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芡实糖转运基因EfSWEET1.4和EfSWEET1.6的克隆与表达分析

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分子植物育种 2024年

作者：王煜皓刘爱莲朱悦冯凯赵书平李良俊吴鹏扬州大学园艺园林学院扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室

SWEET (Sugars will eventually be exported transporter)糖转运蛋白能够转运蔗糖和己糖，并影响植物众多的生长发育过程。EfSWEET1.4和EfSWEET1.6是芡实中两个糖转运基因，本研究以芡实‘紫花苏芡’为实验材料，克隆得到EfSWEET1.4、E... 详细信息

SWEET (Sugars will eventually be exported transporter)糖转运蛋白能够转运蔗糖和己糖，并影响植物众多的生长发育过程。EfSWEET1.4和EfSWEET1.6是芡实中两个糖转运基因，本研究以芡实‘紫花苏芡’为实验材料，克隆得到EfSWEET1.4、EfSWEET1.6基因并对其进行生物信息学和功能分析。结果表明：EfSWEET1.4和EfSWEET1.6 CDS编码区域全长为810 bp和831 bp，分别编码269和276个氨基酸。亚细胞定位显示，EfSWEET1.4和1.6蛋白均定位在质膜上，属于典型的跨膜蛋白。EfSWEET1.4和1.6基因的表达有组织特异性，EfSWEET1.4在叶片中的表达量最高，而EfSWEET1.6在种仁中表达量最高。EfSWEET1.4和1.6基因的启动子中均含有重要的脱落酸响应元件ABRE，并且在脱落酸处理叶片后EfSWEET1.4基因的表达量显著上升，这可能提高了叶片转运糖的能力。本研究为探究EfSWEET1.4和1.6基因对芡实糖转运作用的机制提供了理论基础，为进一步研究脱落酸激素对芡实糖转运的影响提供了依据。

关键词：芡实 EfSWEET1.4和1.6 基因克隆表达分析糖转运

HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响

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中国兽医科学 2024年第6期54卷 711-717页

作者：傅彦贇石磊杨星竹胡娇胡增垒扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州大学兽医学院农业部畜禽传染病学重点开放实验室

为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒（NDV）载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响，本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变，用反向遗传学技术拯救重组NDV，评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示，... 详细信息

为了评价HA蛋白S227N突变对基于新城疫病毒（NDV）载体的H7N9亚型禽流感疫苗免疫原性的影响，本研究向NDV载体携带的H7N9 HA蛋白中引入S227N突变，用反向遗传学技术拯救重组NDV，评价重组病毒的生物学特性与对鸡的免疫原性。结果显示，表达HAS227N的重组NDV的毒力弱（MDT>120 h），在鸡胚中的病毒效价高(HA效价：512;EID50:109.3/m L)，复制性能较强，这些生物学特征与载体病毒及表达野生型HA蛋白的重组NDV相似。S227N突变不影响HA蛋白在重组NDV感染细胞中的表达。此外，表达HAS227N与野生型HA蛋白的重组NDV均能诱导产生较高的抗NDV血凝抑制（HI）抗体；HA蛋白S227N突变能够提高重组NDV免疫鸡的血清转化率，却不能显著提升针对H7N9的HI抗体效价。上述结果表明，HA蛋白S227N突变对基于NDV载体的H7N9亚型禽流感疫苗的免疫原性没有显著的增强作用。本研究对H7N9亚型禽流感疫苗的设计、优化与效力评估有参考意义。

关键词： H7N9亚型禽流感病毒疫苗新城疫病毒载体 HA蛋白 S227N突变免疫原性

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芍药PlSPL1基因克隆与表达特性分析

华北农学报 2024年第2期39卷 55-61页

作者：许华杰卢莉莉汤寓涵赵大球孟家松陶俊扬州大学园艺园林学院江苏扬州225009 扬州大学教育部农业与农产品安全国际联合实验室江苏扬州225009

为研究芍药PlSPL1(SPL)基因的性质和功能,进一步阐明PlSPL1基因在不同物种中的共性与特征差异,探明PlSPL1在芍药茎秆挺直程度中的作用。以芍药红峰茎秆为材料,采用RACE技术获得了芍药PlSPL1基因全长序列,利用生物信息学软件分析预测PlS... 详细信息

为研究芍药PlSPL1(SPL)基因的性质和功能,进一步阐明PlSPL1基因在不同物种中的共性与特征差异,探明PlSPL1在芍药茎秆挺直程度中的作用。以芍药红峰茎秆为材料,采用RACE技术获得了芍药PlSPL1基因全长序列,利用生物信息学软件分析预测PlSPL1的结构、理化性质和亲缘关系,随后利用qRT-PCR技术分析PlSPL1在芍药茎秆不同发育时期的表达量,并通过激光共聚焦扫描显微技术进行了蛋白质亚细胞定位分析。结果表明:PlSPL1基因开放阅读框为3000 bp,编码999个氨基酸。蛋白分子式为C_(4869)H_(7682)N_(1406)O_(1497)S_(43),分子量为111.25 ku,理论等电点为6.26,编码亲水性不稳定酸性蛋白,磷酸化修饰以丝氨酸为主,无信号肽,有跨膜结构,二级结构主要由无规则卷曲组成。系统进化树分析发现,PlSPL1蛋白与牡丹的亲缘关系最近,其次和葡萄有较近的亲缘关系;蛋白序列比对分析发现,PlSPL1蛋白具有SPL转录因子家族特有的SBP保守结构域。相对表达量分析发现,PlSPL1随着茎秆发育逐渐呈现下降趋势,表明PlSPL1负向调控芍药茎秆发育,推测其可能在茎秆挺直程度方面起重要作用;亚细胞定位显示,PlSPL1蛋白定位在细胞核中。上述结果表明,PlSPL1参与芍药茎秆发育过程。

关键词：芍药 SPL 基因克隆表达模式亚细胞定位

稻米淀粉、蛋白质和脂质与蒸煮食味品质关系研究进展

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华中农业大学学报 2024年第3期43卷 121-131页

作者：翁雪莲姜丽秋唐树鹏张伟杨朱宽宇王志琴杨建昌徐云姬扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州225009 扬州大学江苏省粮食作物现代产业技术协同创新中心扬州225009

蒸煮食味品质是消费者选择稻米的重要评价标准。淀粉、蛋白质和脂质作为稻米的三大主要物质成分,与其蒸煮食味品质关系密切。为进一步探索稻米蒸煮食味品质形成机制及水稻优质栽培技术,本文综述了稻米三大主要物质的组成与分布、合成代... 详细信息

蒸煮食味品质是消费者选择稻米的重要评价标准。淀粉、蛋白质和脂质作为稻米的三大主要物质成分,与其蒸煮食味品质关系密切。为进一步探索稻米蒸煮食味品质形成机制及水稻优质栽培技术,本文综述了稻米三大主要物质的组成与分布、合成代谢特点及其与蒸煮食味品质关系的研究进展,总结了干湿交替灌溉技术对稻米三大主要物质及其蒸煮食味品质的影响,并提出了研究存在三大主要物质互作与稻米蒸煮食味品质关系不清楚以及干湿交替灌溉对蒸煮食味品质的调控机制不明确等问题。建议今后基于淀粉、蛋白质和脂质累积与合成代谢的关系深入研究稻米蒸煮食味品质形成机制以及轻-干湿交替灌溉对稻米蒸煮食味品质的调优机制。

关键词：稻米蒸煮食味品质淀粉蛋白质脂质干湿交替灌溉

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circ＿1764的鉴定及其在鸡脂肪细胞分化中的功能预测

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中国家禽 2024年

作者：庄重娄姬英杨婷王来娣江勇王志秀陈世豪毕瑜林陈国宏常国斌白皓扬州大学农业科技发展研究院教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室扬州大学动物科学与技术学院

为探究环状RNA circ＿1764在鸡脂肪细胞分化中的重要作用，试验通过PCR扩增和RNase酶消化鉴定鸡circ＿1764的存在特性，采用qRT-PCR技术检测circ＿1764在鸡组织中的表达情况，利用Miranda、miRDB和Target Scan Human等网站预测鸡circ＿1... 详细信息

为探究环状RNA circ＿1764在鸡脂肪细胞分化中的重要作用，试验通过PCR扩增和RNase酶消化鉴定鸡circ＿1764的存在特性，采用qRT-PCR技术检测circ＿1764在鸡组织中的表达情况，利用Miranda、miRDB和Target Scan Human等网站预测鸡circ＿1764的调控网络，使用DAVID软件可视化预测靶基因的GO和KEGG富集通路，最后通过转染过表达circ＿1764载体，验证生物信息学筛选出的调控网络的准确性。结果显示：鸡体内存在circ＿1764，并主要在细胞质中表达，在鸡心脏、肝脏、胸腺和脂肪组织中高表达；circ＿1764的预测靶miRNA主要为miR-7441-3p、miR-1656、miR-6578-3p、miR-7452-5p、miR-6645-5p、miR-6563-3p、miR-6607-5p和miR-6581-5p，并且circ＿1764在DF-1细胞中过表达可以显著降低上述miRNA的表达；circ＿1764靶基因主要集中在代谢、泛素介导的蛋白水解以及MAPK通路中。本研究验证了鸡circ＿1764的存在，并过生物信息学预测了鸡circ＿1764的调控网络，初步探究circ＿1764通过吸附miR-1656、miR-6645-5p等miRNA调控靶基因进而影响鸡脂肪细胞分化的分子机制，为进一步阐明circ＿1764调控鸡脂肪细胞分化的机理奠定了基础。

关键词：鸡脂肪 circ＿1764 鉴定功能预测

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小麦耐盐种质筛选及栽培调控技术研究进展

麦类作物学报 2024年第3期44卷 334-343页

作者：徐云姬姜丽秋吴昊朱一鸣宋志强张网定朱广龙周桂生扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室\扬州大学农业科技发展研究院江苏扬州225009 扬州市气象局江苏扬州225009

小麦耐盐种质筛选及配套栽培调控技术研究是小麦耐盐品种选育、盐碱地小麦减损稳产的前提。本文简介了小麦耐盐种质筛选流程、耐盐性评价指标与方法,重点总结了山东、河北、新疆和江苏4省的耐盐小麦品种(系)概况以及抗盐相关栽培调控技... 详细信息

小麦耐盐种质筛选及配套栽培调控技术研究是小麦耐盐品种选育、盐碱地小麦减损稳产的前提。本文简介了小麦耐盐种质筛选流程、耐盐性评价指标与方法,重点总结了山东、河北、新疆和江苏4省的耐盐小麦品种(系)概况以及抗盐相关栽培调控技术研究进展,提出了研究存在筛选方法不统一、盐碱地实地筛选研究缺乏和栽培调控技术不系统等问题,建议统一室内筛选方法、利用室外盐池和盐碱地开展耐盐种质筛选及配套抗盐栽培调控技术研发,并基于多组学技术从遗传学和生理学角度系统探究小麦耐盐种质的耐盐机理以及栽培调控原理。

关键词：小麦耐盐品种(系) 耐盐筛选调控技术

金森女贞叶斑病病原物的鉴定、生物学特性及防治药剂筛选

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植物病理学报 2024年第1期54卷 36-48页

作者：陈宸沙鹏飞江学江珊杨峰沈迎春陈夕军扬州大学植物保护学院江苏扬州225009 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009 江苏省农药总站江苏南京210036

金森女贞叶斑病每年春季在扬州大学文汇路校区均普遍发生。为明确其病原种类及病菌生物学特性,筛选适于防治该病的化学药剂,作者对病原菌进行分离纯化、室内外离体与活体致病性测定、形态与多基因(ITS、GAPDH、RPB2和TEF1)序列分子鉴定... 详细信息

金森女贞叶斑病每年春季在扬州大学文汇路校区均普遍发生。为明确其病原种类及病菌生物学特性,筛选适于防治该病的化学药剂,作者对病原菌进行分离纯化、室内外离体与活体致病性测定、形态与多基因(ITS、GAPDH、RPB2和TEF1)序列分子鉴定,以及病原菌生物学特性和对5种杀菌剂的敏感性测定。结果表明,金森女贞叶斑病病原物为链格孢(Alternaria alternata),其最适生长条件为:以蔗糖或果糖为碳源、以硝酸钾为氮源,在25℃、pH 9.0条件下生长。5种杀菌剂对A.alternata均表现较强的毒力,其中嘧菌酯毒力最强,EC50值为0.0806μg·mL^(-1);咪鲜胺、吡唑醚菌酯和戊唑醇次之,EC50值分别为2.2722μg·mL^(-1)、3.9349μg·mL^(-1)和6.4000μg·mL^(-1);而苯醚甲环唑的毒力最弱,EC50值为15.4860μg·mL^(-1),说明这些药剂均可用于生产上金森女贞叶斑病的防控。

关键词：病原鉴定生物学特性药剂筛选链格孢金森女贞叶斑病

3种商品茶多酚的表征、抗氧化性及其抑菌效果比较研究

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2024年第2期45卷 84-92页

作者：刘雅楠张迅单洪雁赵文鹏李松南王君扬州大学旅游烹饪学院江苏扬州225127 扬州大学农业科技发展研究院/教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

以3种商品茶多酚(CTP)为研究对象,对其儿茶素类化合物组分及其结构进行表征,并探究其抗氧化性和抑菌效果。液相质谱测定结果表明,3种CTP均检出7种儿茶素类化合物,其中表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量最高,CTP1-CTP3含量分别为40.12%... 详细信息

以3种商品茶多酚(CTP)为研究对象,对其儿茶素类化合物组分及其结构进行表征,并探究其抗氧化性和抑菌效果。液相质谱测定结果表明,3种CTP均检出7种儿茶素类化合物,其中表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)含量最高,CTP1-CTP3含量分别为40.12%、36.27%和59.13%。SEM图谱分析发现,3种CTP均呈现出大小不一和棱角分明的块状结构。红外光谱分析显示,3种CTP分别在1342~1312和1141 cm^(-1)处出现酚羟基的特征峰,且以CTP3峰值强度最高,依次高于CTP1和CTP2。CTP3对DPPH、·OH、ABTS自由基的半抑制浓度最低,分别为0.0876、0.0605、0.1525 mg·mL^(-1)。CTP3对金黄色葡萄球菌和沙门菌的抑菌效果最佳,其抑菌圈直径分别为23.24和11.43 mm。这一研究为CTP作为抗氧化剂和抑菌剂在食品加工中的开发和应用提供了参考。

关键词：茶多酚液相质谱红外光谱自由基清除抑菌圈

猪德尔塔冠状病毒感染新生仔猪的肠道病理及超微结构变化分析

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农业生物技术学报 2024年第7期32卷 1471-1482页

作者：侯宇辰曹亚男杜小妹靳俪雅陈振海吴正常包文斌张帅扬州大学兽医学院扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)是近年来新发的猪肠道冠状病毒，给养猪业造成了巨大的经济损失。为了解PDCoV感染新生仔猪(Sus scrofa domesticus)的致病性及肠道的病理超微结构变化，本研究对1日龄新生仔猪攻毒PDC... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)是近年来新发的猪肠道冠状病毒，给养猪业造成了巨大的经济损失。为了解PDCoV感染新生仔猪(Sus scrofa domesticus)的致病性及肠道的病理超微结构变化，本研究对1日龄新生仔猪攻毒PDCoV CHN-GD16-05毒株后的临床表现、剖检与组织病理学变化、组织嗜性、肠道超微结构变化进行观察及分析。结果发现，新生仔猪攻毒PDCoV后第3天出现严重呕吐、腹泻、精神萎靡、嗜睡等临床症状；剖检发现，攻毒仔猪肠道胀气，肠管扩张，肠壁出血变薄甚至透明，肠腔内积聚黄色液体；PDCoV主要感染仔猪的十二指肠、空肠和回肠；荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果显示，空肠中PDCoV核衣壳蛋白(nucleocapsid, N)基因及其蛋白水平均极显著高于十二指肠和回肠(P<0.01)；进一步空肠组织切片的苏木精伊红染色结果显示，PDCoV感染后破坏肠绒毛结构，引起弥漫性的肠绒毛萎缩甚至融合，隐窝上皮细胞增殖及隐窝深度增加；电镜观察也发现PDCoV感染后的仔猪肠绒毛萎缩，肠上皮细胞的微绒毛断裂脱落，细胞间紧密连接被破坏，胞质空泡状细胞增多，线粒体数目减少且体积增大；此外，PDCoV感染刺激宿主的抗病毒相关基因表达，促进干扰素α (interferon α, IFN-α)、IFN-β、IFN-λ和其下游干扰素刺激基因黏病毒抗性蛋白1 (myxovirus resistance 1, MX-1)、干扰素刺激基因15 (interferon-stimulating gene 15, ISG-15)、干扰素诱导的四肽重复蛋白1 (interferon induced protein with tetratricopeptide repeats 1, IFIT1)、2'-5'-寡腺苷酸合成酶1 (2'-5'-oligoadenylate synthetase 1, OAS1)、2'-5'寡腺苷酸合成酶样蛋白(2'-5'-oligoadenylate synthetase like, OASL)及炎症因子肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor α, TNF-α)、白细胞介素1β (interleukin 1β, IL-1β)、IL-6、C-C基序趋化因子配体20 (C-C motif chemokine ligand 20, CCL-20)基因的表达。以上结果表明，PDCoV感染新生仔猪后能够迅速入侵小肠，尤其在空肠上皮细胞中大量复制，导致感染的肠上皮细胞变性坏死进而引起肠绒毛萎缩，造成渗透性腹泻。本研究为阐明PDCoV感染仔猪的致病机制提供理论基础。

关键词：猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) 新生仔猪肠道超微结构