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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2020年第2期38卷 250-254页

作者：李潇王江畅管磊顾畦董纪泽吴琛耘严敏王兆军昆明医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系昆明650500 上海交通大学医学院病原生物学与免疫学系上海200025 上海交通大学医学院-国家热带病研究中心全球健康学院上海200025

华支睾吸虫是一种食源性寄生虫,其感染可导致宿主肝胆管病变,甚至诱发胆管癌。本文结合近年来的相关研究,从虫体的毒性作用、宿主的异常免疫反应以及其他病原体共感染等方面对华支睾吸虫导致胆管癌发生发展的致病机制进行阐述。

关键词：华支睾吸虫胆管癌排泄分泌物免疫因素

SLE患者外周血CD4^+T细胞IL-2受体β、γ链表达缺陷与诱导性调节性T细胞转化形成障碍的相关性

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南京医科大学学报（自然科学版） 2015年第4期35卷 455-463页

作者：周小斌杨晓帆徐安琪王慧娟季晓辉南京医科大学微生物学与免疫学系江苏南京210029 南京市红十字血液中心江苏南京210029

目的 :通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+CD25-T细胞及其经体外诱导转化所得CD4+CD25+T细胞表面白细胞介素2受体(IL-2R)β和γ链(CD122和CD132)的表达,探讨其对Foxp3+诱导性调节性T细胞(i Treg)转化形成的影响。方法:分离健康... 详细信息

目的 :通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+CD25-T细胞及其经体外诱导转化所得CD4+CD25+T细胞表面白细胞介素2受体(IL-2R)β和γ链(CD122和CD132)的表达,探讨其对Foxp3+诱导性调节性T细胞(i Treg)转化形成的影响。方法:分离健康对照和SLE患者外周血单个核细胞(PBMCs)并进一步分离出CD4+CD25-T细胞,分别用流式细胞术和实时定量PCR技术分析CD25-CD122+/CD4+、CD25-CD132+/CD4+比值以及CD4+CD25-T细胞内CD122、CD132(IL-2Rβ、γ链)m RNA相对表达水平。将CD4+CD25-T细胞诱导转化,进一步分析转化后细胞CD25+CD122+/CD4+、CD25+CD132+/CD4+、CD25+Foxp3+/CD4+、p Stat5+/CD4+CD25+的比值。结果:与正常人相比,SLE患者外周血细胞CD4+CD25-T细胞CD122表达变化不明显,但其CD25-CD132+/CD4+比值偏低且与系统性红斑狼疮疾病活动性指数(SLEDAI)呈负相关;CD4+CD25-T细胞内CD132 m RNA相对表达水平亦低于正常对照组;SLE患者外周血CD4+CD25-T细胞经诱导转化后CD4+T细胞中CD25+Foxp3+T细胞亚群比例低于正常对照组,且与SLEDAI呈负相关;SLE患者CD4+CD25-T细胞转化后CD25+CD122+/CD4+、CD25+CD132+/CD4+比例低于对照组,但仅后者与SLEDAI呈负相关;SLE患者细胞转化后胞内磷酸化Stat5表达水平低于对照组,且p Stat5+/CD4+CD25+比值与SLEDAI负相关,与CD25+Foxp3+/CD4+比值呈正相关。结论 :SLE患者外周血CD4+CD25-T细胞存在明显的CD132(IL-2Rγ链)表达缺陷,且与疾病活动性相关;在其向CD4+CD25+细胞亚群转化过程中同样存在CD132及CD122(IL-2Rβ链)表达缺陷,但只有CD132表达缺陷与疾病活动性、Foxp3分子表达相关,并伴有Stat5磷酸化水平降低,提示IL-2Rγ链表达缺陷及其下游信号减弱与SLE Foxp3+i Treg转化形成障碍密切相关。

关键词：红斑狼疮调节性T细胞 Foxp3 白细胞介素2受体 pStat5

宏基因组二代测序技术在微生物群抗微生物药物耐药基因研究中的应用现状和研究进展

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中国微生态学杂志 2023年第6期35卷 726-729,735页

作者：吴哲元钱璟李擎天刘畅郭晓奎上海交通大学医学院-国家热带病研究中心全球健康学院上海200025 上海交通大学医学院免疫学与微生物学系

抗微生物药物耐药性(antimicrobial resistance,AMR)是一个跨地区、跨领域和跨学科问题,涉及临床医学、动物医学、环境健康学及政策研究等,全球各地均面临着严峻的AMR局面。随着生物技术的发展,宏基因组二代测序技术(metagenomic next g... 详细信息

抗微生物药物耐药性(antimicrobial resistance,AMR)是一个跨地区、跨领域和跨学科问题,涉及临床医学、动物医学、环境健康学及政策研究等,全球各地均面临着严峻的AMR局面。随着生物技术的发展,宏基因组二代测序技术(metagenomic next generation sequencing,mNGS)的出现为抗微生物药物耐药基因(antibiotic resistance genes,ARGs)的研究带来了巨大突破和转机。本文阐述了研究AMR的重要性和mNGS技术的发展现状,分别总结了mNGS技术在人、动物和环境领域ARGs研究的应用现状,并对基于宏基因组测序的ARGs在人-动物-环境界面的多生境和多层面研究进行了展望。

关键词：抗微生物药物耐药性抗微生物药物耐药基因宏基因组学二代测序

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大别班达病毒mRNA疫苗的构建及初步评价

南京医科大学学报（自然科学版） 2024年第8期44卷 1120-1125页

作者：周婷婷郁心怡纪雪雯王桂芹吴梓菡闻瑜婷朱进刘新建东部战区疾病预防控制中心江苏南京210002 南京医科大学第一附属医院感染病科江苏南京210029 南京中医药大学整合医学院江苏南京210023 中科南京生命健康高等研究院江苏南京211135 南京医科大学基础医学院病原生物学系国家疫苗研发创新平台&卫健委抗体技术重点实验室江苏南京211166

目的:基于mRNA疫苗策略构建大别班达病毒(Bandavirus davieense virus,DBV)疫苗,并免疫BALB/c小鼠,评价其免疫学特征。方法:优化并合成DBV糖蛋白Gn序列,克隆至pGEM-3Zf(+)载体,质粒通过BamHⅠ酶切线性化,进行体外转录,酶法加帽和添加A... 详细信息

目的:基于mRNA疫苗策略构建大别班达病毒(Bandavirus davieense virus,DBV)疫苗,并免疫BALB/c小鼠,评价其免疫学特征。方法:优化并合成DBV糖蛋白Gn序列,克隆至pGEM-3Zf(+)载体,质粒通过BamHⅠ酶切线性化,进行体外转录,酶法加帽和添加A尾制备mRNA,瞬时转染真核293FT细胞,免疫印迹验证蛋白的体外表达。通过脂质纳米颗粒递送mRNA,以低(2μg/只)、中(5μg/只)、高剂量(20μg/只)每2周肌肉注射1次免疫BALB/c小鼠,ELISA测定小鼠血清抗体效价,病毒中和实验评价小鼠血清阻断病毒感染细胞的能力。结果:制备的DBV mRNA疫苗能够进行体外转录和表达,低、中、高3个免疫剂量均能诱导小鼠产生高水平的特异性抗体,其中高剂量免疫组可诱导稳定抗体表达至10周以上;病毒中和实验显示,免疫血清能够与病毒结合,阻止病毒感染细胞。结论:获得了能够诱导小鼠产生特异性中和抗体的DBV mRNA疫苗,为DBV感染的预防奠定了研究基础。

关键词：大别班达病毒 mRNA疫苗中和抗体病毒感染

EBV-LMP2A重组腺病毒体外转染树突状细胞激发特异性CTL的研究

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中国免疫学杂志 2004年第12期20卷 816-820页

作者：姚堃彭光勇丁传林周锋谢芳艺中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 南京医科大学微生物学与免疫学系南京210029

目的 :用EBV潜伏膜蛋白 2A(EBV LMP2A)重组腺病毒转染树突状细胞 (DC)激发特异性细胞毒性T细胞(CTL) ,分析CTL的特性。方法 :用Ad5 LMP2A重组腺病毒转染EBV健康携带者及鼻咽癌患者的DC ,与自体来源的外周血单个核细胞 (PBMC)混合培养 ... 详细信息

目的 :用EBV潜伏膜蛋白 2A(EBV LMP2A)重组腺病毒转染树突状细胞 (DC)激发特异性细胞毒性T细胞(CTL) ,分析CTL的特性。方法 :用Ad5 LMP2A重组腺病毒转染EBV健康携带者及鼻咽癌患者的DC ,与自体来源的外周血单个核细胞 (PBMC)混合培养 ,激发LMP2A特异性CTL。用LDH释放法检测CTL杀伤活性 ;流式细胞术 (FACS)检测培养细胞群体中CD3+ 、CD4 + 、CD8+ 、CD5 6 + 细胞的组成 ;生物活性法检测细胞培养上清中IFN γ含量 ;RT PCR分析CTL的FasLmRNA表达。结果 :EBV健康携带者及鼻咽癌患者的PBMC ,经Ad5 LMP2A转染的自体DC两次刺激后 ,都能诱导出显著的EBV LMP2A特异的CTL。EBV健康携带者CTL的杀伤活性 ,随DC刺激次数的增加而逐渐增强 ,诱导的CTL细胞群体以CD4 +和CD8+ 细胞组成为主 ,且CD4 + 细胞比例高于CD8+ 细胞 ,另含少量CD5 6 + 细胞 ;在不同时段所诱导的CTL上清中 ,均含一定量的IFN γ ,并随刺激次数和诱导时间的延长呈上升趋势 ;RT PCR研究表明 ,所诱导的CTL有FasLmRNA的表达。结论 :以腺病毒载体介导EBV LMP2A基因转染的成熟DC ,在体外能激发较强的LMP2A特异的功能性CTL ,可用于EBV相关NPC的免疫治疗。

关键词：腺病毒载体树突状细胞 EB病毒潜伏期膜蛋白2A 细胞毒性T细胞

霉酚酸及地塞米松对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞凋亡的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2005年第4期25卷 221-223页

作者：李元媛苏定雷宣恒报王慧娟衡春李玉峰季晓辉南京医科大学附属淮安第一医院中心实验室江苏淮安223300 南京医科大学微生物与免疫学系江苏南京210029

目的:以地塞米松(DEX)为对照,观察新型免疫抑制剂霉酚酸(MPA)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞凋亡的作用。方法:分离12例SLE患者及8例健康对照的外周血单个核细胞(PBMCs),分别加或不加MPA/DEX培养48h,用ELISA法测培养上清中sFa... 详细信息

目的:以地塞米松(DEX)为对照,观察新型免疫抑制剂霉酚酸(MPA)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞凋亡的作用。方法:分离12例SLE患者及8例健康对照的外周血单个核细胞(PBMCs),分别加或不加MPA/DEX培养48h,用ELISA法测培养上清中sFas与sFasL的水平,用AV鄄FITC/PI双标记流式细胞术测PBMCs的凋亡率。结果:SLE患者PBMCs培养上清中的sFasL水平较正常对照显著增高,而MPA及DEX均可使其分泌的sFas及sFasL水平显著下降,且MPA使sFasL降低的程度较sFas更显著,而DEX却正相反。SLE患者培养的PBMCs凋亡率较正常对照显著增高,MPA及DEX均可使凋亡率进一步增加,而DEX较MPA对凋亡的诱导作用更加显著。结论:MPA及DEX对SLE患者PBMCs具有促进凋亡的作用,但这一作用可能并非通过Fas鄄FasL途径;而且,在诱导凋亡方面,MPA与DEX的作用既有相同,又存在差异。

关键词：系统性红斑狼疮霉酚酸凋亡 sFas sFasL

支气管哮喘患者血清对内皮穿越模型中单核细胞分化为树突状细胞的作用

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中华结核和呼吸杂志 2011年第3期34卷 169-173页

作者：周林福王文璐李红岩张明顺季晓辉何韶衡黄茂殷凯生南京医科大学第一附属医院呼吸内科南京 210029 南京医科大学微生物学和免疫学系南京 210029 南京医科大学第一附属医院中心实验室南京 210029

目的探讨支气管哮喘（简称哮喘）患者血清和正常血清对内皮穿越模型中单核细胞向树突状细胞（DC）分化和功能的作用及其机制。方法在江苏省哮喘联盟数据库中选择2008年5月至2009年5月轻一中度哮喘患者12例，募集匹配的健康志愿者12名，... 详细信息

目的探讨支气管哮喘（简称哮喘）患者血清和正常血清对内皮穿越模型中单核细胞向树突状细胞（DC）分化和功能的作用及其机制。方法在江苏省哮喘联盟数据库中选择2008年5月至2009年5月轻一中度哮喘患者12例，募集匹配的健康志愿者12名，常规分离血清和外周血单个核细胞，免疫磁珠法获得单核细胞。选择健康产妇5名，胰酶消化法获得人脐静脉内皮细胞（第2代），培养融合至内皮细胞单层。在内皮细胞上方加入单核细胞及哮喘血清（哮喘组）或正常血清（对照组），构建内皮穿越模型。硝酸银染色法观察单核细胞来源的树突状细胞（MDDC）迁移行为。于48h收集MDDC，扫描电镜观察形态学特征，电泳迁移率实验检测核因子KB（NF-KB）活性，流式细胞术、ELISA和混合淋巴细胞反应分别检测其表型和功能。结果（1）在内皮穿越模型中，单核细胞2h后发生正向穿越，48h后发生逆向穿越并分化为DC。（2）与穿越前单核细胞[CD14（81±6）％、人白细胞抗原DR（HLA—DR）（24±5）％、CD80（2．8±2．0）％、CD86（14±4）％、CD83（0．9±0．8）％]比较，对照组MDDC的CD14[（20±5）％]显著下降（F=49．01，P〈0．05）、HLA-DR、CD80、CD86和CD83[（43±4）％、（17．9±3．5）％、（43±11）％和（6．7±1．8）％]均显著增高（均P〈0．05），但CD83仍较低，为未成熟DC。（3）与对照组比较，哮喘组MDDC的HLA—DR和CD。[（55±6）％和（59±12）％]相仿（F值分别为15．29和35．97，均P〉0．05）、CD80和CD83[（49．7±10．2）％和（30．2±6．8）％]显著增高（F值分别为***和20．68，均P〈0．05），为成熟DC。并且，哮喘组MDDC呈典型的树枝样突起，其NF—KB活性、白细胞介素-12pTO水平和T细胞增殖作用[（100±11）％、（568±43）ng／L和（2033±198）cpm]较对照组[（12±3）％、（220±35）ng／L和（952±64）cpm]显著增高（均P〈0．05）。结论哮喘血清可诱导内皮穿越模型中单核细胞向DC异常分化成熟，并与NF—KB过度激活有关。该模型为剖析哮喘免疫学发病机制和筛选新型抗哮喘药物建立了新的体外实验平台。

关键词：哮喘树突细胞血清 NF—KB 内皮穿越模型单核细胞

创伤弧菌转录调控因子OmpR的致病相关功能鉴定

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第10期42卷 784-790页

作者：夏文浩任雨轩徐雨露胡玮琳浙江大学医学院附属儿童医院国家儿童健康与疾病临床医学研究中心杭州310052 浙江大学医学院医学微生物学系杭州310058

目的研究转录调控因子OmpR在创伤弧菌中致病相关的生物学功能及分子机制。方法通过基因无痕敲除技术构建创伤弧菌ompR基因敲除株(ΔompR)。通过生长曲线测定法检测不同渗透压下菌株的耐受力,细菌泳动试验检测运动性,结晶紫染色试验检测... 详细信息

目的研究转录调控因子OmpR在创伤弧菌中致病相关的生物学功能及分子机制。方法通过基因无痕敲除技术构建创伤弧菌ompR基因敲除株(ΔompR)。通过生长曲线测定法检测不同渗透压下菌株的耐受力,细菌泳动试验检测运动性,结晶紫染色试验检测细菌生物膜形成能力,菌落计数法测定创伤弧菌ΔompR株黏附细胞的变化,乳酸脱氢酶释放法测定创伤弧菌ΔompR株对细胞毒性的变化,以明确ΔompR株的致病性相关生物学表型;实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)法检测创伤弧菌ΔompR株和野生株中毒力相关靶基因ompN、ompU、ompA、hcp2的mRNA水平变化。结果成功构建创伤弧菌ΔompR株。与野生株相比,ΔompR株在高渗透压培养基中生长缓慢,生物膜形成能力减弱,细菌运动性未有明显差异,ΔompR株对细胞的黏附率和毒性显著低于野生株。ΔompR株中渗透压调节及生物膜形成相关ompN基因mRNA水平显著下调(P生物膜形成、对细胞的黏附及毒性。

关键词：创伤弧菌 OmpR 功能鉴定

纳米金属和复合物在肿瘤诊断和治疗中的应用（英文）

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黑龙江大学自然科学学报 2014年第1期31卷 65-79页

作者： BASHIR Sajid 王婷婷 PALAKURTHI Srinath 刘静波美国德克萨斯州农工大学金斯维尔分校化学系金斯维尔78363 美国德克萨斯州农工大学健康科学中心药学系金斯维尔78363 美国劳伦斯伯克利国家实验室先进光源伯克利94720

本文讨论利用三类纳米材料对癌症进行诊断和治疗(简称诊治学)。这三类材料包含纳米金属、过渡金属氧化物和金属有机配合物,它们可通过化学湿法来制备。纳米技术具有精确构建细小材料的优越性,所以纳米材料被用来从细胞和基因水平上靶向... 详细信息

本文讨论利用三类纳米材料对癌症进行诊断和治疗(简称诊治学)。这三类材料包含纳米金属、过渡金属氧化物和金属有机配合物,它们可通过化学湿法来制备。纳米技术具有精确构建细小材料的优越性,所以纳米材料被用来从细胞和基因水平上靶向攻击癌细胞,其精确度高、副作用小。目前的挑战在于对转移性癌症、抗药性癌症和肿瘤干细胞的治疗,通过有效设计作为载体的纳米材料,可以实现药物定向传递,进而实现对成体干细胞、胸腺T细胞的免疫治疗。作者讨论了上述纳米材料以及它们在癌症诊治中的应用,重点讨论了纳米材料的湿化学合成、性能及应用,该类材料具有独特的拓扑结构和孔隙度,因而具有高效靶向药物输送功能。另外,该类材料(特别是金属有机配合物)具有可调的颗粒大小、形状及组成,在靶向癌症治疗中,显示出循环半衰期长的优点。该文也就材料对肿瘤的诊治效率及纳米材料运作机制进行了探讨,以期克服目前所使用纳米材料的局限性。

关键词：关键词纳米材料癌症诊治材料合成表征毒性

血浆外泌体来源的miRNA-323a-3p作为结核病潜在生物标志物的评估

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上海交通大学学报（医学版） 2020年第2期40卷 171-179页

作者：林砺李海波夏凡周计雪郭晓奎张舒林上海交通大学基础医学院免疫学与微生物学系上海200025 上海市(复旦大学附属)公共卫生临床中心上海201508 中国人民解放军第905医院肺科上海200235

目的·研究血浆外泌体来源的microRNA(miRNA),为结核病的诊断寻找潜在标志物。方法·采用卡介苗(Bacille CalmetteGuérin,BCG,即减毒牛分枝结核杆菌)感染人单核细胞白血病细胞(THP-1)来源的巨噬细胞(BCG组),设置未感染细胞为对照组。... 详细信息

目的·研究血浆外泌体来源的microRNA(miRNA),为结核病的诊断寻找潜在标志物。方法·采用卡介苗(Bacille CalmetteGuérin,BCG,即减毒牛分枝结核杆菌)感染人单核细胞白血病细胞(THP-1)来源的巨噬细胞(BCG组),设置未感染细胞为对照组。利用超速离心法获取2组细胞培养上清液中的外泌体,通过透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、蛋白质印迹法进行形态学及蛋白标志物鉴定,并对外泌体进行转录组测序分析。选取测序结果中的3个差异表达miRNAs,就10例结核病患者(结核病组)和8例健康志愿者(健康对照组)的血浆外泌体进行临床验证。通过TargetScan、miRDB和PicTar数据库对存在潜在差异表达的miRNA进行靶基因预测。结果·细胞培养上清液外泌体测序结果显示,与对照组相比,miRNA-323a-3p、miRNA-29a-3p和miRNA-29b-3p在BCG组的表达均有显著差异,而在临床验证中仅有miRNA-323a-3p在2组表达间的差异具有统计学意义(P=0.004);且miRNA-323a-3p在结核患者血浆来源的外泌体中显著下调,与转录组结果一致。结论·血浆外泌体来源的miRNA-323a-3p在结核患者中的表达显著下调,且其靶基因与自噬作用密切相关,有望为结核病的机制研究提供新思路。

关键词：外泌体微小RNA miRNA-323a-3p 结核超速离心法