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稀释倍数对湖羊精液低温保存效果的影响

中国畜牧杂志 2023年第4期59卷 181-185页

作者：张柳明孙晓梅康言王旭洋王健王强李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究稀释倍数对湖羊精液4℃保存的影响,本实验使用3只1~2岁体况良好的公羊,将采集的精液稀释2、5、10、15、20、25倍后,检测4℃保存过程中精子活率、活力、运动速率以及质膜完整性和顶体完整性。结果表明:保存3~5 d,10倍稀释保存的精... 详细信息

为探究稀释倍数对湖羊精液4℃保存的影响,本实验使用3只1~2岁体况良好的公羊,将采集的精液稀释2、5、10、15、20、25倍后,检测4℃保存过程中精子活率、活力、运动速率以及质膜完整性和顶体完整性。结果表明:保存3~5 d,10倍稀释保存的精子活率和活力显著高于其他各组;保存1~4 d,25倍高倍稀释的精子活力下降最快,且显著低于其他组;保存1~3 d,10倍稀释保存的精子曲线速率(VCL)和路径速率(VAP)显著高于20和25倍稀释组;保存期间,10倍稀释保存的精子质膜完整性最高,且在第4天显著高于其他组;保存3~5 d,5和10倍稀释保存的精子顶体完整性显著高于15~25倍稀释组。因此,在本实验条件下,5~10倍为湖羊精液4℃保存的最适宜稀释倍数,过低或者过高的稀释倍数都不利于湖羊精液4℃保存。

关键词：稀释倍数 4℃保存湖羊运动性能功能完整性

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大豆卵磷脂对湖羊精液4℃保存效果的影响

畜牧与兽医 2024年第2期56卷 1-6页

作者：江才雨康言王旭洋李拥军扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究大豆卵磷脂(SL)对湖羊精液4℃保存效果的影响,在湖羊精液基础稀释液中添加不同浓度(0、0.1%、0.2%、0.3%和0.4%)的SL进行4℃低温保存试验,通过在不同保存时间(0~6 d)对精子活率、活力、直线速率、曲线速率、路径速率、质膜完整率... 详细信息

为探究大豆卵磷脂(SL)对湖羊精液4℃保存效果的影响,在湖羊精液基础稀释液中添加不同浓度(0、0.1%、0.2%、0.3%和0.4%)的SL进行4℃低温保存试验,通过在不同保存时间(0~6 d)对精子活率、活力、直线速率、曲线速率、路径速率、质膜完整率和顶体完整率进行测定,确定湖羊精液低温保存稀释液中SL的最佳添加浓度。结果表明:保存2、5、6 d,0.1%SL组的精子活率、活力均显著高于其他组(P<0.05);保存3 d,0.1%SL组的精子直线速率显著高于其他组(P<0.05);保存4 d,SL各组的精子曲线速率和路径速率显著高于对照组(P<0.05);保存1、5 d,0.1%SL组的精子质膜完整率显著高于其他组(P<0.05);保存2、6 d,0.1%SL组的精子顶体完整率显著高于其他组(P<0.05)。结论:在低温保存条件下,添加0.1%SL可以有效地延长湖羊精子的存活时间,提高精液质量。

关键词：湖羊精液大豆卵磷脂低温保存

稀释比例对绵羊精子活率、活力、运动速率、质膜完整率和顶体完整率的影响

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畜牧与兽医 2024年第6期56卷 15-21页

作者：张柳明王旭洋江才雨孙宇轩王健孙晓梅李拥军扬州大学动物科学与技术学院/江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

旨在研究15℃条件下保存绵羊精液的最适宜稀释比例,获得较好的精液保存效果。试验分别将精液按照1:1、1:4、1:9、1:14、1:19和1:24进行稀释保存,在保存过程中检测精子的活率、活力、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、路径速率(VAP)、侧摆... 详细信息

旨在研究15℃条件下保存绵羊精液的最适宜稀释比例,获得较好的精液保存效果。试验分别将精液按照1:1、1:4、1:9、1:14、1:19和1:24进行稀释保存,在保存过程中检测精子的活率、活力、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)、路径速率(VAP)、侧摆幅度(ALH)、移动角度(MAD)、质膜完整率和顶体完整率。结果显示,保存3~6 d,1:9稀释后的精子活率显著高于其他稀释比例(P0.05)。因此,在本试验条件下,15℃保存绵羊精液最合适的稀释比例是1:9,过高和过低的稀释比例均不利于绵羊精液保存。

关键词：绵羊精液稀释比例 15℃ 精子活力

鸡gga-miR-31-5p启动子真核表达载体的构建及其转录因子结合位点预测

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浙江农业学报 2022年第4期34卷 713-719页

作者：邓哲宇王乙婷王颖洁胡菜吴宇慧赵宗仪左其生张亚妮扬州大学动物科学技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体。利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒。... 详细信息

为确定鸡gga-miR-31-5p启动子基本活性区域,并分析调控其转录的重要转录因子,初步探究影响鸡gga-miR-31-5p的表达调控机制,采用PCR法扩增鸡gga-miR-31-5p启动子,插入到pEGFP-N1载体,构建重组载体。利用菌液PCR及测序鉴定阳性重组质粒。将重组载体转染DF-1细胞系,观察其启动活性。利用在线预测网站预测gga-miR-31-5p启动子区域的转录因子结合位点。结果显示,成功克隆出gga-miR-31-5p启动子片段,并成功构建其pEGFP重组载体。体外转染结果表明,该区域具有启动活性,并发现鸡gga-miR-31-5p启动子区域存在RARα、ER、c-Jun、GR等重要转录因子结合位点。研究初步确定了鸡gga-miR-31-5p启动子区域,同时发现该区域存在重要转录因子结合位点,该结果为后续探讨进一步研究gga-miR-31-5p启动子的生物学功能奠定基础。

关键词：鸡 gga-miR-31-5p 启动子转录因子

鸡TBX6过表达和干扰载体构建及干扰载体效率检测

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中国家禽 2023年第10期45卷 12-18页

作者：武嵘峰陈欣雨胡菜耿晴晴程富富席一凡左其生张亚妮扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

研究旨在构建TBX6的过表达和干扰载体,为后续研究TXB6在精原干细胞(Sper⁃matogonial stem cells,SSCs)形成过程中的功能奠定基础。通过qRT-PCR检测TBX6在胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)和SSCs的表达水平,根据NCBI上提供的TBX6 CDS区的序列,设计引物扩增目的片段,将其连接到经线性化的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copG⁃FP-T2A-Puro上,构建TBX6的过表达载体;同时,根据TBX6 CDS区设计三个干扰靶点,在退火后将其连接到经线性化的干扰载体pLVX-shRNA2-puro上,并且进一步将三个干扰载体转染鸡成纤维细胞系(DF-1),观察荧光表达情况并通过qRT-PCR检测其干扰效率。结果显示,TBX6在SSCs上的表达量显著高于ESCs(P<0.05),测序和双酶切验证显示成功构建TBX6过表达及干扰载体;干扰载体转染DF-1细胞后均能稳定表达EGFP荧光蛋白,且shRNA2-TBX6的干扰效果最好。结果表明,TBX6过表达及干扰载体构建成功,且经定量检测后确定shRNA2-TBX6的干扰效果最好。

关键词： TBX6 过表达载体干扰载体

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不同稀释液对湖羊精液低温保存效果的影响

中国畜牧杂志 2022年第12期58卷 183-188页

作者：康言王彦虎张柳明王健吴希李拥军孙晓梅扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为研究低温环境下不同稀释液对湖羊精液保存效果的影响,本实验采用假阴道法采集精液样本,经品质检查筛选出合格精液,分别用A、B、C、D、E 5种低温保存稀释液按1:10的比例进行稀释,保存在4℃环境条件下,每隔12 h检测分析精子活率、活力... 详细信息

为研究低温环境下不同稀释液对湖羊精液保存效果的影响,本实验采用假阴道法采集精液样本,经品质检查筛选出合格精液,分别用A、B、C、D、E 5种低温保存稀释液按1:10的比例进行稀释,保存在4℃环境条件下,每隔12 h检测分析精子活率、活力、质膜完整率、顶体完整率、直线速率(VSL)、曲线速率(VCL)和路径速率(VAP)等指标。结果表明:精液经稀释液C(果糖-柠檬酸钠-卵黄)低温保存后的各项指标下降最为缓慢;自保存12 h开始,稀释液C的精子质膜完整率高于其他各组(P<0.05);在保存24~36 h时,稀释液B、C、D的VCL和VAP均高于其他2组(P<0.05);保存60~72 h时,稀释液B、C和D的顶体完整率高于其他2组(P<0.05);随着时间的推移,C组稀释液的优势逐渐明显,当保存60~120 h时,稀释液C的精子活率和精子活力高于其他4种稀释液(P<0.05)。因此,稀释液C对湖羊精液的4℃低温保存效果较好。

关键词：稀释液配方湖羊低温保存运动性能

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褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响

中国兽医科学 2021年第2期51卷 251-256页

作者：胡慧茹王健张柳明王彦虎牛浩原李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,本研究以10~12月龄ICR雌鼠的卵母细胞为研究对象,在体外成熟培养液中添加不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8 mol/L),以第一极体排出率作为卵母细胞成熟的评判依据筛选出褪黑素最佳添... 详细信息

为探究褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的影响,本研究以10~12月龄ICR雌鼠的卵母细胞为研究对象,在体外成熟培养液中添加不同浓度的褪黑素(0、10-4、10-6、10-8 mol/L),以第一极体排出率作为卵母细胞成熟的评判依据筛选出褪黑素最佳添加浓度,并通过活性氧(ROS)水平检测、谷胱甘肽(GSH)水平检测、三磷酸腺苷(ATP)含量检测以及纺锤体组装来分析褪黑素对高龄小鼠卵母细胞体外成熟的作用。结果,1×10^(-6) mol/L的褪黑素能够降低细胞内ROS水平,提高GSH水平,减弱高龄小鼠卵母细胞的氧化应激,同时还可以通过维持细胞内正常的能量(ATP)供应来保证纺锤体的正常形态,促进卵母细胞体外成熟。结论认为,在体外成熟培养体系中添加1×10^(-6) mol/L的褪黑素可以通过改善卵母细胞的质量,促进高龄小鼠卵母细胞的体外成熟。

关键词：褪黑素高龄小鼠卵母细胞体外成熟

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徐淮山羊Oct4启动子功能的初步分析

遗传 2014年第8期36卷 793-799页

作者：韦光辉李东左其生张亚妮朱睿张蕾刘志永邱峰龙李碧春扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室扬州225009

为确定徐淮山羊Oct4(Octamer-binding transcription factor 4)基因启动子活性区域,并初步探讨TSA(Trichostatin A)和VPA(Valproic acid)对Oct4基因启动子活性的调控作用,文章采用Primer5.0设计包含Oct4基因启动子不同长度片段的特异性PCR引物,扩增并定向克隆至PGL3-Bacic荧光素酶报告载体,分别转染gEF、P19和COS7细胞,通过TSA和VPA诱导,进行双荧光报告基因活性检测。同时用Oct4启动子–1516^+30 bp片段替换pEGFP-N1中的CMV启动子,通过GFP荧光表达检测Oct4启动子的活性。结果表明:在gEF、P19和COS7细胞中Oct4启动子各片段均表现出不同程度的活性,且最强活性区域为上游–1516^+30 bp,基本活性区域为–238^+30 bp;在–1516~–946 bp、–615~–96 bp区域存在正调控元件,在–1936~–1516 bp、–946~–615 bp区域存在负调控元件;终浓度为1μmol/L的TSA和4 mmol/L的VPA为诱导的最佳浓度,均能显著增强Oct4基因启动子的活性;–1516^+30 bp片段能够启动GFP的表达。研究结果为揭示Oct4基因的转录调控机制奠定了基础。

关键词： Oct4 启动子活性 TSA VPA 诱导

干扰MAP3K1基因对山羊毛囊干细胞增殖和凋亡的影响

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东北农业大学学报 2020年第10期51卷 56-62页

作者：马金亮王健冯云奎王强张柳明李拥军扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室江苏扬州225009

研究旨在探讨促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1,MAP3K1)基因对体外培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞(HFSCs)增殖和凋亡的影响。针对MAP3K1基因设计3个干扰靶点,构建pDNA316-ZsGreen-ShRN... 详细信息

研究旨在探讨促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 1,MAP3K1)基因对体外培养长江三角洲白山羊毛囊干细胞(HFSCs)增殖和凋亡的影响。针对MAP3K1基因设计3个干扰靶点,构建pDNA316-ZsGreen-ShRNA腺病毒干扰载体。转染HFSCs,以空载体细胞为对照,RT-qPCR技术检测干扰MAP3K1效果及增殖相关基因(PCNA、CDK1、CCND2)、凋亡相关基因(Bax、Bcl-2)表达水平,CCK-8和EdU法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果表明,shRNA(MAP3K1-sh)转染HFSCs后,MAP3K1基因相当表达量极显著下降(P分子形成机制提供科学参考。

关键词： MAP3K1基因 HFSCs 细胞增殖细胞凋亡长江三角洲白山羊