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陆地棉棉籽相关性状的QTN挖掘及候选基因筛选

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中国农业科学 2024年第15期57卷 2901-2925页

作者：白冰楠乔丹葛群栾玉娟刘小芳卢全伟牛皓龚举武巩万奎 ELAMEERELSAMMAN 闫浩亮李俊文刘爱英石玉真王海泽袁有禄黑龙江八一农垦大学农学院中国农业科学院棉花研究所/棉花生物育种与综合利用国家重点实验室安阳工学院喀什大学现代农学院

【目的】挖掘控制棉籽大小性状相关的遗传位点和相关基因，为研究棉籽大小性状形成的分子机理奠定基础。【方法】以陆地棉构建的含有300个家系的重组自交系（recombinant inbred line,RIL）群体为研究对象，对4个环境的棉籽籽指、面积... 详细信息

【目的】挖掘控制棉籽大小性状相关的遗传位点和相关基因，为研究棉籽大小性状形成的分子机理奠定基础。【方法】以陆地棉构建的含有300个家系的重组自交系（recombinant inbred line,RIL）群体为研究对象，对4个环境的棉籽籽指、面积、周长、长度、宽度、长宽比、圆度7个性状进行表型鉴定，利用液相芯片对RIL群体进行基因分型，得到的高质量单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism,SNP）位点和表型数据进行全基因组关联分析（genome-wide association study,GWAS），挖掘控制棉籽大小相关性状的数量性状遗传位点（quantitative trait nucleotides,QTN），对数量性状遗传位点进行遗传效应分析，筛选候选基因。【结果】7个棉籽大小相关性状在4个环境中均表现为连续正态分布，且具有明显的表型变异，变异系数的范围为1.82%—10.70%，性状的影响基本表现为基因型>环境>基因型×环境，适用于GWAS分析。相关分析表明，籽指与面积、周长、长度、宽度显著相关，长宽比与圆度显著相关，表明可能存在一因多效位点。利用3VmrMLM模型进行全基因组关联分析，共定位到47个与棉籽大小性状相关的数量遗传位点。A07染色体上共定位到11个数量遗传位点，其中，A07:71993462、A07:72067994和A07:72198802的位点物理位置接近，在4个环境中稳定存在，与棉籽籽指、面积、周长、长度和宽度关。这3个数量遗传位点位于A07染色体71.99—72.87 Mb区间，标记间R2的平均值>0.8（P<0.001），呈现较大的连锁不平衡。遗传效应分析发现，该区段存在2种单倍型，在棉籽大小的相关性状中，单倍型Ⅱ与单倍型Ⅰ差异性显著，表明该位点直接影响棉籽大小性状，可用于分子标记辅助选择。利用TM-1转录组数据对区间内的基因进行表达模式分析，发现Gh＿A07G1767在棉籽发育阶段优势表达，Gh＿A07G1766在棉籽发育阶段特异性表达，推测其在棉籽生长发育过程中发挥重要的作用。【结论】鉴定了47个QTN，筛选了2个与棉籽发育相关的候选基因。

关键词：棉花棉籽全基因组关联分析数量性状遗传位点候选基因

乳房炎奶牛血浆源外泌体对LPS诱导的MAC-T细胞炎症的影响

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中国畜牧兽医 2024年 5097-5107页

作者：李杨王昭元何兴丽刘鹏王梓李晓琳宋杨阳沈冰蕾黑龙江八一农垦大学动物科技学院

【目的】外泌体是细胞通讯和组织微环境建立的关键因素,其对炎症过程具有一定的调节作用。本研究旨在探究奶牛血浆源外泌体对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T细胞)炎症的调控作用。【方法】采集健康及患有乳房炎的奶牛静脉血,... 详细信息

【目的】外泌体是细胞通讯和组织微环境建立的关键因素,其对炎症过程具有一定的调节作用。本研究旨在探究奶牛血浆源外泌体对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T细胞)炎症的调控作用。【方法】采集健康及患有乳房炎的奶牛静脉血,离心后获得血浆,并对血浆进行超速离心,分离得到血浆源外泌体。通过实时荧光定量PCR检测孵育奶牛血浆源外泌体后MAC-T细胞中促炎因子的表达。Western blotting验证孵育奶牛血浆源外泌体后NF-κB通路相关蛋白Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。通过CCK8和Hoechst染色验证奶牛血浆源外泌体对MAC-T细胞的增殖及凋亡效果的影响。【结果】实时荧光定量PCR结果显示,与LPS组相比,奶牛乳房炎血浆源外泌体可显著下调促炎因子白细胞介素-6(IL-6)、IL-23、IL-1α、NFRK、MyD88、TNF-α、IL-1β基因mRNA的表达(P0.05)。CCK8与Hoechst染色结果显示,与LPS组相比,奶牛乳房炎血浆源外泌体可促进细胞增殖,缓解细胞凋亡;健康奶牛血浆源外泌体可恢复一定的细胞活力。【结论】奶牛乳房炎血浆源外泌体可通过NF-κB通路缓解LPS诱导的MAC-T细胞炎症。本研究结果将为血浆源外泌体在奶牛乳房炎中发挥的抗炎作用提供理论依据,同时为血浆外泌体的临床应用奠定基础。

关键词：血浆源外泌体 NF-κB通路抗炎奶牛乳房炎

番茄红素对顺铂所致大鼠脏器损伤的保护效果评价

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中国畜牧兽医 2024年第8期51卷 3247-3255页

作者：孙悦田雪杨春雪徐恩爽郑家三黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163000

[目的]评价不同浓度番茄红素(lycopene,LCP)对顺铂(CDDP)诱导大鼠脏器损伤的保护效果。[方法]将30只雄性Wistar大鼠随机分为5组(n=6),分别为对照组(CON)、CDDP组及不同浓度LCP处理组(5 mg/kg,LLCP组;10 mg/kg,MLCP组;50 mg/kg,HLCP组)。CON和CDDP组大鼠每天灌胃1 mL/kg玉米油,LLCP、MLCP和HLCP组大鼠每天灌胃相应浓度的LCP,连续灌胃28 d。除CON组外,其余各组在第26天单次腹腔注射CDDP(7 mg/kg)。试验结束后采集大鼠胃、小肠(十二指肠、空肠和回肠)、肝脏、肾脏组织及血液样本。通过生理和生化指标检测、HE染色、ELISA和Western blotting方法评价不同浓度LCP在CDDP所致大鼠急性损伤中的保护作用。[结果]与CON组相比,CDDP组大鼠体重、采食量和饮水量均极显著或显著下降(P<0.01;P<0.05),血清中谷草转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)等6项生化指标水平、丙二醛(MDA)、白细胞介素-8(IL-8)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著下降(P<0.01),大鼠胃、小肠、肝脏和肾脏组织病理学损伤严重。与CDDP组相比,MLCP组大鼠体重、采食量和饮水量均显著升高(P<0.05),血清中AST、ALT等6项生化指标水平以及MDA、IL-8、TNF-α和IL-6含量均显著降低(P<0.05),脏器组织病理学损伤减轻。Western blotting结果显示,与CON组相比,CDDP组大鼠不同组织中TNF-α和IL-6蛋白表达量均极显著升高(P<0.01),IL-10蛋白表达量极显著下降(P<0.01)。与CDDP组相比,MLCP组大鼠各组织中TNF-α和IL-6蛋白表达量均极显著或显著降低(P<0.01;P<0.05),IL-10蛋白表达量均显著或极显著升高(P<0.01;P<0.05)。[结论]LCP能通过抑制氧化应激和炎症反应改善CDDP诱导的大鼠胃、小肠、肝脏和肾脏损伤,本试验条件下10 mg/kg LCP作用效果最佳。

关键词：番茄红素顺铂大鼠脏器损伤炎症

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过表达miRNA-424-5p靶向AKT3对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的影响

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中国畜牧兽医 2024年第8期51卷 3635-3642页

作者：姚伟佳罗春海刘佳金王薇李丹阳刘炳琦付世新黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

[目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理... 详细信息

[目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理论依据。[方法]试验分为3组:空白对照组(Control)、阴性对照组(miRNA-424-5p mimics NC)和过表达组(miRNA-424-5p mimics)。采用茎环法实时荧光定量PCR检测转染miRNA-424-5p mimics后奶牛子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p的表达变化;采用Western blotting及实时荧光定量PCR检测过表达后AKT3和凋亡相关因子的表达变化,采用Annexin V-FITC/PI法检测奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡情况。[结果]与空白对照及阴性对照组相比,转染miRNA-424-5p mimics后子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)和Caspase9的mRNA表达量极显著升高(P<0.01),AKT3和Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);Bax和Caspase3蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Caspase9蛋白表达量显著升高(P<0.05),AKT3和Bcl-2蛋白表达量极显著降低(P<0.01);细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。[结论]过表达miRNA-424-5p可通过靶向调控AKT3使奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子Bax、Caspase3和Caspase9的表达量增加,使Bcl-2的表达量降低,进而促进细胞凋亡。

关键词：奶牛 miRNA-424-5p AKT3 子宫内膜上皮细胞凋亡

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东北地区秋季饲喂赖氨酸锌对湖羊种公羊血浆生化指标与精子质量的影响

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 558-567页

作者：王赫川李天峰张涵宋宇伦冯赫泽魏姚程烨李用昕董莹莹尹国安郭庆崔卫国李井春黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

[目的]试验旨在研究东北地区秋季饲喂赖氨酸锌对湖羊血浆生化指标与精子质量的影响。[方法]选择体况良好的1~2岁湖羊种公羊32只随机平均分为4组,分别补饲0、25、50、100 mg/d赖氨酸锌。试验于2022年8月至2022年10月在黑龙江伊春开展,平... 详细信息

[目的]试验旨在研究东北地区秋季饲喂赖氨酸锌对湖羊血浆生化指标与精子质量的影响。[方法]选择体况良好的1~2岁湖羊种公羊32只随机平均分为4组,分别补饲0、25、50、100 mg/d赖氨酸锌。试验于2022年8月至2022年10月在黑龙江伊春开展,平均气温10.3℃。试验预试期7 d,正试期56 d。分别于试验第28、42及56天采集湖羊颈静脉血,测定血浆睾酮、褪黑素、白细胞介素-2、白细胞介素-4、白细胞介素-6、白细胞介素-10、促肾上腺皮质激素和肿瘤坏死因子-α水平,以及血浆总抗氧化能力、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛水平。采集湖羊精液测定精子活率、质膜完整率及畸形率。[结果]第28天时50 mg/d组湖羊褪黑素水平显著高于0及100 mg/d组(P<0.05),总抗氧化能力显著高于0 mg/d组(P<0.05),白细胞介素-4水平显著低于25 mg/d组(P<0.05),白细胞介素-10水平显著低于0 mg/d组(P<0.05)。第42天时50 mg/d组湖羊超氧化物歧化酶活性显著高于0 mg/d组(P<0.05),白细胞介素-4水平显著低于其他各组(P<0.05),促肾上腺皮质激素水平显著低于0及100 mg/d组(P<0.05)。第56天时50 mg/d组湖羊精子质膜完整率显著高于0 mg/d组(P<0.05),超氧化物歧化酶活性显著高于0 mg/d组(P<0.05),白细胞介素-4水平显著低于0及100 mg/d组(P<0.05)。[结论]补饲赖氨酸锌能够改善东北地区秋季湖羊种公羊血浆生殖激素水平、抗氧化能力、免疫指标水平与精子质量,建议补饲量为50 mg/d。

关键词：赖氨酸锌湖羊精子质量抗氧化免疫

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金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对奶牛中性粒细胞炎性因子分泌的影响

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中国畜牧兽医 2024年第8期51卷 3676-3686页

作者：何兴丽周佩瑶张小雪牟泉宙李杨王昭元刘鹏王梓宋杨阳李晓琳沈冰蕾黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

[目的]探究金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对奶牛外周血中性粒细胞(PMNs)活力以及炎性因子分泌的影响。[方法]以体外培养的奶牛外周血PMNs为研究对象,用姬姆萨和台盼蓝染色对分离培养的奶牛PMNs进行形态鉴定和细胞活率检测,确定奶牛外周... 详细信息

[目的]探究金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对奶牛外周血中性粒细胞(PMNs)活力以及炎性因子分泌的影响。[方法]以体外培养的奶牛外周血PMNs为研究对象,用姬姆萨和台盼蓝染色对分离培养的奶牛PMNs进行形态鉴定和细胞活率检测,确定奶牛外周血PMNs的最佳作用时间。构建金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌诱导的奶牛外周血PMNs感染模型,测定奶牛外周血PMNs对两种细菌的杀伤能力;利用CCK-8法测定奶牛PMNs活力,用ELISA法检测细胞中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-8和IL-10含量。[结果]体外分离培养的奶牛外周血PMNs纯度达99%,其存活率随培养时间延长逐渐降低,24 h内存活率达85%以上。金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌对数生长期分别为4~7和4~8 h,二者感染奶牛PMNs后,当MOI为10时,2、4、6 h时金黄色葡萄球菌存活率极显著高于表皮葡萄球菌(P<0.01)。与对照组相比,金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌感染PMNs不同时间点细胞中TNF-α、IL-8含量均极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05);感染3、6、12、24 h时细胞中IL-10含量极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05);感染6、9、12、24 h时细胞中IL-1β含量极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05)。与金黄色葡萄球菌组相比,感染3 h时表皮葡萄球菌组细胞中TNF-α含量极显著降低(P<0.01),IL-10、IL-8含量极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05);感染6 h时表皮葡萄球菌组细胞中TNF-α、IL-1β含量极显著降低(P<0.01);感染9 h时细胞中TNF-α、IL-8含量极显著或显著升高(P<0.01;P<0.05)。[结论]金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均能逃避奶牛外周血PMNs的吞噬和杀伤作用,二者感染后细胞活力显著降低,能通过调控PMNs中炎性因子的分泌介导先天免疫应答反应,试验结果为靶向PMNs筛选金黄色葡萄球菌性的奶牛乳房炎抗性相关的候选因子研究奠定基础。

关键词：外周血中性粒细胞金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌炎性因子奶牛

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普氏野马群发日射病

中国兽医杂志 1990年第9期 37-38页

作者：许义轩新疆八一农学院兽医院

普氏野马(Equus przewalskii pol-iarov) (4公7母),于1986年12月由乌鲁木齐市南公园移居祖籍地准噶尔盆地——昌吉回族自治州吉木萨尔县野马繁殖中心基地

关键词：日射病普氏野马厩舍群发

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌免疫逃避机制研究进展

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中国畜牧兽医 2024年第2期51卷 748-758页

作者：何兴丽王昭元周佩瑶牟泉宙沈冰蕾黑龙江八一农垦大学动物科技学院大庆163319

奶牛乳房炎是奶牛养殖业最常见的疾病之一,严重影响奶牛泌乳量和奶品质,增加奶牛淘汰率。饲养条件、环境因素及病原菌等都可诱发奶牛乳房炎,其中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)导致的奶牛乳房炎最难治愈。金黄色葡萄球菌是一种... 详细信息

奶牛乳房炎是奶牛养殖业最常见的疾病之一,严重影响奶牛泌乳量和奶品质,增加奶牛淘汰率。饲养条件、环境因素及病原菌等都可诱发奶牛乳房炎,其中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)导致的奶牛乳房炎最难治愈。金黄色葡萄球菌是一种具有高致病性、高耐药性且能通过自身分泌的酶、毒力因子介导免疫逃避作用的致病菌,其在宿主体内长期存活可导致长期慢性奶牛乳房炎的发生。笔者首先从奶牛乳腺免疫防御方面揭示奶牛乳腺在金黄色葡萄球菌入侵时所产生的一系列免疫防御手段;其次从金黄色葡萄球菌依靠自身表达的毒力因子、生物膜、表面蛋白及进化过程中产生小菌落变种、持留菌等不断增强其致病性和高耐药性方面进行阐述,揭示金黄色葡萄球菌高致病性和高耐药性的原因,以及金黄色葡萄球菌导致的奶牛乳房炎难以治愈的原因;最后进一步阐明金黄色葡萄球菌是如何在宿主强大的免疫防御作用下存活,以及通过荚膜多糖和纤维连接蛋白在乳腺定植并逃避吞噬,分泌中性粒细胞丝氨酸蛋白酶抑制蛋白、葡萄球菌蛋白A、产生细胞外囊泡等毒力因子逃避机体的免疫吞噬作用,揭示金黄色葡萄球菌具有高度环境适应力及众多免疫逃避手段。笔者从以上三方面对金黄色葡萄球菌逃避乳腺天然免疫的机制及相关研究进行综述,为维护奶牛健康、预防奶牛乳房炎疾病发生、抵御病原入侵机体等方面的机制研究提供依据。

关键词：奶牛乳房炎免疫防御金黄色葡萄球菌免疫逃避

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PRRSV经典毒株、高致病毒株、类NADC30毒株及类NADC34毒株鉴别RT-PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医科学 2024年第4期54卷 465-471页

作者：蹇艳银张佳怡张耕馨倪民婷卢淳师源王金涛黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同流行毒株的快速鉴别诊断能力,本研究对近几年国内外流行的PRRSV不同毒株的Nsp2核苷酸序列进行比对,设计了1对可用于鉴别4类不同PRRSV毒株的简并引物,建立了鉴别PRRSV经典毒株(C-PRRSV)、高致病... 详细信息

为提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)不同流行毒株的快速鉴别诊断能力,本研究对近几年国内外流行的PRRSV不同毒株的Nsp2核苷酸序列进行比对,设计了1对可用于鉴别4类不同PRRSV毒株的简并引物,建立了鉴别PRRSV经典毒株(C-PRRSV)、高致病毒株(HP-PRRSV)、类NADC30毒株(NADC30-like)及类NADC34毒株(NADC34-like)的RT-PCR检测方法。结果显示,C-PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like、NADC34-like毒株Nsp2基因的扩增片段大小分别为1072 bp、982 bp、679 bp、772 bp,检测限分别为4.70×10 copies/μL、3.34×10^(2)copies/μL、8.57×10 copies/μL、5.71×10^(2)copies/μL,对其他常见猪病病原均未扩增出特异性条带,3次重复试验均能够扩增出均匀一致的目的片段;83份临床组织样品共检出阳性27份,其中NADC30-like毒株7份、NADC34-like毒株20份,与GP5基因检测结果的符合率为97.6%。上述结果表明,本研究建立的PRRSV鉴别RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于C-PRRSV、HP-PRRSV、NADC30-like、NADC34-like毒株的快速鉴别和流行病学调查。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株高致病毒株类NADC30毒株类NADC34毒株鉴别