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糖蛋白激素LGR6的结构分析及其表达细胞株的建立

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南通医学院学报 2000年第1期20卷 3-5页

作者：徐立 Axel Methner Rainer Reinscheid 南通医学院生物化学教研室南通226001 德国汉堡大学细胞生化与临床神经生物学研究所

L GR6是新近分离出来的糖蛋白激素受体家族的新成员 ,对分离出来的全长 c DNA及其编码的蛋白质序列初步分析结果显示 ,该受体属于富含亮氨酸重复序列的 G-蛋白偶联受体。c DNA编码一个 977个氨基酸组成的多肽链 ,没有信号肽 ,跨膜区域长... 详细信息

L GR6是新近分离出来的糖蛋白激素受体家族的新成员 ,对分离出来的全长 c DNA及其编码的蛋白质序列初步分析结果显示 ,该受体属于富含亮氨酸重复序列的 G-蛋白偶联受体。c DNA编码一个 977个氨基酸组成的多肽链 ,没有信号肽 ,跨膜区域长为 2 64个氨基酸 ,受体的胞外区域含有 16个 LRR。组织分布的研究显示 ,该受体广泛表达于人体各组织 ,但骨骼肌中没有检测到。该受体在蛋白水平上与 L GR5有 5 1%的同源性。为进一步研究受体的功能 ,我们利用脂质体 DAC-3 0转染 HEK2 93细胞 ,建立了稳定表达 L GR6的细胞株 ,用于今后的研究 ,包括天然配基的分离。

关键词：糖蛋白激素 LRG6 结构分析表达细胞株建立

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新基因hKCNE4的克隆、表达及功能

基础医学与临床 2004年第5期24卷 542-546页

作者：滕思勇马丽娟林春霞甄一松陈敬洲 Olaf Pongs 惠汝太中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院中德实验室北京100037 德国汉堡大学分子神经生物学研究所

KCNE4是KCNE家族中的一员 ,编码电压依赖性钾通道的 β亚基。KCNE1、KCNE2、KCNE3均在人类基因组发现 ,并且有重要的生理功能 ,而KCNE4只是在鼠文库中得到 ,在人类cDNA文库中没有相关报道。本研究应用生物信息学分析 ,通过RT PCR和RACE... 详细信息

KCNE4是KCNE家族中的一员 ,编码电压依赖性钾通道的 β亚基。KCNE1、KCNE2、KCNE3均在人类基因组发现 ,并且有重要的生理功能 ,而KCNE4只是在鼠文库中得到 ,在人类cDNA文库中没有相关报道。本研究应用生物信息学分析 ,通过RT PCR和RACE方法 ,从人类心脏cDNA文库中获取人类hKCNE4全长cDNA序列。其全长1188bp ,编码 170个氨基酸 ,和鼠KCNE4蛋白具有 90 %同源性。NorthernBlot结果表明该基因在心脏、骨骼肌和肾脏高度表达。通过电子PCR方法将hKCNE4基因定位在 2q35 - 36。亚细胞定位表明该基因的编码产物定位在细胞膜上。

关键词：离子通道 hKCNE4 cDNA快速末端扩增 Northem blot 电生理克隆表达功能

长QT综合征相关基因新突变G52R-KCNE1的功能研究

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中华心血管病杂志 2004年第12期32卷 1072-1076页

作者：滕思勇马丽娟浦介麟林春霞柴咏平 Olaf 惠汝太中国医学科学院中国协和医科大学心血管病研究所阜外心血管病医院中德分子医学研究室心律失常中心北京100037 Pongs 德国汉堡大学分子神经生物学研究所

目的了解长QT综合征相关基因新突变G52R-KCNE1的功能。方法采用交叠PCR方法体外制备突变体G52R-KCNE1,并克隆到原核细胞表达载体中;体外合成RNA、显微注射入卵母细胞,在卵母细胞中共表达野生型KCNQ1(WT-KCNQ1)、野生型KCNE1(WT-KCNE1... 详细信息

目的了解长QT综合征相关基因新突变G52R-KCNE1的功能。方法采用交叠PCR方法体外制备突变体G52R-KCNE1,并克隆到原核细胞表达载体中;体外合成RNA、显微注射入卵母细胞,在卵母细胞中共表达野生型KCNQ1(WT-KCNQ1)、野生型KCNE1(WT-KCNE1)和突变体G52R-KCNE1,采用标准双电极电压钳了解突变体的功能。结果突变体G52R-KCNE1不能放大WT-KCNQ1通道的电流强度;当WT-KCNE1和G52R-KCNE1等量注射时,G52R-KCNE1可降低WT-KCNQ1／WT-KCNE1通道约50％的电流强度,而不影响该通道的激活动力学。结论位于跨膜区第52位的甘氨酸对维持KCNE1的功能非常重要;突变体G52R-KCNE1明显抑制WT-KCNE1通道的功能,这可能是突变基因携带者心肌细胞复极化延缓,QT间期延长的分子电生理机制。

关键词： KCNQ1 长QT综合征相关基因突变体携带者延缓功能研究表达载体显微注射卵母细胞

热灌注化疗对口腔颌面部恶性肿瘤患者NO及T淋巴细胞的影响

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中国口腔颌面外科杂志 2020年第6期18卷 521-525页

作者：刘英李晨曦王冰龚忠诚新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)颌面肿瘤外科新疆维吾尔自治区口腔医学研究所新疆乌鲁木齐830054 汉堡大学艾本德附属医院头部及神经中心口腔颌面外科口腔颌面部肿瘤遗传学及再生医学实验室德国汉堡20246

目的:探讨热灌注化疗对口腔颌面部恶性肿瘤患者NO及T淋巴细胞的影响。方法:选取汉堡大学休伯特斯·沃尔德癌症中心2017年12月—2019年12月收治的口腔颌面部恶性肿瘤患者60例,按照随机数字表法分为热化疗组(30例)与常规化疗组(30例),常... 详细信息

目的:探讨热灌注化疗对口腔颌面部恶性肿瘤患者NO及T淋巴细胞的影响。方法:选取汉堡大学休伯特斯·沃尔德癌症中心2017年12月—2019年12月收治的口腔颌面部恶性肿瘤患者60例,按照随机数字表法分为热化疗组(30例)与常规化疗组(30例),常规化疗组患者给予单纯静脉化疗,热化疗组患者在静脉化疗的基础上给予热化疗。比较2组患者的治疗效果、NO及T淋巴细胞数量、生存质量以及毒副反应之间的差异。采用SPSS 22.0软件包进行数据统计。结果:热化疗组的治疗有效率及疾病控制率显著高于常规化疗组。治疗后,热化疗组患者NO含量显著高于常规化疗组,CD4^+、CD4^+/CD8^+显著高于常规化疗组,热化疗组患者体力功能、情感功能、社会功能等功能性指标及综合生存质量评分显著高于常规化疗组,疲劳、疼痛、便秘等症状性指标显著低于常规化疗组,差异均具有统计学意义(P学意义(P>0.05)。结论:热化疗可显著提高口腔颌面部恶性肿瘤患者的治疗效果及NO含量,改善患者的免疫功能,提高生存质量,且安全性较高。

关键词：热化疗一氧化氮 T淋巴细胞口腔颌面部恶性肿瘤免疫功能

Octreotide治疗垂体生长激素腺瘤的体外分子学研究

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中国临床神经外科杂志 1996年第1期1卷 49-52页

作者：雷霆蒋先惠 Adams EF Buchfelder M Fahlbusch R 同济医科大学附属同济医院神经外科武汉430030 德国Erlangen-Nürnberg大学神经外科医院

本文采用PCR和直接序列分析以及原代细胞培养方法研究了32例垂体生长激素(GH)腺瘤的生化特征,发现21例gsp癌基因阴性肿瘤中大多对Octreotide无反应,而11例gsp癌基因阳性肿瘤中就有9例对Octreotide敏感。推测其机理可能与Octreotide通过G... 详细信息

本文采用PCR和直接序列分析以及原代细胞培养方法研究了32例垂体生长激素(GH)腺瘤的生化特征,发现21例gsp癌基因阴性肿瘤中大多对Octreotide无反应,而11例gsp癌基因阳性肿瘤中就有9例对Octreotide敏感。推测其机理可能与Octreotide通过GH释放抑制因子受体,进而GTP调节蛋白而负反馈调节腺苷酸环化酶活性所致。提示gsp癌基因可作为评价GH释放抑制因子类似物治疗GH腺瘤反应性的分子生物学指标。

关键词：治疗肿瘤癌基因 GH 垂体生长激素腺瘤体外分子学调节蛋白抑制因子酶活性

强迫症患者前额叶、海马磁共振质子波谱成像的研究

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强迫症患者前额叶、海马磁共振质子波谱成像的研究

作者：卢蕴容浙江大学

学位级别：硕士

背景强迫症是一种以强迫观念和强迫动作为特征的疾病，病因尚未阐明。国际上已有大量的神经影像学研究如磁共振成像（MRI）、正电子发射型断层成像（PET）、单光子发射型断层成像（SPECT）等研究提示，强迫症患者存在大脑结构及功能的... 详细信息

背景强迫症是一种以强迫观念和强迫动作为特征的疾病，病因尚未阐明。国际上已有大量的神经影像学研究如磁共振成像（MRI）、正电子发射型断层成像（PET）、单光子发射型断层成像（SPECT）等研究提示，强迫症患者存在大脑结构及功能的异常，尤其在大脑前额叶、海马、尾状核等部位较为明显。近年来，非侵入性的功能性神经影像手段——磁共振波谱分析技术（MRS），特别是H-MRS，得以广泛的关注。磁共振质子波谱分析（H-MRS）是利用磁共振显像和化学位移作用，检测活体组织能量代谢、生化改变及化合物定量分析的一种无创性影像技术。国内外MRS技术已经广泛应用于精神分裂症、抑郁症、癫痫等神经精神疾病的研究，但关于强迫症的MRS研究相对较少，据文献检索发现，国外近十年仅有不到十项研究结果，这些研究结果也是颇不一致，而国内尚未见报道。我们拟通过H-MRS技术对强迫症患者前额叶、海马脑组织N-乙酰天门冬氨酸（NAA）、胆碱（Cho）、肌酸（Cr）三种代谢物进行定量分析，旨在探讨强迫症患者脑功能的变化特点，为强迫症的神经生物学基础研究提供线索，为强迫症的临床诊断和治疗提供更客观的依据。对象和方法10例[女性6例，男性4例;年龄18～60岁，平均年龄（32.4±12.6）岁]的强迫症患者与10例[女性6名，男性4名;平均年龄（30.3±6.5）岁]的性别、年龄、受教育时间均匹配的健康对照者入组研究。采用1.5-Tesla超导磁共振扫描仪（德国西门子公司），先行MRI快速定位成像，选取双侧前额叶和双侧海马区对称部位相同容量的感兴趣范围后行H-MRS检查，采用点分辨表面线圈法（PRESS）空间定位技术，单体素多次采集，体素体积15×15×15mm，重复时间（TR）1500 ms，回波时间（TE）135 ms，平均次数（NA）192次，扫描时间（TA）4 min 48 sec。机器自动匀场、水抑制（CHESS）及调谐以避免伪影，使用长回波时间提高信号清晰度，信号经西门子随机软件（2002B版本）处理后转换为数据和波谱图来反映NAA、Cho、Cr水平，数值以百万单位（ppm）表示，计算NAA／Cr和Cho／Cr比值。所获数据用SPSS11.0软件包进行统计分析。结果研究结果显示：强迫症组患者双侧前额叶NAA／Cr均高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）;强迫症组患者右侧前额叶NAA明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）;强迫症组患者左侧前额叶NAA与对照组的差异无统计学意义（P＞0.05）;强迫症组患者双侧前额叶Cho、Cr、Cho／Cr与对照组的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。强迫症组患者左侧海马NAA／Cr明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），而在右侧海马并未见到这样的统计学差异;强迫症组患者双侧海马Cho／Cr均高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）;强迫症组患者右侧海马Cho明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01），而在左侧海马并未见到这样的统计学差异。结论本研究的结果显示强迫症患者双侧前额叶及左侧海马神经元活性有增高。结果还提示强迫症患者海马的细胞膜代谢可能存在异常，推测这种异常可能与强迫症患者所合并存在的焦虑情绪有关。双侧海马可能还存在神经胶质细胞的增生，在右侧更为明显，以致影响右侧海马神经元的功能，出现双侧海马神经元功能变化不一致的现象。在强迫症患者的海马及双额叶均未见到明显的能量代谢异常。

关键词：强迫症磁共振质子波谱前额叶海马

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五氯硝基苯对雄性小鼠生殖系统毒性作用

五氯硝基苯对雄性小鼠生殖系统毒性作用

作者：王新吉林大学

学位级别：硕士

五氯硝基苯属于有机氯杀菌剂。有机氯农药挥发性低,不易分解,残留期长,不溶于水,易溶于有机溶剂和脂肪等,侵入机体后,易蓄积在脂肪含量较高的组织和脏器中,造成慢性中毒,引起各种特异性疾病。五氯硝基苯作为一种土壤杀菌剂和拌种剂广泛... 详细信息

五氯硝基苯属于有机氯杀菌剂。有机氯农药挥发性低,不易分解,残留期长,不溶于水,易溶于有机溶剂和脂肪等,侵入机体后,易蓄积在脂肪含量较高的组织和脏器中,造成慢性中毒,引起各种特异性疾病。五氯硝基苯作为一种土壤杀菌剂和拌种剂广泛应用于大棚蔬菜的病菌防治和大田种子病虫害的预防。我国功效植物如人参、银杏等在栽种过程中,杀菌剂五氯硝基苯的施用量较大,致使该类保健食品中五氯硝基苯的残留量较高,导致产品质量下降,目前五氯硝基苯已被列为人参类产品质量检验指标之一。作为杀菌剂,因为五氯硝基苯对实验动物存在严重慢性毒性作用,先后被瑞典、奥地利、德国等国家禁用。研究表明五氯硝基苯可导致肝、肾和神经系统的损伤。生殖系统是机体的一个重要组成部分,也经常是外来化学物攻击的靶器官。随着环境污染和饮食污染的不断加剧,不孕不育的患者也不断增多,而五氯硝基苯在某些食品中的残留量很高,所以对其生殖毒性的研究就更具有重要意义。本实验目的在于探讨五氯硝基苯对雄性小鼠生殖系统的生殖毒性,及可能的作用机制。本实验选用雄性ICR小鼠,采用灌胃的染毒方法以不同浓度进行染毒,分别从一般指标、形态学指标、生化指标、细胞学改变等方面研究了PCNB对小鼠生殖系统的影响,并探讨其影响的机制。实验结果表明:通过对小鼠形态学指标(如:精子畸形率等),生殖系统特异酶(如:LDH-L),病理学改变,睾丸细胞凋亡的影响以及一些生化指标(如:MDA、过氧化氢等)的观察,显示PCNB对小鼠生殖系统具有毒性作用,能够造成小鼠精子畸形率升高,引起睾丸细胞凋亡指数的升高,病理改变,致使精子畸形率增加。PCNB对小鼠睾丸具有氧化损伤作用。初步确定小鼠睾丸为PCNB作用的靶器官之一。

关键词：五氯硝基苯 MDA 过氧化氢 LDH 精子畸形率

HIV相关microRNAs表达的临床意义及AIDS患者长期治疗随访研究

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作者：王莉彦浙江大学

学位级别：硕士

抗逆转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)使艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)从一个致死性疾病转变为目前可防可控的慢性病。但是目前的药物仅能抑制而不能根除病毒,故寻找更有效的诊疗手段一直都是研究热点,其... 详细信息

抗逆转录病毒治疗(antiretroviral therapy,ART)使艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome,AIDS)从一个致死性疾病转变为目前可防可控的慢性病。但是目前的药物仅能抑制而不能根除病毒,故寻找更有效的诊疗手段一直都是研究热点,其中微小RNA(micro ribonucleic acid,miRNA)靶向治疗、CRISPR/Cas9基因编辑等基因疗法为疾病治愈提供了可能。同时,疗效的保证建立在及时诊断、规范给药的前提下。为了确认AIDS患者长期生存的可能性,我们对长期治疗的AIDS病人进行了生存随访的分析,了解疗效及依从性的情况,以期总结经验,优化策略,提升患者生活品质。故本研究从探索方法和新策略两个方面入手,力求为优化HIV治疗提供新的科学依据及综合治疗策略。研究的第一部分中,我们从基础层面找寻新治疗靶点。miRNA作为重要的宿主因子,可在人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HI V)感染的过程中与之发生复杂的相互作用,一方面细胞内许多miRNAs对HIV具有抑制作用,另一方面HIV也会反过来影响miRNA的表达,导致表达谱的改变。miRNA或可成为HIV感染的生物标志物或潜在治疗靶点。我们利用基因芯片分析HIV感染者(包括治疗者与未治疗者)与健康人群PBMC中miRNA的表达谱,发现这三组人群之间存在显著差异(P细胞模型验证,hsa-miR-191-5p对HIV的复制表现出了抑制作用。为探求其作用机制,我们通过生物信息学数据库与文献检索等手段对靶分子进行预测。经定量PCR和构建报告基因,发现hsa-miR-191-5p可能是通过抑制CCR1和(或)NUP50实现对HIV的抑制效应,在进一步探究潜在治疗靶点提供了科学依据。在研究的第二部分中,我们为了解目前治疗的有效性、最大程度降低其副作用、提高HIV感染者的生活质量,分析了 6位治疗30年左右并随访至今的珍贵德国病例。这些病人目前平均年龄为58.33岁,均为男性,经男男性接触感染。首次诊断时,他们的平均年龄仅为28.83岁,平均CD4+T淋巴细胞只有226.67/μL,而病毒载量平均高达1.3×105 copies/mL。除HIV感染以外,同时还伴有多种机会性感染、心血管疾病以及血糖血脂代谢异常等,已达到HIV感染晚期,即AIDS期。一经诊断,他们马上接受了相应的治疗,并坚持每3个月在医院接受一次随访。我们将每5年的随访结果汇总,整理成图表,发现经过30年左右的治疗,目前这些病人的CD4+T细胞都达到了正常水平,平均778.67/μL,病毒载量均低于检测值(神经系统、消化系统疾病及代谢异常等问题也得到了有效治疗。分析历年的实验室检查指标,病人的血常规指标、活化部分凝血激酶时间、淋巴细胞亚群分析以及生化指标检查结果,绝大部分都逐渐趋近或达到了正常水平,仅少数指标仍有异常。总体CD8+T细胞目前水平为 905.50/μL,HLADR 活化细胞 359.17/μL,CD4/CD8 比值为 1.17。偏高 CD8+T细胞计数以及HLADR,有所上升但仍低于正常的CD4与CD8比值(病人1除外,已达到2.8),表明了持续的免疫激活。这些患者最初均患有代谢相关疾病。治疗前的平均血糖5.83 mmol·L-1,但目前为4.97 mmol·L-1。经治疗,病人1和病人4的血脂虽有控制但尚未调整到正常水平,其余患者平均胆固醇4.5 mmol·L-1,甘油三酯1.09 mmol·L-1。在患病的过程中,几乎每个病人都有不同程度的心理疾病存在,病人出现抑郁、睡眠障碍、偏头痛等情况,医生诊断后,采用药物与心理疏导相结合的方式,目前已经明显改善。从随访过程中的检查结果以及病情记录来看,通过积极的治疗,他们的身体状况有明显好转。以上结果提示,只要病人依从性好,与医护积极沟通,及时处理并发症、继发疾病以及在当前治疗方案失败后更换合适有效的药物,即使在初次诊断已经达到了艾滋病期,患者仍可以长期生存。

关键词： HIV 艾滋病抗逆转录病毒治疗 microRNA 长期随访

血清视黄醇结合蛋白4与2型糖尿病视网膜病变相关性的临床研究

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血清视黄醇结合蛋白4与2型糖尿病视网膜病变相关性的临床研究

作者：李鹏伟郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的随着人类生活水平的提高和老龄化的加快,2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2DM)患者数量逐年增加。糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是T2DM的主要并发症,是造成视力损害和可预防性失明的主要原因。约三分之一糖尿病患者... 详细信息

背景和目的随着人类生活水平的提高和老龄化的加快,2型糖尿病(Type 2 diabetes,T2DM)患者数量逐年增加。糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)是T2DM的主要并发症,是造成视力损害和可预防性失明的主要原因。约三分之一糖尿病患者患有DR,而三分之一DR为威胁视力的糖尿病视网膜病变(VTDR)——包括糖尿病黄斑水肿(diabetic macular edema,DME)和增殖性DR(Proliferative diabetic retinopathy,PDR)。长期高血糖是导致DR的主要原因,控制血糖虽然能够有效减少DR的发生、发展,但并不能将其完全阻止。目前,DR的发病机制尚未清楚。除长期高血糖外,许多因素也参与DR的发展,而视黄醇结合蛋白4(retinol-binding protein 4,RBP4)是一种新的脂肪细胞因子,与肥胖、胰岛素抵抗、心血管疾病、T2D微血管并发症存在临床联系。血清RBP4主要由肝脏合成的,可与维生素A、甲状腺素转运蛋白(transthyretinTTR)结合成三元复合物,从而参与维生素A的转运。近年研究发现,RBP4还可由脂肪细胞分泌,并参与胰岛素抵抗,这引起了众多学者对血清RBP4新的关注。此外,有两个临床研究发现,PDR与轻度或无视网膜病变的糖尿病患者相比,血清RBP4水平增加。全视野视网膜电图(Full-Field Electroretinograms,F-ERG)能够记录下全视网膜神经细胞的电生理活动情况,其中b波主要反映内层视网膜中双极细胞的功能,其振幅可用于DR的早期病情程度的评估。鉴于目前血清RBP4在DR中发病机制尚未明确,我们拟通过测量DR患者血清RBP4浓度及F-ERG的b波振幅,探索血清RBP4对DR发病机制的意义,为DR的早期防治提供依据。对象和方法对象:所有病例均为2015年10月到2016年10月河南省人民医院内分泌科收治的T2DM患者,共83例,其中男44例,女39例,年龄介于37到73岁之间,平均年龄55.7岁。分组:按照有无DR及DR的严重程度,将所有收集对象一共分三组:无糖尿病视网膜病组(NDR组)、合并非增殖性糖尿病视网膜病组(NPDR组)、合并增殖性糖尿病视网膜病组(PDR组)。NPDR组:视网膜病变包括微血管瘤、小出血点;黄白色硬性渗出、出血斑;棉絮斑、出血斑。PDR组:包括新生血管、玻璃体积血;纤维增生;并发牵拉性视网膜脱离。测定指标:采用德国西门子生化流水线检测研究对象的RBP4、糖化血红蛋白(HbA1c)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)等,并收集血压、身高、体重、糖尿病病程等数据。采用德国罗兰多焦视觉电生理仪测定患者视网膜电生理活动,收集刺激强度为3.0 cd·s/m2时F-ERG的b波振幅。统计学方法:采用SPSS22.0统计学软件对数据进行统计学处理。所有的计量资料以均数±标准差(?x±s)表示,NDR组、NPDR组、PDR组之间的计量资料比较采用单因素方差分析。NDR组、NPDR组、PDR组之间性别的构成比用?检验。采用Pearson检验分析RBP4与各因素之间的关系。以P学意义。结果:1.所有83例收集对象中,PDR组32例(38.55%),NPDR组20例(24.1%),NDR组31例(37.35%)。PDR组、NPDR组、NDR组之间RBP4[(56.72?9.82)mg/L vs(46.90?6.86)mg/L vs(41.68?9.15)mg/L,P学意义(P临床标志,我们推测血清RBP4除了胰岛素抵抗之外,还可能通过神经炎性损害机制造成DR的发生、发展。

关键词： 2型糖尿病糖尿病视网膜病变视黄醇结合蛋白4 全视野视网膜电图