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痛泻要方调控慢性应激下结肠癌NKG2DL表达促进NK细胞抗肿瘤免疫效应及机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第1期30卷 103-111页

作者：胡艳娥黄渝清杨懿蒋义芳付西由凤鸣成都中医药大学附属医院代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室成都610075 成都中医药大学肿瘤研究所成都610072

目的:探讨痛泻要方对慢性应激下肿瘤相关自然杀伤(NK)细胞功能的影响及其可能的分子机制。方法:将50只SPF级BABL/C雄性小鼠,随机分成正常组、模型组、痛泻要方低、中、高剂量组,每组10只。除空白组,其余各组进行慢性束缚应激干预7 d,进... 详细信息

目的:探讨痛泻要方对慢性应激下肿瘤相关自然杀伤(NK)细胞功能的影响及其可能的分子机制。方法:将50只SPF级BABL/C雄性小鼠,随机分成正常组、模型组、痛泻要方低、中、高剂量组,每组10只。除空白组,其余各组进行慢性束缚应激干预7 d,进行强迫游泳及悬尾实验行为学检测来评价造模是否成功,成功后痛泻要方组分别给予痛泻要方低、中、高剂量(6.825、13.65、27.3 g·kg^(-1))灌胃,其余组予生理盐水灌胃,14 d后对每组小鼠进行结肠癌皮下瘤接种,构建慢性应激结肠癌小鼠模型。采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠肿瘤组织病理形态变化;采用流式细胞术检测小鼠外周血及瘤体组织中CD49b阳性细胞的含量;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠外周血中NK细胞活化相关分子的含量;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠瘤体组织中主要组织相容性复合物Ⅰ类多肽相关序列A和B(MICA+MICB)、UL-16结合蛋白1(ULBP1)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组血清中5-羟色胺(5-HT)含量降低及皮质酮(CORT)含量升高(P<0.05);与模型组比较,痛泻要方各组5-HT含量上升、CORT含量下降(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组瘤体体积、质量增大(P<0.05);与模型组比较,痛泻要方各组瘤体体积降低,但差异无统计学意义。与正常组比较,模型组肿瘤细胞排列紧密、不规则,大小不均,异型性明显,多见核分裂,坏死面积较小,且肿瘤细胞及周围血管丰富。与模型组比较,痛泻要方各组肿瘤细胞排列稀疏,肿瘤组织内有不同程度的片状坏死区,坏死部分可见核碎裂、溶解和核碎屑。与正常组比较,模型组外周血及瘤体组织中CD49b阳性细胞数显著降低(P<0.01);与模型组比较,痛泻要方中剂量组上升(P<0.01);痛泻要方高剂量组明显上升(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组血清中颗粒酶-B(Gzms-B)、穿孔素(PF)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量均明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,痛泻要方低剂量组PF、Gzms-B、TNF-α含量上升(P<0.05,P<0.01),痛泻要方中剂量组Gzms-B、PF、IFN-γ、TNF-α含量明显上升(P<0.05,P<0.01),痛泻要方高剂量组PF、IFN-γ、TNF-α含量显著上升(P<0.01)。与正常组比较,模型组中ULBP1蛋白表达量明显下降(P<0.05);与模型组比较,痛泻要方低、中、高剂量组中ULBP1蛋白表达量明显上升(P<0.05,P<0.01),痛泻要方中、高剂量组MICA+MICB蛋白表达量明显上升(P<0.05,P<0.01)。结论:痛泻要方可能通过上调NKG2DL中MICA+MICB及ULBP1表达促进NK细胞活化及功能发挥,阻延慢性应激下结肠癌进展。

关键词：痛泻要方结肠癌慢性应激肿瘤相关性自然杀伤(NK)细胞 NKG2DL

半夏泻心汤调控Wnt/β-catenin通路抑制具核梭杆菌感染的炎症相关性结肠癌研究

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中国中药杂志 2024年第5期49卷 1266-1274页

作者：蒋义芳黄渝清胡艳娥杨懿郑川由凤鸣赵梓亦成都中医药大学附属医院代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室四川成都610075 成都中医药大学肿瘤研究所四川成都610072

探究半夏泻心汤对具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)感染的炎症相关性结肠癌的干预效应及其作用机制。将C57BL/6小鼠随机分为对照(control)组、具核梭杆菌(Fn)组、炎症相关性结肠癌[氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)]组、模型... 详细信息

探究半夏泻心汤对具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)感染的炎症相关性结肠癌的干预效应及其作用机制。将C57BL/6小鼠随机分为对照(control)组、具核梭杆菌(Fn)组、炎症相关性结肠癌[氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)]组、模型(model)组、半夏泻心汤(BXD)组。除control组和AOM/DSS组外,其余各组小鼠每周予以2次Fn菌液灌胃;AOM/DSS组、model组和BXD组同时采用单次腹腔注射10 mg·kg-1 AOM联合3个循环2.5%DSS灌胃。BXD组从第2个循环开始,予以半夏泻心汤灌胃,直至实验结束。实验期间监测小鼠一般情况和体质量变化,计算疾病活动指数(disease activity index,DAI)。实验结束时比较各组小鼠结肠长度和质量;通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察结肠组织病理变化;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中白细胞介素(interleukin,IL)-2、IL-4、IL-6炎症因子水平变化;免疫组化(immunohistochemisty,IHC)法检测小鼠结肠组织中肿瘤增殖抗原Ki67(Ki67)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、β-连环蛋白(β-catenin)表达情况;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测小鼠结肠组织中Wnt3a、β-catenin、E-cadherin、膜联蛋白A1(annexin A1)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白含量。结果显示,与control组相比,Fn组无明显病变;AOM/DSS组和model组小鼠体质量下降,DAI评分升高,结肠质量显著增加,结肠长度明显缩短,且model组病变更显著。同时,model组结肠病理组织学呈现更为严重的腺瘤、炎症浸润和细胞异型性;血清中IL-4、IL-6水平显著升高,IL-2含量明显降低;IHC结果显示model组E-cadherin低表达,Ki67、β-catenin高表达,且E-cadherin、GSK-3β蛋白含量降低,Wnt3a、β-catenin、annexin A1、cyclin D1蛋白含量升高。半夏泻心汤干预后,小鼠体质量增加,DAI评分降低,结肠长度增加且肿瘤减少,病理组织学显示肿瘤增生减少、炎症浸润减轻,且血清中IL-6、IL-4水平明显下降,而IL-2含量上升;同时E-cadherin表达上调、Ki67、β-catenin表达下降,且E-cadherin、GSK-3β蛋白含量升高,Wnt3a、β-catenin、annexin A1、cyclin D1蛋白含量降低。综上,半夏泻心汤可阻延Fn感染的炎症相关性结肠癌,其潜在机制可能与其抑制Fn与E-cadherin结合,降低annexin A1蛋白水平,调控Wnt/β-catenin通路有关。

关键词：半夏泻心汤具核梭杆菌炎症相关性结肠癌 Wnt/β-catenin通路

温补脾肾法治疗甲状腺功能减退症的疗效及药理作用机制研究进展

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中药药理与临床 2024年

作者：朱泳江陈正涛富晓旭谢春光代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室成都中医药大学附属医院成都中医药大学江西中医药大学附属医院

甲状腺功能减退症已成为严重损害患者身心健康的慢性内分泌疾病，治疗首选的甲状腺激素替代疗法易引起不良反应。研究显示，甲减的发生和发展与自身抗体大量生成、氧化应激过强、促炎与抗炎因子失调、细胞凋亡程序异常等密切相关。中医... 详细信息

甲状腺功能减退症已成为严重损害患者身心健康的慢性内分泌疾病，治疗首选的甲状腺激素替代疗法易引起不良反应。研究显示，甲减的发生和发展与自身抗体大量生成、氧化应激过强、促炎与抗炎因子失调、细胞凋亡程序异常等密切相关。中医认为甲减属“虚劳”、“瘿劳”的范畴，核心病机为“脾肾阳气虚衰”，临床实践表明“温补脾肾”能有效改善甲减症状、减少外源性激素使用。为深入探究其内在机制，诸多临床和基础研究从上述病理因素入手，验证了温补脾肾法治疗甲减的确切作用。尽管目前相关研究以甲状腺功能观察为主，但不可否认，温补脾肾法是防治甲状腺功能减退症的根本大法，应进一步挖掘与推广。

关键词：甲状腺功能减退症温补脾肾法机制研究综述

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“饮一溲二”病名病机浅析

北京中医药大学学报 2024年第3期47卷 320-324页

作者：朱泳江富晓旭谢春光成都中医药大学成都610072 成都中医药大学附属医院代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室

“饮一溲二”首见于《黄帝内经》,是“肺消”的主要症状,病机为心移寒于肺。后世医家对其所属病名莫衷一是,各以“上消”“下消”“肺消”或“肾消”称之;病机上亦有较多发挥,燥火、寒热相兼或虚寒是主要病性,心、肺、肝、肾是主要病位... 详细信息

“饮一溲二”首见于《黄帝内经》,是“肺消”的主要症状,病机为心移寒于肺。后世医家对其所属病名莫衷一是,各以“上消”“下消”“肺消”或“肾消”称之;病机上亦有较多发挥,燥火、寒热相兼或虚寒是主要病性,心、肺、肝、肾是主要病位,如喻嘉言强调“心肺燥热”、郑钦安主张“厥阴风火”、张从正阐明“心肺寒热”、楼英揭示“肺肾寒热”、黄元御提出“水寒土湿”。通过分析各家理论和相关方药、医案,本文认为“饮一溲二”可归“肾消”,肺肾虚寒为其基本病机,同时,亦应充分考虑脏腑相传、虚实夹杂、寒热转化等问题。本文总结并梳理中医古籍中的“消”病理论,为现代防治糖尿病启发思路。

关键词：饮一溲二病名病机黄帝内经

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基于STAT3信号通路探讨花椒精油吸嗅改善CAC小鼠免疫微环境的机制

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中华中医药杂志 2024年第1期39卷 173-179页

作者：刘宏陈芜林俊芝祝捷由凤鸣郑川成都中医药大学附属医院代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室成都610075 成都中医药大学肿瘤研究所成都610075

目的:探讨花椒精油吸嗅对结肠炎相关性结直肠癌(CAC)小鼠免疫微环境的影响及作用机制。方法:将70只小鼠随机分为空白组(10只)、模型组(20只)、溶媒组(20只)、花椒精油组(20只)。除空白组,其余组采用氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS... 详细信息

目的:探讨花椒精油吸嗅对结肠炎相关性结直肠癌(CAC)小鼠免疫微环境的影响及作用机制。方法:将70只小鼠随机分为空白组(10只)、模型组(20只)、溶媒组(20只)、花椒精油组(20只)。除空白组,其余组采用氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)造模,第7天开始给药,溶媒组给予2%Tween-80雾化,花椒精油组给予5%花椒精油雾化。隔日1次,15 min/次,直至14周。监测体质量变化,计算结肠指数、脾脏指数、肿瘤负荷,HE染色检测结肠与脾脏组织病理,Ki67免疫组化与TUNEL免疫荧光染色检测结肠组织细胞增殖与凋亡水平,免疫组化检测中性粒细胞和巨噬细胞浸润程度以及信号转导及转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3表达水平。结果:与模型组比较,花椒精油组小鼠体质量下降情况改善,脾脏指数显著降低(P<0.05),结肠肿瘤负荷显著减少(P<0.05),结肠黏膜炎症浸润与肿瘤增生程度减轻,脾脏髓外造血减少,结肠肿瘤细胞增殖率显著降低(P<0.05),凋亡率显著增加(P<0.01),中性粒细胞与巨噬细胞密度显著降低(P<0.05)、p-STAT3组织化学评分显著降低(P<0.05)。结论:雾化吸入花椒精油能够减少结肠肿瘤形成与免疫炎症细胞浸润,延缓CAC进程,其作用机制可能与调控STAT3信号通路、重塑积极的免疫微环境有关。

关键词：结肠炎相关性结直肠癌花椒精油雾化吸入免疫微环境 STAT3信号通路

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地龙腥臭气特征、来源及矫臭方法研究进展

中草药 2024年第2期55卷 670-677页

作者：杨静叶慧马鸿雁廖嘉宝韩丽林俊芝张定堃成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室四川成都611137 华润三九现代中药制药有限公司广东深圳518110 成都中医药大学附属医院代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室四川成都610072 成都中医药大学天府中医药创新港四川彭州611930

地龙Pheretima是临床常用动物药,广泛应用于小儿惊风、高热抽搐等儿科疾病的治疗及溶栓、卒中后遗症等心脑血管疾病的防治。但地龙药材、饮片及相关中成药具有显著的腥臭气,热水冲服时尤为强烈,导致患者服药顺应性差,尤其不利于儿童自... 详细信息

地龙Pheretima是临床常用动物药,广泛应用于小儿惊风、高热抽搐等儿科疾病的治疗及溶栓、卒中后遗症等心脑血管疾病的防治。但地龙药材、饮片及相关中成药具有显著的腥臭气,热水冲服时尤为强烈,导致患者服药顺应性差,尤其不利于儿童自主服药。究其根本,是地龙腥臭气物质的基础研究不深、产生的主要途径不明、矫臭技术有待提高。为此,归纳了地龙腥臭气的物质基础及其3种腥臭气特征分型,分析了生长代谢、生长环境、产地加工等多因素对地龙腥臭气物质形成的影响规律,总结了传统炮制技术、气味吸附技术、包合技术、包衣技术等矫臭方法对地龙腥臭气的掩蔽效果,为解决地龙的腥臭气难题、推动地龙相关产品的高质量创新发展提供参考。

关键词：地龙动物药腥臭气物质基础产生途径矫臭方法

瘤内微生物与结直肠癌病程演进的研究现状与展望

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微生物学通报 2024年

作者：龙静王倩蒋义芳罗苑珂肖冲由凤鸣李雪珂成都中医药大学附属医院代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室成都中医药大学肿瘤学教研室成都中医药大学肿瘤研究所

作为全球范围内最常见、最致命的恶性肿瘤之一，结直肠癌(colorectal cancer，CRC)造成了巨大的健康威胁和社会负担。微生物对CRC发生、发展的影响已受到研究者的广泛关注，但大部分研究聚焦于肠道微生物。近年来，随着新一代测序技术... 详细信息

作为全球范围内最常见、最致命的恶性肿瘤之一，结直肠癌(colorectal cancer，CRC)造成了巨大的健康威胁和社会负担。微生物对CRC发生、发展的影响已受到研究者的广泛关注，但大部分研究聚焦于肠道微生物。近年来，随着新一代测序技术的快速发展，CRC瘤内微生物被发现并逐渐开启了新的研究领域。本综述回顾了CRC瘤内微生物及其对CRC病程影响的研究进展，总结了在结直肠肿瘤不同分子亚型、腺瘤-癌的不同病理演进阶段以及不同的肿瘤发生位置，CRC瘤内微生物的相对丰度及群落组成差异。瘤内微生物主要通过影响结肠上皮细胞、肿瘤细胞以及免疫细胞影响CRC发生发展，致病机制包括DNA损伤、代谢重编程、致癌非编码RNA等，且不同瘤内微生物对CRC的作用已展现出两面性特征。未来需通过全面的实验方案及合适的体外模型等克服现有研究局限性，阐明瘤内微生物的作用机制，为微生物相关治疗策略在CRC乃至其他肿瘤中的临床应用奠定基础。

关键词：瘤内微生物结直肠癌特异性分布肿瘤微环境

强精片对初老雄性大鼠精子质量及雄激素生成、利用的影响

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中国中西医结合杂志 2024年

作者：严旭洪陈帝昂尤耀东李广森张培海黄晓朋董良申毅锋俞旭君常德贵成都中医药大学附属医院代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室成都中医药大学医学与生命科学学院

目的观察强精片对初老雄性大鼠精子质量及雄激素生成、利用的调节作用，并从雄激素受体（AR）及睾酮合成通路探索其作用机制。方法将6只2月龄SD大鼠设为对照组，将24只19月龄SD大鼠随机分为模型组、强精片低、中、高剂量组，每组6只... 详细信息

目的观察强精片对初老雄性大鼠精子质量及雄激素生成、利用的调节作用，并从雄激素受体（AR）及睾酮合成通路探索其作用机制。方法将6只2月龄SD大鼠设为对照组，将24只19月龄SD大鼠随机分为模型组、强精片低、中、高剂量组，每组6只。对照组和模型组采用生理盐水灌胃，强精片低、中、高剂量组灌胃相应剂量药物[0.72、1.44、2.88 g/（kg·d）]，干预4周。检测精子密度、精子存活率、活动精子率。ELISA法检测血清黄体生成素（LH）、总睾酮（TT）、游离睾酮（FT）及性激素结合球蛋白（SHBG）水平，并计算睾酮分泌指数（TSI）。Western Blot法检测睾丸AR、类固醇急性生成调节蛋白（StAR）、细胞色素P450侧链裂解酶（CYP11A1）、细胞色素P450 17-α-羟化酶/20-裂解酶（CYP17A1）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-HSD）蛋白表达水平。结果与对照组比较，模型组精子密度、精子存活率、活动精子率、TSI降低（P<0.01），血清SHBG水平及AR、StAR、3β-HSD蛋白表达升高（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较，强精片高剂量组精子密度、精子存活率、活动精子率升高（P<0.01）；强精片中、高剂量组TSI降低（P<0.05）,CYP17A1蛋白表达升高（P<0.01）；强精片低、中、高剂量组AR蛋白表达升高（P<0.01）,StAR、3β-HSD、CYP11A1蛋白表达降低（P<0.01）。结论强精片能改善初老雄性大鼠精液质量，缓解睾酮生成过程中的代偿，增加睾丸组织雄激素利用，其机制可能与调控StAR、3β-HSD、CYP11A1、CYP17A1并上调睾丸组织AR表达有关。

关键词：强精片初老生殖衰老精子雄激素中药复方

参芪复方对糖尿病GK大鼠肝脏组织mRNA、lncRNA表达谱的影响

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中华中医药学刊 2024年第1期42卷 46-51,I0008-I0012页

作者：刘桠张翕宇谢春光徐刚彭思涵成都中医药大学附属医院四川成都610072 代谢性疾病中医药调控四川省重点实验室四川成都610072

目的应用全转录组测序与实时聚合酶链锁反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术,探索参芪复方调控糖尿病GK大鼠肝脏信使RNA(messenger RNA,mRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)表达谱的机制研究。方法采用高脂高糖饲料建立2型糖尿病模型,将GK大鼠随机分为模型组、参芪复方组和西药组。另将10只Wistar大鼠设为空白组,予普通饲料喂养。参芪复方组大鼠予参芪复方浸膏灌胃,西药组予西格列汀混悬液灌胃,模型组及空白组灌服生理盐水。干预12周,每周检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)。运用HE染色法观察大鼠肝脏组织病理形态,在空白组、模型组和参芪复方组中每组随机选取4只大鼠进行全转录组测序,构建mRNA、lncRNA差异表达谱,分析差异基因生物学功能,并进行RT-qPCR验证。结果与空白组相比,糖尿病GK大鼠FBG显著升高(P代谢过程相关信号通路改善糖尿病,包括胰岛素分泌、非酒精性脂肪性肝病、胆固醇代谢、鞘脂代谢、胰岛素抵抗等信号通路。RT-qPCR结果显示,基因Irf1、Trim30、Tmcc3、Insig1与转录组结果一致,转录组准确性较高。结论参芪复方发挥调节血糖及改善肝脏脂质沉积、水肿的作用,可能与广泛调控mRNA、lncRNA的差异表达有关。

关键词：参芪复方 2型糖尿病长链非编码RNA(lncRNA) 信使RNA(mRNA)