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毛叶芋兰不同组织qRT-PCR内参基因选择与验证

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热带作物学报 2025年第1期46卷 35-43页

作者：池珈仪刘舒璇向思诗詹若挺何瑞广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心/广州中医药大学岭南中药资源教育部重点实验室/广州中医药大学中药学院广东广州510006

毛叶芋兰(Nervilia plicata)是一种珍稀南药,目前对其有效成分及其分子调控机理鲜有报道。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)在植物基因表达分析中得到了广泛应用,但在毛叶芋兰中缺少研究,限制了相关工作的开展。在... 详细信息

毛叶芋兰(Nervilia plicata)是一种珍稀南药,目前对其有效成分及其分子调控机理鲜有报道。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)在植物基因表达分析中得到了广泛应用,但在毛叶芋兰中缺少研究,限制了相关工作的开展。在前期工作基础上,本研究从毛叶芋兰转录组数据库中筛选出Actin、GAPDH、TUA、UBC、UBQ、EF-1α、EF-1β、CYP、RPL共9个常见管家基因,以毛叶芋兰叶片、叶柄和球茎3个组织部位为材料,开展qRT-PCR内参基因的筛选工作。经过9个基因在不同组织的表达水平、稳定性和综合分析,筛选出最适合的内参基因,并选择毛叶芋兰花青素合成途径关键基因NpDFR、Np3GT进行验证。结果发现:EF-1α和CYP的表达稳定性相近,整体稳定性最好。2个内参基因单独或共同使用时,NpDFR、Np3GT在不同组织的表达情况与转录组测序结果基本一致,表明其均可用作qRT-PCR的内参基因。本研究结果为进一步开展毛叶芋兰药效相关基因的分子作用机理研究提供依据。

关键词：毛叶芋兰内参基因实时荧光定量PCR 表达稳定性

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牡蛎的本草考证及现代研究进展

中国实验方剂学杂志 2025年第3期 223-234页

作者：张洪怡王彬刘佳雯胡媛陈林刘友平陈鸿平成都中医药大学药学院西南特色中药资源国家重点实验室

通过查阅历代本草古籍和炮制规范等相关文献资料，笔者对牡蛎的品名、产地、采收、品质、炮制历史沿革、相关炮制规范、现代炮制工艺、炮制前后化学成分和药理作用转变等方面进行系统考证和梳理，以期为牡蛎的炮制工艺研究和质量标准建... 详细信息

通过查阅历代本草古籍和炮制规范等相关文献资料，笔者对牡蛎的品名、产地、采收、品质、炮制历史沿革、相关炮制规范、现代炮制工艺、炮制前后化学成分和药理作用转变等方面进行系统考证和梳理，以期为牡蛎的炮制工艺研究和质量标准建立提供文献依据。经考证可知，牡蛎入药历史悠久，各时期出现的别名和俗称较多，《神农本草经》始以“牡蛎”为其正名并沿用至今，尚有牡蛤、左顾牡蛎、蠔壳等别称。该药材道地性广泛，采收时期多不固定。古人多认为其左壳质优，但现代并未见此说法。牡蛎的炮制方法包括研、熬、煅、炒、煨、炙、醋淬、盐淬、酒淬、童便制、米泔水制等，煅法沿用至今。1963—2020年版《中华人民共和国药典》均仅收载煅牡蛎，各地方炮制规范主要收录有煅牡蛎、盐牡蛎和醋牡蛎3种炮制品。其现代炮制研究主要集中在工艺优化、化学成分及药理作用转变方面，且研究方法较为单一。目前存在炮制规范不统一、工艺参数不明确、质量标准不完善等问题，不利于牡蛎的质量控制和临床规范用药。因此，进一步探究牡蛎及其炮制品的药效物质基础以阐明其炮制机制、规范其炮制工艺、完善其质量标准是十分必要的。

关键词：牡蛎本草考证炮制沿革质量控制化学成分药理作用

川产道地药材蓬莪术醋制入肝调控“肠-肝轴”的增效机制研究

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中草药 2025年第1期 133-144页

作者：高天慧林丽婷陈元惠徐李缘卿莹郭亭君廖婉成都中医药大学西南特色中药资源国家重点实验室药学院/现代中药产业学院

目的基于“肠-肝轴”学说，从“肝保护”及“肠屏障”角度表征蓬莪术醋制后对肝、肠的调节效应，揭示蓬莪术醋制增效机制。方法将昆明小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药（0.06 g/kg）组及蓬莪术生、醋品水煎液高、中、低剂量（3、2... 详细信息

目的基于“肠-肝轴”学说，从“肝保护”及“肠屏障”角度表征蓬莪术醋制后对肝、肠的调节效应，揭示蓬莪术醋制增效机制。方法将昆明小鼠随机分为对照组、模型组、阳性药（0.06 g/kg）组及蓬莪术生、醋品水煎液高、中、低剂量（3、2、1 g/kg）组，各组ig给药（10 mL/kg）,1次/d，连续给药4 d。末次给药1 h后，除对照组外，其余各组小鼠ip硫代乙酰胺（thioacetamide,TAA,100 mg/kg）建立肝损伤模型。测定小鼠肝脏指数；采用试剂盒检测血清中天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）水平，检测肝脏组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β、IL-10以及肠道IL-17A和分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,sIgA)的含量；苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色观察肝脏及回肠组织形态；免疫组织化学法检测回肠组织紧密连接蛋白1(zonula occludens proteins-1,ZO-1)、咬合蛋白（occludin）的表达；16S rDNA基因测序分析小鼠肠道菌群变化；Western blotting检测Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MYD88)及核因子-κB-p65(nuclear factor kappa-B-p65,NF-κB-p65)蛋白的表达。结果蓬莪术醋制前后均可改善肝损伤小鼠的肝脏炎症细胞浸润、肝细胞肿胀变大等变化，且醋制后显著降低肝脏指数、ALT、AST及MDA水平（P化，且醋制后显著升高occludin的蛋白表达（P<0.05），显著逆转由肝损伤引起的厚壁菌门丰度升高（P<0.05）、拟杆菌门丰度的降低（P<0.05）以及厚壁菌门与拟杆菌门比值的升高（P<0.05）；蓬莪术醋制前后均可升高肝损伤小鼠回肠内IL-17A(P<0.01)和s IgA水平（P<0.001），降低TNF-α、IL-1β、IL-6水平（P<0.05），同时抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路上关键蛋白MyD88、NF-κB-p65和TLR4(P<0.05)的表达，且醋制后显著升高IL-10水平（P<0.05），降低LPS水平（P<0.01），抑制TLR4(P<0.05)蛋白表达。结论蓬莪术醋制后通过保护肠道机械屏障、调节肠道生物屏障、修复肠道免疫屏障，抑制“肠-肝轴”TLR4/MyD88/NF-κB通路，可更好地发挥肝保护作用、改善肝损伤。

关键词：蓬莪术醋制入肝肠-肝轴 TLR4/MyD88/NF-κB通路肠道屏障保肝作用双去氧基姜黄素吉马酮

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不同年份标准仓储广陈皮表面微生物的分布

中国食品学报 2022年第3期22卷 281-287页

作者：陈林吴蓓陈鸿平王福胡媛刘友平成都中医药大学药学院中药标准化教育部重点实验室西部特色中药资源——省部共建国家重点实验室成都611137

目的:研究不同年份标准仓储广陈皮表面微生物的分布特点。方法:采用高通量测序的方法对贮存年限为0,1,2,3,4,5,10,15,30年的广陈皮进行测序,结合OUT分析、Alpha多样性分析与主成分分析方法,分析广陈皮表面真菌与细菌在“属”水平的分布... 详细信息

目的:研究不同年份标准仓储广陈皮表面微生物的分布特点。方法:采用高通量测序的方法对贮存年限为0,1,2,3,4,5,10,15,30年的广陈皮进行测序,结合OUT分析、Alpha多样性分析与主成分分析方法,分析广陈皮表面真菌与细菌在“属”水平的分布特点。结果:9个贮存年限的广陈皮样品中真菌的物种类型丰富程度总体为先上升后下降,在贮存年限为2,3,4,5,10年时,物种类型数目较多且均一性好。前10年的优势菌属主要为青霉菌属与曲霉属,而后是耐干霉菌属。有别于真菌,细菌种类数目的变化波动较大,但每种细菌的丰度变化幅度较小。优势细菌属有鞘氨醇单胞菌属、乳杆菌属、另枝菌属与泛菌属,分别为贮存年限0,1,2,4年样品的优势菌属,以及在各年份样品中均占有较高相对丰度的瘤胃球菌属。结论:根据不同年份菌属分布特点,建立了以真菌特征菌属为主,细菌特征菌属为辅的模式,可用于初步判断广陈皮药材的贮存时间。

关键词：标准仓储广陈皮细菌真菌特征菌属

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大黄素对高脂血症斑马鱼脂质代谢的作用研究

天然产物研究与开发 2019年第11期31卷 1873-1879页

作者：王成代旭阳龚莉虹余琳媛胡乃华李芸霞成都中医药大学药学院教育部中药材标准化重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地

研究大黄素对高脂血症斑马鱼脂质代谢的作用。将5 dpf转基因Tg(fli1:eGFP)斑马鱼随机分成普通饲料组(NCD)、高胆固醇饲料组(HCD)、大黄素组(Emo)。NCD组饲喂普通饲料,HCD组饲喂高胆固醇饲料,Emo组饲喂高胆固醇饲料且加入不同浓度的大黄... 详细信息

研究大黄素对高脂血症斑马鱼脂质代谢的作用。将5 dpf转基因Tg(fli1:eGFP)斑马鱼随机分成普通饲料组(NCD)、高胆固醇饲料组(HCD)、大黄素组(Emo)。NCD组饲喂普通饲料,HCD组饲喂高胆固醇饲料,Emo组饲喂高胆固醇饲料且加入不同浓度的大黄素(0.125、0.25、0.5μg/mL)。连续喂养10 d后,观测各组斑马鱼存活率、体重、体长、BMI的变化;在激光共聚焦显微镜下观察血管中胆固醇的积累;用总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)试剂盒测定斑马鱼体脂含量。结果显示,HCD组斑马鱼体重、体长均显著增加(P<0.01);TC、TG、LDL-c水平以及血管中胆固醇含量均显著上升(P<0.01);存活率、HDL-c水平均显著降低(P<0.001)。不同浓度的大黄素均可提高斑马鱼存活率;体重、体长、血管中的胆固醇含量均显著降低(P<0.01);TC和LDL-c水平均呈剂量依耐性下降(P<0.01);HDL-c水平均呈剂量依耐性上升(P<0.05)。大黄素对高脂血症斑马鱼脂代谢紊乱有较好的改善作用。

关键词：大黄素高脂血症斑马鱼脂质代谢动脉粥样硬化

模式生物斑马鱼在中药药效物质筛选中的应用进展

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中草药 2019年第24期50卷 6125-6134页

作者：王成龚莉虹郭朝成何林峰赵兴桃李芸霞成都中医药大学药学院教育部中药材标准化重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地

与哺乳动物相比,斑马鱼在药物药效筛选方面具有独特的优势,目前已受到医药学界越来越多的重视。近年来,对斑马鱼的探索已延伸和扩展到中药领域,特别是对我国具有多靶点、多途径、多环节作用的传统单味中药、复方和中成药等药效物质的筛... 详细信息

与哺乳动物相比,斑马鱼在药物药效筛选方面具有独特的优势,目前已受到医药学界越来越多的重视。近年来,对斑马鱼的探索已延伸和扩展到中药领域,特别是对我国具有多靶点、多途径、多环节作用的传统单味中药、复方和中成药等药效物质的筛选。作为一种完整的动物模型,斑马鱼可以对中药中发挥作用的有效化学成分进行全方面、深层次的研究,进而实现对中药药效物质进行便捷、快速和高通量的筛选。结合国内外近5年文献报道,综述了模式生物斑马鱼在中药药效物质筛选方面的最新研究进展,主要从筛选心血管药物、调脂保肝药物、抗骨质疏松药物、抗肿瘤药物、抗炎药物和其他药物6个方面和独特优势进行归纳总结,以期为模式生物斑马鱼在中药中的应用研究提供新的思路,以及为研究人员在中药新药研究方面提供借鉴参考。

关键词：斑马鱼中药药效物质高通量筛选心血管药物调脂保肝药物抗骨质疏松药物抗肿瘤药物抗炎药物

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藏药俄色果降血脂活性研究

中国新药杂志 2021年第18期30卷 1709-1714页

作者：陈华林徐俊蔡晓洋陈蓉敬勇康晋梅李敏成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地成都611137

目的:探究藏药俄色果的降血脂活性。方法:采用体外(医用脂肪乳诱导建立高脂细胞模型)和体内(高脂饲料诱导建立高脂血症小鼠模型) 2种高脂模型,进行俄色果的降血脂活性研究;同时,考察同等剂量的俄色果、俄色叶、山楂对高脂小鼠体重、脏... 详细信息

目的:探究藏药俄色果的降血脂活性。方法:采用体外(医用脂肪乳诱导建立高脂细胞模型)和体内(高脂饲料诱导建立高脂血症小鼠模型) 2种高脂模型,进行俄色果的降血脂活性研究;同时,考察同等剂量的俄色果、俄色叶、山楂对高脂小鼠体重、脏器指数、总胆固醇(total cholesterol, TC)、三酰甘油(triglyceride, TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase, AST)水平的影响,对比评价俄色果的降血脂效果。结果:在医用脂肪乳诱导的高脂细胞模型中,俄色果给药(50,100μg·mL^(-1))显著降低脂变性细胞内TC和TG水平;明显改善脂变性细胞的细胞形态。在高脂饲料诱导的高脂血症小鼠模型中,俄色果给药(0.75,1.5 g·kg^(-1),ig)能减缓高脂小鼠体重增长,显著降低肝脏指数及TC,TG,LDL-C,ALT,AST水平,升高HDL-C水平;同等剂量下,降TC效果比较山楂>俄色果>俄色叶;降TG,LDL-C,ALT效果比较俄色果>山楂>俄色叶;降AST效果比较:俄色果>俄色叶>山楂;升HDL-C效果比较:俄色叶>俄色果>山楂。结论:俄色果具有较好的降血脂活性,能显著改善血脂水平,减轻高脂饮食造成的肥胖症状,同时缓解肝损伤,且在降TG,LDL-C,ALT方面优于俄色叶和山楂。

关键词：藏药俄色果高脂血症 L-02细胞小鼠降血脂

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斑马鱼模型筛选何首乌肝毒性的物质基础

中国实验方剂学杂志 2019年第6期25卷 52-57页

作者：全云云周忆梦刘美辰李芸霞成都中医药大学药学院教育部中药材标准化重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地成都611137

目的:用斑马鱼模型探索何首乌肝毒性物质基础,为何首乌肝毒性作用机制研究提供一定的理论依据。方法:将对实验前期所筛选出来的大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷(... 详细信息

目的:用斑马鱼模型探索何首乌肝毒性物质基础,为何首乌肝毒性作用机制研究提供一定的理论依据。方法:将对实验前期所筛选出来的大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷、芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷(质量浓度分别为0. 000 73,0. 002 22,0. 015 05,0. 002 36,0. 198 95,0. 072 73 g·L^(-1))这6种何首乌中的化学成分,继续使用肝脏荧光转基因斑马鱼为动物模型,对受精后72 h的幼鱼连续给药3 d。分别测定给药后1,2,3 d的斑马鱼体内丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),谷胱甘肽(GSH)的活力和总胆红素(TBIL)的含量,分别对其进行切片分析,观察斑马鱼肝脏组织病理学改变。结果:大黄素、大黄酸、大黄素-1-O-葡萄糖苷、大黄素甲醚-8-O-葡萄糖苷对斑马鱼体内ALT,AST,GSH的活力和TBIL的含量无明显影响,其斑马鱼肝组织显示正常;芦荟大黄素能显著降低斑马鱼体内ALT,AST,GSH的活力(P <0. 01),显著升高TBIL含量(P <0. 01);芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷能显著降低斑马鱼体内ALT,GSH的活力(P <0. 01),明显升高TBIL含量(P <0. 05,P <0. 01),对斑马鱼体内AST的活力无明显影响,同时此二者的斑马鱼肝组织均出现大片片状坏死,肝组织细胞发生明显形态改变,肝细胞排列不规则等。结论:何首乌中的芦荟大黄素和芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷可对斑马鱼肝脏产生毒性作用,提示芦荟大黄素和芦荟大黄素-8-O-葡萄糖苷可能是何首乌的肝毒性物质基础。

关键词：何首乌斑马鱼肝毒性物质基础

蓬莪术种姜分级及其对植株生长与药材产量和品质的影响

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中国实验方剂学杂志 2021年第4期27卷 145-151页

作者：陈洁何金晓瞿雅懿徐俊敬勇陈蓉李敏成都中医药大学药学院中药材标准化教育部重点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地成都611137

目的:制定蓬莪术种姜分级标准,并探究种姜分级对蓬莪术生长、产量和品质的影响。方法:测定蓬莪术种姜样品的净度、种姜粗、种姜重、种姜长、发芽率、含水量指标,运用偏相关分析、方差分析及聚类分析,确定种姜分级指标,结合生产实际,制... 详细信息

目的:制定蓬莪术种姜分级标准,并探究种姜分级对蓬莪术生长、产量和品质的影响。方法:测定蓬莪术种姜样品的净度、种姜粗、种姜重、种姜长、发芽率、含水量指标,运用偏相关分析、方差分析及聚类分析,确定种姜分级指标,结合生产实际,制定蓬莪术种姜分级标准;然后以不同等级种姜为处理进行田间试验,分析种姜等级对植株生长、药材产量与品质的影响。结果:以种姜粗、种姜重为分级指标,将蓬莪术种姜分为3个等级。田间试验表明从植株生长情况分析,随着蓬莪术植株的生长发育,不同等级种姜植株的株高、叶长在块根膨大期时差异达显著性水平(P药材产量分析,各级种姜所产郁金、莪术药材产量大小均为一级种姜>二级种姜>三级种姜>等外级种姜;从药材商品等级占比分析,种姜等级越高所产一等郁金药材占比也越高;从药材品质分析,不同等级种姜所产郁金及莪术药材的浸出物、挥发油、吉马酮含量均无显著性差异。结论:通过对蓬莪术种姜分级方法进行系统研究,制定了种姜分级标准;通过田间试验发现,种姜分级种植能促进植株生长发育、增加药材产量、提高一等药材的比例且不影响药材内在品质,可见蓬莪术种姜分级具有科学性和必要性,能为实现蓬莪术的规范化种植奠定基础。

关键词：蓬莪术郁金莪术种姜等级生长产量品质