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6个wnt基因家族基因在细粒棘球绦虫原头节和成虫的差异表达分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2016年第6期34卷 552-557页

作者：王正荣张艳艳薄新文徐雪平徐春生新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000 石河子大学石河子832000

目的探讨无翅型小鼠乳房肿瘤病毒整合位点家族[wingless-type mouse mammary tumor virus(MMTV)integration site family,wnt]成员wnt1、wnt2、wnt4、wnt5、wnt11A和wnt11B基因在细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)原头节和成虫的m RNA差异转录及组织分布。方法用SYBR GreenⅠq RT-PCR方法检测wnt1、wnt2、wnt4、wnt5、wnt11A和wnt11B基因在细粒棘球绦虫原头节和成虫的m RNA相对转录情况。用RNA荧光探针以全量组织荧光原位杂交方法检测6个基因在原头节的组织分布情况。结果 q RT-PCR检测结果显示,wnt1和wnt2基因m RNA在原头节和成虫的相对转录水平分别为1.00、1.49和1.00、2.53,在成虫的相对转录水平分别为原头节的1.49倍(P>0.05)、2.53倍(P0.05),原头节和成虫间wnt4、wnt5、wnt11A表达量的差异有统计学意义,而wnt11B的差异则无统计学意义。全量组织荧光原位杂交结果显示,在原头节中,wnt1主要分布于表皮组织,wnt2主要分布于吸盘部位,wnt4主要分布于吸盘和顶突部位,wnt5、wnt11B主要分布于吸盘和表皮,wnt11A主要分布于顶突和小刺。结论 wnt2基因在细粒棘球绦虫成虫的m RNA相对转录水平高于原头节,wnt4、wnt5、wnt11A在原头节的m RNA相对转录水平高于成虫,6个wnt基因均分布于细粒棘球绦虫原头节的前端区域。

关键词：细粒棘球绦虫 wnt基因家族原头节成虫差异表达

2株兼具除臭功能的纤维素降解细菌的分离鉴定

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家畜生态学报 2018年第9期39卷 46-51页

作者：杨井泉张云峰高磊沈敏新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆石河子832000

研究旨在筛选高效纤维素降解菌,用于提高养殖废弃物堆肥效果和利用价值。利用羧甲基纤维素钠选择性培养基结合革兰氏碘液水解圈测定法,初步分离纤维素降解菌;经纤维素酶(滤纸酶FPA、内切葡聚糖苷酶Cen、外切葡聚糖苷酶Cex、葡萄糖苷酶BG... 详细信息

研究旨在筛选高效纤维素降解菌,用于提高养殖废弃物堆肥效果和利用价值。利用羧甲基纤维素钠选择性培养基结合革兰氏碘液水解圈测定法,初步分离纤维素降解菌;经纤维素酶(滤纸酶FPA、内切葡聚糖苷酶Cen、外切葡聚糖苷酶Cex、葡萄糖苷酶BG)活性测定,筛选到2株(X-1、X-6)具有高效纤维素降解能力的细菌,其中X-1的纤维素酶活力较高,震荡培养4d后其FPA、Cen、Cex和BG的酶活分别为77.97、105.58、135.64和109.87IU/mL。结果表明,X-1、X-6对H_2S和NH_3的清除能力分别达到40%以上。经菌落形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析,鉴定菌株X-1为类芽孢杆菌属中的灿烂类芽孢杆菌(Paenibacillus lautus),菌株X-6为芽孢杆菌属中的烟酸芽胞杆菌(Bacillus niacini)。

关键词：细菌纤维素降解除臭分离鉴定

牛病毒性腹泻病毒的分子生物学特性及发病机制研究进展

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中国畜牧兽医 2023年第11期50卷 4632-4645页

作者：韩猛立张倩赵文娟张星星吴桐忠黄新钟发钢新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)是影响全世界养牛业的重要病原体之一,给畜牧业造成了巨大经济损失。BVDV由2种生物型和多种不同基因亚型毒株组成,这些毒株具有不同的抗原性、细胞病理学和致病性发病机制。尽管世... 详细信息

牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)是影响全世界养牛业的重要病原体之一,给畜牧业造成了巨大经济损失。BVDV由2种生物型和多种不同基因亚型毒株组成,这些毒株具有不同的抗原性、细胞病理学和致病性发病机制。尽管世界各国为控制和预防BVDV的发生与流行做出诸多努力,但仍有BVDV感染动物的报道。笔者主要围绕BVDV的分子生物学、发病机制以及宿主对病毒感染的免疫反应尤其是免疫逃避策略、免疫防控等方面进行论述,阐述了BVDV通过劫持宿主免疫系统以确保病毒复制成功的一些免疫逃避策略,以期为遏制BVDV的出现和传播,从而实现净化、控制该病毒提供参考。

关键词：牛病毒性腹泻病毒分子生物学发病机制

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克百威人工抗原合成及其免疫应用

西北农业学报 2018年第1期27卷 131-137页

作者：孙凤霞康立超庞芳琴刑丽杰罗瑞峰罗小玲彭夏雨省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院分析测试中心新疆石河子832000

研究克百威半抗原4-[[(2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)的新合成方法,以避免传统三光气合成法的危害。以呋喃酚为起始物,通过酯化反应和还原反应最终合成半抗原BFNB,利用质谱和核磁进行表征,结果证明半抗原BFN... 详细信息

研究克百威半抗原4-[[(2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)的新合成方法,以避免传统三光气合成法的危害。以呋喃酚为起始物,通过酯化反应和还原反应最终合成半抗原BFNB,利用质谱和核磁进行表征,结果证明半抗原BFNB合成成功。利用活性酯法将BFNB分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联得到免疫原和包被原,紫外扫描计算偶联比分别为17∶1和8∶1;将免疫原免疫小鼠制备多克隆抗体,间接竞争酶免疫检测方法(icELISA)表明其半数抑制质量浓度(IC_(50))为0.096μg/mL,定量检测线性(IC_(20)~IC_(80))为0.023~0.403μg/mL。该研究所制备的抗原为进一步研制抗克百威单克隆抗体奠定基础。

关键词：克百威半抗原BFNB 人工抗原抗体

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粪甲虫对绢蒿荒漠春秋两季牛粪分解的影响

应用生态学报 2021年第5期32卷 1854-1862页

作者：郭亚亚曹佳敏车昭碧杨寒珺黄星宇鲁为华石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院新疆石河子832003

为明确绢蒿荒漠草地牛粪的分解规律,分别在5月(春季)和9月(秋季)设置不同堆置时间点(0、7、29、48、58 h),明确粪便理化性质变化规律,同时设置不同开口的网笼(无网笼、上下开口、上开口、全封口),探讨各生态功能类群粪甲虫对粪便分解的... 详细信息

为明确绢蒿荒漠草地牛粪的分解规律,分别在5月(春季)和9月(秋季)设置不同堆置时间点(0、7、29、48、58 h),明确粪便理化性质变化规律,同时设置不同开口的网笼(无网笼、上下开口、上开口、全封口),探讨各生态功能类群粪甲虫对粪便分解的影响。结果表明:春季的粪甲虫种类数显著高于秋季,秋季的粪甲虫数量显著高于春季。春季粪便的水分、全碳、全氮、全磷下降主要集中在0~29 h,堆置29 h时粪便的水分、全碳、全氮、全磷分别降低39.4%、13.9%、32.1%、26.7%。堆置58 h时粪便的中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维分别显著降低8.0%和16.0%。秋季粪便的水分、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维在0~7 h内下降速度最快,堆置7 h时分别降低85.6%、10.2%和20.2%。7~58 h内中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维上升,58 h时粪便的中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维分别升高20.0%和13.7%。全碳、全氮和全磷的分解主要集中在0~29 h内,堆置29 h时分别降低17.5%、55.0%和64.8%。不同开口的网笼有效阻止了相应生态功能类群粪甲虫的进驻,随着粪甲虫生态功能类群的增加,粪便分解速度加快,无网笼状态下的粪便分解速度显著高于其它处理。粪甲虫种类、数量以及粪便堆置时间均显著影响牛粪的分解过程。

关键词：粪甲虫绢蒿荒漠牛粪堆置时间生态功能类群分解规律

荒漠植物囊果草生物学特性及其种群分布格局的生态适应意义

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草业学报 2019年第7期28卷 198-207页

作者：孙海荣车昭碧陈乙实鲁为华王树林李娜娜辛怀璐石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆农垦科学院新疆石河子832003

为明确荒漠植物囊果草生物学特性及其种群分布格局的生态适应意义,以北疆地区温性荒漠中的特有植物囊果草为研究对象,对其生物学特性、种子传播方式及野外种群的分布格局进行了观测。结果表明,囊果草具膀胱状膜质果囊和膨大的不规则块... 详细信息

为明确荒漠植物囊果草生物学特性及其种群分布格局的生态适应意义,以北疆地区温性荒漠中的特有植物囊果草为研究对象,对其生物学特性、种子传播方式及野外种群的分布格局进行了观测。结果表明,囊果草具膀胱状膜质果囊和膨大的不规则块状根茎,每株平均具果囊8.29个,果囊底部和侧面具网状脉络,且底部脉络较粗,不易破裂,顶部无脉络但具蓝紫斑,成熟时易破裂,每个果囊内平均包含球形种子2.82个。囊果草的花具有暂时闭合特性。囊果草为风滚式传播植物,一方面,地上果囊随风滚动时释放内部种子完成远距离传播,随着果囊体积的增大,果囊在不同粗糙程度微地形条件下的移动距离呈线性递增趋势,随地面粗糙度的增加,果囊最短移动距离显著减小(P<0.05),散布的种子数量则显著增加(P<0.05),且果囊移动距离与散布种子数量之间显著负相关(r=0.30,P<0.05);另一方面,地下块状根茎以营养生殖的方式在原位萌发。囊果草种群的分布格局与其生殖方式密切相关。在小尺度范围内(0~50m),随着空间尺度的扩大,囊果草种群幼苗和成株的分布格局表现为从均匀分布到聚集分布再到随机分布的特点;在中等尺度范围内(3.0~17.5m),幼苗和成株的空间关联性表现为正关联,随着空间尺度的递增,二者之间的关联性逐渐减小且关联性不显著。

关键词：囊果草生物学特性种子传播点格局分析生态适应

CRISPR/Cas9介导绵羊成纤维细胞MSTN基因突变系统的构建

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农业生物技术学报 2018年第8期26卷 1440-1448页

作者：魏海霞罗健郭延华张译元王立民唐红周平石河子大学动物科技学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室/新疆农垦科学院

肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是肌肉生长负调控因子,MSTN基因突变可造成MSTN生物学功能缺陷,从而引起动物的双肌性状。本研究旨在筛选靶向绵羊(Ovis aries)MSTN基因的高效单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA),并构建可标记表达载体,... 详细信息

肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是肌肉生长负调控因子,MSTN基因突变可造成MSTN生物学功能缺陷,从而引起动物的双肌性状。本研究旨在筛选靶向绵羊(Ovis aries)MSTN基因的高效单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA),并构建可标记表达载体,以提高CRISPR/Cas9(clustered regulatory interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)介导的绵羊MSTN基因突变效率。利用Gibson Assembly法将增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)序列与串联表达原件2A序列插入pX330质粒载体中,构建pX330-EGFP质粒载体,并将设计好的12个sgRNA寡核苷酸链以Golden Gate法分别连入pX330-EGFP质粒载体,以构建12个不同的pX330-EGFP-sgRNA质粒表达载体;将构建好的pX330-EGFP-sgRNA表达载体以电转染的方法分别转入12组绵羊成纤维细胞,48 h后提取各组部分细胞基因组,利用SURVEROR分析初选获得3个具有靶向效果的细胞群(T2,T9,Q2),其对应转染质粒为pX330-EGFP-sgRNA;之后分别提取3组细胞中的阳性转染细胞基因组,扩增MSTN基因并进行测序分析,得出sgRNA-T2、sgRNA-T9、sgRNA-Q2的打靶效率分别为40%、40%、60%。本研究通过构建表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的pX330-EGFP-sgRNA表达载体,成功筛选到高效靶向绵羊MSTN基因的sgRNA,并获得准确的编辑效率,为后续其他基因sgRNA的筛选提供了借鉴,并为MSTN基因编辑羊的生产提供科学依据。

关键词：绵羊肌肉生长抑制素基因(MSTN) CRISPR/Cas9 基因突变

转IGF-1基因超细毛羊与非转基因羊肠道粪便菌群多样性及组成差异分析

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畜牧兽医学报 2020年第10期51卷 2387-2402页

作者：王新华张星星王立民黄新韩猛立张译元郭延华唐红何延华钟发刚周平新疆农垦科学院畜牧兽医研究所省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832000

旨在探究超细毛羊转入IGF-1基因后是否会引起超细毛羊肠道微生物菌群群落改变而导致转基因羊生物安全存在隐患的问题。本研究在同一羊场随机选取临床健康羊3组,其中转IGF-1基因阳性组(GP组)41只(24母(GDF),17公(GPM)),转基因阴性羊(GN组... 详细信息

旨在探究超细毛羊转入IGF-1基因后是否会引起超细毛羊肠道微生物菌群群落改变而导致转基因羊生物安全存在隐患的问题。本研究在同一羊场随机选取临床健康羊3组,其中转IGF-1基因阳性组(GP组)41只(24母(GDF),17公(GPM)),转基因阴性羊(GN组)43只(25母(GNF),18公(GNM)),非转基因超细毛羊(NG组)29只(18母(NGF),11公(NGM))。取直肠粪样,应用IIlumina HiSeq高通量测序技术测定粪便样本中细菌的16S rRNA V3-V4区序列,分析转基因超细毛羊与非转基因羊间肠道粪样细菌群落组成。结果表明,共计得到17个门,32个纲,56个目,94个科,228个属及185个种;LEfSe分析显示,GPF组有10个生物标记物;GPM组有5个,均是反刍动物肠道菌群的常见定植菌;NGF组的生物标记物为拟杆菌BS11科;NGM组为厚壁菌门。均为反刍动物肠道菌群的主要优势菌。3组肠道菌群的共享菌分析显示,在门纲目科属种6个分类水平拥有共享菌比例高达91%~94%。本研究证实,转入IGF-1基因并未改变超细毛羊肠道菌群的整体结构分布,转基因羊具有生物安全及环境安全性。

关键词： IGF-1基因超细毛羊肠道菌群结构细菌多样性高通量测序转基因生物安全

NAC通过调控活性氧影响脂肪间充质干细胞增殖和分化

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中国农业科学 2023年第21期56卷 4330-4343页

作者：刘裴裴丁世杰宋文娟唐长波李惠侠唐红南京农业大学动物科技学院新疆农垦科学院畜牧兽医研究所/省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室

【目的】细胞在体外培养过程中易受氧化应激，细胞内活性氧水平升高，影响细胞功能。通过探究N-乙酰-L半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)对猪脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)活性氧的调控作用，进一... 详细信息

【目的】细胞在体外培养过程中易受氧化应激，细胞内活性氧水平升高，影响细胞功能。通过探究N-乙酰-L半胱氨酸(N-Acetyl-L-cysteine,NAC)对猪脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)活性氧的调控作用，进一步明确对其增殖和分化的影响，为培养脂肪种子细胞体外大量扩增和提高分化效率提供理论基础和参考依据。【方法】为建立ADSCs体外培养氧化应激模型，在ADSCs增殖过程中加入不同浓度的H2O2(0、25、50、100μmol·L-1)，通过细胞计数结果、细胞形态、细胞活力、高通量高内涵活细胞共聚焦成像系统检测细胞内活性氧水平，确定H2O2的添加浓度。为了筛选NAC促进ADSCs增殖的最佳添加浓度，在ADSCs增殖过程中加入不同浓度的NAC (0、1、2、3 mmol·L-1)，通过细胞计数结果和细胞形态，确定NAC的适宜添加浓度。通过EdU染色和细胞计数分析不同处理条件下(Control、1mmol·L-1NAC、50μmol·L-1H2O2、1 mmol·L-1NAC+50μmol·L-1H2O2)的细胞增殖情况，为进一步探究NAC对氧化应激的ADSCs增殖的影响。为探究不同处理条件下ADSCs内活性氧的水平，对不同处理条件下增殖3 d后的ADSCs进行CellRox染色，通过高通量高内涵活细胞共聚焦成像系统检测细胞内活性氧水平，明确ADSCs增殖与细胞内活性氧水平的关系。为探究ADSCs内活性氧水平对其分化的影响，ADSCs在不同处理条件下分化10 d，对其进行油红O染色，Image J分析染色面积评估ADSCs的分化脂质积累量并通过RT-qPCR检测ADSCs分化相关基因的相对表达量。【结果】ADSCs在增殖过程中，与对照组相比较，添加50μmol·L-1H2O2组的ADSCs呈梭形，细胞内活性氧含量显著升高(P0.05)。【结论】氧化应激的产生提高ADSCs中活性氧水平，不利于ADSCs体外大量扩增，诱导细胞分化，加速细胞衰老。在ADSCs体外扩增体系中添加1 mmol·L-1NAC可以降低因长期培养、外源刺激等因素带来的氧化应激损伤，对氧化应激的ADSCs具有保护作用，能有效促进细胞的增殖，并且不会影响细胞的分化能力。

关键词： NAC ADSCs 活性氧增殖分化培养脂肪