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三株AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

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水产学报 2019年第5期43卷 1378-1396页

作者：乔欢徐旭凌费文斌黄杰陈海胡怿林丛郁菲吉乐科(南京)生物科技有限公司

为分离获得AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体,并鉴定及研究其生物学特性,本研究以AHPND致病型副溶血性弧菌为宿主菌,采用双层平板法分别从中国福建及墨西哥海水样本中对其噬菌体进行分离;通过噬菌斑形态、限制性内切酶、全基因组测序... 详细信息

为分离获得AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体,并鉴定及研究其生物学特性,本研究以AHPND致病型副溶血性弧菌为宿主菌,采用双层平板法分别从中国福建及墨西哥海水样本中对其噬菌体进行分离;通过噬菌斑形态、限制性内切酶、全基因组测序构建系统发育树及透射电镜观察对所获噬菌体进行分类鉴定;同时对供试噬菌体裂解谱及其生物学特性进行测定,包括最佳感染复数(MOI)、pH稳定性、热稳定性、过氧乙酸稳定性及不同储存温度下的存活稳定性等。结果显示,本研究分离获得3株AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体P46、P48及VP7,3株噬菌体的噬菌斑均呈透亮圆形,P46噬菌斑直径4～5 mm,P48与VP7噬菌斑直径5～6 mm。3株噬菌体核酸均为双链DNA,电镜下观察其头部均呈二十面立体结构,直径约60 nm,尾部宽约8 nm,长约18～20 nm,属于短尾噬菌体科。3株供试噬菌体对AHPND型副溶血性弧菌裂解率达91.5%,对非AHPND型副溶血性弧菌裂解率为92.3%,且无法识别除副溶血性弧菌外其他种属的细菌;噬菌体P46、P48及VP7感染AHPND致病型副溶血性弧菌的最佳MOI分别为0.001、0.1及0.001;P46与VP7最适pH为6～8,P48最适pH为6～9;3株噬菌体对60°C的温度耐受力较强,在4°C条件下存放50周后仍具有较高的存活率;对通用杀菌浓度的过氧乙酸具有一定耐受性。将噬菌体P46、P48及VP7保守蛋白序列在NCBI数据库中比对后发现,3株供试噬菌体与其他噬菌体同源性较低,因此,噬菌体P48与P46及VP7很可能为3株新发现的短尾科噬菌体,这是中国首次报道AHPND致病型副溶血性弧菌短尾科噬菌体。本研究丰富了AHPND致病型副溶血性弧菌噬菌体的菌种资源,并为其应用于噬菌体生物防治制剂的开发奠定了理论基础。

关键词： AHPND致病型副溶血性弧菌 AHPND致病型副溶血性弧菌烈性噬菌体分离鉴定生物学特性

Caco-2细胞模型评价白术对人参皂苷Rg1肠吸收影响

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中药药理与临床 2023年第5期39卷 51-55页

作者：罗波赵建棋李娇黄凌恺罗前东唐灿成都医学院成都610500 成都普康生物科技有限公司成都611130

目的:运用Caco-2细胞模型研究白术提取物对人参皂苷Rg1肠吸收的影响。方法:建立Caco-2细胞模型及使用高效液相色谱测定人参皂苷Rg1含量方法,考察在最适细胞生长浓度下,白术提取物对人参皂苷Rg1表观渗透系数(Papp)和转运量的影响。结果:... 详细信息

目的:运用Caco-2细胞模型研究白术提取物对人参皂苷Rg1肠吸收的影响。方法:建立Caco-2细胞模型及使用高效液相色谱测定人参皂苷Rg1含量方法,考察在最适细胞生长浓度下,白术提取物对人参皂苷Rg1表观渗透系数(Papp)和转运量的影响。结果:本研究成功构建了Caco-2细胞模型及人参皂苷Rg1的高效液相色谱含量测定方法,研究显示,与正常对照组相比,模型对照组中200μg/mL白术提取物可显著促进400μg/mL人参皂苷Rg1在肠道的吸收,Papp增加超过3倍(P<0.01)。结论:提示白术提取物对人参皂苷Rg1肠吸收有较好的促进作用。

关键词： Caco-2细胞模型人参皂苷Rg1 白术提取物肠吸收

表达人源补体调节蛋白hCD55对异种胰岛移植的保护作用

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器官移植 2022年第4期13卷 475-482页

作者：李欣潘登科周佳闫杰陈军杜嘉祥龚曼琳电子科技大学医学院成都610054 成都中科奥格生物科技有限公司四川中科奥格生物科技有限公司

目的验证猪胰岛细胞上表达人类簇分化抗原55(hCD55)蛋白能否抑制人血清中补体成分的激活。方法选取4只基因型分别为WT(野生型)、GTKO[α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除]、GTKO/hCD55和hCD55的成年猪,分离WT、GTKO、GTKO/hCD55猪胰... 详细信息

目的验证猪胰岛细胞上表达人类簇分化抗原55(hCD55)蛋白能否抑制人血清中补体成分的激活。方法选取4只基因型分别为WT(野生型)、GTKO[α-1,3-半乳糖基转移酶(GGTA1)基因敲除]、GTKO/hCD55和hCD55的成年猪,分离WT、GTKO、GTKO/hCD55猪胰岛细胞,检测其纯度及胰岛素分泌功能,通过琼脂糖凝胶电泳、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术从DNA、RNA和蛋白水平检测hCD55的表达。在新鲜人血清孵育条件下,进行补体依赖的细胞毒性实验和补体沉积检测。结果分离得到的3种基因型猪胰岛细胞纯度>75%,糖刺激指数>1。GTKO/hCD55猪胰岛细胞上表达hCD55信使核糖核酸(mRNA)和hCD55蛋白,能够减少人补体C3c和攻膜复合物C5b-9的沉积,降低细胞毒性。结论猪胰岛细胞上表达hCD55蛋白能够抑制人补体激活,降低补体介导的杀伤作用,表明hCD55蛋白在猪胰岛细胞上可发挥补体保护效果,这为hCD55在异种胰岛移植中的应用提供了理论依据。

关键词：糖尿病猪胰岛细胞转基因人类簇分化抗原55(hCD55) 补体立即经血液介导的炎症反应(IBMIR) C3c C5b-9

贝莱斯芽孢杆菌PG1-2生产γ-聚谷氨酸的发酵培养基和培养条件优化

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基因组学与应用生物学 2021年第7期40卷 2635-2642页

作者：黄斌良李光赵吴华德江朝明杨齐广西多得乐生物科技有限公司南宁530000

本项目从自然界中筛选得到了能够生产γ-聚谷氨酸(PGA)的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)PG1-2,对其发酵培养基和发酵条件进行优化,并对其发酵过程进行了研究。PG1-2合成PGA的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为酵母粉和蛋白胨。PG1-2合成... 详细信息

本项目从自然界中筛选得到了能够生产γ-聚谷氨酸(PGA)的贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)PG1-2,对其发酵培养基和发酵条件进行优化,并对其发酵过程进行了研究。PG1-2合成PGA的最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为酵母粉和蛋白胨。PG1-2合成PGA的最佳条件为:蔗糖用量为80 g/L,氮源用量为20 g/L,谷氨酸钠用量60 g/L,发酵pH值为6.8,通气量1 vvm,搅拌转速350 r/min。在最佳发酵条件下,PGA的产量可以达到33.8 g/L。贝莱斯芽孢杆菌PG1-2能够高产PGA,为其在农业及PGA生产上的应用提供了更多可能。

关键词： γ-聚谷氨酸贝莱斯芽孢杆菌发酵条件优化

两株溶藻弧菌烈性噬菌体的分离鉴定及其生物学特性

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水产学报 2021年

作者：乔欢陈海徐旭凌丛郁刘墨何四龙费文斌黄杰胡怿林菲吉乐科(南京)生物科技有限公司

溶藻弧菌是海洋经济动物的主要病原菌之一。噬菌体作为一种新兴的抗细菌感染制剂，在水产养殖方面具有较大潜力。为寻找并丰富溶藻弧菌噬菌体资源，实验以溶藻弧菌VAHN1为宿主菌，采用双层平板法从海南虾塘水样及福建海产品样本中对溶... 详细信息

溶藻弧菌是海洋经济动物的主要病原菌之一。噬菌体作为一种新兴的抗细菌感染制剂，在水产养殖方面具有较大潜力。为寻找并丰富溶藻弧菌噬菌体资源，实验以溶藻弧菌VAHN1为宿主菌，采用双层平板法从海南虾塘水样及福建海产品样本中对溶藻弧菌噬菌体进行分离。通过透射电镜、限制性内切酶及构建发育树等方法对所获溶藻弧菌噬菌体进行了分类鉴定；同时对其生理生化性能进行了研究。结果显示，本研究分离获得2株溶藻弧菌噬菌体VAP9与VAP21，其噬菌斑均清晰透亮，直径约1.5～2.0 mm。2株噬菌体核酸均为双链DNA，于透射电镜下可见其头部均呈正二十面体结构，2株噬菌体均属肌尾噬菌体科。噬菌体VAP9与VAP21对理化环境具有良好的耐受性；VAP9最适pH为6～8，VAP21最适pH为7～11；2株噬菌体可耐受通用杀菌浓度的过氧乙酸，且对氯仿与乙醚不敏感，同时对紫外线具有一定耐受性。噬菌体VAP9与VAP21的最佳感染复数均为0.001；2株噬菌体对供试溶藻弧菌的裂解率达95.2%，可裂解部分副溶血性弧菌，但无法裂解除溶藻弧菌与副溶血性弧菌外的弧菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属等其他种属的供试细菌；噬菌体VAP9与VAP21可高效抑制溶藻弧菌VAHN1的生长，且2株噬菌体的混合制剂对溶藻弧菌的抑制效果好于单株溶藻弧菌噬菌体。将噬菌体VAP9及VAP21保守蛋白序列于NCBI上比对后发现2株供试噬菌体与其他噬菌体间同源性较低，因此噬菌体VAP9及VAP21很可能为2株新发现的肌尾科噬菌体。

关键词：溶藻弧菌噬菌体分离生物学特性微生态抗菌剂

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柑橘溃疡病菌噬菌体的分离鉴定

园艺学报 2021年第12期48卷 2349-2359页

作者：肖逍丁良丛郁徐旭凌乔欢何四龙许文建徐天舜菲吉乐科(南京)生物科技有限公司南京211100

从中国9个地区采集柑橘溃疡病样本,并通过单菌落形态,PCR特异性引物和16S rDNA测序对地毯草黄单胞菌柑橘致病变种进行分离鉴定,获得17株目标菌。以地毯草黄单胞菌柑橘致病变种标准菌株ACCC 03526为宿主菌,采用双层平板法从南京市污水样... 详细信息

从中国9个地区采集柑橘溃疡病样本,并通过单菌落形态,PCR特异性引物和16S rDNA测序对地毯草黄单胞菌柑橘致病变种进行分离鉴定,获得17株目标菌。以地毯草黄单胞菌柑橘致病变种标准菌株ACCC 03526为宿主菌,采用双层平板法从南京市污水样本中分离其噬菌体,获得1株地毯草黄单胞菌柑橘致病变种烈性噬菌体,命名为Xac-P9。通过透射电镜对噬菌体Xac-P9形态大小进行观察,结果显示Xac-P9头部直径约58 nm,属于有尾噬菌体目(Caudovirales),短尾噬菌体科(Podoviridae)。对Xac-P9的裂解谱、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性、pH稳定性、紫外线敏感性及杀菌速率等生物学特性进行测定,结果表明,Xac-P9对17株来源不同的Xac菌株的裂解率为100%,裂解谱宽;最佳感染复数为0.001,此时所获噬菌体效价为6.6×109 PFU·mL^(-1);一步生长曲线表明:Xac-P9潜伏期为20 min,爆发时间为60 min,裂解量为132;Xac-P9在40~60℃条件下具有一定耐受性,在pH 3~13环境中具有活性,对紫外辐射不敏感;30 min对宿主菌ACCC 03526的杀菌率可达90%,150 min后可将宿主菌全部杀灭。

关键词：柑橘溃疡病地毯草黄单胞菌柑橘致病变种噬菌体分离鉴定生物学特性

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青蒿琥酯对甲型流感病毒肺炎的治疗作用研究

四川大学学报（医学版） 2022年第6期53卷 1055-1060页

作者：周永君张静巫波李政吴江别明江成都乐助生物科技有限公司成都610041 四川大学华西公共卫生学院(华西第四医院)检验科成都610041 四川大学华西医院成都610041 四川大学学报(医学版)编辑部成都610041

目的探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对甲型流感病毒肺炎的治疗作用。方法将36只小鼠随机分为6组:正常对照组(C组)、溶剂对照组(M组,10%DMSO)、阳性药物组(P组,奥司他韦1.25 mg/kg)、ART高剂量组(ART-G组,ART 120 mg/kg)、ART中剂量组(AR... 详细信息

目的探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对甲型流感病毒肺炎的治疗作用。方法将36只小鼠随机分为6组:正常对照组(C组)、溶剂对照组(M组,10%DMSO)、阳性药物组(P组,奥司他韦1.25 mg/kg)、ART高剂量组(ART-G组,ART 120 mg/kg)、ART中剂量组(ART-Z组,ART 60 mg/kg)和ART低剂量组(ART-D组,ART 30 mg/kg),每组6只。除C组不进行病毒干预和腹腔注射外,其余5组小鼠鼻腔滴入感染甲型流感病毒(influenza A virus,IAV),12 h后按分组剂量进行每日一次腹腔注射;治疗过程中观察小鼠体征、体质量和存活情况;治疗7 d后,取小鼠肺组织,计算肺指数,HE染色观察小鼠肺组织病理变化,RT-qPCR和Western blot分别检测肺组织中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)(p65)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-1β(interleukin-1,IL-1β)mRNA和蛋白表达水平。结果与C组比较,M组小鼠体征变差、体质量和存活率降低,肺指数增加,肺组织出现严重病理变化,肺组织中TLR4、NF-κB(p65)、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);与M组比较,ART各组小鼠体征明显改善、体质量和存活率升高,肺指数降低,肺组织病理变化得到改善,肺组织中TLR4、NF-κB(p65)、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),且上述指标变化以ART-G组最显著。结论ART对甲型流感病毒肺炎具有治疗作用,其机制与抑制TLR4/NF-κB(p65)信号通路活化和抗炎相关。

关键词：青蒿琥酯甲型流感病毒肺炎

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复配改良剂对面包烘焙品质及抗老化的影响

中国粮油学报 2023年第3期38卷 61-67页

作者：杨连战蔡金鑫孟宪伟李言钱海峰樊铭聪王立江南大学食品学院无锡214122 福建意乐焙宝生物科技有限公司福建灵雀谷生物科技有限公司泉州362200

以面包芯的硬度为指标,利用正交实验获得由1 mg/kg真菌α-淀粉酶、6 mg/kg脂肪酶、10 mg/kg葡萄糖氧化酶、5 mg/kg葡萄糖淀粉酶、20 U/kg环糊精葡萄糖基转移酶、0.1 g/kg硬脂酰乳酸钠、0.5 g/kg双乙酰酒石酸单双甘油酯组成的复配改良剂... 详细信息

以面包芯的硬度为指标,利用正交实验获得由1 mg/kg真菌α-淀粉酶、6 mg/kg脂肪酶、10 mg/kg葡萄糖氧化酶、5 mg/kg葡萄糖淀粉酶、20 U/kg环糊精葡萄糖基转移酶、0.1 g/kg硬脂酰乳酸钠、0.5 g/kg双乙酰酒石酸单双甘油酯组成的复配改良剂,并探究复配改良剂对面包品质和抗老化能力的影响。结果表明,复配改良剂使面包储藏30 d时硬度减小21.9%,储藏7 d内的含水量显著提高,组织孔隙率提高12.76%,比容增大11.53%。此外,复配改良剂面包储藏7 d时的淀粉相对结晶度和回生焓值分别较空白面包降低37.19%和61.07%,并优于市售改良剂面包。因此,优化复配改良剂具有明显改善面包烘焙品质和延缓老化的作用。

关键词：酶制剂乳化剂烘焙品质面包老化

肉豆蔻木脂素通过PI3K/AKT信号通路诱导胃癌细胞凋亡的研究

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四川大学学报（医学版） 2023年第1期54卷 136-141页

作者：周永君潘永越杨丽君别明江成都乐助生物科技有限公司成都610041 西藏大学拉萨850000 四川大学华西公共卫生学院/四川大学华西第四医院检验科成都610041 《四川大学学报(医学版)》编辑部成都610041

目的探讨肉豆蔻木脂素(myrislignan,MYR)对胃癌细胞凋亡的影响及与磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路的关系。方法采用不同浓度的MYR(即0、25、50、100和200μmol/L)作用胃癌细胞(SGC-7901)48 h和72 h,CCK8法检测细胞活性。选择MYR(50、100和200μmol/L)作用胃癌细胞(SGC-7901)48 h,同时设置正常对照(Control)组和溶剂对照(0.1%DMSO)组,采用流式细胞仪检测凋亡率,蛋白质印迹法检测PI3K、AKT、Bcl2关联X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)、半胱天冬酶(cysteine-dependent aspartate-specifc protease,Caspase)-3和Caspase-9蛋白的表达水平。特异性PI3K激活剂(20μmol/mL)作用胃癌细胞(SGC-7901)48 h(分组为:Control组、0.1%DMSO组、MYR组和MYR+PI3K激活剂组),观察其对MYR诱导胃癌细胞凋亡和调控PI3K、AKT、BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响。结果与对照组比较,MYR在50、100和200μmol/L时以剂量依赖关系抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡,下调PI3K和AKT蛋白表达水平,上调BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达水平(P<0.05)。PI3K激活剂减弱了MYR诱导胃癌细胞凋亡和对PI3K、AKT、BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的调控作用(P<0.05)。结论肉豆蔻木脂素通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导BAX、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达,促进胃癌细胞凋亡。

关键词：肉豆蔻木脂素 PI3K/AKT信号通路胃肿瘤细胞凋亡