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基于干细胞的胶质细胞源性神经营养因子和睫状神经营养因子对CLN7型神经元蜡样脂褐质沉积症小鼠模型视网膜退行性病变的治疗研究

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中华眼底病杂志 2024年第7期40卷 526-537页

作者：魏莹莹 Udo Bartsch 汉堡-埃彭多夫大学医学中心眼科德国汉堡100731 长沙湘江爱尔眼科医院长沙410011

目的观察CLN7型神经元蜡样脂褐质沉积症小鼠模型视网膜变性的形态学和功能学改变,以及基于神经干细胞(NSC)的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和(或)睫状神经营养因子(CNTF)对小鼠光感受器细胞的治疗效果。方法鼠龄14 d的CLN7型小鼠100... 详细信息

目的观察CLN7型神经元蜡样脂褐质沉积症小鼠模型视网膜变性的形态学和功能学改变,以及基于神经干细胞(NSC)的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和(或)睫状神经营养因子(CNTF)对小鼠光感受器细胞的治疗效果。方法鼠龄14 d的CLN7型小鼠100只随机分为实验组、对照组,分别为80、20只。鼠龄14 d的C57BL/6J小鼠20只设定为野生型组(WT组)。对照组、WT组小鼠不作任何处理,于2、4、6月龄时,采用免疫组织化学染色观察视网膜视锥细胞、视杆-双极细胞、视锥-双极细胞分布和数量变化;采用视网膜电图(ERG)检查记录暗视a、b波及明视b波振幅。实验组小鼠随机选取单侧眼为实验眼,玻璃体腔分别注射2μl CNTF-NSC、GDNF-NSC、CNTF-NSC和GDNF-NSC 1:1细胞混合物(GDNF/CNTFNSC),并据此再分为CNTF-NSC组、GDNF-NSC组、GDNF/CNTF-NSC组;对侧眼玻璃体腔注射不含神经营养因子(NTF)的NSC 2μl作为自身对照组。实验组不同治疗亚组于小鼠2、4月龄时,采用免疫组织化学染色观察光感受器细胞的数量;采用ERG检查记录暗视a、b波及明视b波振幅;小鼠4月龄时,观察移植的NSC分化情况和NTF表达。两组间比较采用双因素方差分析。结果与WT组比较,小鼠2、4、6月龄时,对照组小鼠周边区视网膜视锥细胞密度(F=285.10),中央区、周边区视网膜视杆-双极细胞密度(F=823.20、346.20)、视锥-双极细胞密度(F=356.30、210.60)以及暗视a、b波振幅(F=1911.00、387.10)均显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论随年龄增长,CLN7型小鼠表现出渐进性加重的退行性变化,这种变化在光感受器细胞和双极细胞的形态结构及功能上是一致的。基于NSC玻璃体内递送的CNTF和GDNF/CNTF均对光感受器细胞有保护作用,但联合使用GDNF/CNTF并未展现出比各自单独使用时更显著的协同保护效果。GDNF对CLN7型小鼠视网膜的形态和功能均没有治疗效果。

关键词：神经元蜡样质脂褐质沉积症7型胶质细胞源性神经营养因子睫状神经营养因子慢病毒神经干细胞眼内干细胞移植神经保护

槲皮素通过抑制p38 MAPK/NOX4信号通路减轻H_(2)O_(2)诱导的人子宫内膜基质细胞氧化应激损伤

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四川大学学报（医学版） 2024年第3期55卷 552-558页

作者：陈秀楠王瑞琦单红英周平李蓉北京大学第三医院生殖医学中心北京100191

目的探讨槲皮素对过氧化氢(hydrogen peroxide, H_(2)O_(2))诱导人子宫内膜基质细胞(human endometrial stromal cells, HESCs)损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法体外培养HESCs,加入不同浓度的槲皮素(0、10、20和40μmol/L)作用... 详细信息

目的探讨槲皮素对过氧化氢(hydrogen peroxide, H_(2)O_(2))诱导人子宫内膜基质细胞(human endometrial stromal cells, HESCs)损伤的保护作用及其可能的作用机制。方法体外培养HESCs,加入不同浓度的槲皮素(0、10、20和40μmol/L)作用24 h,验证给予不同剂量的槲皮素对正常子宫内膜细胞没有毒性,随后采用250μmol/L H_(2)O_(2)孵育细胞12 h,建立H_(2)O_(2)诱导的HESCs损伤模型。槲皮素预处理24 h,H_(2)O_(2)刺激HESCs后,CCK-8检测细胞活力,筛选有效的干预剂量,随后将HESCs分为空白组、H_(2)O_(2)模型组、H_(2)O_(2)+槲皮素组,采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;AnnexinⅤ/PI双染,流式细胞术检测槲皮素对H_(2)O_(2)诱导HESCs凋亡的影响;JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位;Western blot检测相关蛋白NADPH氧化酶4(NADPH oxidase 4, NOX4)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK)及磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达。结果根据CCK-8实验结果,选择槲皮素20μmol/L为有效干预剂量。ROS检测显示,与空白组相比,H_(2)O_(2)模型组ROS的平均荧光强度升高(P保护作用,其机制可能是减少ROS过量累积以及抑制p38 MAPK/NOX4信号通路。

关键词：槲皮素子宫内膜基质细胞氧化应激细胞凋亡活性氧

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人类生殖细胞低温冷冻保存现状与研究进展

中华生殖与避孕杂志 2024年第1期44卷 103-108页

作者：蒋冉胡静怡姚桂东郑州大学第一附属医院生殖医学中心郑州450052

人类生殖细胞低温冷冻作为生育力保存的一种方式,在辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)发展中起着重要作用,目前该技术已成为生殖医学领域的研究热点之一,并在辅助生殖实践中得到越来越广泛的应用。为提高ART的成功率... 详细信息

人类生殖细胞低温冷冻作为生育力保存的一种方式,在辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)发展中起着重要作用,目前该技术已成为生殖医学领域的研究热点之一,并在辅助生殖实践中得到越来越广泛的应用。为提高ART的成功率,冷冻保存技术在发展中不断改进,尤其是冷冻策略的选择和冷冻保护剂的改良与优化。冷冻保存技术适用于行ART治疗或是因疾病导致的生育力下降而进行的卵母细胞、精子、胚胎冷冻保存的群体,也适用于癌症患者为保存生育力而进行的卵巢及睾丸组织冷冻保存。然而,不同的冷冻方法对于不同生殖细胞类型的冷冻效果并不一致,且目前不同生殖细胞冷冻效果的评价尚缺乏合理有效的标准。本文综述了人类生殖细胞低温冷冻保存技术的发展现状及应用,并探讨了低温保存未来的发展方向。

关键词：卵母细胞精子睾丸组织胚胎卵巢组织低温冷冻保存

应用自然周期与激素替代疗法行首次冻融胚胎移植的年轻患者临床结局分析

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中华生殖与避孕杂志 2024年第5期44卷 463-470页

作者：李思晨卜志勤崔悦悦尹贝宁姚治伊张轶乐郑州大学第一附属医院生殖医学中心郑州450052

目的分析应用自然周期(natural cycle,NC)与激素替代疗法(hormone replacement therapy,HRT)行首次冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)的0.05);PSM后,纳入NC组和HRT组各1441例,两组患者的女方年龄、男方年龄、BMI等基线... 详细信息

目的分析应用自然周期(natural cycle,NC)与激素替代疗法(hormone replacement therapy,HRT)行首次冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)的大学第一附属医院生殖医学中心接受首次FET助孕的年轻不孕症患者4814例,根据内膜准备方案的不同分为NC组和HRT组,使用倾向性评分匹配(propensity score matching,PSM)法按1∶1的比例匹配两组的基线数据后,比较基线特征、妊娠结局及围产期结局,通过单因素及多因素logistic回归分析调整影响活产率的混杂因素后,根据窦卵泡计数(antral follicle count,AFC)、移植胚胎数和移植优质胚胎数进一步分层,分别分析NC和HRT对活产率的影响。结果PSM前,纳入NC组2131例,HRT组2683例,两组间的女方年龄、男方年龄、体质量指数(body mass index,BMI)、基础卵泡刺激素(basal follicle-stimulating hormone,bFSH)、抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、AFC、转化日子宫内膜厚度、移植胚胎数差异均存在统计学意义(均P0.05);PSM后,纳入NC组和HRT组各1441例,两组患者的女方年龄、男方年龄、BMI等基线特征差异均无统计学意义(均P>0.05),NC组的活产率[50.66%(730/1441)]和临床妊娠率[60.31%(869/1441)]显著高于HRT组[44.69%(644/1441),P=0.001;54.27%(782/1441),P=0.001],极低出生体质量儿发生率NC组[0.34%(3/871)]显著低于HRT组[1.69%(13/769),P=0.006],余各项指标两组差异均无统计学意义(均P>0.05)。把bFSH、AMH、AFC、转化日子宫内膜厚度、移植胚胎数及移植优质胚胎数纳入多因素logistic回归模型矫正混杂因素后,结果显示NC为影响首次FET周期活产的独立保护因素(aOR=1.280,95%CI:1.103~1.486,P=0.001)。分层分析结果显示,在AFC<11、11~20,移植胚胎数为2及移植优质胚胎数为2的人群中,NC组的活产率[49.03%(151/308),49.09%(349/711),56.38%(442/784),57.85%(350/605)]显著高于HRT组[36.36%(120/330),P=0.001;43.14%(286/663),P=0.027;48.97%(379/774),P=0.003;48.68%(294/604),P=0.001]。结论对于年轻FET助孕患者,NC-FET比HRT-FET有更高的活产率和临床妊娠率。

关键词：自然周期激素替代疗法冻融胚胎移植临床结局活产率

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DMD基因变异特征分析

中华儿科杂志 2024年第2期62卷 153-158页

作者：化春晓刘莉娜杨少哲辛淑文孔祥东郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心郑州450052 漯河市中心医院生殖医学与遗传中心漯河462000

目的了解杜氏肌营养不良症(DMD)和贝氏肌营养不良症(BMD)患者群体的DMD基因变异特点。方法横断面研究,选取2005年1月至2022年2月于郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心就诊的2690例无亲缘关系的DMD和BMD 0~18岁患儿为研究对象,收集... 详细信息

目的了解杜氏肌营养不良症(DMD)和贝氏肌营养不良症(BMD)患者群体的DMD基因变异特点。方法横断面研究,选取2005年1月至2022年2月于郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心就诊的2690例无亲缘关系的DMD和BMD 0~18岁患儿为研究对象,收集其性别、年龄、临床表现以及地区来源等基本信息并应用多重连接依赖探针扩增、二代测序Panel、Sanger测序及PCR扩增相结合的方法检测其DMD基因的变异情况,对其临床资料及基因检测结果进行描述性分析。结果2690例患儿中男2648例、女42例,年龄6.0(4.0,9.0)岁。所有患儿的血清肌酸激酶值均有异常增高。检测到致病性DMD基因变异的2618例患儿中DMD基因大片段缺失、重复、微小变异分别为1875例(71.6%)、231例(8.8%)和512例(19.6%)。缺失变异中,以3个外显子的缺失最为常见[15.4%(288/1875)],第45~50外显子是最常见的缺失区域[6.3%(119/1875)],第2外显子是最常见的重复区域[13.0%(30/231)]。微小变异在DMD基因的79个外显子上均有分布,无变异热点。此外还检测到46种新发现的微小变异。结论外显子缺失是最常见的DMD基因变异类型,然后依次是微小变异和外显子重复。

关键词：肌营养不良,杜氏突变遗传学外显子

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辅助生殖技术出生子代福祉的伦理思考

中国医学伦理学 2024年

作者：吴红萍马彩虹李蓉乔杰刘平北京大学第三医院生殖医学中心

近年来，与辅助生殖技术助孕相关的特殊临床需求案例逐年增多。如配子捐赠、超育龄夫妇助孕、一方或双方亡故胚胎归属与处置等均涉及助孕技术实施中出生子代健康及利益冲突。我国辅助生殖技术伦理原则虽有保护后代的原则，但细则不详，... 详细信息

近年来，与辅助生殖技术助孕相关的特殊临床需求案例逐年增多。如配子捐赠、超育龄夫妇助孕、一方或双方亡故胚胎归属与处置等均涉及助孕技术实施中出生子代健康及利益冲突。我国辅助生殖技术伦理原则虽有保护后代的原则，但细则不详，亟待补充完善；另外辅助生殖技术临床应用缺乏立法协同治理。相应行政管理部门、从业者及不孕夫妇应共同协力，从关注辅助生殖技术临床应用出生子代福祉视角出发，在开展临床研究解决技术难题的同时，努力摆脱技术应用中的伦理困境，全面考虑助孕治疗出生子代福祉，帮助其寻求最佳照护促进其健康生长。

关键词：辅助生殖技术特殊临床需求子代福祉

N-乙酰半胱氨酸对冻融人卵巢组织的保护作用

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首都医科大学学报 2024年第4期45卷 573-582页

作者：李扬璐阮祥燕李妍秋谷牧青杜娟王泽铖程姣姣金凤羽蒋玲玲杨瑜 Alfred O.Mueck 首都医科大学附属北京妇产医院/北京妇幼保健院内分泌科北京100026 德国图宾根大学妇产医院妇女健康部与妇女健康研究中心图宾根D-72076

目的以首都医科大学附属北京妇产医院生育力保护中心现有冻存复苏方案为基础,以雌性去势裸鼠为模型,通过人冻融卵巢组织异种移植探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-Cysteine,NAC)对人卵巢组织的保护作用。方法将4例患者的卵巢组织... 详细信息

目的以首都医科大学附属北京妇产医院生育力保护中心现有冻存复苏方案为基础,以雌性去势裸鼠为模型,通过人冻融卵巢组织异种移植探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-Acetyl-L-Cysteine,NAC)对人卵巢组织的保护作用。方法将4例患者的卵巢组织按照原有冻融方案和改良方案(加入NAC)进行冻融,所有患者取材后留取新鲜卵巢组织进行钙黄绿素AM(Calcein acetoxymethyl ester,Calcein-AM)和苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色评估卵泡活性并计数。将36只雌性去势裸鼠随机分为4组,将复苏后的卵巢组织移植于双侧裸鼠肾被膜下,按照移植卵巢组织的冻融方案分为原有冻融方案组(control group),改良方案组(NAC group),卵巢去势组(ovariectomy group)和正常对照组(normal group,不进行手术)。分别在移植第3天、第7天、第21天处死裸鼠,取血清及卵巢组织移植物。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清雌二醇(estradiol,E2)、卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)和抗苗勒管激素(anti-mullerian hormone,AMH)水平,取卵巢组织移植物1片用于HE染色观察卵泡发育情况,1片用于总抗氧化能力(total antioxidant capability,TAC)的检测。结果移植后各时间点两移植组卵泡发育分级差异无统计学意义(P>0.05)。NAC组总抗氧化能力显著高于control组(P0.05)。移植第3天control组裸鼠血清中E2水平显著高于卵巢去势组(P0.05)。移植后第3天和第21天两移植组裸鼠血清中FSH水平低于卵巢去势组(P0.05)。移植后第3天control组AMH显著高于卵巢去势组(P0.05),移植第7天两移植组AMH水平下降,显著低于正常对照组(P0.05)。结论原有冻存方案及改良冻存方案均能有效恢复卵巢组织的内分泌功能。与原有冻存方案相比,NAC改良方案能够提高移植卵巢组织的抗氧化能力,并减少移植初期原始卵泡的激活,保存更多的原始卵泡数量。

关键词： N-乙酰半胱氨酸原始卵泡卵泡激活卵泡丢失卵巢储备

医源性早发性卵巢功能不全性激素水平的变化及对糖代谢的影响

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首都医科大学学报 2024年第4期45卷 583-588页

作者：王泽铖阮祥燕杨瑜李婧 Alfred O.Mueck 首都医科大学附属北京妇产医院/北京妇幼保健院内分泌科北京100026 德国图宾根大学妇产医院妇女健康部与妇女健康研究中心图宾根D-72076

目的研究医源性早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)性激素水平的变化及对糖代谢的影响。方法募集2022年1月到2024年4月就诊于首都医科大学附属北京妇产医院内分泌科的20~40岁的60例因造血干细胞移植(hematopoieti... 详细信息

目的研究医源性早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)性激素水平的变化及对糖代谢的影响。方法募集2022年1月到2024年4月就诊于首都医科大学附属北京妇产医院内分泌科的20~40岁的60例因造血干细胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)导致的医源性POI患者和60例特发性POI患者,一般资料包括身高、体质量、年龄,并计算体质量指数(body mass index,BMI),实验检测指标包括卵泡刺激素(follicle stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E 2)、皮质醇(cortisol,F)、总睾酮(total testosterone,TT)、游离睾酮(free testosterone,FT)、空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)及空腹胰岛素(fasting insulin,FINS)。结果医源性POI患者体质量、BMI、E 2、TT、FT低于特发性POI患者,差异有统计学意义(P均0.05)。医源性POI患者高胰岛素血症的比例明显高于特发性POI患者(P=0.025)。结论医源性POI患者性激素水平的降低和糖代谢异常均比特发性POI患者更加严重,可能原因是疾病治疗对卵巢功能的损伤更大。但医源性POI是可以预防的。卵巢组织冻存(ovarian tissue cryopreservation,OTC)可以同时保护生育力和卵巢内分泌功能,使医源性POI的防治从不可能变为可能,因此在接受放射治疗和化学药物治疗之前进行OTC十分有必要。

关键词：医源性特发性早发性卵巢功能不全性激素卵巢组织冻存糖代谢

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卵巢恶性肿瘤保留生育治疗的助孕策略

实用妇产科杂志 2024年第8期40卷 611-613页

作者：李玉洁梁晓燕中山大学附属第六医院生殖中心广东广州510000

据统计,全球范围内,卵巢恶性肿瘤在育龄期女性中的发病率正在呈现出持续上升的趋势。每年约有38500例15~40岁的女性新诊断为卵巢恶性肿瘤,其中育龄期女性占比高达12%,值得关注的是,在这些年轻的卵巢恶性肿瘤患者中,超过70%有生育意愿[1... 详细信息

据统计,全球范围内,卵巢恶性肿瘤在育龄期女性中的发病率正在呈现出持续上升的趋势。每年约有38500例15~40岁的女性新诊断为卵巢恶性肿瘤,其中育龄期女性占比高达12%,值得关注的是,在这些年轻的卵巢恶性肿瘤患者中,超过70%有生育意愿[1]。因此,育龄期卵巢恶性肿瘤患者的生育力保护及保存日渐重要。在2024年的美国国立综合癌症网络(NCCN)指南中,明确阐述了对于希望保留生育功能的早期卵巢上皮性恶性肿瘤(EOC)患者或低风险恶性肿瘤(包括低度恶性潜能肿瘤、生殖细胞肿瘤或恶性性索间质细胞肿瘤)的治疗策略。

关键词：卵巢恶性肿瘤生殖细胞肿瘤育龄期女性保留生育功能美国国立综合癌症网络治疗策略 NCCN 低风险