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浸麻芽孢杆菌-葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2005年第5期31卷 628-632页

作者：李卫芬姚江涛胡春霞许梓荣浙江大学饲料科学研究所教育部动物分子营养学重点实验室浙江杭州310029

将含浸麻芽孢杆菌β-葡聚糖酶基因的重组克隆质粒进行亚克隆,用Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切后,与相同酶切的表达载体pET-30a相连接,构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21中表达.蛋白质电泳结果表明在25.0 kD处有表达带,酶活力达60.4 U/mL,为出发菌... 详细信息

将含浸麻芽孢杆菌β-葡聚糖酶基因的重组克隆质粒进行亚克隆,用Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切后,与相同酶切的表达载体pET-30a相连接,构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21中表达.蛋白质电泳结果表明在25.0 kD处有表达带,酶活力达60.4 U/mL,为出发菌的30多倍.酶特性研究表明:该酶的最适温度为50℃,最适pH为5.0～7.0;在50℃以下及在不同的pH下(pH 3.0～9.0)处理后较稳定.

关键词： β-葡聚糖酶浸麻芽孢杆菌大肠杆菌表达酶特性

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甜菜碱对蛋鸡血清卵黄前体物水平的影响

浙江大学学报（农业与生命科学版） 2006年第3期32卷 287-291页

作者：卢建军邹晓庭浙江大学饲料科学研究所教育部动物分子营养学重点实验室浙江杭州310029

以20周龄伊莎蛋鸡为试验对象,研究日粮添加甜菜碱对蛋鸡卵黄前体物极低密度脂蛋白VLDL和卵黄磷蛋白VTG含量的影响.结果表明日粮中添加600 mg?kg-1甜菜碱促产蛋效果最佳,全程平均产蛋率比对照组提高8.67%(P<0.05),料蛋比下降9.02%(P<0.0... 详细信息

以20周龄伊莎蛋鸡为试验对象,研究日粮添加甜菜碱对蛋鸡卵黄前体物极低密度脂蛋白VLDL和卵黄磷蛋白VTG含量的影响.结果表明日粮中添加600 mg?kg-1甜菜碱促产蛋效果最佳,全程平均产蛋率比对照组提高8.67%(P<0.05),料蛋比下降9.02%(P<0.05).日粮添加600 mg?kg-1甜菜碱使50和70周龄蛋鸡血清VLDL含量分别提高34.61%(P<0.05)和53.41%(P<0.03),VTG含量提高33.74%(P<0.01)和39.14%(P<0.01);腹脂LPL酶活性分别下降31.0%(P<0.01)和44.83%(P<0.01);血清FSH水平分别提高29.40%(P<0.05)和19.85%(P<0.01);LH水平分别提高45.49%(P<0.01)和26.69%(P<0.01).结果表明,甜菜碱对蛋鸡血清卵黄前体物VLDL和VTG含量有显著影响,它是通过影响血清卵黄前体物含量来提高蛋鸡生产性能.

关键词：产蛋鸡甜菜碱卵黄前体物 VLDL VTG

浸麻芽孢杆菌(Bacillus macerans)β-1,3-1,4-葡聚糖酶特性及其基因克隆

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中国兽医学报 2004年第4期24卷 411-413页

作者：李卫芬孙建义许梓荣吕文平浙江大学饲料科学研究所教育部动物分子营养学重点实验室浙江杭州310029

对浸麻芽孢杆菌 (Bacillusmacerans)所产的β- 1,3- 1,4 -葡聚糖酶特性进行了分析。结果表明 :该酶的最适温度为5 5℃ ,在 6 0℃以下酶相对稳定。通过 PCR方法扩增和克隆了该酶基因的全长 DNA序列 ,长度为 734bp,其中开放阅读框架长 717... 详细信息

对浸麻芽孢杆菌 (Bacillusmacerans)所产的β- 1,3- 1,4 -葡聚糖酶特性进行了分析。结果表明 :该酶的最适温度为5 5℃ ,在 6 0℃以下酶相对稳定。通过 PCR方法扩增和克隆了该酶基因的全长 DNA序列 ,长度为 734bp,其中开放阅读框架长 717bp,编码 2 37个氨基酸。经 Blast分析 ,该序列与已登录的浸麻芽孢杆菌和多粘芽孢杆菌 (***)的同源性较高 ,分别为 99%和 82 %。

关键词：浸麻芽孢杆菌 β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因克隆温度

N-甲基-天冬氨酸对猪脂肪组织甘油三酯脂肪酶活性及其mRNA表达的影响

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2007年第3期33卷 243-246页

作者：冯杰马文强许梓荣汪以真刘建新浙江大学饲料科学研究所教育部动物分子营养学重点实验室浙江杭州310029

选用16头体重60 kg左右杜长大三元杂交母猪,分为两组,分别饲喂01、00 mg·kg-1N-甲基-天冬氨酸(NMA),研究NMA对肥育猪脂肪组织甘油三酯脂肪酶活性及其mRNA表达的影响.结果表明,试验7 d后,肥育猪脂肪组织甘油三酯脂肪酶活性略有提高,但... 详细信息

选用16头体重60 kg左右杜长大三元杂交母猪,分为两组,分别饲喂01、00 mg·kg-1N-甲基-天冬氨酸(NMA),研究NMA对肥育猪脂肪组织甘油三酯脂肪酶活性及其mRNA表达的影响.结果表明,试验7 d后,肥育猪脂肪组织甘油三酯脂肪酶活性略有提高,但差异不显著;15 d后,酶活性显著提高,较对照组增加30.44%(P<0.05);甘油三酯脂肪酶mRNA丰度变化与其酶活性变化呈相同趋势,7 d后无显著改变,但15 d后,mRNA丰度显著提高13.70%(P<0.05).由此可知,NMA可以通过调控猪脂肪组织甘油三酯脂肪酶酶活性及mRNA的表达,从而影响猪机体脂肪代谢.

关键词： N-甲基-天冬氨酸(NMA) 甘油三脂脂肪酶 mRNA 肥育猪

大肠杆菌K_(88)体外黏附Caco-2细胞及其对细胞膜的影响

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细胞生物学杂志 2004年第2期26卷 177-180页

作者：郭彤许梓荣浙江大学饲料科学研究所浙江大学动物分子营养学教育部重点实验室杭州310029

采用体外Caco-2细胞培养模型,研究大肠杆菌K88黏附Caco-2肠上皮细胞后对其存活率及增殖活力、细胞膜磷脂酶A2、细胞内Ca2+浓度及膜流动性的影响。结果表明,细菌黏附3h后细胞活力明显下降,PLA2活性升高,细胞内Ca2+浓度增加,细胞膜流动性... 详细信息

采用体外Caco-2细胞培养模型,研究大肠杆菌K88黏附Caco-2肠上皮细胞后对其存活率及增殖活力、细胞膜磷脂酶A2、细胞内Ca2+浓度及膜流动性的影响。结果表明,细菌黏附3h后细胞活力明显下降,PLA2活性升高,细胞内Ca2+浓度增加,细胞膜流动性降低,从而导致肠上皮细胞膜结构和功能的损害。

关键词：大肠杆菌K88 Caco-2细胞细胞膜体外黏附存活率

壳聚糖铜对断奶仔猪生产性能、肠道菌群及黏膜形态的影响

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中国农业科学 2011年第2期44卷 387-394页

作者：朱叶萌谢正军李云涛韩新燕浙江大学饲料科学研究所/动物分子营养学教育部重点实验室

【目的】研究壳聚糖铜对断奶仔猪生产性能、肠道菌群和肠道黏膜形态等方面的影响,为壳聚糖铜的利用提供科学依据。【方法】选择120头体重(7.8±0.2 kg)的"杜长大"三元杂交断奶仔猪随机分为4组。分别饲喂4种日粮:基础日粮组不添加外源铜... 详细信息

【目的】研究壳聚糖铜对断奶仔猪生产性能、肠道菌群和肠道黏膜形态等方面的影响,为壳聚糖铜的利用提供科学依据。【方法】选择120头体重(7.8±0.2 kg)的"杜长大"三元杂交断奶仔猪随机分为4组。分别饲喂4种日粮:基础日粮组不添加外源铜(对照组),其它组在基础日粮基础上分别添加50、100 ***-1壳聚糖铜(CS-Cu)、200 ***-1硫酸铜,预饲期7 d,试验期30 d。【结果】50、100 ***-1 CS-Cu和200 ***-1硫酸铜组的日增重分别比对照组显著增加(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05);添加CS-Cu可使盲肠和结肠内容物中大肠杆菌、沙门氏菌数量明显降低(P<0.05),而乳酸杆菌数量显著升高(P<0.05);与硫酸铜组相比,100 ***-1 CS-Cu组空肠和回肠隐窝深度显著降低(P<0.05);空肠绒毛高度明显提高(P<0.05)。【结论】日粮中添加100 ***-1CS-Cu与200 ***-1硫酸铜,对提高断奶仔猪日增重和降低料重比具有等同的效果;日粮中添加CS-Cu具有改善肠道微生态平衡和肠道形态的作用。

关键词：壳聚糖铜生产性能肠道菌群肠道形态断奶仔猪

早籼稻饲粮中添加酶制剂对猪生长和消化的影响

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中国水稻科学 2003年第2期17卷 179-183页

作者：王敏奇许梓荣孙建义浙江大学动物分子营养学教育部重点实验室浙江大学饲料科学研究所浙江杭州310029

选择 6 0头体重约 35 kg的“长加”二元杂交猪 ,按饲养试验要求分成 2组 ,分别饲喂不含和含 0 .2 %复合酶制剂 (内含β-葡聚糖酶、木聚糖酶和纤维素酶 )的早籼稻型饲粮 ,进行了为期 70 d的饲养试验 ,在试验后期进行了消化试验、采样分... 详细信息

选择 6 0头体重约 35 kg的“长加”二元杂交猪 ,按饲养试验要求分成 2组 ,分别饲喂不含和含 0 .2 %复合酶制剂 (内含β-葡聚糖酶、木聚糖酶和纤维素酶 )的早籼稻型饲粮 ,进行了为期 70 d的饲养试验 ,在试验后期进行了消化试验、采样分析。饲养试验结果显示 ,添加复合酶制剂使日增重提高了 8.78% (P 饲料粗蛋白、粗脂肪和粗纤维的表观消化率分别提高了 12 .73个百分点 (P <0 .0 1)、8.84个百分点 (P <0 .0 5 )和 16 .97个百分点 (P <0 .0 1)。添加复合酶制剂使空肠、回肠内容物粘度分别降低了 7.0 8% (P <0 .0 1)、6 .78% (P <0 .0 1) ,粪中大肠杆菌数、腹泻频率分别较对照组降低了 81.2 9% (P <0 .0 1)、37.0 0 % (P <0 .0 5 )。消化性能指标分析显示 ,添加复合酶制剂组十二指肠内容物总蛋白水解酶、α-淀粉酶活性较对照组提高了 99.0 7% (P <0 .0 1)和18.38% (P <0 .0 5 )。

关键词：猪稻谷 β-葡聚糖酶木聚糖酶纤维素酶生长消化

铜离子对引起仔猪腹泻的大肠杆菌K_(88)杀菌机理的研究

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中国预防兽医学报 2004年第2期26卷 127-130页

作者：郭彤许梓荣浙江大学动物分子营养学教育部重点实验室浙江大学饲料科学研究所浙江杭州310029

采用K+电极对大肠杆菌K88细胞内的K+释放进行测定;采用氧电极法对其呼吸耗氧量进行测定;采用透射电子显微镜观察细胞壁结构的完整性,从而探讨硫酸铜(CuSO4)的杀菌机理。研究表明:Cu2+在微摩尔水平时就能有效抑制微生物的呼吸代谢途径。... 详细信息

采用K+电极对大肠杆菌K88细胞内的K+释放进行测定;采用氧电极法对其呼吸耗氧量进行测定;采用透射电子显微镜观察细胞壁结构的完整性,从而探讨硫酸铜(CuSO4)的杀菌机理。研究表明:Cu2+在微摩尔水平时就能有效抑制微生物的呼吸代谢途径。比较了典型抑制剂对硫酸铜的叠加率,得出硫酸铜主要抑制呼吸代谢的HMP途径。而且Cu2+还可诱导K+从细胞内释放出来,使细菌死亡。但它是一个可逆的过程,营养基质和EDTA可阻止细胞内K+的释放。在透射电镜下观察细菌细胞壁的完整性被破坏。因此,硫酸铜在肠道中可有效杀死引起腹泻的病原菌大肠杆菌K88。

关键词： Cu^2+ 大肠杆菌K88 呼吸抑制 K^+释放杀菌机理

不同日龄猪腹脂中脂肪酸合成酶(FAS)基因表达规律的研究

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畜牧兽医学报 2006年第7期37卷 662-666页

作者：单体中汪以真刘建新许梓荣冯杰浙江大学饲料科学研究所动物分子营养学教育部重点实验室杭州310029

从猪腹脂中提取总RNA，用RT-PCR扩增脂肪酸合成酶基因（FAS），获得一条206bp的片段，以pGEM-TEasyvector为载体，将该基因片段克隆到大肠杆菌*** DH5α，筛选阳性克隆并测序。测序结果表明，得到的片段为FAS基因的部分序列，与GenBank... 详细信息

从猪腹脂中提取总RNA，用RT-PCR扩增脂肪酸合成酶基因（FAS），获得一条206bp的片段，以pGEM-TEasyvector为载体，将该基因片段克隆到大肠杆菌*** DH5α，筛选阳性克隆并测序。测序结果表明，得到的片段为FAS基因的部分序列，与GenBank中登录的猪FAS基因（AY183428）494～699之间序列同源性达到100％。以FAS基因片段的克隆为基础，构建了优化的半定量RT-PCR法，以18S rRNA为内标，研究从1日龄到28周龄杜长大腹脂中FAS基因表达的规律。结果显示，从1日龄到28周龄，FAS基因在腹脂mRNA水平呈逐渐升高的趋势；统计分析发现，1日龄与28周龄FAS在腹脂中mRNA水平存在显著性差异（P〈0．05）。

关键词：猪脂肪酸合成酶基因克隆腹脂半定量RT-PCR