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基于蛋白组学分析旋毛虫原肌球蛋白过表达对小细胞肺癌NCI-H446细胞蛋白组分的影响

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中国人兽共患病学报 2023年第8期39卷 758-765页

作者：王灏轩朱莹莹程露阳郭文平杜娈英承德医学院病原生物学教研室承德067000 承德医学院免疫学教研室承德067000

目的研究旋毛虫原肌球蛋白(tropomyosin,Tm)过表达对人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)NCI-H446细胞蛋白组分的影响。方法本研究通过串联质谱标记(Tandem mass tags,TMT)技术结合生物信息学分析旋毛虫Tm过表达对NCI-H446细胞... 详细信息

目的研究旋毛虫原肌球蛋白(tropomyosin,Tm)过表达对人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)NCI-H446细胞蛋白组分的影响。方法本研究通过串联质谱标记(Tandem mass tags,TMT)技术结合生物信息学分析旋毛虫Tm过表达对NCI-H446细胞蛋白组分的影响。比较旋毛虫Tm(Tm-pcDNA3.1)过表达和转染空载体(pcDNA3.1)48 h后NCI-H446细胞的蛋白组分,利用Uniprot数据库检索差异表达蛋白(Differentially expressed protein,DEPs)并对所得DEPs进行基因本体论(GO)富集分析。从STRING数据库获得DEPs相互作用数据,利用Cytoscape 3.9.0软件构建蛋白互作网络并筛选中心节点蛋白。通过Western blot对随机选取的中心节点蛋白NDRG1进行验证。结果旋毛虫Tm转染NCI-H446细胞48 h后,筛选出DEPs 70个,其中34个上调,36个下调;GO功能富集分析显示,DEPs主要涉及转录后的调控、免疫应答的调节等生物学功能;分析蛋白互作网络获得5个下调的中心节点蛋白:细胞周期蛋白G相关激酶(GAK)、组蛋白H3-7(H3-7)、辛普勒金Symplekin(SYMPK)、N-myc下游调节因子1(NDRG1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶N2(PKN2);Westrne blot结果显示旋毛虫Tm降低NCI-H446细胞中NDRG1的表达。结论旋毛虫TM能引起NCI-H446细胞蛋白组分的显著变化;旋毛虫Tm可能通过下调NCI-H446细胞中GAK、H3-7、SYMPK、NDRG1、PKN2的表达发挥其生物学作用。

关键词：旋毛虫原肌球蛋白小细胞肺癌NCI-H446细胞蛋白组学

人胎盘源间充质干细胞通过CD73/Nrf2途径抑制Th1细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病小鼠肝损伤机制研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2023年第9期43卷 663-670页

作者：吴沄桦张恒超韩凯悦赵雅萱栾希英滨州医学院免疫学教研室烟台264003

目的:探究人胎盘源间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)通过CD73/核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)途径抑制CD4^(+)IFN-γ+T(Th1)细胞分泌TNF-α减轻急性移植物抗宿主病(graft versus-host disease,GVHD)小鼠肝损伤的作用机制。方法:流式细胞术分析GVHD小鼠外周血和肝组织中Th1细胞对TNF-α的表达以及CD4^(+)IFN-γ+TNF-α+T(TNF-α+Th1)细胞上PD-1的表达水平。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、马松(Masson)染色和免疫荧光染色观察各组GVHD小鼠肝组织病理变化,并进一步用HE染色观察各组GVHD小鼠皮肤和肺组织病理变化。体外建立非条件性外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)向Th1细胞诱导方案,检测TNF-α+Th1细胞比例以及其Nrf2和磷酸化细胞核内核因子-κB(phosphorylated nuclear factor-kappa B,p-NF-κB)的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)。结果:与正常对照组相比,GVHD发病高峰组小鼠外周血和肝组织中TNF-α+Th1细胞比例和TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达明显升高(P学分析结果显示,肝脏中TNF-α+Th1细胞比例分别与Suzuki′s评分、胶原面积和α-SMA的MFI呈正相关(P学分析结果也显示,外周血中TNF-α+Th1细胞比例分别与皮肤的Cetkovic-Cvrlje评分和肺的Qiao Shukai评分呈正相关(P<0.001)。PBMCs活化实验也显示hPMSCs能下调TNF-α+Th1细胞比例(P<0.01),上调TNF-α+Th1细胞对PD-1的表达(P<0.05);进一步分析发现hPMSCs可增强TNF-α+Th1细胞中Nrf2的MFI(P<0.05),减弱p-NF-κB的MFI(P<0.01)。结论:hPMSCs可能通过CD73/Nrf2途径上调PD1的表达,抑制TNF-α+Th1细胞形成,进而减轻GVHD小鼠肝损伤。

关键词：人胎盘源间充质干细胞 Th1细胞 PD-1 CD73 Nrf2 NF-κB

新生SD大鼠原代海马组织中神经干细胞的培养和鉴定

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吉林大学学报（医学版） 2023年第3期49卷 795-801页

作者：张玲娣赵亮由涌许倩杨振军承德医学院人体解剖教研室河北承德067000 承德医学院药理学教研室河北承德067000 承德医学院免疫学教研室河北承德067000 承德医学院基础医学研究所河北承德067000

目的:观察原代海马组织中神经干细胞(NSCs)的形态表现和生长规律,为NSCs提取和培养提供依据。方法:提取新生SD大鼠海马组织中NSCs,观察海马组织中NSCs形态表现,流式细胞术检测海马组织中NSCs纯度,免疫荧光法检测NSCs中Nestin和EdU蛋白表... 详细信息

目的:观察原代海马组织中神经干细胞(NSCs)的形态表现和生长规律,为NSCs提取和培养提供依据。方法:提取新生SD大鼠海马组织中NSCs,观察海马组织中NSCs形态表现,流式细胞术检测海马组织中NSCs纯度,免疫荧光法检测NSCs中Nestin和EdU蛋白表达,细胞计数法和CCK-8法检测NSCs增殖活性。结果:培养第0天海马组织中NSCs以单细胞形式悬浮于培养基中;培养第2天海马组织中NSCs开始聚集成大小不等和形态不规则的细胞团块,悬浮生长;培养第8天神经球大小不一,呈圆形或椭圆形,边界清晰,无明显突起。培养第8天NSCs纯度为76.50%~85.40%。NSCs细胞质中Nestin阳性表达呈绿色,细胞核中EdU阳性表达呈红色,神经球为Nestin与EdU共染细胞构成。培养5~11 d,NSCs处于对数生长期,细胞增殖活性较高。结论:NSCs增殖能力强,培养至第8天时纯度较高,体外培养5~11 d时细胞增殖活性较高。

关键词：神经干细胞海马组织增殖活性生长曲线免疫荧光

IL-6通过促进人胎盘间充质干细胞上CD73的表达调节其迁移、黏附和增殖能力

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第12期42卷 940-948页

作者：张恒超赵楠楠张加深韩凯悦赵雅萱戚荣栾希英滨州医学院免疫学教研室烟台264003

目的探讨IL-6影响人胎盘间充质干细胞(human placenta-derived mesenchymal stem cells,hPMSCs)表面CD73的表达,以及调节其迁移、黏附和增殖的作用机制。方法流式细胞术(flow cytometry,FCM)和Western blot分析外源性IL-6和hPMSCs分泌的IL-6对hPMSCs上CD73表达的影响。单克隆抗体阻断和Western blot方法检测IL-6对hPMSCs中信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)磷酸化的影响。实时无标记动态细胞分析技术(real-time cellular analysis,RTCA)分析慢病毒转染后低表达CD73的hPMSCs和APCP(5′-α,β亚甲基-二磷酸腺苷)预处理后hPMSCs的迁移、黏附和增殖变化。结果FCM与Western blot检测结果显示,外源性和hPMSCs分泌的IL-6均能促进CD73在hPMSCs上的表达(P<0.001,P<0.01)。IL-6R抑制剂处理后,hPMSCs上CD73表达明显下降(P<0.01);IL-6可上调hPMSCs内STAT3磷酸化和CD73水平(P<0.05,P<0.01),而加入STAT3抑制剂后,CD73表达下降(P<0.01)。RTCA分析结果显示,敲低hPMSCs上CD73的表达后,hPMSCs的黏附和增殖能力均明显降低(P<0.01,P<0.05),迁移能力明显上升(P<0.05)。使用APCP抑制hPMSCs上CD73水解酶活性后,hPMSCs同样表现出黏附和增殖能力明显降低,而迁移能力增强(P<0.05)。结论IL-6能够通过JAK/STAT3通路增强hPMSCs上CD73的表达,进而影响其迁移、黏附和增殖能力。

关键词：间充质干细胞胎盘 IL-6 CD73 迁移黏附增殖

柴胡皂苷D通过Akt/mTOR通路调控胰腺癌Panc-1细胞凋亡及自噬

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中国中药杂志 2023年第19期48卷 5278-5284页

作者：关月宏刘桂梅刘雨思兰琳博郑蕊刘晓斌延安大学医学院免疫学教研室陕西延安716000

该研究旨在探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D)对胰腺癌Panc-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)测定7、10、13、16、19、22、25、28μmol·L^(-1)柴胡皂苷D对Panc-1细胞增殖活性的影响;分... 详细信息

该研究旨在探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D)对胰腺癌Panc-1细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)测定7、10、13、16、19、22、25、28μmol·L^(-1)柴胡皂苷D对Panc-1细胞增殖活性的影响;分别设置对照组(0μmol·L^(-1))、柴胡皂苷D低浓度组(10μmol·L^(-1))和柴胡皂苷D高浓度组(16μmol·L^(-1)),采用平板克隆形成实验检测柴胡皂苷D对Panc-1细胞克隆形成率的影响;采用苏木素-伊红(HE)染色观察柴胡皂苷D作用后细胞形态的变化;采用Hoechst 33258荧光染色检测柴胡皂苷D对细胞凋亡的影响;采用细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)检测柴胡皂苷D对细胞自噬的影响;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法和免疫细胞化学法检测柴胡皂苷D对B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、剪切的caspase-3(cleaved caspase-3)、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达水平及分布的影响。结果显示,与对照组相比,柴胡皂苷D显著抑制Panc-1细胞增殖,且呈时间和浓度依赖性;柴胡皂苷D作用后细胞克隆形成率显著降低。与对照组相比,柴胡皂苷D处理组细胞萎缩变小,并伴有凋亡小体形成;细胞凋亡率显著升高,自噬小泡堆积显著增多;Bax、cleaved caspase-3、Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的表达显著升高,Bcl-2、caspase-3、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR的表达显著降低,均主要分布在细胞质中。因此,柴胡皂苷D可通过抑制Akt/mTOR通路抑制胰腺癌Panc-1细胞增殖并诱导其凋亡及自噬。

关键词：柴胡皂苷D 胰腺癌凋亡自噬 Akt/mTOR

侧脑室注射促性腺激素抑制激素/RF酰胺相关肽-3对卵巢摘除术后补充雌激素大鼠子宫腔液影响的蛋白质组学分析

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解剖学报 2021年第4期52卷 499-505页

作者：赵雪莹司丽娜魏萌乔跃兵杨松鹤程露阳承德医学院免疫学教研室承德医学院人体解剖学与组织学胚胎学教研室河北承德067000

目的运用生物信息学方法分析侧脑室注射促性腺激素抑制激素(GnIH)/RF酰胺相关肽-3(RFRP-3)对卵巢摘除术补充雌激素(OEP)大鼠子宫腔液蛋白的影响,探索GnIH/RFRP-3影响子宫的分子机制。方法本研究通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术结... 详细信息

目的运用生物信息学方法分析侧脑室注射促性腺激素抑制激素(GnIH)/RF酰胺相关肽-3(RFRP-3)对卵巢摘除术补充雌激素(OEP)大鼠子宫腔液蛋白的影响,探索GnIH/RFRP-3影响子宫的分子机制。方法本研究通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术结合生物信息学分析侧脑室微量注射GnIH对OEP模型大鼠(n=30)子宫腔液蛋白的影响。比较侧脑室注射GnIH/RFRP-3实验组(n=15,给予2 g/L RFRP-3,16μl/kg)与生理盐水对照组(n=15,给予生理盐水16μl/kg) 6 h后子宫腔液的蛋白质组分,利用Uni Prot数据库筛选差异蛋白并对所得差异蛋白进行基因本体论(GO)富集分析和京都基因与基因百科全书(KEGG)通路分析。从STRING数据库获得蛋白相互作用数据,利用Cytoscape 3.7.1软件构建蛋白相互作用网络(PPI)并筛选中心节点蛋白。结果应用LC-MS/MS技术所得质谱数据利用Uni Prot数据库进行搜索鉴定,筛选出差异蛋白419个,其中279个上调,138个下调;GO功能富集分析显示,差异蛋白主要富集于对有机物质的反应,对内源性刺激的反应,对含氧化合物的反应等生物过程;KEGG通路分析显示,差异蛋白在糖酵解、碳代谢、肌动蛋白骨架调节、甲状腺激素合成等代谢途径富集(P<0.05);分析蛋白相互作用网络获得5个中心节点蛋白:白蛋白(Alb)、α-烯醇化酶1(Eno1)、过氧化物酶6(Prdx6)、组织型基质金属蛋白酶抑制剂1(Timp1)、Ras相关C3肉毒素底物1 (Rac1)。结论本实验结果提示,GnIH可能通过下丘脑-垂体生殖轴调节子宫腔液蛋白的分泌,并可能通过上调Alb、Eno1和Prdx6,下调Timp1和Rac1,调节子宫生理及病理过程。

关键词：促性腺激素释放激素子宫腔液卵巢摘除术补充雌激素生物信息学大鼠

小鼠Skint6基因突变对脾脏淋巴细胞亚群的影响

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中国免疫学杂志 2022年第13期38卷 1544-1549页

作者：王惠战倩穆高航李秀峰王艺璇徐志伟(指导) 鞠吉雨(指导) 潍坊医学院免疫学教研室潍坊261053

目的:制备Skint6基因突变小鼠模型,探究Skint6基因突变对小鼠脾脏各淋巴细胞亚群的影响。方法:利用CRISPR/Cas9技术定点突变小鼠Skint6基因,高分辨率熔解曲线(HRM)和DNA测序鉴定Skint6基因突变小鼠(B6-Skint6^(M));取6月龄B6-WT小鼠和B6... 详细信息

目的:制备Skint6基因突变小鼠模型,探究Skint6基因突变对小鼠脾脏各淋巴细胞亚群的影响。方法:利用CRISPR/Cas9技术定点突变小鼠Skint6基因,高分辨率熔解曲线(HRM)和DNA测序鉴定Skint6基因突变小鼠(B6-Skint6^(M));取6月龄B6-WT小鼠和B6-Skint6^(M)小鼠,qRT-PCR检测小鼠皮肤Skint6基因mRNA水平,考马斯亮蓝G-250法测定小鼠尿蛋白水平;计算小鼠体质量、脾脏指数和总细胞数并通过流式细胞术(FACS)检测其脾脏中各淋巴细胞亚群比例并计算细胞绝对数。结果:DNA测序结果显示B6-Skint6^(M)小鼠模型制备成功;qRT-PCR结果表明Skint6基因突变不影响皮肤Skint6 mRNA表达。B6-Skint6^(M)小鼠尿蛋白含量明显高于B6-WT小鼠(P0.05)。FACS结果表明,与B6-WT组小鼠相比,B6-Skint6^(M)小鼠脾脏细胞数及淋巴细胞数明显增多(P免疫功能紊乱。

关键词：系统性红斑狼疮 Skint6基因淋巴细胞亚群

Ⅰ型干扰素应答基因与类风湿关节炎生物制剂疗效

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中国免疫学杂志 2022年第7期38卷 883-887页

作者：吕明华王宁胡志芳张典郭娜(指导) 西安医学院免疫学教研室西安710021

类风湿关节炎(RA)发生发展与TNF-α、IL-6、B细胞和T细胞密切相关。基于TNF-α、IL-6和T、B细胞表面标志分子的生物制剂治疗RA取得了显著成效,但仍有部分RA患者不应答。近年研究发现,Ⅰ型干扰素及其信号通路在RA患者生物制剂治疗应答中... 详细信息

类风湿关节炎(RA)发生发展与TNF-α、IL-6、B细胞和T细胞密切相关。基于TNF-α、IL-6和T、B细胞表面标志分子的生物制剂治疗RA取得了显著成效,但仍有部分RA患者不应答。近年研究发现,Ⅰ型干扰素及其信号通路在RA患者生物制剂治疗应答中发挥作用。本文综述不同生物制剂治疗RA患者的应答情况以及Ⅰ型干扰素应答基因与生物制剂疗效的关系,探讨浆细胞样树突状细胞(pDC)对Ⅰ型干扰素应答基因表达的影响,为改善RA患者对生物制剂不敏感提供新思路。

关键词：类风湿关节炎生物制剂 Ⅰ型干扰素应答基因浆细胞样树突状细胞

基于Bcl-2/Beclin-1复合体探讨黄连素对脑缺血再灌注损伤大鼠模型的保护作用

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中国实验动物学报 2019年第5期27卷 651-657页

作者：丁实赵学荣李宝群赵亮周健毕红东庞冲郭娜娜承德医学院药理学教研室承德067000 承德医学院免疫学教研室承德067000

目的基于B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)/Beclin-1复合体研究黄连素对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法 SPF级SD大鼠108只,按照随机数字表法分为假手术组(sham组)、模型组(I/R)、黄连素低、中、高剂量组(BBR-L、BBR-M、BBR-H),... 详细信息

目的基于B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)/Beclin-1复合体研究黄连素对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法 SPF级SD大鼠108只,按照随机数字表法分为假手术组(sham组)、模型组(I/R)、黄连素低、中、高剂量组(BBR-L、BBR-M、BBR-H),尼莫地平预处理组(NMDP组),造模后对大鼠进行神经功能评分;TTC染色观察大鼠脑梗死面积;HE染色观察大鼠脑组织病理学变化;RT-PCR法检测脑组织中Bcl-2、caspase-3、Bax mRNA的表达;Western blot检测脑皮质中Bcl-2、caspase-3、Bax、Beclin-1蛋白表达水平。结果 I/R组 6、24、48 h3个时间点的神经功能评分均显著高于Sham组,24 h的神经功能评分最高;与模型组比较,BBR处理组和NMDP组24、48 h的神经功能缺损评分显著降低( P<0.05);与Sham组比较,I/R组梗死面积百分比、细胞坏死比例显著升高,与I/R组比较,BBR治疗组和NMDP组显著减少( P<0.05);与Sham组比较,I/R组Bcl-2、caspase-3、Bax mRNA和蛋白水平均显著升高;与I/R组比较,BBR治疗组和NMDP组Bcl-2 mRNA和蛋白水平均显著升高,caspase-3、Bax mRNA和蛋白水平均显著降低;与Sham组比较,I/R组Bcl-2/Bax比值显著降低;与I/R组比较,各治疗组Bcl-2/Bax比值均显著上升,且呈剂量依赖性升高;与Sham组比较,I/R组Beclin-1蛋白水平及Bcl-2/Beclin-1比值升高( P<0.05);与I/R组比较,BBR组和NMDP组Beclin-1蛋白水平显著升高( P<0.05),Bcl-2/Beclin-1比值均降低,且BBR-M组、BBR-H组、NMDP组Bcl-2/Beclin-1无显著差异。结论黄连素对大鼠脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用,其可通过调节自噬蛋白与凋亡蛋白的水平,使自噬达到合适水平,发挥神经保护作用。

关键词： SD大鼠 Bcl-2 Beclin-1 脑缺血再灌注