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肾综合征出血热病毒血凝素纯化及免疫学性状分析

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中华实验和临床病毒学杂志 1997年第2期11卷 160-162页

作者：薛小平汪美先徐志凯马文煜西安第四军医大学分子病毒研究室

应用高压液相色谱法对粗制肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）血凝素分离纯化获得具有血凝活性的蛋白，效价１８０，分子量为５６６００。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蔗糖密度梯度超速离心分析显示具有均一的分子量和浮密度，多株位点特异性Ｍｃ... 详细信息

应用高压液相色谱法对粗制肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）血凝素分离纯化获得具有血凝活性的蛋白，效价１８０，分子量为５６６００。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和蔗糖密度梯度超速离心分析显示具有均一的分子量和浮密度，多株位点特异性ＭｃＡｂ分析证实，该蛋白有血凝抗原和中和抗原决定簇，免疫小鼠可产生特异性抗－ＨＦＲＳＶ抗体，其中和效价４０，血凝抑制效价６４。

关键词：肾综合征出血热血凝素病毒抗原单克隆抗体

HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第2期30卷 167-170,175页

作者：王冰冰涂建欣吕艳侯柏龙刘巧琼林晓云陈韶薛向阳朱珊丽张丽芳温州医科大学分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室浙江温州325000

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-... 详细信息

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性。结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白。结论成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白多克隆抗体

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海分枝杆菌ppk基因的生物学功能研究

复旦学报（医学版） 2016年第6期43卷 649-656页

作者：祝琳施旭骏高谦复旦大学基础医学院医学分子病毒学教育部/卫生部重点实验室上海200032

目的构建海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)ppk基因敲除株,对其生物学功能进行研究。方法利用基因同源重组技术,构建了海分枝杆菌ppk基因敲除株;使用DAPI染色法检测细菌胞内多聚无机磷酸盐(poly inorganic phosphate,poly-Pi)浓度;比... 详细信息

目的构建海分枝杆菌(Mycobacterium marinum)ppk基因敲除株,对其生物学功能进行研究。方法利用基因同源重组技术,构建了海分枝杆菌ppk基因敲除株;使用DAPI染色法检测细菌胞内多聚无机磷酸盐(poly inorganic phosphate,poly-Pi)浓度;比较野生株及突变株在不同环境压力下的生存能力;用野生株和突变株分别感染斑马鱼成鱼,通过观察斑马鱼的存活情况,研究ppk基因对海分枝杆菌毒力的影响。将野生株和突变株分别感染小鼠来源的巨噬细胞系RAW267.4,检测其在巨噬细胞内的增殖。结果 ppk突变株胞内polyPi浓度明显下降;在斑马鱼成鱼感染模型中出现显著减毒表型;其在小鼠来源的巨噬细胞感染模型中的增殖较野生型菌株明显减弱;在营养缺陷、抗生素(利福平、左氧氟沙星)等环境压力下,其生存能力下降。结论 ppk基因影响分枝杆菌在环境压力下的生存,并且在其致病中发挥重要作用。

关键词：分枝杆菌多聚磷酸盐激酶多聚无机磷酸盐

外源导入乙型肝炎病毒增强子Ⅱ片段对乙型肝炎病毒基因表达的影响

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病毒学报 1993年第3期9卷 274-277页

作者：袁正宏何丽芳闻玉梅吴雪汪垣上海医科大学分子病毒学实验室上海200032 中国科学院上海生化研究所

乙型肝炎病毒(HBV)基因组由一环状,部分双链DNA分子组成,分别编码S、C抗原X蛋白及多聚酶,这些基因的表达受启动子和增强子序列等的调控。近年国内外学者利用氯霉素乙酰转移酶(CAT)系统对HBV基因组进行缺失分析,发现了一个新的具有顺式调... 详细信息

乙型肝炎病毒(HBV)基因组由一环状,部分双链DNA分子组成,分别编码S、C抗原X蛋白及多聚酶,这些基因的表达受启动子和增强子序列等的调控。近年国内外学者利用氯霉素乙酰转移酶(CAT)系统对HBV基因组进行缺失分析,发现了一个新的具有顺式调控HBV基因转录的元件——增强子Ⅱ(EN Ⅱ),它位于1627-1774核苷酸之间。

关键词：乙型肝炎病毒增强子基因表达

传染性喉气管炎病毒糖蛋白G基因的原核表达、细胞定位及功能研究

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科学通报 2005年第18期50卷 1978-1983页

作者：孙照刚张曼夫中国农业大学生物学院动物分子病毒室

克隆测定了传染性喉气管炎病毒(ILTV)北京E3和Zhonghai毒株的糖蛋白G基因(gG)序列,并与多种动物的Ⅰ型α-疱疹病毒gG基因序列作了比对.通过克隆gG基因至原核表达载体pET30a(+)构建pET30a-gG质粒,IPTG诱导表达含pET30a-gG重组质粒的阳性... 详细信息

克隆测定了传染性喉气管炎病毒(ILTV)北京E3和Zhonghai毒株的糖蛋白G基因(gG)序列,并与多种动物的Ⅰ型α-疱疹病毒gG基因序列作了比对.通过克隆gG基因至原核表达载体pET30a(+)构建pET30a-gG质粒,IPTG诱导表达含pET30a-gG重组质粒的阳性宿主菌后,分离纯化得到分子量约35kD的His-GG融合蛋白.利用该融合蛋白制备的纯化的抗His-GG大鼠多抗血清,观测ILTV糖蛋白G的在细胞上的分布,发现糖蛋白G主要存在于宿主细胞的细胞核外周及细胞膜上,在散在细胞内的分布较为分散,而在融合细胞的结合部位分布较为集中.利用抗体中和病毒糖蛋白G的实验结果表明,糖蛋白G可能参与病毒从细胞到细胞的直接感染(CTCS),从而影响病毒复制和噬斑的形成.

关键词：糖蛋白G 原核表达定位功能传染性喉气管炎病毒病毒糖蛋白原核表达载体细胞定位 gG基因功能研究

Modified Vaccinia Virus Ankara Induces Autophagy to Enhance Endogenous MHC ⅡAntigen Processing Pathways in Dendritic Cells

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Modified Vaccinia Virus Ankara Induces Autophagy to Enhance ...

ε分子内完整的侧向突出结构对鸭乙肝病毒反转录酶启动引发至关重要

中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：张懿 Frank Thiele Ingo Drexler 德国慕尼黑工业大学病毒所重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室德国杜塞尔多夫大学分子病毒所

Modified vaccinia virus Ankara(MVA)is non-permissive in human cells due to a blockage of viral replication occurs at the late stage of virion *** is considered as a prospective vaccine candidate for immunotherapy because of high safety record and strong ***,an intracellular bulk system,can engulf cytoplasmic pathogens and deliver them to lysosomes for lysis or engergy recycling,so that subsequently facilitates antigen ***

关键词：

来源： cnki会议评论

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病毒学报 2009年第4期25卷 296-302页

作者：胡康洪冯辉李卉中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室武汉430071 德国雷根斯堡大学分子和细胞解剖学研究所雷根斯堡d93053

通过构建鸭乙肝病毒ε(Dε)的RNA文库并利用指数级富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选的策略,获得与反转录酶(P蛋白)高度亲和的适配子(Aptamer),再通过体外引发实验和核酸酶切割方法测定全部适配子的RNA二级结构,以研究鸭乙型肝炎病毒(D... 详细信息

通过构建鸭乙肝病毒ε(Dε)的RNA文库并利用指数级富集的配体系统进化技术(SELEX)筛选的策略,获得与反转录酶(P蛋白)高度亲和的适配子(Aptamer),再通过体外引发实验和核酸酶切割方法测定全部适配子的RNA二级结构,以研究鸭乙型肝炎病毒(Duck Hepatitis B Virus,DHBV)中对启动P蛋白引发步骤至关重要的ε结构信息。本研究发现凡是支持P蛋白启动引发的高亲和力适配子中均包含完整的侧向突出结构;而一旦侧向突出被破坏,则适配子均不再支持P蛋白启动引发。本研究的结果表明Dε分子内部的一个完整侧向突出结构对于P蛋白启动引发是必不可少的。

关键词：鸭乙型肝炎病毒反转录酶 ε 侧向突出

RT－PCR联合一步法扩增G蛋白α亚基基因的开放阅读框

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武汉植物学研究 1996年第2期14卷 97-100页

作者：彭艳华黄永秀齐义鹏武汉大学病毒系分子病毒室中国科学院武汉植物研究所

报道逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）联合一步程序，扩增大于１ｋｂ的拟南芥菜Ｇ蛋白α亚基基因的开放阅读框。该程序中，当ＲＮＡ模板和引物变性，并在同一管中加入ＰＣＲ缓冲液、４种ｄＮＴＰ底物、逆转录酶和ＴａｑＤＮＡ聚... 详细信息

报道逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）联合一步程序，扩增大于１ｋｂ的拟南芥菜Ｇ蛋白α亚基基因的开放阅读框。该程序中，当ＲＮＡ模板和引物变性，并在同一管中加入ＰＣＲ缓冲液、４种ｄＮＴＰ底物、逆转录酶和ＴａｑＤＮＡ聚合酶之后，就不需其它手工操作步骤，因而可同时进行大批量样品的操作。实验结果证明ＡＭＶ（鸟类骨髓性白血病病毒）逆转录酶对ＴａｑＤＮＡ聚合酶的活性没有抑制作用。这种ＲＴ－ＰＣＲ联合一步法可从０．５μｇ的总ＲＮＡ中快速地扩增长于１．０ｋｂ的ｃＤＮＡ片段。

关键词：拟南芥菜 RT-PCR 开放阅读框 G蛋白 α亚基基因

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原代肝细胞分离培养技术现状及展望

世界华人消化杂志 2009年第21期17卷 2164-2170页

作者：牟卉卉胡康洪中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室湖北省武汉市430071 德国雷根斯堡大学分子和细胞解剖学研究所德国雷根斯堡93051

原代肝细胞的分离和培养是建立体外HBV感染的细胞模型和临床应用生物人工肝的关键步骤,许多学者对肝细胞分离和培养技术做了大量探索.本文就近年来建立的各种肝细胞分离技术和培养技术的优缺点进行比较,并对该领域今后的发展前景作了展望.

关键词：原代肝细胞乙型肝炎病毒生物人工肝肝细胞分离培养技术