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雷公藤内酯醇对肝细胞色素P450的诱导及机制研究

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中国药理学通报 2017年第3期33卷 366-372页

作者：虞茜万子衿朱燕萍徐海荣廖凯刘峰李巍扬州大学医学院江苏省中西医结合老年病防治重点实验室江苏扬州225001

目的探索雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对肝细胞中细胞色素P450(CYPs)的诱导及可能机制。方法 TP处理大鼠原代肝细胞或Hep G2细胞后,采用实时定量PCR和Western blot等方法检测CYPs的表达水平变化,并结合特异性抑制剂或基因敲低的方法分... 详细信息

目的探索雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对肝细胞中细胞色素P450(CYPs)的诱导及可能机制。方法 TP处理大鼠原代肝细胞或Hep G2细胞后,采用实时定量PCR和Western blot等方法检测CYPs的表达水平变化,并结合特异性抑制剂或基因敲低的方法分析TP诱导CYPs的可能机制。结果 TP能够分别诱导大鼠CYP1A2、2C7、2C11、2C12、2D2、2E1和3A1的mRNA表达,50 nmol·L^(-1)时诱导倍数分别为18.5、2.2、31.2、3.2、21.5、88.3、34.0;100 nmol·L^(-1)时诱导倍数分别为20.3、4.6、29.6、23.1、61.1、83.0、38.5。HepG2细胞中人CYP1A1、2B6、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4也被TP诱导。大鼠原代肝细胞内核受体PXR和CAR的活性被TP下调;TP可上调肝细胞内p53的蛋白水平,p53活性抑制后TP对部分CYPs的诱导作用受到抑制。结论 TP可在肝细胞水平诱导CYPs表达,该诱导作用可能不通过核受体,p53可能参与了TP对部分CYPs的诱导作用。

关键词：雷公藤内酯醇细胞色素P450 核受体 p53 肝细胞 HepG2

雌激素化小鼠感染普雷沃菌引起细菌性阴道病的模型研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第6期36卷 423-426页

作者：焦红梅赵丹陈红菊严华季明春李国才江苏省中西医结合老年病防治重点实验室扬州大学医学院225001

目的：利用雌激素化小鼠构建普雷沃菌（ Prevotella）感染引起细菌性阴道病（ bacterial vaginosis, BV）的动物模型。方法17β-戊酸雌二醇芝麻油溶液腹腔注射小鼠,然后用对数期普雷沃菌稀释液定量接种小鼠阴道,于不同时间点取小鼠阴道... 详细信息

目的：利用雌激素化小鼠构建普雷沃菌（ Prevotella）感染引起细菌性阴道病（ bacterial vaginosis, BV）的动物模型。方法17β-戊酸雌二醇芝麻油溶液腹腔注射小鼠,然后用对数期普雷沃菌稀释液定量接种小鼠阴道,于不同时间点取小鼠阴道洗液分离培养普雷沃菌,并测定洗液中唾液酸酶活性；接种后2 d、7 d和21 d分别扑杀10只小鼠,取子宫角、膀胱和肾脏,匀浆后分离培养普雷沃菌。结果普雷沃菌可在雌激素化小鼠阴道中感染14 d以上,21 d时可观察到分离菌数的明显下降；感染小鼠阴道分泌物中唾液酸酶活性明显增高,并可查见线索细胞；高剂量感染时细菌可扩散到小鼠子宫角。结论雌激素化小鼠可作为BV 的一种实验动物模型。

关键词：细菌性阴道病普雷沃菌 17β-戊酸雌二醇唾液酸酶活性小鼠模型

络石内生菌Myrothecium roridum产生的一个新单端孢霉烯大环内酯

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药学学报 2024年第10期59卷 2889-2893页

作者：韩旭李晓雯张凤方蕾申丽扬州大学医学院江苏扬州225009 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室江苏扬州225009

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及高效液相色谱法从络石(Trachelospermum jasminoides)内生菌Myrothecium roridum IFB-E008发酵液的粗浸膏中分离得到3个化合物。经高分辨质谱、一维和二维核磁共振谱及文献比对等方法,鉴定... 详细信息

采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱以及高效液相色谱法从络石(Trachelospermum jasminoides)内生菌Myrothecium roridum IFB-E008发酵液的粗浸膏中分离得到3个化合物。经高分辨质谱、一维和二维核磁共振谱及文献比对等方法,鉴定为:3′-iso-isororidin A(1)、verrol(2)和N-乙酰色胺(3),其中,3′-iso-isororidin A(1)是一个未见文献报道的新单端孢霉烯大环内酯。体外细胞毒活性测定表明,化合物2对人胃癌细胞株SGC-7901具有一定的抑制活性,半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC_(50))为59.79μg·m L^(-1)(158.1μmol·L^(-1)),阳性对照顺铂的IC_(50)值为6.58μg·m L^(-1)(21.9μmol·L^(-1))。

关键词：络石内生菌 Myrothecium roridum 次生代谢产物单端孢霉烯

orchinol对胃癌SGC-7901细胞侵袭迁移和Wnt3a/β-catenin信号通路的影响

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中国中药杂志 2018年第23期43卷 4718-4723页

作者：凌涛王委胡琛严鑫许雨婷唐淳寇玉刘量扬州大学医学院(转化医学研究院)江苏省中西医结合老年病防治重点实验室

研究中药绶草中分离得到的主要的9,10-二氢菲类单体化合物orchinol对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的抑制作用及初步的分子机制。体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别加入终浓度为5,10,20,40,80μmol·L-1的orchinol处理细胞24,48,72 h,采... 详细信息

研究中药绶草中分离得到的主要的9,10-二氢菲类单体化合物orchinol对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的抑制作用及初步的分子机制。体外培养人胃癌SGC-7901细胞,分别加入终浓度为5,10,20,40,80μmol·L-1的orchinol处理细胞24,48,72 h,采用MTT法检测orchinol对SGC-7901细胞活力的影响;利用伤口愈合实验、Transwell实验分别分析5,10,20μmol·L^-1orchinol作用48 h后对SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力的影响;Western blot法检测orchinol对SGC-7901细胞β-catenin,Wnt-3a,DvL2,cyclinD1,GSK-3β蛋白表达水平的影响。结果显示,orchinol在5~80μmol·L^-1能以剂量和时间依赖性的方式抑制SGC-7901细胞的活力,orchinol分别处理细胞24,48,72 h后,其对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为77.79,42.96,7.85μmol·L^-1;与对照组相比,5,10,20μmol·L^-1orchinol作用48 h,可明显抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移的能力(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖关系;Western blot结果显示,orchinol可显著下调β-catenin,Wnt3a,DvL2,cyclinD1蛋白、显著上调GSK-3β蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。以上结果提示orchinol能显著抑制SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,其机制可能是与orchinol抑制Wnt3a/β-catenin信号通路及下游基因蛋白的表达有关。

关键词：绶草 orchinol 人胃癌SGC-7901细胞迁移侵袭 Wnt3a/β-catenin信号通路

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手参化学成分及神经保护活性研究

中草药 2024年第23期55卷 7923-7931页

作者：秦娟薛诗意王建斌袁海恋刘量扬州大学医学院(转化医学研究院) 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室

目的对手参Gymnadenia conopsea块茎的化学成分进行研究，并评价其神经保护作用。方法采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和半制备HPLC等手段进行分离纯化，通过理化性质、波谱数据和单晶X-射线衍射鉴定化合物的结构。... 详细信息

目的对手参Gymnadenia conopsea块茎的化学成分进行研究，并评价其神经保护作用。方法采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱和半制备HPLC等手段进行分离纯化，通过理化性质、波谱数据和单晶X-射线衍射鉴定化合物的结构。同时，评价化合物对氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）损伤的PC12细胞的保护作用。结果从手参乙醇提取物中分离得到7个化合物，被鉴定为（2R,3R,4S,5S,7S,8S,9S）-2,3,8,9-四羟基-7-甲基-五氧杂四环[6.***.2.04,5.07,8]十六烷（1）、（5S）-5-（羟基甲基）-4-[（E）-[5′-（羟基甲基）呋喃-2′-基]甲亚基]-2-[（Z）-（4′′-羟基苯基）甲亚基]四氢呋喃-3-酮（2）、5-羟甲基糠醛（3）、双-（5-甲酰基糠基）醚（4）、pollenfuran A（5）、pollenfuran B（6）、5-(（4-O-β-D-吡喃葡萄糖基苄氧基）甲基)-呋喃-2-甲醛（7）。与OGD/R组相比，化合物1～2、4和7在1.062 5～50μmol/L的浓度范围内能显著提高PC12细胞活力。结论化合物1和2为新化合物，分别命名为手参环醇和手参呋喃B；化合物4～7首次从手参属中分离得到。化合物1～2、4和7具有神经保护活性。

关键词：手参手参环醇手参呋喃B 双-(5-甲酰基糠基)醚神经保护活性 PC12细胞

苦参总黄酮改善非酒精性脂肪肝的作用机制及斑马鱼实验验证

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中国组织工程研究 2025年第14期29卷 2969-2978页

作者：古玉凤邓丙英李倪仁曾译萱鲁思凡朱晨陈磊刘怡南方医科大学中医药学院广东省广州市510510 广州中医药大学第二附属医院药学部广东省广州市510120 广东药科大学中药学院广东省广州市510006 广东省中药制剂重点实验室广东省广州市510515 广东省中西医结合防治情志病基础研究卓越中心广东省广州市510515

背景:苦参总黄酮具有抗炎、调节免疫、抗氧化、抗肝损伤等多种药理作用,其对非酒精性脂肪肝的治疗效果和作用机制尚不明确。目的:利用生物信息学、网络药理学方法及斑马鱼实验验证苦参总黄酮治疗非酒精性脂肪肝的作用机制。方法:构建非... 详细信息

背景:苦参总黄酮具有抗炎、调节免疫、抗氧化、抗肝损伤等多种药理作用,其对非酒精性脂肪肝的治疗效果和作用机制尚不明确。目的:利用生物信息学、网络药理学方法及斑马鱼实验验证苦参总黄酮治疗非酒精性脂肪肝的作用机制。方法:构建非酒精性脂肪肝斑马鱼模型,观察苦参总黄酮治疗后斑马鱼肝脏脂质累积情况、病理形态改变,以及脂质累积、炎症基因的表达变化。通过TCMSP、Swiss Target Prediction、Bat-man数据库获取苦参总黄酮活性成分与非酒精性脂肪肝相关靶点;利用STRING数据库进行蛋白互作网络分析,GO功能富集和KEGG通路富集分析。基于GSE33814数据集,筛选出“苦参总黄酮-非酒精性脂肪肝”交集靶点的差异表达基因并运用R4.3.2软件进行相关性分析、受试者操作特征曲线分析,通过验证集GSE89632验证核心基因;RT-qPCR和Western blot实验验证核心通路相关基因和蛋白表达。结果与结论:①苦参总黄酮能够改善非酒精性脂肪肝斑马鱼肝脏脂质累积,显著抑制斑马鱼脂质和转氨酶水平的升高(P实验结果表明苦参总黄酮能够抑制非酒精性脂肪肝斑马鱼JAK2/STAT3信号通路的激活。以上结果表明,苦参总黄酮通过调节JAK2/STAT3信号通路减轻炎性反应,抑制脂质累积从而改善非酒精性脂肪肝。

关键词：苦参总黄酮非酒精性脂肪肝斑马鱼网络药理学生物信息学 JAK2 STAT3

小鼠结直肠癌半脾肝转移模型用于Hippo信号通路的研究

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肿瘤 2019年第8期39卷 616-622,640页

作者：乔大伟张蕾李玉芳李胜男肖云姜礼双董小耘孔桂美卜平扬州大学医学院江苏扬州225001 扬州大学江苏省中西医结合老年病重点防治实验室江苏扬州225001

目的:应用小鼠结直肠癌半脾切除肝转移模型研究Hippo信号通路的作用。方法:20只BALB/c小鼠随机分为假手术组和实验组。假手术组将小鼠开腹后关腹,实验组将小鼠结肠腺癌CT26细胞注入脾的下极后切除,建立肝转移模型。7 d后小鼠处死并解剖... 详细信息

目的:应用小鼠结直肠癌半脾切除肝转移模型研究Hippo信号通路的作用。方法:20只BALB/c小鼠随机分为假手术组和实验组。假手术组将小鼠开腹后关腹,实验组将小鼠结肠腺癌CT26细胞注入脾的下极后切除,建立肝转移模型。7 d后小鼠处死并解剖。ELISA法检测小鼠眼球血中肾上腺素(epinephrine,EPI)、胰高血糖素(glucagon,GC)、溶血磷脂酸(lysobisphosphatidic acids,LPA)和1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1phosphate,S1P)的含量;HE染色结果确定脾半切除肝移植瘤造模成功,免疫组织化学法对Yes相关蛋白1(yes-associated protein 1,YAP1)和磷酸化YAP1(phospho-yes-associated protein 1,p-YAP1)进行定位,蛋白质印迹法检测肝组织中YAP1和p-YAP1的表达水平。结果:小鼠结直肠癌半脾切除模型建立7 d后肝转移率为100%;假手术组血浆中EPI与GC的含量均明显高于实验组(P值均实验组小鼠血浆中LPA与S1P的含量均明显高于假手术组(P值均实验组肝组织HE染色结果显示典型的低分化腺癌特征,有核分裂现象。假手术组正常肝组织中YAP1蛋白表达在细胞质中[细胞核YAP1(-),细胞质YAP1(+)],p-YAP1蛋白在细胞质和细胞核中均有表达[细胞核p-YAP1(+),细胞质p-YAP1(+)];实验组肝肿瘤组织中YAP1蛋白在细胞质和细胞核中均有表达[细胞核p-YAP1(+),细胞质p-YAP1(+)],p-YAP1蛋白在细胞核与细胞质中均未见表达[细胞核p-YAP1(-),细胞质p-YAP1(-)]。YAP1在实验组肝肿瘤组织中的表达水平明显高于假手术组(P 实验组肝肿瘤组织中的表达水平明显低于假手术组(P <0.01)。结论:成功建立结直肠癌肝转移模型,并发现EPI、GC与YAP1表达呈负相关,与p-YAP1表达呈正相关,LPA、S1P与YAP1呈正相关,与p-YAP1呈负相关。有望开发针对Hippo信号通路相关血清因子调节剂,进行靶向治疗研究。

关键词：结直肠肿瘤肿瘤转移模型,动物 Hippo信号通路

六君子合旋覆代赭汤对反流性食管炎大鼠食管Cajal间质细胞及干细胞因子/c-kit通道的影响

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中国中西医结合杂志 2019年第6期39卷 716-722页

作者：陈健海乔大伟李玉芳肖云姜礼双崔亚仲婕张蕾孔桂美卜平扬州大学医学院江苏225000 江苏省中西医结合老年病防治重点实验室江苏225000

目的研究六君子合旋覆代赭汤对反流性食管炎(reflux esophagitis,RE)大鼠食管Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)及干细胞因子(stem cell factor,SCF)/c-kit通道的影响。方法采用幽门半结扎+前胃结扎+大黄灌胃法建立RE脾... 详细信息

目的研究六君子合旋覆代赭汤对反流性食管炎(reflux esophagitis,RE)大鼠食管Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)及干细胞因子(stem cell factor,SCF)/c-kit通道的影响。方法采用幽门半结扎+前胃结扎+大黄灌胃法建立RE脾虚证大鼠模型,造模成功35只Wistar大鼠随机分为模型组、西药组、中药高、中、低剂量组共5组,每组7只,另设正常组10只。西药组予以雷贝拉唑+莫沙比利混悬液灌胃;中药高、中、低剂量3组分别给予六君子合旋覆代赭汤高、中、低剂量灌胃;连续给药14天,1 mL/只,1次/天;正常组以及模型组予以等量生理盐水灌胃。第15天取大鼠下段食管组织,利用透射电镜观察ICC超微结构、 Western blot法检测c-kit及SCF蛋白含量以及RT-PCR法检测c-kit和SCF mRNA相对表达量。结果与模型组比较,各治疗组ICC细胞形态结构改善,与周围细胞之间缝隙连接较紧密。与正常组比较,模型组c-kit、SCF蛋白含量及c-kit mRNA、SCF mRNA相对表达水平显著降低(P0.05),其余各治疗组均较模型组显著升高(P0.05),但中药高剂量组c-kit、SCF蛋白含量及c-kit mRNA、SCF mRNA相对表达水平明显高于低剂量组(P<0.05,P<0.01)。结论六君子合旋覆代赭汤通过促进c-kit、SCF mRNA及其蛋白的表达,能够使受损的ICC恢复正常。

关键词：反流性食管炎六君子合旋覆代赭汤 Cajal间质细胞干细胞因子/c-kit信号通道

栝楼瞿麦汤干预糖尿病肾病大鼠P38MAPK炎症信号通路机制

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南京中医药大学学报 2017年第1期33卷 59-64页

作者：惠晓丹朱虹张昊悦孙峰赵蓓扬州大学临床医学院江苏省中西医结合老年病防治重点实验室江苏扬州225000

目的研究栝楼瞿麦汤干预糖尿病肾病大鼠p38MAPK炎症信号通路的机制,探讨其对糖尿病肾病的作用机制及治疗效果。方法通过对SD大鼠采用单侧肾切除及一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法构建大鼠糖尿病肾病(DN)模型。造模成功后,随机分为... 详细信息

目的研究栝楼瞿麦汤干预糖尿病肾病大鼠p38MAPK炎症信号通路的机制,探讨其对糖尿病肾病的作用机制及治疗效果。方法通过对SD大鼠采用单侧肾切除及一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法构建大鼠糖尿病肾病(DN)模型。造模成功后,随机分为:DN模型组,栝楼瞿麦汤高、中、低剂量组,阳性药物(缬沙坦)组,另设正常组。治疗组从实验开始第4周起,栝楼瞿麦汤高、中、低剂量组分别以5.6、2.8、1.4g/kg ig,缬沙坦4.8×10^(-3) g/kg ig,正常组及模型组均给予2.8g/kg蒸馏水ig,每日1次,连续12周。于末次给药12h后,剖杀取大鼠肾组织。观察大鼠一般情况;光镜观察大鼠肾小球、肾小管组织结构变化;ELISA检测大鼠肾组织中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素生长因子(IGF)及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量;Western blot法检测大鼠肾组织p-p38、p-CREB、FN蛋白表达情况。逆转录聚合酶链反应(qPCR)法检测大鼠肾组织FNmRNA基因表达情况。结果 DN模型组大鼠与正常组大鼠比较,肾组织出现明显的病理变化,肾组织中bFGF、IGF、MCP-1含量显著升高(P<0.01);p-p38MAPK、p-CREB、FN蛋白表达水平显著上调(P<0.05);FNmRNA基因表达水平显著上升(P<0.05)。经栝楼瞿麦汤干预后,各治疗组与DN模型组比较,肾组织病理变化有不同程度的改善;肾组织中bFGF、IGF、MCP-1含量有不同程度的减少,差异具有统计学意义(P<0.05~0.01);肾组织中p-p38MAPK、p-CREB、FN蛋白表达水平下调;FNmRNA基因表达水平下调,差异具有统计学意义(P<0.05~0.01)。结论栝楼瞿麦汤能通过抑制DN大鼠肾组织中p38MAPK炎症信号通路的激活,使损伤的组织得以修复,从而延缓DN的病理进程。

关键词：糖尿病肾病栝楼瞿麦汤 p38MAPK通路 bFGF IGF MCP-1