检索结果-南通市图书馆

检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法的建立及初步应用

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2024年

作者：万志敏龚简汐赵喆泓汤婷李亚锋谢泉李拓凡邵红霞秦爱建叶建强扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州大学农业科技发展研究院(国际联合实验室) 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室

为建立快速检测H6亚型禽流感病毒的血清学方法，试验利用前期制备的两株抗H6亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体，建立检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法，并进行特异性、灵敏度、稳定性试验以及对活禽市场采集的48份咽拭子样品... 详细信息

为建立快速检测H6亚型禽流感病毒的血清学方法，试验利用前期制备的两株抗H6亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体，建立检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法，并进行特异性、灵敏度、稳定性试验以及对活禽市场采集的48份咽拭子样品的检测效果。结果显示：该ELISA方法只与H6亚型禽流感病毒反应，而与H1、H3、H4、H5、H7、H9、H10、H12等其他亚型禽流感病毒，血清4型禽腺病毒、血清8b型禽腺病毒、血清3型鸭腺病毒、传染性支气管炎病毒、新城疫病毒、鹅星状病毒、小鹅瘟病毒、传染性法氏囊病病毒以及禽白血病病毒均无交叉反应；该ELSIA方法可检测2.32×10～4 TCID50/mL H6亚型禽流感病毒，批间和批内重复试验变异系数均小于10%；该ELISA方法和RT-PCR方法对活禽市场采集的48份咽拭子样品检测结果一致，进一步检测攻毒鸡的咽拭子显示该方法可有效检测咽拭子中H6亚型禽流感病毒。研究表明，基于两株单克隆抗体建立的检测H6亚型禽流感病毒的双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏度高的特点，适用于H6亚型禽流感病毒感染的临床检测。

关键词： H6亚型禽流感病毒单克隆抗体血凝素蛋白双抗体夹心ELISA

血清4型禽腺病毒Fiber蛋白的原核表达及其在抗体检测中的应用

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2024年第7期46卷 51-59页

作者：王圆梦王伟康李拓凡万志敏邵红霞秦爱建叶建强谢泉扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学农业科技发展研究院江苏扬州225009 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

为建立特异的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)血清学抗体检测技术,试验将FAdV-4纤突蛋白基因fiber-2克隆至载体pET-28a中,构建原核表达载体pET-28a-Fiber-2,获得纯化的重组蛋白His-Fiber-2,以纯化的His-Fiber-2作为包被抗原建立检测Fiber-2抗... 详细信息

为建立特异的血清4型禽腺病毒(FAdV-4)血清学抗体检测技术,试验将FAdV-4纤突蛋白基因fiber-2克隆至载体pET-28a中,构建原核表达载体pET-28a-Fiber-2,获得纯化的重组蛋白His-Fiber-2,以纯化的His-Fiber-2作为包被抗原建立检测Fiber-2抗体的间接ELISA方法,对该方法进行特异性、重复性、稳定性、灵敏性试验,并与BioChek FAdV商品化ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果显示:建立的ELISA仅与抗FAdV-4阳性鸡血清发生反应,与检测的抗其他病原的血清以及SPF鸡血清均无反应性,批间重复性与批内重复性良好,其变异系数分别在4.345%~6.983%和4.326%~9.391%之间,包被酶标板保存12个月后,变异系数为4.4%~10.0%,其检测灵敏度是间接免疫荧光检测技术的8~32倍,是基于包被GST-Fiber-2蛋白ELISA的2倍;建立的ELISA对FAdV-4灭活疫苗免疫的鸡血清检出率高于BioChek试剂盒,两者对临床感染FAdV-4的鸡血清的检测结果一致。研究表明,试验构建的基于重组蛋白His-Fiber-2的检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法为临床上FAdV-4感染监测以及疫苗的免疫评价提供了技术,具有良好的应用前景。

关键词：血清4型禽腺病毒原核表达间接ELISA 抗体检测

表达鸡传染性贫血病毒VP1蛋白的新型重组血清4型禽腺病毒的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2024年第4期46卷 47-53页

作者：徐贞琦蒋蕙如郭艺文谢泉殷楠李拓凡万志敏邵红霞秦爱建张俊叶建强扬州大学兽医学院禽类预防医学教育部重点实验室江苏省动物预防医学重点实验室江苏扬州225009 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 扬州大学农业科技发展研究院江苏扬州225009 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光... 详细信息

为研制新型鸡传染性贫血(CIA)高效疫苗以解决国内商品鸡群中普遍存在的鸡传染性贫血病毒(CIAV)感染问题,试验利用CRISPR-Cas9技术和Cre-LoxP系统,以血清4型禽腺病毒(FAdV-4)为载体,构建表达CIAV VP1蛋白的重组FAdV-4。通过间接免疫荧光试验和蛋白免疫印迹试验对重组病毒进行验证,通过体外病毒生长曲线来研究其复制效率。结果显示:该重组病毒构建成功,能有效表达CIAV VP1蛋白,命名为rFAdV-4-CIAV-VP1,且发现rFAdV-4-CIAV-VP1在LMH细胞中的复制效率远低于野生型FAdV-4。研究表明构建的重组病毒rFAdV-4-CIAV-VP1为CIAV和FAdV-4的联防联控提供了二联候选疫苗株。

关键词：鸡传染性贫血病毒 VP1蛋白 CRISPR-Cas9 重组血清4型禽腺病毒表达

2021—2022年我国鸡马立克病的流行病学调查

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2024年第3期54卷 344-349页

作者：丁天吴少鹏熊敏蒲兴王顷森许默儒邵红霞钱琨叶建强党海斌秦爱建扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室江苏扬州225009 南昌勃林格格翰动物保健有限公司江西南昌330000 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

为了解我国规模化养殖场中马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)的感染和免疫状态,采用四重TaqMan探针荧光定量PCR对采自我国11个省(自治区、直辖市)的19个养殖企业的94个鸡群的羽毛囊和环境样本进行MDV疫苗毒和野毒检测。结果显示... 详细信息

为了解我国规模化养殖场中马立克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)的感染和免疫状态,采用四重TaqMan探针荧光定量PCR对采自我国11个省(自治区、直辖市)的19个养殖企业的94个鸡群的羽毛囊和环境样本进行MDV疫苗毒和野毒检测。结果显示,大部分养殖场存在野毒感染,其中山东地区样本平均阳性率较高为13.6%。不同省市白羽肉鸡、黄羽肉鸡和蛋鸡样本的野毒平均阳性率分别为8.3%、3.9%和7.2%。在不同日龄蛋鸡样本中,1~7、8~14和50~80日龄野毒阳性率较高,分别为12.6%、13.8%和14.3%。此外,单独免疫CVI988疫苗或以火鸡疱疹病毒(HVT)为载体的基因工程重组疫苗(rHVT)以及同时免疫这两种疫苗,均能降低MDV野毒的阳性率,且同时免疫两种疫苗鸡群的野毒阳性率最低。对不同免疫方式下疫苗在羽毛囊中复制情况的检测结果显示,在3~4周龄时,单独免疫CVI988疫苗的平均阳性率为91.4%,单独免疫rHVT疫苗的平均阳性率为58.2%,同时免疫两种疫苗时,CVI988疫苗和rHVT疫苗的平均阳性率分别为51.8%和36.9%,提示鸡场应切实做好马立克病的防控工作。本研究丰富了对MDV感染现状的新认识,为我国未来马立克病的防控提供了指导。

关键词：马立克病流行病学调查四重荧光定量PCR

猪德尔塔冠状病毒感染新生仔猪的肠道病理及超微结构变化分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农业生物技术学报 2024年第7期32卷 1471-1482页

作者：侯宇辰曹亚男杜小妹靳俪雅陈振海吴正常包文斌张帅扬州大学兽医学院扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州大学教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)是近年来新发的猪肠道冠状病毒，给养猪业造成了巨大的经济损失。为了解PDCoV感染新生仔猪(Sus scrofa domesticus)的致病性及肠道的病理超微结构变化，本研究对1日龄新生仔猪攻毒PDC... 详细信息

猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)是近年来新发的猪肠道冠状病毒，给养猪业造成了巨大的经济损失。为了解PDCoV感染新生仔猪(Sus scrofa domesticus)的致病性及肠道的病理超微结构变化，本研究对1日龄新生仔猪攻毒PDCoV CHN-GD16-05毒株后的临床表现、剖检与组织病理学变化、组织嗜性、肠道超微结构变化进行观察及分析。结果发现，新生仔猪攻毒PDCoV后第3天出现严重呕吐、腹泻、精神萎靡、嗜睡等临床症状；剖检发现，攻毒仔猪肠道胀气，肠管扩张，肠壁出血变薄甚至透明，肠腔内积聚黄色液体；PDCoV主要感染仔猪的十二指肠、空肠和回肠；荧光定量PCR和蛋白免疫印迹结果显示，空肠中PDCoV核衣壳蛋白(nucleocapsid, N)基因及其蛋白水平均极显著高于十二指肠和回肠(P<0.01)；进一步空肠组织切片的苏木精伊红染色结果显示，PDCoV感染后破坏肠绒毛结构，引起弥漫性的肠绒毛萎缩甚至融合，隐窝上皮细胞增殖及隐窝深度增加；电镜观察也发现PDCoV感染后的仔猪肠绒毛萎缩，肠上皮细胞的微绒毛断裂脱落，细胞间紧密连接被破坏，胞质空泡状细胞增多，线粒体数目减少且体积增大；此外，PDCoV感染刺激宿主的抗病毒相关基因表达，促进干扰素α (interferon α, IFN-α)、IFN-β、IFN-λ和其下游干扰素刺激基因黏病毒抗性蛋白1 (myxovirus resistance 1, MX-1)、干扰素刺激基因15 (interferon-stimulating gene 15, ISG-15)、干扰素诱导的四肽重复蛋白1 (interferon induced protein with tetratricopeptide repeats 1, IFIT1)、2'-5'-寡腺苷酸合成酶1 (2'-5'-oligoadenylate synthetase 1, OAS1)、2'-5'寡腺苷酸合成酶样蛋白(2'-5'-oligoadenylate synthetase like, OASL)及炎症因子肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor α, TNF-α)、白细胞介素1β (interleukin 1β, IL-1β)、IL-6、C-C基序趋化因子配体20 (C-C motif chemokine ligand 20, CCL-20)基因的表达。以上结果表明，PDCoV感染新生仔猪后能够迅速入侵小肠，尤其在空肠上皮细胞中大量复制，导致感染的肠上皮细胞变性坏死进而引起肠绒毛萎缩，造成渗透性腹泻。本研究为阐明PDCoV感染仔猪的致病机制提供理论基础。

关键词：猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) 新生仔猪肠道超微结构

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

沙门菌调控NOD样受体机制的研究进展

中国兽医学报 2024年第2期44卷 396-402页

作者：许辰孟闯焦新安潘志明扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室江苏扬州225009 扬州大学农业农村部农产品质量安全生物性危害因子(动物源)控制重点实验室江苏扬州225009

沙门菌作为一种重要食源性病原菌,可广泛感染动物和人,严重威胁宿主健康。沙门菌入侵时,首先与宿主天然吞噬细胞等的模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)结合并激活天然免疫应答。NOD样受体(NOD-like receptors,NLR)作为一... 详细信息

沙门菌作为一种重要食源性病原菌,可广泛感染动物和人,严重威胁宿主健康。沙门菌入侵时,首先与宿主天然吞噬细胞等的模式识别受体(pattern recognition receptor,PRR)结合并激活天然免疫应答。NOD样受体(NOD-like receptors,NLR)作为一种细胞质PRR,在病原体感染和肿瘤免疫中发挥重要作用。NLR可被沙门菌鞭毛、分泌蛋白、LPS等多种毒力因子激活,组装炎性小体促进细胞分泌多种细胞因子抵御感染。而沙门菌也进化出多种机制如修饰鞭毛、细胞内形成带菌囊泡(Salmonella-containing vacuole,SCV)和分泌蛋白等阻止受体识别从而实现免疫逃逸,在宿主体内长期存活。现总结了近年来沙门菌激活NLR,以及沙门菌躲避NLR识别的相关研究进展,为进一步了解宿主应对沙门菌的天然免疫应答及疫苗开发提供思路。

关键词：沙门菌 NOD样受体炎症小体天然免疫免疫逃逸

小鼠慢性弓形虫病发生过程及其动态变化规律初探

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国血吸虫病防治杂志 2024年第3期 304-309页

作者：周国庆白邵缘李宇渊朱国鼎黄思扬扬州大学兽医学院比较医学研究院江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心国家卫生健康委员会寄生虫病预防和控制技术重点实验室江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室江苏省医学重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室

目的观察不同形态刚地弓形虫感染后小鼠脑内包囊形成及其动态变化，为弓形虫病防控提供依据。方法取6～8周龄ICR小鼠（20～25 g）建立慢性弓形虫感染模型，其中弓形虫PRU株速殖子按1×10～5个/只剂量腹腔注射感染小鼠，包囊和卵囊分别... 详细信息

目的观察不同形态刚地弓形虫感染后小鼠脑内包囊形成及其动态变化，为弓形虫病防控提供依据。方法取6～8周龄ICR小鼠（20～25 g）建立慢性弓形虫感染模型，其中弓形虫PRU株速殖子按1×10～5个/只剂量腹腔注射感染小鼠，包囊和卵囊分别按20、200个/只剂量通过灌胃针口服感染小鼠，观察感染后小鼠临床症状和存活情况。分别以10（低剂量组）、20（中剂量组）、40个包囊/只（高剂量组）剂量感染小鼠，观察弓形虫不同感染剂量对小鼠脑内包囊数量的影响。将小鼠按性别（雌、雄性）、感染时间（感染后20、30、60、90、120、150、180 d）分组，按20个/只剂量口服弓形虫包囊后，分别观察性别和感染时间对小鼠脑内包囊数量的影响。将小鼠分成速殖子组（T组）、包囊1代组（C1组）、包囊2代组（C2组）、包囊3代组（C3组）、包囊4代组（C4组）；T组小鼠按1×10～5个/只剂量腹腔注射弓形虫速殖子，感染后第30天处死小鼠并收集其脑组织内包囊，再按20个/只感染C1组小鼠。此后每一代小鼠均采用上一代所产生包囊进行口服连续传代，观察连续传代对小鼠脑内弓形虫包囊数量的影响。结果以弓形虫速殖子、包囊、卵囊分别感染小鼠，感染第6～13天小鼠出现明显临床症状、感染第7～12天小鼠出现集中死亡。感染第30天时，感染速殖子、包囊、卵囊的小鼠存活率分别为67.0%、87.0%、53.0%，平均脑内包囊数量分别为（516.0±257.2）、（1 203.0±502.0）、（581.0±183.1）个，差异有统计学意义（F=11.94,P 0.05）；雄、雌性组小鼠存活率分别为73.0%和80.0%，平均脑内包囊数量分别为（946.4±411.4）、（932.1±322.4）个，差异无统计学意义（F=1.63,P> 0.05）。通过连续传代感染后，T、C1、C2、C3、C4组小鼠平均脑内包囊数量分别为（516.0±257.2）、（1 203.0±502.0）、（896.8±332.3）、（782.5±423.9）、（829.2±306.0）个，差异有统计学意义（F=4.82,P <0.01）;C1组小鼠脑内包囊数高于速殖子组，差异有统计学意义（P <0.01）。小鼠口服20个包囊后，感染第20天首次查见脑内弓形虫包囊，随感染时间延长脑内包囊数量逐渐增加；至感染第30、90天时，脑内包囊数量分别达峰值，此后逐步下降，至感染第180天时仍能查见脑内包囊。结论刚地弓形虫包囊较速殖子、卵囊感染后形成慢性感染的可能性更高，且慢性感染程度亦最严重；感染弓形虫包囊数量与慢性感染严重程度无关；脑内包囊形成数量于感染第30天和90天时达高峰。

关键词：刚地弓形虫慢性弓形虫病包囊卵囊速殖子脑组织小鼠

基于马立克病病毒Meq蛋白单克隆抗体的免疫组化诊断方法的建立

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2024年第1期46卷 70-76页

作者：王润锦孙英杰石彬吴少鹏邵红霞钱琨叶建强秦爱建扬州大学教育部禽类预防医学重点实验室江苏扬州225009 西藏山南市畜牧兽医总站山南市畜禽良种繁育中心西藏山南856000 江苏高校动物重要疫病与人畜共患病防控协同控制中心江苏扬州225009 教育部农业与农产品安全国际合作联合实验室江苏扬州225009

为了对临床上马立克病(MD)准确诊断,研究利用杆状病毒表达系统表达马立克病病毒(MDV)强毒株Meq重组蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术研制MDV Meq蛋白特异性单克隆抗体,并以此为基础建立MD诊断方法。结果显示:试验成功制备了4株Meq蛋白特异... 详细信息

为了对临床上马立克病(MD)准确诊断,研究利用杆状病毒表达系统表达马立克病病毒(MDV)强毒株Meq重组蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤技术研制MDV Meq蛋白特异性单克隆抗体,并以此为基础建立MD诊断方法。结果显示:试验成功制备了4株Meq蛋白特异性单克隆抗体,分别命名为MDV-Meq-1D6、MDV-Meq-1D10、MDV-Meq-6B3、MDV-Meq-6D10;Western blot结果证明这些单克隆抗体不仅能与体外表达的Meq蛋白反应,而且能识别MD肿瘤细胞系MSB-1中的Meq蛋白和MD肿瘤组织细胞中的Meq蛋白;以Meq蛋白单克隆抗体成功建立免疫组化诊断MD的方法,该方法特异性强,结果稳定,易观察判定。研究表明,试验制备了4株Meq蛋白单克隆抗体(MDV-Meq-1D6、MDV-Meq-1D10、MDV-Meq-6B3、MDV-Meq-6D10),基于此建立的免疫组化MD诊断方法为临床MD鉴别诊断提供技术支撑。

关键词：马立克病 Meq蛋白单克隆抗体免疫组化诊断

一株GI-19基因型禽传染性支气管炎病毒基因序列分析及致病性研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2024年

作者：武奇徐梦成魏邓乐张雪花李丁梅梅江苏省农业科学院动物免疫工程研究所扬州大学兽医学院教育部禽类预防医学重点实验室国家兽用生物制品工程技术研究中心兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心

为了解传染性支气管炎病毒（IBV）的遗传变异及致病性，试验对江苏某鸡场发病鸡进行病原分离和鉴定，并对分离株S1基因进行同源性、遗传进化树、糖基化位点、S蛋白裂解位点和致病性分析。结果显示：从发病鸡肾脏组织中分离并鉴定到1株IB... 详细信息

为了解传染性支气管炎病毒（IBV）的遗传变异及致病性，试验对江苏某鸡场发病鸡进行病原分离和鉴定，并对分离株S1基因进行同源性、遗传进化树、糖基化位点、S蛋白裂解位点和致病性分析。结果显示：从发病鸡肾脏组织中分离并鉴定到1株IBV，该分离株经SPF鸡胚盲传5代后，可引起典型的侏儒胚特征病变，其S1基因大小为1 620 bp，分离株被命名为CK/CH/WJ215;CK/CH/WJ215与GⅠ-19基因型毒株S1核苷酸序列相似性为94.3%，与流行优势基因型GⅠ-19属于同一分支；RDP4重组分析显示该分离株S1蛋白不存在重组事件；进一步糖基化位点分析表明，与常用疫苗株相比，CK/CH/WJ215 S1蛋白在第51、77、103、138、163、178、247、276、283、530位点出现变异，值得注意的是，与H120疫苗株和QXL87疫苗株相比，CK/CH/WJ215 S1蛋白分别在138和530位出现了新的糖基化位点；7日龄SPF鸡致病性试验显示，该分离株可导致SPF鸡100%(15/15)发病，66.7%(10/15)死亡，并且导致严重的肾脏病变；感染鸡从第2天开始持续排毒，直到第21天气管和泄殖腔排毒率仍为80%(4/5)和100%(5/5)。研究表明，从江苏某鸡场发病鸡群种分离的GⅠ-19基因型IBV对SPF雏鸡具有很强的致病性，结果为该地区传染性支气管炎流行病学及防控提供参考。

关键词：传染性支气管炎病毒 GⅠ-19基因型 S1基因致病性