检索结果-南通市图书馆

H5N8亚型禽流感病毒HA蛋白的原核及真核表达及兔多克隆抗体的制备

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病原生物学杂志 2024年第7期19卷 745-750页

作者：刘静王聪颖梁志鹏梁昭平刘闰栀张新宇何杰珩陈高婕闫战飞池仕红袁生郭锦玥黄淑坚温峰佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528225 华南农业大学兽医学院

目的构建H5N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)HA基因的原核和真核表达载体,分别在E.coli Rosetta(DE3)和Sf9中进行表达,并制备兔多克隆抗体。方法采用RT-PCR扩增H5N8亚型AIV的HA基因,并将其克隆至原核表达载体pTac-His-MB... 详细信息

目的构建H5N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)HA基因的原核和真核表达载体,分别在E.coli Rosetta(DE3)和Sf9中进行表达,并制备兔多克隆抗体。方法采用RT-PCR扩增H5N8亚型AIV的HA基因,并将其克隆至原核表达载体pTac-His-MBP-PreScission中,再转化至Rosetta(DE3)中,利用IPTG诱导表达。通过SDS-PAGE及蛋白免疫印迹(Western blot, WB)鉴定HA蛋白的表达,并优化IPTG浓度、诱导时间和温度以提高表达效率。将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗H5N8亚型AIV的HA蛋白多克隆抗体,通过酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测其特异性和效价。同时,将HA基因克隆到真核表达载体pFastBacHTA中,将其瞬时转染Sf9细胞并扩增3代,最后通过WB和间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay, IFA)验证表达产物。结果成功构建了HA基因的原核重组质粒pTac-HA-DE3和真核重组质粒pFast-HA。经SDS-PAGE及WB验证该蛋白分子质量约110 ku,最佳表达条件为IPTG浓度为0.8 mmol/L、温度37℃和诱导时间为4 h。ELISA检测显示兔多克隆抗体效价为1∶102 400。成功将真核重组质粒pFast-HA转化入DH10Bac感受态细胞中,证明HA基因成功转座。Bacmid-HA转染Sf9细胞后观察到细胞病变,WB和IFA检测表明重组杆状病毒Bac-HA感染的Sf9细胞能够表达HA蛋白。结论本研究初步探究了H5N8亚型AIV HA蛋白的表达条件及免疫原性,并且具有良好的免疫原性和反应原性,为后续建立ELISA诊断试剂盒及H5N8 AIV疫苗的研制提供了一定的参考价值。

关键词：禽流感病毒 H5N8亚型 HA蛋白原核表达真核表达多克隆抗体

三源重组H9N2亚型禽流感病毒NA蛋白原核表达及多克隆抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病原生物学杂志 2024年第6期19卷 625-630页

作者：梁志鹏刘静刘闰栀张新宇何杰珩陈高婕闫战飞池仕红袁生郭锦玥梁昭平黄淑坚温峰佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528225 华南农业大学兽医学院

目的利用原核表达系统表达华南地区分离的三源重组H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的神经氨酸酶(NA)蛋白,并制备兔多克隆抗体。方法将1株H9N2亚型AIV的NA基因克隆到pET-32a载体,构建NA原核表达质粒,并转化至E.coli Roset... 详细信息

目的利用原核表达系统表达华南地区分离的三源重组H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的神经氨酸酶(NA)蛋白,并制备兔多克隆抗体。方法将1株H9N2亚型AIV的NA基因克隆到pET-32a载体,构建NA原核表达质粒,并转化至E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞进行蛋白表达。优化IPTG浓度、诱导时间和温度,提高蛋白表达量。利用镍柱纯化重组NA蛋白,并免疫新西兰兔,制备兔抗NA蛋白多克隆抗体通过Western blot和间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)验证多克隆抗体的特异性。通过间接酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定多克隆抗体的效价。结果成功构建了pET-32a-H9N2-NA原核表达质粒;经SDS-PAGE和Western blot验证,表达的重组NA蛋白大小约70 ku,符合预期;对诱导条件进行优化,确定37℃,终浓度为1.2 mmol/L的IPTG,诱导时长6 h为最佳条件;制备的兔抗NA蛋白多克隆抗体的Western blot和IFA的结果显示,该多克隆抗体能和H9N2亚型AIV结合,特异性好;间接ELISA测得兔抗NA蛋白多克隆抗体的效价达到了1∶409600。结论本研究表达的NA蛋白,制备的兔抗NA蛋白多克隆抗体具有特异性,效价高,为NA蛋白的ELISA检测方法的建立和疫苗研制提供帮助。

关键词：禽流感病毒 H9N2亚型神经氨酸酶原核表达多克隆抗体

碳水化合物对心血管疾病风险因素影响的Meta分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国全科医学 2024年

作者：李一光刘荷君赵锦鹏冯焱徐银兰新乡医学院人事处新乡医学院公共卫生学院山西农业大学生命科学学院

背景心血管疾病作为全球首要死亡原因，严重威胁人类的健康。饮食作为重要的干预手段备受关注，但碳水化合物对心血管疾病的影响尚未知。目的分析碳水化合物摄入对心血管疾病风险相关性影响的证据。方法计算机检索万方数据知识服务平... 详细信息

背景心血管疾病作为全球首要死亡原因，严重威胁人类的健康。饮食作为重要的干预手段备受关注，但碳水化合物对心血管疾病的影响尚未知。目的分析碳水化合物摄入对心血管疾病风险相关性影响的证据。方法计算机检索万方数据知识服务平台（Wanfang Data）、中国知网（CNKI）、维普信息资源系统（VIP）、中国生物医学文献数据库（SinoMed）、PubMed、Cochrane Library、EMBase数据库，获取发表时间为建库至2023年1月的关于碳水化合物与心血管疾病风险的随机对照研究。由两名研究者分别独立提取文献数据，并进行文献质量评价。使用RevMan 5.3软件进行数据分析。结果共纳入16项随机试验，碳水化合物能够降低三酰甘油水平，下降了0.17mmol/L(95%CI=-0.24～-0.10,P<0.000 01)。持续6个月以下碳水化合物饮食干预使三酰甘油水平下降了0.25 mmol/L(95%CI=-0.33～-0.17,P<0.000 01);12～23个月组三酰甘油降低0.15 mmol/L(95%CI=-0.29～-0.01,P=0.04)。血浆高密度脂蛋白水平升高0.09 mmol/L(95%CI=0.07～0.10,P<0.000 01)，血浆低密度脂蛋白水平升高0.10 mmol/L(95%CI=0.02～0.17,P=0.01)。结论低碳水化合物饮食对心血管危险因素的总体影响在6个月以下和6～11个月时更加有利，但2年后对心血管危险因素没有显著影响，其长期影响需要进一步研究证实。

关键词：心血管疾病碳水化合物膳食血脂异常 Meta分析

表达传染性支气管炎病毒S1重组腺病毒的构建及免疫原性分析

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国病原生物学杂志 2024年第7期19卷 751-755页

作者：何杰珩袁子岚程晴梁志鹏张新宇陈高婕池仕红袁生郭锦玥黄淑坚温峰佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528225

目的构建表达传染性支气管炎病毒S1蛋白的重组腺病毒,并进行初步免疫原性分析。方法本研究利用腺病毒表达载体系统,利用同义点突变技术,消除IBV-S1基因中的PacⅠ和PmeⅠ限制性酶切位点;将已突变的S1基因克隆至pShuttle-CMV-N-DsRed穿... 详细信息

目的构建表达传染性支气管炎病毒S1蛋白的重组腺病毒,并进行初步免疫原性分析。方法本研究利用腺病毒表达载体系统,利用同义点突变技术,消除IBV-S1基因中的PacⅠ和PmeⅠ限制性酶切位点;将已突变的S1基因克隆至pShuttle-CMV-N-DsRed穿梭质粒中;使用Pme I线性化处理携带目的基因的穿梭质粒,并与pAdEasy-1质粒同时转化进行同源重组;后将重组质粒转染HEK 293细胞,包装成重组Adv,构建S1-CMV-pAd(293)重组病毒;并进行免疫实验验证抗体。结果 PCR扩增出S1基因,大小约为1 700 bp。S1和pShuttle-CMV-N-DsRed穿梭质粒经酶切及测序结果表明,成功构建S1-CMV表达载体;在BJ5183感受态中进行同源重组,测序结果表明成功构建S1-CMV-Pad重组质粒。利用HEK-293细胞包装成重组腺病毒,能稳定产生红色荧光;经Western blot和IFA验证重组病毒成功表达S1 (RBD)蛋白;以106TCID50/mL滴度肌肉免疫雏鸡,7~21 d后均可检测到S1抗体,且抗体浓度仍呈增长趋势。结论本研究所构建的S1-CMV-pAd重组Adv为之后的免疫保护试验研究及IBV-Adv疫苗构建提供了基础实验支撑。

关键词：传染性支气管炎病毒 S1 腺病毒载体重组病毒

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

医学院校高等学历继续教育课程思政探索研究

中文科技期刊数据库（引文版）教育科学 2024年第3期 94-98页

作者：张婷李阳新乡医学院继续教育学院河南新乡453003 新乡医学院生命科学技术学院河南新乡453003

在新时代背景下,加强医学院校继续教育课程的思政建设对于培养德才兼备的医学人才具有至关重要的意义。本文深入分析了我国医学院校继续教育课程思政教育在完成立德树人根本任务等方面的重要作用。通过现状分析,发现医学院校继续教育课... 详细信息

在新时代背景下,加强医学院校继续教育课程的思政建设对于培养德才兼备的医学人才具有至关重要的意义。本文深入分析了我国医学院校继续教育课程思政教育在完成立德树人根本任务等方面的重要作用。通过现状分析,发现医学院校继续教育课程思政体系在重视程度、教师理论素质、课程设置和教学方法等方面存在一定的不足。针对这一现状,学校应采取相应措施,如完善课程体系、采用多元化教学方法、加强师资队伍建设并建立有效的评价机制,以确保思政教育成果的可持续性。本文为我国医学院校继续教育课程思政教育改革提供了一定的理论支持和实践借鉴。期望本文能推动医学院校继续教育课程思政教育的健康发展,为我国医疗卫生事业贡献力量。

关键词：医学院校继续教育课程思政实施策略

碱性亮氨酸拉链转录因子的翻译后修饰在植物响应非生物胁迫中的作用

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2024年第1期40卷 53-62页

作者：李影赵伟迪杨敬华李佳奇韩松洋任月坤郭长虹哈尔滨师范大学生命科学与技术学院黑龙江哈尔滨150000

非生物胁迫是植物生长发育过程中必须要应对的不利环境因素。在进化过程中,植物获得了多种响应或抵抗逆境的能力,其中转录因子在调控非生物胁迫耐受性方面起到了重要作用。碱性亮氨酸拉链转录因子(basic leucine zipper transcription f... 详细信息

非生物胁迫是植物生长发育过程中必须要应对的不利环境因素。在进化过程中,植物获得了多种响应或抵抗逆境的能力,其中转录因子在调控非生物胁迫耐受性方面起到了重要作用。碱性亮氨酸拉链转录因子(basic leucine zipper transcription factors,bZIP)是转录因子中较大的基因家族之一。不同的翻译后修饰(post-translational modifications,PTMs)可以控制bZIP转录因子的稳定性和活性,响应各种细胞内或细胞外胁迫。本文介绍了bZIP转录因子的结构特征与分类,重点综述了bZIP转录因子磷酸化、泛素化和小泛素相关修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)化等翻译后修饰在植物响应非生物胁迫中的作用,并对未来的研究方向进行了展望,为通过调控bZIP转录因子的翻译后修饰培育优良抗逆作物品种提供研究参考。

关键词：非生物胁迫碱性亮氨酸拉链转录因子(bZIP) 磷酸化泛素化小泛素相关修饰物(SUMO)

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

基于SEER数据库预测食管癌患者生存

中国老年学杂志 2024年第10期44卷 2351-2355页

作者：钱河赵宝生齐博史文龙刘振宇刘玉珍新乡医学院第一附属医院胸外科新乡医学院食管癌研究所新乡医学院第一附属医院生命科学研究中心

目的构建预测食管癌患者生存的Nomogram模型。方法下载1973～2015年美国国立癌症研究所的监测、流行病学和结果(SEER)数据库食管癌患者临床病理信息，按7∶3分为建模组与验证组，应用相关系数图评估多个变量间共线性情况，应用Lasso... 详细信息

目的构建预测食管癌患者生存的Nomogram模型。方法下载1973～2015年美国国立癌症研究所的监测、流行病学和结果(SEER)数据库食管癌患者临床病理信息，按7∶3分为建模组与验证组，应用相关系数图评估多个变量间共线性情况，应用Lasso回归筛选有预测价值的变量，应用曲线拟合明确预测生存时间区间，据此，构建Nomogram预测模型，应用受试者工作特征(ROC)曲线、校准曲线评估模型可靠性，应用决策曲线分析(DCA)评估模型的临床应用价值。结果相关系数图显示多个变量间存在共线性情况，Lasso回归确定有预测价值的变量为Grade分级、T分期、N分期、M分期、手术，其中手术因素影响权重最大；ROC曲线提示模型具有较好区分度，校准曲线显示预测模型与理想模型拟合良好，DCA显示出临床净获益。结论基于Grade分级、T分期、N分期、M分期、手术因素构建的Nomogram模型具有可靠的预测性能及临床实用价值，对临床上实施个体化预测生存时间及制定治疗、护理方案具有重要参考意义。

关键词：食管癌预测 Nomogram 美国国立癌症研究所的监测、流行病学和结果(SEER)

SBR串联小球藻生物反应器高效处理猪场废水

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

应用与环境生物学报 2024年

作者：余奕飞柳洋金泽枫梁运祥陈正军华中农业大学生命科学技术学院

猪场废水是养殖废水的重要组成部分。为建立一种高效处理猪场废水至达标排放的生物反应器，本实验比较三个污水处理厂的活性污泥对猪场废水的降解性能，通过响应面实验确定SBR工艺的最适处理条件，最后利用小球藻对SBR出水深度净化。结... 详细信息

猪场废水是养殖废水的重要组成部分。为建立一种高效处理猪场废水至达标排放的生物反应器，本实验比较三个污水处理厂的活性污泥对猪场废水的降解性能，通过响应面实验确定SBR工艺的最适处理条件，最后利用小球藻对SBR出水深度净化。结果显示，汉西污水处理厂的活性污泥对猪场废水的COD和氨氮(NH4+-N)降解效率最高。响应面实验显示，原废水的COD和NH4+-N浓度分别为1547和513 mg L-1，在混合液悬浮固体浓度(MLSS)为5 082 mg/L，曝气启停时间比6.5 h : 1.5 h，温度27.7 ℃的条件下，SBR8 h的TN降解率最高达70.22%。稳定运行的SBR装置出水COD和NH4+-N分别为31和3.5 mg/L。微生物群落多样性分析表明，假单胞菌属(Pseudomonas)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)和硝化螺旋菌属(Nitrospira)在SBR驯化过程中被富集，占比分别提高至13.98%、10.79%和6.26%。SBR出水在接种量为0.2的小球藻(Chorella FACHB-9)处理5 d后，藻蛋白得率为0.111 g/L，出水的COD、NH4+-N、TN和TP仅有36、0.5、1.5和0.23 mg L-1，且MPN法测定粪大肠菌群浓度为9143 MPN/L，出水各项指标达到GB 3838-2002《地表水环境质量标准》Ⅴ类水质标准。上述结果表明，优化的SBR串联小球藻生物反应器可以有效净化猪场废水达到直排水质，同时获得有价值的藻蛋白，该结果可对养殖废水的循环利用提供理论依据。(图5表3参42)

关键词： SBR 猪场废水小球藻硝酸盐粪大肠菌群微生物多样性

基于智能饲喂开展哺乳母猪采食量基因组遗传评估研究

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

畜牧兽医学报 2024年第7期 2890-2900页

作者：张瑞琪厐彦芹李再山尚秀国兰干球郭金彪赵云翔广西大学动物科学技术学院佛山科学技术学院生命科学与工程学院广西扬翔股份有限公司

旨在通过分析哺乳母猪采食量性状的遗传参数及全基因组关联分析(GWAS),评估基于智能饲喂技术对哺乳期采食性状的选育效果。本研究收集2022年7月至2023年5月份分娩的922头1～4胎次大白猪的哺乳期采食量数据，分析猪只的哺乳期采食情况。... 详细信息

旨在通过分析哺乳母猪采食量性状的遗传参数及全基因组关联分析(GWAS),评估基于智能饲喂技术对哺乳期采食性状的选育效果。本研究收集2022年7月至2023年5月份分娩的922头1～4胎次大白猪的哺乳期采食量数据，分析猪只的哺乳期采食情况。利用Hiblup软件对哺乳期采食性状进行遗传参数估计，后使用Plink、GEMMA和R软件进行全基因组关联分析，筛选与采食量性状相关的SNP位点及重要候选基因，并对显著关联的SNP位点上、下游420 kb范围内注释基因进行功能富集分析。结果显示，纯种大白猪哺乳期采食性状遗传力在0.20～0.27之间，并筛选到28个SNPs位点与哺乳期采食性状显著相关。通过对相关联的SNPs位点进行注释，共筛选到15个与哺乳期采食性状相关的候选基因，这些候选基因显著富集在葡萄糖、脂肪酸、激素和辅酶等的合成代谢多个生物学过程(P<0.05),分析认为HAMP、NDUFB8、UPK1A、CHSY1、U6、COX7A1可作为大白猪哺乳期采食性状的关键候选基因。以上研究结果为大白猪哺乳期采食性状提供重要的遗传变异位点与后续基因，为后期利用该遗传分子标记进一步改良采食量性状的选育奠定基础，也将为大白猪哺乳母猪高繁殖力和高泌乳性能品种选育提供理论支撑。

关键词：智能饲喂哺乳母猪采食量选育全基因组关联分析 SNP标记