗传进化情况进行了分析,通过PCR扩增获得Notch1基因,并构建了与GST标签融合表达的原核表达载体、与GFP标签融合表达的真核表达载体。将双酶切和测序鉴定的阳性克隆分别转化BL21感受态细胞和转染BHK21细胞进行原核和真核表达,并用Western blot和荧光显微镜鉴定。同时,与GFP标签对照确定其在细胞中的定位情况。结果显示,扩增的Notch1基因片段约780 bp,为Notch1基因的部分序列,Notch1在不同动物间的基因序列同源性为94%以上,遗传进化关系上分为3个分支。Western blot检测结果显示,构建的原核表达pGEX-KG-Notch1能够表达预期大小为56 kDa的融合蛋白;荧光显微镜检测显示Notch1与GFP的融合蛋白分布在整个细胞中,但主要集中于细胞核,而GFP空白对照仅分布于细胞质中,说明Notch1主要定位于细胞核中。本研究为进一步探索Notch1与KLP1的相互作用及其功能奠定了基础。

关键词：山羊 Notch1基因原核表达细胞定位

和田羊Lin28B基因启动子区的克隆及序列分析

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四川农业大学学报 2022年第5期40卷 649-655页

作者：隋志远张继虎李庆瑾张志帅张永杰邢凤塔里木大学动物科学与技术学院/新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

【目的】分析和田羊Lin28B基因的启动子序列与结构,为进一步解析其转录调控机制奠定基础。【方法】根据Ensembl数据库中绵羊Lin28B基因5’侧翼区序列,设计PCR引物进行扩增、克隆测序及序列鉴定,得到和田羊Lin28B基因启动子区序列,并利... 详细信息

【目的】分析和田羊Lin28B基因的启动子序列与结构,为进一步解析其转录调控机制奠定基础。【方法】根据Ensembl数据库中绵羊Lin28B基因5’侧翼区序列,设计PCR引物进行扩增、克隆测序及序列鉴定,得到和田羊Lin28B基因启动子区序列,并利用相关生物信息学软件对其进行预测分析。【结果】试验成功获得2 993 bp的和田羊Lin28B基因启动子区序列,GC含量为39.33%;预测了其核心启动子区域,发现在启动子区存在7个潜在的转录起始位点,同时发现了2个TATA-box、2个CpG岛,但未发现CAAT-box;该序列还包含AP-1、Oct-1、p53、Pax-4、STAT3、TGIF等转录因子结合位点。【结论】运用生物信息学软件预测分析和田羊Lin28B基因启动子序列,可为更深入研究Lin28B基因对绵羊初情期的调控机制提供理论基础。

关键词：和田羊 Lin28B基因启动子区序列分析结构预测

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纳米抗菌药物抗金黄色葡萄球菌感染研究进展

畜牧与兽医 2022年第7期54卷 140-144页

作者：鲁壮壮刘金环张珊玲鞠牧洁罗万和陈伟新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室/塔里木大学动物科学学院/新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus耐药性问题日益严重,由其引起的奶牛乳腺炎的临床治疗面临着严峻的挑战。通过新型纳米载体系统所制备的纳米抗菌药物治疗金葡菌感染尤为重要。通过总结金葡菌感染机制、常规药物及纳米抗菌药物在治... 详细信息

金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus耐药性问题日益严重,由其引起的奶牛乳腺炎的临床治疗面临着严峻的挑战。通过新型纳米载体系统所制备的纳米抗菌药物治疗金葡菌感染尤为重要。通过总结金葡菌感染机制、常规药物及纳米抗菌药物在治疗金葡菌感染中的应用,讨论并分析纳米抗菌药物在兽医临床上治疗金葡菌感染所面临的挑战,对纳米抗菌药物治疗金葡菌感染的应用前景进行展望。

关键词：金黄色葡萄球菌感染机制小菌落变异体纳米抗菌药物纳米载体系统

添加屎肠球菌、枯草芽孢杆菌及其复合菌对绵羊生长性能、养分表观消化率、瘤胃发酵指标和瘤胃微生物区系的影响

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动物营养学报 2022年第8期34卷 5190-5205页

作者：白天天崔浩然赵林波王彦郭雪峰周小玲塔里木大学动物科学与技术学院阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300

本试验旨在研究添加屎肠球菌、枯草芽孢杆菌及其复合菌对绵羊生长性能、养分表观消化率、瘤胃发酵指标和瘤胃微生物区系的影响。试验选取24只体重为(32.7±4.7)kg、安装瘘管的成年绵羊,随机分为4组,分别为CK组(添加10 mL发酵液)、S组(添... 详细信息

本试验旨在研究添加屎肠球菌、枯草芽孢杆菌及其复合菌对绵羊生长性能、养分表观消化率、瘤胃发酵指标和瘤胃微生物区系的影响。试验选取24只体重为(32.7±4.7)kg、安装瘘管的成年绵羊,随机分为4组,分别为CK组(添加10 mL发酵液)、S组(添加10 mL 1×10^(10)CFU/mL屎肠球菌发酵液)、K组(添加10 mL 1×10^(10)CFU/mL枯草芽孢杆菌发酵液)和F组(添加5 mL 1×10^(10)CFU/mL屎肠球菌发酵液+5 mL 1×10^(10)CFU/mL枯草芽孢杆菌发酵液),每组6个重复,每个重复1只。预试期15 d,正试期60 d,正试期分为2期:第1~30天为Ⅰ期和第31~60天为Ⅱ期,分别于第1~3天和第31~33天进行瘤胃发酵试验,于第5~12天和第35~42天进行养分表观消化率测定,于第30天和第60天进行瘤胃微生物区系的测定。结果表明:1)Ⅰ期时,S组和K组的平均日增重(ADG)高于CK组(P>0.05),F组料重比(F/G)为最高;Ⅱ期时,S组的酸性洗涤纤维(ADF)表观消化率显著高于CK组(P0.05),S组F/G为最高。2)Ⅰ期时,各试验组各时间点瘤胃液pH、氨态氮(NH3-N)和挥发性脂肪酸(VFA)含量与CK组相比均无显著差异(P>0.05);Ⅱ期6 h时,K组乙酸含量显著低于S组和F组(P0.05),K组丙酸含量显著低于CK组和S组(P<0.05),K组总挥发性脂肪酸(TVFA)含量显著低于其他各组(P<0.05),Ⅱ期0 h时,F组乙酸/丙酸显著高于其他各组(P<0.05)。3)Ⅱ期时,S组的未分类菌属-F082相对丰度显著低于CK组(P<0.05),CK组疣微菌门相对丰度显著高于K组和F组(P<0.05)。综上所述,添加60 d屎肠球菌可以提高绵羊营养物质表观消化率,调节绵羊瘤胃微生物区系菌门或菌属的相对丰度,效果优于枯草芽孢杆菌,可作为微生态饲料添加剂应用于反刍动物绿色养殖中。

关键词：屎肠球菌枯草芽孢杆菌消化率瘤胃发酵瘤胃微生物

产细菌素屎肠球菌F11.1G的生物学特性分析

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微生物学通报 2024年

作者：万颖王明根朱振宇白天天杨成郭雪峰塔里木大学生命科学与技术学院塔里木大学动物科学与技术学院塔里木大学新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室

【背景】随着滥用抗生素导致耐药问题日益严重，逐渐破坏动物健康与生态环境。为应对这一全球性公共威胁，多国禁止把抗生素作为食品和饲料添加剂，益生菌的替代使用应运而生。【目的】旨在对产细菌素屎肠球菌F11.1G的生物学特性作全面... 详细信息

【背景】随着滥用抗生素导致耐药问题日益严重，逐渐破坏动物健康与生态环境。为应对这一全球性公共威胁，多国禁止把抗生素作为食品和饲料添加剂，益生菌的替代使用应运而生。【目的】旨在对产细菌素屎肠球菌F11.1G的生物学特性作全面分析，以保证该菌株在生产中的合理及安全应用。【方法】通过热稳定性试验、耐酸试验和耐胆盐试验测定其耐热、耐酸和耐胆盐性能；通过药敏试验探究其耐受药物能力；通过表面疏水性试验、自凝聚性试验间接探究其对细胞的粘附能力；通过耐蛋白酶活性试验研究其在蛋白酶作用下活性作用的强弱。【结果】屎肠球菌F11.1G发酵上清液具有较强的热稳定性，在110 ℃条件下仍然能够发挥抑菌作用，而最佳生长温度为37 ℃；当pH为5.9时，菌株生长情况较好且存活率最高，随着pH的降低，其生长受到抑制，当pH降低为1.8时，菌株仍可生长，但存活率仅有9%；胆盐浓度在0.1%时存活率达140.0%，胆盐浓度在0.15%时，存活率达126.6%，而胆盐浓度在0.2%时，存活率为96.6%；对头孢吡肟、丁胺卡那、庆大霉素、诺氟沙星、红霉素、罗红霉素、多黏菌素B、林可霉素、链霉素、新霉素、甲硝唑、克林霉素、制霉菌素、甲氧苄啶、阿奇霉素和卡那霉素耐受；对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星中度敏感；对青霉素、头孢唑啉、头孢呋辛、氯霉素、四环素、多西环素、替考拉宁和呋喃妥因高度敏感。屎肠球菌F11.1G对正己烷的疏水率为84.29%，对二甲苯(25.75%) 、对乙酸乙酯(31.26%) 、对二氯甲烷(15.08%) 。屎肠球菌F11.1G在3、6、9、12、15和18 h的自凝聚率分别为51%、54%、76%、80%、83%和84%。在蛋白酶K作用下，对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌效果明显减弱，抑菌圈直径为13.05 mm和11.28 mm，抑菌率下降幅度为52%和58%，而在胰蛋白酶、胃蛋白酶的作用下，未产生抑菌圈，抑菌效果几乎完全丧失。【结论】综上所述，屎肠球菌F11.1G具有良好的耐高温、耐酸、耐胆盐能力，对头孢吡肟、丁胺卡那、庆大霉素、诺氟沙星、红霉素和罗红霉素等16种药物耐受，对正己烷有较高的疏水率，且自凝聚性良好，并且经胰蛋白酶、胃蛋白酶处理后抑菌活性丧失，证明该抑菌物质为蛋白类或肽类，为微生态制剂的安全应用提供基础数据。

关键词：细菌素屎肠球菌F11.1G 生物学特性替抗

新疆南疆地区表皮葡萄球菌对氟苯尼考注射液的药物敏感性研究

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黑龙江畜牧兽医 2023年第17期 122-127,133,141页

作者：冷楠楠任强陈伟罗万和塔里木大学动物科学与技术学院/新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

为了探索新疆南疆地区表皮葡萄球菌对氟苯尼考注射液的敏感性,试验采用微量肉汤稀释法测定了氟苯尼考注射液对表皮葡萄球菌ATCC 35984和临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC),对表皮葡萄球菌生长、生物被膜形成的抑制作用... 详细信息

为了探索新疆南疆地区表皮葡萄球菌对氟苯尼考注射液的敏感性,试验采用微量肉汤稀释法测定了氟苯尼考注射液对表皮葡萄球菌ATCC 35984和临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC),对表皮葡萄球菌生长、生物被膜形成的抑制作用及表面疏水性的影响,测定了氟苯尼考注射液的体外抑菌效果及其对表皮葡萄球菌细胞膜完整性的影响。结果表明:氟苯尼考注射液对表皮葡萄球菌ATCC 35984和临床分离株的MIC值分别为4,2μg/mL,MBC值分别为16,8μg/mL。与未加氟苯尼考注射液的菌液相比,0.5μg/mL氟苯尼考注射液可显著抑制表皮葡萄球菌生长,0.25μg/mL氟苯尼考可显著抑制其生物被膜的形成(P2μg/mL时抑制效果极显著(P1/2 MIC时,其可损伤表皮葡萄球菌的细胞膜完整性。说明新疆南疆地区表皮葡萄球菌对氟苯尼考注射液的药物敏感性较好,氟苯尼考可能是通过降低表皮葡萄球菌细胞表面疏水性和损伤表皮葡萄球菌的细胞膜完整性来发挥抑菌和杀菌作用的。

关键词：新疆南疆地区表皮葡萄球菌氟苯尼考注射液药物敏感性抗菌活性生物被膜

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盐穗木青贮中乳酸菌的分离及筛选

中国农业科学 2018年第14期51卷 2825-2834页

作者：尹雪郭雪峰刘俊峰张秀萍席琳乔张苏江塔里木大学动物科学学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室

【目的】合理利用牧草资源,为新疆南疆地区畜牧业提供优质青贮,研究探讨了花果期盐穗木青贮后的营养价值和发酵品质,同时为提高青贮饲料发酵品质筛选提供乳酸菌资源。【方法】以新疆阿克苏地区花果期盐穗木为原料制作实验室小剂量自然... 详细信息

【目的】合理利用牧草资源,为新疆南疆地区畜牧业提供优质青贮,研究探讨了花果期盐穗木青贮后的营养价值和发酵品质,同时为提高青贮饲料发酵品质筛选提供乳酸菌资源。【方法】以新疆阿克苏地区花果期盐穗木为原料制作实验室小剂量自然发酵青贮,在发酵第150天时对比青贮前后盐穗木的干物质(DM)、粗蛋白(CP)、可溶性糖(WSC)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的含量变化,测定盐穗木青贮的p H、氨态氮(NH3-N)、乳酸(LA)、乙酸(AA)、丙酸(PA)和丁酸(BA)含量,并采用实验室纯培养方法结合生理生化分析,对青贮中乳酸菌的种类和形态学进行分类,通过葡萄糖发酵产酸产气试验、细菌微量生化反应碳源发酵试验、耐盐试验、耐酸试验和温度生长试验等生理生化试验对所筛选菌株进行研究。运用核酸Blast技术,将所测序列与Gen Bank数据库进行对比,选择并下载与所测序列同源性最高的已知分类地位的菌种,与本试验所测菌株的序列一起,采用Clustal进行比对,用MEGA5.0绘制系统发育树,确定各菌株分类地位,对分离的菌株进行种属鉴定。【结果】与青贮前相比,由于乳酸菌发酵利用原料中的糖类物质导致青贮后盐穗木中的干物质和可溶性糖含量下降,同时在青贮发酵过程中盐穗木茎秆中难降解的水溶性碳水化合物被乳酸菌降解为易被利用的纤维,导致中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维的含量升高,青贮p H为4.250—4.286,乳酸含量为60.923—61.283属于优良品质青贮饲料的范围。从自然发酵盐穗木青贮中分离得到3株粪肠球菌(Enterococcus faecium)、1株屎肠球菌(Enterococcus lactis)、2株蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、1株戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)、1株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和1株布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)。9株菌均能在p H4—7环境下能生长,在3.0%和6.5%Na Cl条件下及10—45℃范围内生长,且生长状况良好,同时能利用D-葡萄糖、D-甘露糖、纤维二糖、D-甘露醇、D-果糖、蔗糖等多种碳源。其中,戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)、布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)产酸速率和生长速率较快,且具有很强的耐酸耐盐能力,在5—45℃范围内生长良好。【结论】将盐穗木制成青贮后其营养成分含量和发酵品质均处于良好水平,可将戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)、布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)和植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)这3株菌选作青贮饲料制作过程中的添加剂。

关键词：盐穗木乳酸菌分离鉴定

槲皮素-替米考星混合物纳米粒的制备及对金黄色葡萄球菌小菌落变异株抗菌活性研究

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中国畜牧兽医 2022年第4期49卷 1470-1478页

作者：刘金环张珊玲宋玮罗万和陈伟塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室阿拉尔843300

【目的】制备一种适用于治疗由金黄色葡萄球菌小菌落变异株(Staphylococcus aureus small colony variants,SASCVs)引起奶牛乳腺炎感染的槲皮素-替米考星混合物纳米粒,评价其对SASCVs菌株的抗菌活性。【方法】通过对槲皮素(0.05、0.10、... 详细信息

【目的】制备一种适用于治疗由金黄色葡萄球菌小菌落变异株(Staphylococcus aureus small colony variants,SASCVs)引起奶牛乳腺炎感染的槲皮素-替米考星混合物纳米粒,评价其对SASCVs菌株的抗菌活性。【方法】通过对槲皮素(0.05、0.10、0.15和0.20 g)和替米考星原料药用量(0.2、0.3、0.4和0.5 g)及转速(500、1000、1500 r/min)、反应时间(0.5、1.0、2.0 h)、反应温度(25、50、75℃)、溶剂浓度(5.0%、7.5%、10.0%)进行考察,以外观性状为指标,筛选槲皮素-替米考星混合物纳米粒最优配方和制备条件;以微观形态、沉降体积比、再分散性、粒径和Zeta电位为指标,对制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒表征;通过琼脂扩散法、微量肉汤稀释法和体外杀菌曲线,对比槲皮素-替米考星混合物纳米粒和市售替米考星溶液对SASCVs菌株的抗菌活性,评价槲皮素-替米考星混合物纳米粒的优势。【结果】当替米考星为0.4 g、槲皮素为0.1 g、溶剂为20 mL 7.5%的聚乙二醇溶液,在转速为1000 r/min、反应时间为1 h、反应温度为50℃时,所制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒最优,其溶液外观性状显示颜色清亮,无沉淀和絮状物;微观形态显示该混合物纳米粒分布均匀,颗粒大小一致;沉降体积比为1,再分散性良好,平均粒径为741.9 nm,Zeta电位为-7.69 mV。替米考星标准品、槲皮素-替米考星混合物纳米粒和市售替米考星溶液对SASCVs菌株的抑菌圈直径分别为2.54、1.51和1.38 cm,对SASCVs菌株的最低抑菌浓度分别为1、1和2μg/mL;体外杀菌曲线表明,槲皮素-替米考星混合物纳米粒对SASCVs菌株表现出明显的浓度依赖性。【结论】本研究所制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒对SASCVs菌株具有较强杀菌能力,可为治疗由SASCVs菌株引起的奶牛乳腺炎提供基础研究资料。

关键词：槲皮素替米考星混合物纳米粒金黄色葡萄球菌小菌落变异株抗菌活性

绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 689-699页

作者：王永飞邓博文刘晓艳哈尔勒哈·阿曼太郭嘉栋周正国蔡江李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室阿拉尔843300 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室阿拉尔843300 阿克苏职业技术学院阿克苏843000

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu... 详细信息

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG,并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析,利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,利用镍柱亲和层析法纯化,以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。[结果]试验成功突变了EF-Tu基因中TGA位点,并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu′原核表达载体。生物信息学分析表明,克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高,亲缘关系最近;编码387个氨基酸,无N-糖基化位点和跨膜区域,存在10个丝氨酸、20个苏氨酸、4个酪氨酸磷酸化位点,二级结构由无规则卷曲(35.14%)、α-螺旋(26.87%)、延伸链(26.87%)及β-转角(11.11%)构成。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的蛋白大小约为43 ku,蛋白纯化浓度为0.615 g/L。ELISA和Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体效价可达1∶128 000,能够特异性识别EF-Tu融合蛋白,具有良好的免疫反应性。[结论]本研究成功突变了EF-Tu基因的TGA密码子,原核表达并纯化获得EF-Tu融合蛋白,制备其多克隆抗体效价为1∶128 000,为后续研究肺炎支原体EF-Tu蛋白结构和生物学功能及其疫苗研发提供了试验基础。

关键词：绵羊肺炎支原体重叠延伸PCR EF-Tu基因多克隆抗体