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绵羊肺炎支原体核糖体蛋白30S rpsE基因的原核表达及多克隆抗体的制备

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畜牧与兽医 2024年第7期56卷 78-84页

作者：刘晓艳王永飞邓博文哈尔勒哈·阿曼太蔡江李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到... 详细信息

旨在了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)30S rpsE蛋白的生物学特性及其蛋白免疫原性。用在线分析软件预测30S rpsE蛋白的理化性质、B细胞抗原表位、糖基化位点、二级结构及三级结构等;采用PCR方法从病羊鼻拭子样品中扩增得到30S rpsE基因片段,经NdeⅠ、XhoⅠ酶切纯化后,将其连接到pET-42b载体上,构建原核表达载体pET-42b-30S rpsE,使用不同浓度IPTG诱导蛋白在大肠杆菌BL21中表达;重组蛋白通过SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用镍层析法纯化蛋白后,与弗氏佐剂1∶1混合注射免疫家兔,然后采取全血,检测血清抗体效价及特异性。结果:经预测30S rpsE蛋白是亲水无信号肽的膜外蛋白,无跨膜结构域,有一个糖基化位点;成功构建了原核表达载体pET-42b-30S rpsE,表达的重组蛋白分子量约为25.9 ku,以包涵体和可溶性的形式存在;免疫家兔后血清抗体效价为1∶25 600,证实30S rpsE蛋白具有较好的免疫原性。

关键词：肺炎支原体 30S rpsE基因原核表达多克隆抗体

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多浪羊PROKR 2基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析

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中国畜牧兽医 2024年第4期51卷 1339-1348页

作者：黄巧艳李伟王鑫昆邢凤塔里木大学动物科学学院阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室阿拉尔843300

【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR 2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑c... 详细信息

【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR 2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑cDNA为模板,PCR扩增PROKR 2基因并克隆测序。利用DNAMAN软件对测序结果进行拼接,采用MegAlign软件进行物种间相似性比对并构建系统进化树,并利用生物信息学软件预测多浪羊PROKR2蛋白理化性质和结构功能。使用实时荧光定量PCR技术检测PROKR 2基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫中初情期前、初情期及初情期后的表达水平。【结果】克隆获得PROKR 2基因序列大小为2641 bp,包括5′-UTR 143 bp、3′-UTR 1343 bp和CDS区1155 bp,编码384个氨基酸,与GenBank中绵羊预测mRNA序列(登录号:XM_004014342.5)相似性为99.83%。系统进化树表明,多浪羊PROKR 2基因的遗传距离与山羊最近,与鸡最远。生物信息学分析表明,PROKR2蛋白为疏水稳定碱性蛋白,有7个跨膜结构,属于跨膜蛋白,存在31个磷酸化位点,主要在质膜上发挥作用。多浪羊PROKR2蛋白与GnRH1、PROK1、ANOS1等蛋白存在相互作用关系。实时荧光定量PCR结果显示,在多浪羊下丘脑各时期中PROKR 2基因表达量均显著高于其他组织(P0.05);子宫中PROKR 2基因在初情期前的表达量显著高于初情期和初情期后(P<0.05);卵巢和输卵管中PROKR 2基因在初情期的表达量显著高于初情期前和初情期后(P<0.05)。【结论】试验成功克隆了多浪羊PROKR 2基因CDS区序列,PROKR2蛋白属于疏水稳定碱性蛋白,含有7个跨膜结构,主要在下丘脑中表达,且在卵巢和输卵管中的总趋势为先升后降。研究结果可为进一步探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的调控作用提供参考。

关键词：多浪羊 PROKR 2基因克隆初情期表达

绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 689-699页

作者：王永飞邓博文刘晓艳哈尔勒哈·阿曼太郭嘉栋周正国蔡江李有文塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室阿拉尔843300 新疆生产建设兵团南疆动物疫病诊断与防控工程实验室阿拉尔843300 阿克苏职业技术学院阿克苏843000

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu... 详细信息

[目的]克隆绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)EF-Tu基因,原核表达获得EF-Tu蛋白,制备抗EF-Tu蛋白的兔源多克隆抗体,为研究肺炎支原体EF-Tu蛋白的结构和功能奠定基础。[方法]采用重叠延伸PCR方法将pET-28a-EF-Tu质粒中EF-Tu基因中间的TGA密码子突变为TGG,并对测序结果与其他支原体参考株进行相似性比对和遗传进化分析,利用在线软件对其推测的蛋白序列进行生物信息学分析。将突变后的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行原核表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,利用镍柱亲和层析法纯化,以纯化的EF-Tu融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA和Western blotting检测多克隆抗体效价及免疫反应性。[结果]试验成功突变了EF-Tu基因中TGA位点,并构建了融合表达His标签pET-28a-EF-Tu′原核表达载体。生物信息学分析表明,克隆的EF-Tu基因与绵羊肺炎支原体MoGH3-3菌株相似性最高,亲缘关系最近;编码387个氨基酸,无N-糖基化位点和跨膜区域,存在10个丝氨酸、20个苏氨酸、4个酪氨酸磷酸化位点,二级结构由无规则卷曲(35.14%)、α-螺旋(26.87%)、延伸链(26.87%)及β-转角(11.11%)构成。SDS-PAGE和Western blotting结果显示,目的蛋白大小约为43 ku,蛋白纯化浓度为0.615 g/L。ELISA和Western blotting结果显示,制备的多克隆抗体效价可达1∶128 000,能够特异性识别EF-Tu融合蛋白,具有良好的免疫反应性。[结论]本研究成功突变了EF-Tu基因的TGA密码子,原核表达并纯化获得EF-Tu融合蛋白,制备其多克隆抗体效价为1∶128 000,为后续研究肺炎支原体EF-Tu蛋白结构和生物学功能及其疫苗研发提供了试验基础。

关键词：绵羊肺炎支原体重叠延伸PCR EF-Tu基因多克隆抗体

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棉副产品在畜禽养殖业中应用的研究进展

饲料研究 2024年第3期47卷 143-148页

作者：路顺萍李龙龙陈雪文郭雪峰张苏江新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300

新疆棉副产品资源十分丰富,但资源利用率较低。棉副产品包括棉花秸秆、棉籽粕、棉籽壳和棉渣等,其中棉籽粕是畜禽养殖生产中重要的蛋白质原料之一,棉花秸秆、棉籽壳和棉渣可以作为反刍动物的粗饲料来源。由于棉副产品中包含游离棉酚等... 详细信息

新疆棉副产品资源十分丰富,但资源利用率较低。棉副产品包括棉花秸秆、棉籽粕、棉籽壳和棉渣等,其中棉籽粕是畜禽养殖生产中重要的蛋白质原料之一,棉花秸秆、棉籽壳和棉渣可以作为反刍动物的粗饲料来源。由于棉副产品中包含游离棉酚等抗营养因子,并且棉花秸秆、棉籽壳和棉渣中的粗纤维含量比较高,致使棉副产品在畜禽养殖业中的应用受到制约。文章综述了棉副产品产量、种类、营养价值及其在畜禽养殖中的研究与应用,以期为棉副产品在畜禽养殖业中的进一步应用提供参考。

关键词：棉花秸秆棉籽粕棉籽壳棉渣畜禽养殖

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棉副产品全混合发酵饲料工艺参数优化

饲料研究 2024年第12期47卷 97-104页

作者：王明根白天天朱振宇杨成赵林波刘俊峰卢冬郭雪峰塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木大学新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300

试验旨在探索棉副产品全混合发酵饲料工艺参数,为提高棉副产品综合利用效率、解决新疆南疆地区饲料不足的问题提供思路。试验采用3×5双因素设计,设置28.57%(C1)、31.51%(C2)和34.21%(C3)3个玉米粉添加组,每组分别添加1.0(B1)、2.0(B2)... 详细信息

试验旨在探索棉副产品全混合发酵饲料工艺参数,为提高棉副产品综合利用效率、解决新疆南疆地区饲料不足的问题提供思路。试验采用3×5双因素设计,设置28.57%(C1)、31.51%(C2)和34.21%(C3)3个玉米粉添加组,每组分别添加1.0(B1)、2.0(B2)、3.0(B3)、4.0(B4)、5.0 g(B5)屎肠球菌冻干粉,每组3个重复,加水预发酵2 d,测定pH值后加入棉副产品全混合饲料的其他部分,控制水分含量为70%,室温下发酵30 d,开封后测定发酵品质、营养成分、游离棉酚(FG)及有机酸含量。结果表明:全部发酵饲料感官品质较好,C1B3、C2B3、C2B4组为优等。不同玉米粉添加量对干物质、粗蛋白、酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量影响极显著(P<0.01);不同屎肠球菌添加量对干物质、粗蛋白、酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量影响极显著(P<0.01);玉米粉和屎肠球菌交互作用对粗蛋白含量有极显著影响(P<0.01),对酸性洗涤纤维和中性洗涤纤维含量有显著影响(P<0.05)。不同屎肠球菌添加量对FG含量影响显著(P<0.05)。不同玉米粉添加量对乳酸(LA)、丁酸(BA)和总挥发性脂肪酸含量影响极显著(P<0.01),不同屎肠球菌添加量对LA、乙酸(AA)、丙酸(PA)和总挥发性脂肪酸含量影响极显著(P<0.01),玉米粉和屎肠球菌交互作用仅对LA、AA和总挥发性脂肪酸含量具有极显著影响(P<0.01)。采用隶属函数法综合对各项指标进行评估,C3B3发酵效果最佳。研究表明,添加34.21%玉米粉、3.0 g屎肠球菌、17.20%棉籽粕、28.35%棉花秸秆、19.38%棉籽壳、0.66%预混料、0.07%CaCO3和0.13%NaCl,含水量控制为70%时,棉副产品全混合饲料发酵效果较好。

关键词：屎肠球菌棉副产品发酵效果工艺优化

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棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣混合青贮的营养价值研究

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饲料研究 2024年第2期47卷 106-110页

作者：李龙龙路顺萍陈雪文方雷伊敏江·阿卜杜热伊木卢冬张苏江新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300 塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300

试验旨在探究棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣混合青贮的营养特性及饲用价值。试验分为3组,对照组(CK组)使用全株玉米青贮,A组、B组棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣按1∶1混合青贮,每组3个重复,发酵90 d后取样,分析青贮饲料的发酵品质... 详细信息

试验旨在探究棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣混合青贮的营养特性及饲用价值。试验分为3组,对照组(CK组)使用全株玉米青贮,A组、B组棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣按1∶1混合青贮,每组3个重复,发酵90 d后取样,分析青贮饲料的发酵品质、营养特性及饲用价值等指标。结果显示,与CK组相比,A组和B组青贮饲料的pH值升高(P<0.05),费氏评分降低(P<0.05);A组和B组的粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量升高(P<0.05),非纤维性碳水化合物(NFC)含量降低(P<0.05)。A组饲料相对饲喂价值(RFV)和粗饲料相对质量(RFQ)高于B组(P<0.05)。与CK组相比,A组和B组的体外产气量降低,其中A组的体外产气量高于B组。A组和B组的干物质降解率(IVDMD)低于CK组(P<0.05)。研究表明,棉花秸秆分别与全株玉米、甜菜渣混合青贮饲料的饲用价值仍低于全株玉米青贮饲料,但A组与CK组的饲用价值较接近,应用潜力较高。

关键词：棉花秸秆全株玉米甜菜渣混合青贮发酵品质营养特性饲用价值

枯草芽孢杆菌与黑曲霉对甜高粱秸秆发酵效果的影响

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中国畜牧杂志 2024年第2期60卷 323-328页

作者：董宇蔡宏宇马艳王娇陈凤柏梁耀孙禹张苏江塔里木大学动物科学与技术学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室塔里木大学塔里木盆地生物资源保护利用兵团重点实验室新疆阿拉尔843300

试验旨在探究枯草芽孢杆菌与黑曲霉对甜高粱秸秆发酵品质的影响。以切短至1~2 cm甜高粱秸秆为原料,采用单因素设计,分为4个试验组,分别为对照组、枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组、菌+霉组(枯草芽孢杆菌:黑曲霉为1:1),添加量为2 mL/100 g,菌... 详细信息

试验旨在探究枯草芽孢杆菌与黑曲霉对甜高粱秸秆发酵品质的影响。以切短至1~2 cm甜高粱秸秆为原料,采用单因素设计,分为4个试验组,分别为对照组、枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组、菌+霉组(枯草芽孢杆菌:黑曲霉为1:1),添加量为2 mL/100 g,菌液浓度控制在1×10^(8)个细菌/mL,每组3个重复。分别在15、30、45d取样,通过感官评定、营养价值、发酵品质、有氧稳定性等指标进行综合分析。结果表明:试验组对甜高粱秸秆的感官品质均起到改善作用;在15、30、45 d时试验组粗蛋白质含量高于对照组(P<0.05),在30、45 d时中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量低于对照组(P<0.05);在30、45 d时黑曲霉组、菌+霉组pH低于对照组、枯草芽孢杆菌组(P<0.05),在45d时枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组、菌+霉组氨态氮/总氮低于对照组(P<0.05),在15、30、45 d时菌+霉组乳酸与乙酸含量高于对照组、枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组(P<0.05);随着有氧暴露时间的延长,对照组、枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组、菌+霉组pH呈上升趋势(P<0.05),干物质含量呈先上升再下降趋势(P<0.05),枯草芽孢杆菌组、黑曲霉组、菌+霉组pH和干物质含量低于对照组(P<0.05)。可见,在发酵第45天,菌+霉组能显著改善甜高粱秸秆感官品质、提高营养价值与发酵品质、延长其有氧稳定性时间。

关键词：甜高粱秸秆枯草芽孢杆菌黑曲霉发酵品质

新疆阿克苏地区鸭源鸡杆菌的分离鉴定和生物学特性分析

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中国兽医杂志 2024年第2期60卷 46-53页

作者：郝斌张家浩黎双李雪娇陈鑫刘淑华梁樊鑫侯梦哲李莲瑞塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300 新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室新疆阿拉尔843300

为确定引起新疆维吾尔自治区阿克苏地区某鸡场蛋鸡产蛋量下降和死亡的原因,本试验对采集自该鸡场病鸡的组织进行细菌分离和培养,对分离菌株进行形态学观察、生化鉴定和16S rRNA序列鉴定,并进行药敏试验和动物回归试验。结果显示,从病鸡... 详细信息

为确定引起新疆维吾尔自治区阿克苏地区某鸡场蛋鸡产蛋量下降和死亡的原因,本试验对采集自该鸡场病鸡的组织进行细菌分离和培养,对分离菌株进行形态学观察、生化鉴定和16S rRNA序列鉴定,并进行药敏试验和动物回归试验。结果显示,从病鸡病料中分离获得1株革兰阴性杆菌;生化试验结果显示,该分离菌株能分解乳糖和果糖等,过氧化氢酶、甘露醇和氧化酶等反应呈阳性;16S rRNA基因核苷酸序列系统进化树分析显示,该分离菌株与鸭源鸡杆菌同源性>99.9%;药敏试验结果显示,该分离菌株对四环素、氯霉素和环丙沙星等10种抗菌药耐药;动物回归试验结果显示,23周龄开产母鸡经生殖道接种分离菌株后采食量减少、产蛋量下降,剖检主要表现为输卵管炎、卵泡充血和变形等生殖道病变,与自然发病鸡一致;同居雏鸡与人工感染雏鸡分别在同居第2天和人工感染后第4天,可从上颚裂中分离出鸭源鸡杆菌,注射高浓度分离菌株可致雏鸡死亡。结果表明,引起该鸡场蛋鸡产蛋量下降和死亡的病原为鸭源鸡杆菌。本试验结果为治疗和防控鸭源鸡杆菌提供借鉴,为鸭源鸡杆菌的进一步研究提供了参考材料。

关键词：鸭源鸡杆菌分离与鉴定 16S rRNA 耐药性分析

产细菌素屎肠球菌F11.1G的生物学特性分析

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微生物学通报 2024年第8期51卷 3119-3132页

作者：万颖王明根朱振宇白天天杨成郭雪峰塔里木大学动物科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木大学生命科学与技术学院新疆阿拉尔843300 塔里木大学新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技兵团重点实验室新疆阿拉尔843300

【背景】随着滥用抗生素导致耐药问题日益严重,逐渐破坏动物健康与生态环境。为应对这一全球性公共威胁,多国禁止把抗生素作为食品和饲料添加剂,益生菌的替代使用应运而生。【目的】对产细菌素屎肠球菌(Enterococcus faecium)F11.1G的... 详细信息

【背景】随着滥用抗生素导致耐药问题日益严重,逐渐破坏动物健康与生态环境。为应对这一全球性公共威胁,多国禁止把抗生素作为食品和饲料添加剂,益生菌的替代使用应运而生。【目的】对产细菌素屎肠球菌(Enterococcus faecium)F11.1G的生物学特性作全面分析,以保证该菌株在生产中的合理及安全应用。【方法】通过热稳定性试验、耐酸试验和耐胆盐试验测定其耐热、耐酸和耐胆盐性能;通过药敏试验探究其耐受药物能力;通过表面疏水性试验、自凝聚性试验间接探究其对细胞的黏附能力;通过蛋白酶耐受试验研究其在蛋白酶作用下活性作用的强弱。【结果】屎肠球菌F11.1G发酵上清液具有较强的热稳定性,在110℃条件下仍然能够发挥抑菌作用,而最佳生长温度为37℃。当pH 5.9时,菌株生长情况较好且存活率最高,随着pH的降低,其生长受到抑制,当pH值降低为1.8时,菌株仍可生长,但存活率仅有9%。胆盐浓度在0.10%时存活率达140.0%,胆盐浓度在0.15%时,存活率达126.6%,而胆盐浓度在0.20%时,存活率为96.6%;菌株对头孢吡肟、丁胺卡那、庆大霉素、诺氟沙星、红霉素、罗红霉素、多黏菌素B、林可霉素、链霉素、新霉素、甲硝唑、克林霉素、制霉菌素、甲氧苄啶、阿奇霉素和卡那霉素耐受;对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星中度敏感;对青霉素、头孢唑啉、头孢呋辛、氯霉素、四环素、多西环素、替考拉宁、克拉霉素和呋喃妥因高度敏感。菌株F11.1G对正己烷、二甲苯、乙酸乙酯和二氯甲烷的疏水率分别为84.29%、25.75%、31.26%和15.08%。菌株F11.1G在3、6、9、12、15和18 h的自凝聚率分别为51%、54%、76%、80%、83%和84%。在蛋白酶K作用下,对大肠杆菌(Escherichia coli)和沙门氏菌(Salmonella)的抑菌效果明显减弱,抑菌圈直径分别为13.05 mm和11.28 mm,抑菌率下降幅度分别为52%和58%,而在胰蛋白酶、胃蛋白酶的作用下未产生抑菌圈,抑菌效果几乎完全丧失。【结论】屎肠球菌F11.1G具有良好的耐高温、耐酸、耐胆盐能力,对丁胺卡那、庆大霉素、诺氟沙星、红霉素和罗红霉素等16种药物耐受,对正己烷有较高的疏水率且自凝聚性良好,经胰蛋白酶、胃蛋白酶处理后抑菌活性丧失,证明该抑菌物质为蛋白类或肽类,为微生态制剂的安全应用提供基础数据。

关键词：细菌素屎肠球菌F11.1G 生物学特性替抗