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猪圆环病毒3型衣壳蛋白的原核表达与鉴定

中国兽医杂志 2023年第2期59卷 44-48页

作者：高茵李杰峰张宁王华健赵志强郑丽丽陆安田勇杨威徐丽娜河北工程大学生命科学与食品工程学院河北邯郸056038 河北省畜牧兽医研究所河北保定071001 河北农业大学动物医学院河北保定071001 石家庄市金元康牧药业有限公司河北石家庄051130

为获取猪圆环病毒3型衣壳蛋白(PCV3-Cap蛋白),本试验参照PCV3 HBBD1810毒株(GenBank登录号:MK105924)的基因组序列信息合成cap基因,并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,对重组质粒进行测序和双酶切鉴定后,将重组质粒转化Rosetta大肠杆菌... 详细信息

为获取猪圆环病毒3型衣壳蛋白(PCV3-Cap蛋白),本试验参照PCV3 HBBD1810毒株(GenBank登录号:MK105924)的基因组序列信息合成cap基因,并将其克隆至原核表达载体pET-32a中,对重组质粒进行测序和双酶切鉴定后,将重组质粒转化Rosetta大肠杆菌,对最佳IPTG诱导浓度和诱导表达时间筛选,并对目的蛋白表达后的存在形式进行检测以及对纯化条件进行筛选,透析复性后利用鼠源抗PCV3-Cap单克隆抗体进行Western blot以验证目的蛋白的反应原性。结果显示,通过构建原核表达系统获得大小为42 kDa的PCV3-Cap蛋白;破菌处理后目的蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中;0.2 mmol/L IPTG 37℃下诱导培养8 h后蛋白表达量较高;在300 mmol/L咪唑洗脱时纯化出清晰条带;经过Western blot验证目的蛋白能够被鼠源抗PCV3-Cap单克隆抗体识别,具有良好的反应原性。结果表明,本试验成功构建了PCV3-Cap蛋白表达载体,成功表达PCV3-Cap蛋白,同时优化了表达和纯化条件,为PCV3亚单位疫苗的研制以及检测试剂盒的开发和研究提供了科学依据。

关键词：圆环病毒3型 Cap蛋白原核表达

Hg^(2+)对克隆牙鲆和普通牙鲆的急性毒性

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渔业科学进展 2014年第3期35卷 68-73页

作者：姜宏波王桂兴刘海金包杰韩英宋宏东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030 沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110866 中国水产科学研究院北戴河中心实验站秦皇岛066100 中国水产科学研究院北京100141 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

以相同规格的牙鲆Paralichthys olivaceus普通群体为对照,采用静水生物测试法开展了Hg2+对牙鲆克隆群体的急性毒性实验,实验所用幼鱼为130日龄,体长为(12.38±1.13)cm,体质量为(17.97±5.79)g。实验期间,水温为(21±1.2)℃,pH为8.1-8.3... 详细信息

以相同规格的牙鲆Paralichthys olivaceus普通群体为对照,采用静水生物测试法开展了Hg2+对牙鲆克隆群体的急性毒性实验,实验所用幼鱼为130日龄,体长为(12.38±1.13)cm,体质量为(17.97±5.79)g。实验期间,水温为(21±1.2)℃,pH为8.1-8.3,盐度为31.0,硬度6200 mg/L,连续充气保证溶氧充足。研究表明,实验初始阶段,高浓度组克隆牙鲆在容器内躁动不安,上升到水面沿池壁缓慢转圈游动,一段时间后安静伏在池底;而普通牙鲆则仅个别鱼在水面游动,多数静止在池底不动。随中毒程度加深,用玻璃棒触碰普通牙鲆时,其反应剧烈,在水中侧翻、打转、急速游动或上下窜动,而克隆牙鲆则仅沿池底缓慢游动。最终克隆牙鲆和普通牙鲆均身体僵直,失去呼吸能力死亡。Hg2+对克隆牙鲆的24、48、96 h的半致死质量浓度分别为1.50、0.86、0.84 mg/L,而对普通牙鲆的半致死质量浓度则分别为1.93、1.04、0.90 mg/L。结果表明,克隆牙鲆对Hg2+的耐受性弱于普通牙鲆,对Hg2+更加敏感。从死亡过程看,各处理组的克隆牙鲆从出现死亡个体开始,死亡时间集中在8 h内,具有同步性;普通牙鲆则在实验期间陆续出现死亡,持续时间较长,同步性较差。

关键词：克隆牙鲆 Hg^2+ 急性毒性

SCOTS技术在筛选动物病原菌功能基因中的应用

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中国预防兽医学报 2015年第2期37卷 159-162页

作者：汪洋易力范红结陆承平河南科技大学动物科技学院河南洛阳471003 南京农业大学动物医学学院江苏南京210095 洛阳师范学院生命科学系河南洛阳471022

病原菌在宿主体内定植与感染的过程是一个复杂的、动态的多因素作用过程,在这个过程中病原菌需要通过调控各基因的表达来适应环境的变化。目前,随着大量细菌的基因组测序完成,为研究细菌病原、流行病学和防控方法提供了参考。下一步就... 详细信息

病原菌在宿主体内定植与感染的过程是一个复杂的、动态的多因素作用过程,在这个过程中病原菌需要通过调控各基因的表达来适应环境的变化。目前,随着大量细菌的基因组测序完成,为研究细菌病原、流行病学和防控方法提供了参考。下一步就需要研究这些基因的功能,考察在不同环境条件下的选择性表达情况,特别是病原菌的致病过程以及如何与宿主细胞作用一直是关注的重点。

关键词：功能基因病原菌 COTS技术应用动物筛选适应环境宿主细胞

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猪青霉素过敏

中国兽医杂志 2000年第10期26卷 45-46页

作者：姜泽之聂建云南昌大学生命科学与食品工程学院!江西南昌330047 原江西南昌农业学校兽医科!江西南昌330047

莱恩养猪场于1998年下半年陆续从广东、深圳两地猪场购进长白与大约克(长大)杂交母猪.7月中旬由深圳购进的100多头母猪,在起运时,产地嘱咐,到场后要立即注射青、链霉素,场技术总监、押运员也一再交代要及时注射.

关键词：青霉素过敏反应抗菌素苄青霉素钾猪群

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白三叶TrDFR基因克隆及表达分析

西南农业学报 2022年第11期35卷 2485-2491页

作者：张婷婷刘洋许本波田宏熊军波陆姣云张鹤山动物胚胎及分子育种湖北重点实验室/湖北省农业科学院畜牧兽医研究所武汉430064 长江大学生命科学学院湖北荆州434000

【目的】二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)是花色素苷生物合成途径上的关键调节酶,探究其基本性质和在白三叶花色形成过程中的作用对白三叶育种具有重要意义。【方法】以野生型和红花突变体白三叶为材料,克隆白三叶TrDFR序列,并对其进行生物信... 详细信息

【目的】二氢黄酮醇4-还原酶(DFR)是花色素苷生物合成途径上的关键调节酶,探究其基本性质和在白三叶花色形成过程中的作用对白三叶育种具有重要意义。【方法】以野生型和红花突变体白三叶为材料,克隆白三叶TrDFR序列,并对其进行生物信息学分析和组织表达分析。【结果】白三叶红花突变体中TrDFR序列开放阅读框长969 bp,编码合成322个氨基酸。TrDFR蛋白分子量为36.59 kD,属于不稳定的亲水非分泌蛋白;二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,和红三叶的进化关系最近。组织表达分析表明,TrDFR基因在白三叶花瓣、叶柄和花梗中大量表达,且红花突变体茎和花瓣中的表达量显著高于野生型(P<0.01)。【结论】TrDFR基因可能与白三叶花瓣中花色素苷的合成有重要关系,为进一步研究TrDFR在白三叶花色形成调控中的功能提供了一定的理论基础。

关键词：白三叶 TrDFR 基因克隆生物信息学分析表达分析

猪圆环病毒2型合并感染脑心肌炎病毒对仔猪的致病性分析

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畜牧兽医学报 2016年第7期47卷 1435-1442页

作者：常洪涛刘慧敏李永涛贺秀媛赵军陈陆王新卫杨霞王川庆河南农业大学牧医工程学院郑州450002 河南农业大学生命科学学院郑州450002

旨在研究猪圆环病毒2型(PCV-2)感染仔猪后造成免疫抑制条件下,探索合并感染脑心肌炎病毒(EMCV)对仔猪的生长性能影响和致病性分析。选取16头健康仔猪设计了EMCV攻毒组、PCV-2攻毒组、PCV-2/EMCV联合攻毒组和对照组,通过临床表现、组织... 详细信息

旨在研究猪圆环病毒2型(PCV-2)感染仔猪后造成免疫抑制条件下,探索合并感染脑心肌炎病毒(EMCV)对仔猪的生长性能影响和致病性分析。选取16头健康仔猪设计了EMCV攻毒组、PCV-2攻毒组、PCV-2/EMCV联合攻毒组和对照组,通过临床表现、组织病理学检测、生长性能、免疫指标以及排毒情况等多方面评价,对二者合并感染仔猪的影响进行了研究。结果显示,2种病毒单独感染后,均表现出各自的典型临床特征,危害均不严重。但合并感染后死亡率迅速上升,平均日增重显著降低,体重负增长率升高,心肌和脑组织变性、坏死更为严重,血液中淋巴细胞比率始终较低,EMCV中和抗体较长时间维持在低水平。EMCV排毒期可持续至感染后第12天,略长于EMCV单独攻毒组的第9天。研究结果证实,PCV-2先期感染可使EMCV对仔猪表现出更为严重的致病性和致死性,免疫功能降低,并可能使得EMCV在猪体内的复制、排毒能力增强。

关键词：猪圆环病毒2型脑心肌炎病毒合并感染仔猪致病性

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国家级保护品种陆川猪的发展现状

黑龙江畜牧兽医 2013年第4期 43-45页

作者：黄雅琼江永强梁文全李呈万莫常信李家洲詹萍曾诗媛李桂芬陈旭健甘耀坤赵仕花阮桂文石德顺玉林师范学院生命科学与技术学院广西玉林537000 广西大学动物繁殖研究所南宁530005 玉林市陆川县畜牧局广西玉林537700 国家级陆川猪保种基地广西陆川537715

陆川猪是中国八大地方优良品种之一,属于国家级保护品种。陆川猪产于中国广西省桂东南地区的玉林市陆川县。陆川猪具有肉质好、营养丰富,有特殊的生长和繁殖性能等优点,在市场上有重要地位,深受广大消费者的喜爱。目前,随着人们对猪肉... 详细信息

陆川猪是中国八大地方优良品种之一,属于国家级保护品种。陆川猪产于中国广西省桂东南地区的玉林市陆川县。陆川猪具有肉质好、营养丰富,有特殊的生长和繁殖性能等优点,在市场上有重要地位,深受广大消费者的喜爱。目前,随着人们对猪肉需求量的增加,要将动物繁殖生物技术运用于实践,进一步开展陆川猪繁殖领域的研究工作,以期不断提高陆川猪优良品种的繁殖育种性能,加强资源品种特征,进一步做好陆川猪品种的保护措施,继续保持国家级保护品种陆川猪的优势地位。

关键词：国家级保护品种陆川猪繁殖育种现状

多重RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒

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中国兽医学报 2005年第1期25卷 9-12页

作者：陈芳刘惠莉孙红立曹祥荣李震赵立平上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 南京师范大学生命科学学院江苏南京210097 上海交通大学生命科技学院上海200030

为了检测、区分猪传染性胃肠炎 (TGE)和猪流行性腹泻 (PED) ,建立了同时检测这 2种疾病病原体的多重 PCR方法。参考 Gen Bank登录的 TGEV和 PEDV纤突蛋白 S基因序列 ,经 DNAsis 2 .0比较分析 ,分别筛选出 TGEV、PEDV S基因相对保守区。... 详细信息

为了检测、区分猪传染性胃肠炎 (TGE)和猪流行性腹泻 (PED) ,建立了同时检测这 2种疾病病原体的多重 PCR方法。参考 Gen Bank登录的 TGEV和 PEDV纤突蛋白 S基因序列 ,经 DNAsis 2 .0比较分析 ,分别筛选出 TGEV、PEDV S基因相对保守区。以 TGEV TH- 98株 (Gen Bank登陆号为 AF4 94 337)和 PEDV CV777株 (Gen Bank登陆号为 NC0 0 3436 )为参考模板 ,利用软件 Primer 3设计合成了 2对寡核苷酸引物 ,以 ST细胞培养的 TGEV和 PEDV毒株核酸为模板 ,利用所设计的 2对引物进行多重 RT- PCR扩增 ,结果同时得到与试验设计相符的 4 99bp(TGEV)和199bp(PEDV)的扩增条带 ,而对其他 3种猪病原的扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明 ,建立的多重 RT- PCR方法可检测出 10 pg TGEV RNA和 10 0 pg PEDV RNA。

关键词： TGEV 猪流行性腹泻病毒猪传染性胃肠炎病毒 RT-PCR检测引物纤突蛋白猪病扩增 RNA 阴性

蛋鸭circ-ZNF326的特征分析、过表达载体的构建及对小肠上皮细胞增殖的影响

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中国畜牧兽医 2022年第3期49卷 837-844页

作者：魏文焯郑超吴艳梁振华皮劲松杜金平李成凤张昊湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室武汉430064 西南科技大学生命科学与工程学院绵阳621010 湖北神丹健康食品有限公司安陆432600

【目的】明确circ-ZNF326的基本特征及对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的影响。【方法】以绿头鸭为研究对象,采集鸭胚肠道并培养小肠上皮细胞,提取RNA并反转录为cDNA,参考circ-ZNF326的全长序列设计引物,通过PCR反应扩增获得circ-ZNF326的部分序... 详细信息

【目的】明确circ-ZNF326的基本特征及对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的影响。【方法】以绿头鸭为研究对象,采集鸭胚肠道并培养小肠上皮细胞,提取RNA并反转录为cDNA,参考circ-ZNF326的全长序列设计引物,通过PCR反应扩增获得circ-ZNF326的部分序列,测序后利用反向剪接位点验证其成环方式。利用PARISTM Kit提取细胞核与细胞质RNA检测其在细胞中的核质分布情况。合成circ-ZNF326全长序列并利用双酶切及T4连接酶将circ-ZNF326全长序列连接在PLCDH-ciR真核表达载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞扩大培养,提取重组质粒进行双酶切及琼脂糖凝胶电泳检测,将circ-ZNF326过表达载体转染小肠上皮细胞,利用实时荧光定量PCR技术检测circ-ZNF326过表达后的表达效率,利用CCK-8检测过表达circ-ZNF326对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的影响。【结果】circ-ZNF326是由ZNF326基因第10、11和12号外显子反向剪接而成,且主要分布在细胞质中。circ-ZNF326过表达载体构建成功,表达效率极显著高于空载组(P<0.01)。将circ-ZNF326过表达载体转染小肠上皮细胞,结果发现,circ-ZNF326过载组在24~72 h细胞活力极显著或显著高于空载组(P<0.01;P<0.05)。【结论】本试验成功验证了circ-ZNF326的反向剪接与环状结构,证明了circ-ZNF326主要富集在细胞质中,并构建了circ-ZNF326过表达载体,证实了过表达circ-ZNF326可提高蛋鸭小肠上皮细胞的活力,为深入研究circ-ZNF326的生物学功能及其对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的调控机制奠定了理论基础。

关键词：环状RNA 蛋鸭 circ-ZNF326 核质分布过表达载体