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鼠衣原体改善DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎的作用研究

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微生物学报 2020年第4期60卷 695-702页

作者：贺庆芝罗晓清马芙蓉郑慧怡王昕金盈圻成国锋钟光明南华大学衡阳医学院湖南衡阳421001 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物与免疫学系德克萨斯圣安东尼奥78229

【目的】探讨鼠衣原体(Chlamydia muridarum)对小鼠溃疡性结肠炎的作用。【方法】取15只雌性C57BL/6J小鼠随机分为3组,每组5只动物,分别为空白对照组(Control)、肠炎模型组(DSS)、实验组(CM+DSS)。选取CM+DSS组小鼠予以2×10^5 IFU的鼠... 详细信息

【目的】探讨鼠衣原体(Chlamydia muridarum)对小鼠溃疡性结肠炎的作用。【方法】取15只雌性C57BL/6J小鼠随机分为3组,每组5只动物,分别为空白对照组(Control)、肠炎模型组(DSS)、实验组(CM+DSS)。选取CM+DSS组小鼠予以2×10^5 IFU的鼠衣原体灌胃处理,并在其感染后第29天开始,给予DSS组和CM+DSS组的小鼠2%DSS饮水,持续5 d,每天监测小鼠体重和肠炎疾病评分,实验结束后检测小鼠结肠长度和结肠组织炎性改变。【结果】肠炎模型组的小鼠均表现出典型的肠炎症状(包括体重减轻、肠炎疾病评分、结肠长度和组织炎性改变);而经鼠衣原体预处理的小鼠(CM+DSS组)肠炎症状显著减轻,表现在肠炎疾病评分降低,体重和结肠长度有所恢复,肠组织炎性损伤减轻。【结论】鼠衣原体对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎具有改善作用。

关键词：鼠衣原体肠道菌群溃疡性结肠炎

鼠抗沙眼衣原体Tarp蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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南方医科大学学报 2010年第10期30卷 2219-2223页

作者：王洁张颖骞钟光明余平中南大学基础医学院免疫学系湖南长沙410078 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物学免疫学系

目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免... 详细信息

目的制备抗衣原体Tarp蛋白的单克隆抗体,为探讨Tarp蛋白的生物学特性及功能提供实验工具。方法克隆表达沙眼衣原体血清型D重组Tarp融合蛋白,并以其为免疫原免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞进行常规融合,应用间接免疫荧光法筛选阳性克隆和有限稀释克隆化,获得鼠抗沙眼衣原体血清型DTarp蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA法鉴定单克隆抗体的抗Tarp特异性,并应用间接免疫荧光法鉴定单克隆抗体的亚类和衣原体种属特异性。结果成功克隆表达了重组GST-Tarp融合蛋白,其相对分子质量约为136kDa;成功地建立了7株稳定分泌抗Tarp蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株;7株单克隆抗体均特异性的识别Tarp蛋白而不识别其他衣原体性蛋白;2株单克隆抗体(R5B6.2和R8G7.2)的免疫球蛋白亚类为IgG2a,其余5株单克隆抗体(R4D5,R2H1.2,R12B12,R2H7和R5G8.1)的免疫球蛋白亚类均为IgG1;7株单克隆抗体全部特异性识别衣原体血清型A、D、L2,而不识别MoPn、6BC和AR39。结论获得了特异性识别沙眼衣原体血清型DTarp蛋白的单克隆抗体,为Tarp蛋白的结构及生物学功能研究奠定了基础。

关键词：沙眼衣原体 Tarp 单克隆抗体

沙眼衣原体OmcBc基因的克隆、表达与抗原性研究

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南方医科大学学报 2010年第7期30卷 1558-1561页

作者：王洁张颖骞钟光明余平中南大学基础医学院免疫学系湖南长沙410078 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物学免疫学系

目的探讨重组沙眼衣原体OmcB基因C端编码蛋白的抗原性,为衣原体感染性疾病的早期诊断和疫苗研究提供新的靶标。方法采用PCR技术从沙眼衣原体基因组中扩增OmcB的C端(T270-Y553)序列,并构建pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,转染大肠杆菌XL-1b... 详细信息

目的探讨重组沙眼衣原体OmcB基因C端编码蛋白的抗原性,为衣原体感染性疾病的早期诊断和疫苗研究提供新的靶标。方法采用PCR技术从沙眼衣原体基因组中扩增OmcB的C端(T270-Y553)序列,并构建pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,转染大肠杆菌XL-1blue,IPTG诱导表达重组GST-OmcBc融合蛋白;收集120例Ct生殖道感染患者血清,以CtD血清型灭活的EB分别于皮下和腹腔免疫7只新西兰大白兔和5只Balb/C小鼠,以CtD血清型活的EB滴鼻感染9只Balb/C小鼠,分别收集这些动物免疫血清;间接免疫荧光法检测各血清中抗衣原体特异性抗体的效价;ELISA法检测重组GST-OmcBc融合蛋白与各免疫血清的反应性。结果成功构建了pGEX-6p-CtOmcBc原核表达质粒,经测序显示插入基因长度为852bp,编码284个氨基酸。IPTG成功诱导表达了重组GST-OmcBc融合蛋白,其分子质量约为57kDa;所制备和收集的各免疫血清均含高滴度抗衣原体特异性抗体;ELISA结果显示重组GST-OmcBc融合蛋白对各免疫血清均具有强的抗原性。结论 CtOmcBc是衣原体的一个免疫优势蛋白,重组GST-OmcBc融合蛋白的成功表达及其良好的抗原性为进一步开展衣原体感染早期诊断研究和疫苗的研发奠定了基础。

关键词：沙眼衣原体 OmcB 抗原性

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合成生物学助力细菌疫苗研发

合成生物学 2024年第2期5卷 321-337页

作者：章金勇顾江关山李海波曾浩邹全明陆军军医大学国家免疫生物制品工程技术研究中心陆军军医大学药学与检验医学系微生物与生化药学教研室重庆400037

细菌感染已成为全球第二大死亡因素,给人类健康与公共安全造成了巨大威胁。抗生素一直是治疗细菌感染最为主要的手段,但越来越严重的耐药问题给传统的抗生素疗法带来了严峻挑战。除了抗生素之外,疫苗被认为是防治传染性疾病传播最为科... 详细信息

细菌感染已成为全球第二大死亡因素,给人类健康与公共安全造成了巨大威胁。抗生素一直是治疗细菌感染最为主要的手段,但越来越严重的耐药问题给传统的抗生素疗法带来了严峻挑战。除了抗生素之外,疫苗被认为是防治传染性疾病传播最为科学、经济、安全和有效的手段,在人类抗击病原体感染斗争中发挥了重要作用。然而,细菌基因组庞大,致病机制复杂,研发疫苗存在有效抗原筛选、设计、制备难,抗原组合配伍难,有效性评价难,研发周期长等诸多瓶颈,导致细菌疫苗研发进展缓慢,尤其是临床常见的严重耐药致病菌尚无有效的疫苗可用。合成生物学是一门新兴的交叉学科,近年来在疫苗研究领域已经得到了广泛应用,包括抗原的筛选、理性设计、配伍组合,载体、佐剂和递送系统的设计以及免疫应答调控等。本文综述了细菌疫苗研究的现状以及耐药细菌疫苗临床试验研究进展,总结了合成生物学技术在几种重要类型细菌疫苗研发中的应用进展,最后对相关前景进行了展望。合成生物学在疫苗的形式、疫苗递送、疫苗的研制效率等方面为研究人员提供了更为广阔的空间,未来,应最大化地发挥合成生物学的优势,充分发展和应用合成生物学技术手段,建立科学、理性、有效、可行的管理制度,建设生物安全保障法律体系和监管措施,高效推动细菌疫苗研发,解决抗生素耐药问题,造福人类健康。

关键词：细菌感染抗生素耐药疫苗合成生物学

沙眼衣原体激活MAPK通路而非NF-κB通路诱导IL-8生成

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中南大学学报（医学版） 2010年第4期35卷 307-313页

作者：陈凡程文张赛丹钟光明余平中南大学湘雅医院心内科长沙410008 中南大学基础医学院免疫学系长沙410078 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心免疫学与微生物学系

目的:研究沙眼衣原体诱导上皮细胞产生IL-8的信号通路。方法:应用Western印迹、免疫荧光技术和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测沙眼衣原体感染Hela229细胞后诱导的细胞内、外IL-8表达情况,并对细胞内IL-8定位;Western印迹和免疫荧光技术检... 详细信息

目的:研究沙眼衣原体诱导上皮细胞产生IL-8的信号通路。方法:应用Western印迹、免疫荧光技术和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测沙眼衣原体感染Hela229细胞后诱导的细胞内、外IL-8表达情况,并对细胞内IL-8定位;Western印迹和免疫荧光技术检测沙眼衣原体感染后MAPK和NF-κB信号通路活化情况;利用MAPK和NF-κB信号通路化学抑制剂抑制MAPK和NF-κB通路,观察其对沙眼衣原体诱导IL-8生成的影响。结果:沙眼衣原体感染可诱导IL-8产生,呈时间依赖性;沙眼衣原体感染可激活MAPK/ERK和MAPK/p38信号通路,但不能激活NF-κB信号通路;利用化学抑制剂抑制ERK和p38通路可以抑制沙眼衣原体诱导上皮细胞产生IL-8。结论:沙眼衣原体诱导上皮细胞产生IL-8依赖于MAPK信号通路,但不依赖NF-κB信号通路。

关键词：沙眼衣原体 MAPK通路 NF-κB通路 IL-8

沙眼衣原体D型生殖道感染小鼠动物模型的建立及评价

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中华微生物学和免疫学杂志 2012年第3期32卷 212-217页

作者：陆春雪吴移谋彭波胡四海李忠玉陈丽丽钟光明南华大学病原生物研究所衡阳421001 南华大学肿瘤研究所美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心微生物学与免疫学系

目的建立沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，Ct）D型感染小鼠生殖道动物模型，为研究人类生殖道ct感染的病理变化和致病机制提供实验基础。方法分离20个临床株，经阴道接种C3H／HeJ小鼠，得到清除时间明显延长的临床株（UT0603）。应... 详细信息

目的建立沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，Ct）D型感染小鼠生殖道动物模型，为研究人类生殖道ct感染的病理变化和致病机制提供实验基础。方法分离20个临床株，经阴道接种C3H／HeJ小鼠，得到清除时间明显延长的临床株（UT0603）。应用该临床株建立ctD型感染模型，免疫荧光检测阴道脱落上皮细胞中衣原体的含量；原位组织免疫荧光检测上生殖道的衣原体感染定植情况；分离生殖道组织，肉眼观察并进行病理学评分。结果ct临床株感染小鼠下生殖道其排菌量及排菌周期明显延长，可见衣原体有上行感染和定植，并能引发类似人类生殖道感染的病理变化。结论成功建立了CtD型生殖道感染动物模型。

关键词：沙眼衣原体生殖道感染动物模型

Melatonin及其衍生物作为急性严重呼吸系统综合征急救用药的理论基础和临床应用的可行性

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中国药理学通报 2003年第7期19卷 721-722页

作者：谭敦宪霍玉书杜冠华张均田美国德克萨斯州立大学圣安东尼奥健康科学中心分子与细胞结构教研室美国德克萨斯州立大学圣安东尼奥健康科学中心微生物与免疫教研室中国医学科学院药物研究所北京100050

已有研究资料表明 ,Melatonin作为一种维生素样内源物质 ,具有多方面的生理作用和极强的抗炎、抗自由基作用 ,在组织损伤方面可以发挥保护作用。近来实验研究证明 ,Melatonin对急性呼吸综合征具有改善症状作用 ,在Melatonin基础上新合... 详细信息

已有研究资料表明 ,Melatonin作为一种维生素样内源物质 ,具有多方面的生理作用和极强的抗炎、抗自由基作用 ,在组织损伤方面可以发挥保护作用。近来实验研究证明 ,Melatonin对急性呼吸综合征具有改善症状作用 ,在Melatonin基础上新合成的具有强大抗氧化作用的衍生物也表现良好的作用。

关键词： melatonin 急性严重呼吸系统综合征抗氧化作用

H10N3禽流感病毒安徽分离株遗传多样性研究

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病毒学报 2024年第5期 1022-1032页

作者：李珊董卉姚雪张春鸽邢薇佳李娟史卫峰山东第一医科大学(山东省医学科学院)山东省高等学校新发传染病重点实验室山东第一医科大学(山东省医学科学院)临床与基础医学院(基础医学研究所)病原生物学系山东第一医科大学(山东省医学科学院)公共卫生与健康管理学院中国科学院流感研究与预警中心中国科学院微生物研究所病原微生物与免疫学重点实验室

2021年4月我国江苏确诊全球第一例人感染H10N3禽流感病例，研究我国活禽市场H10N3亚型禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）的遗传多样性和分子特征，将为理解人感染H10N3病毒的进化来源、评估其溢出风险提供理论依据。为此，2021... 详细信息

2021年4月我国江苏确诊全球第一例人感染H10N3禽流感病例，研究我国活禽市场H10N3亚型禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）的遗传多样性和分子特征，将为理解人感染H10N3病毒的进化来源、评估其溢出风险提供理论依据。为此，2021年6-12月我们对安徽地区活禽市场销售家禽及环境中H10N3 AIV进行实时荧光定量RT-PCR检测，共分离鉴定到6株H10N3病毒（AH01-AH06），其中1株为11月份环境样本分离株，其余5株为6月、11月和12月鸡咽拭子分离株。高通量测序和生物信息学分析表明，同一活禽市场分离到的毒株表现出一定的遗传多样性和重配模式差异：4株H10N3分离株（AH01-AH04）间核苷酸同源性均高于99.00%，而A/chicken/Anhui/11-30-YHZGS024-O/2021(AH05)株的MP基因片段和A/chicken/Anhui/06-26-YHZGS006-O/2021(AH06)株的PA、MP基因片段与其他分离株的核苷酸同源性较低，均低于97.04%。系统发育分析显示，本研究6株H10N3分离株与人源H10N3病毒的HA和NA基因均位于欧亚进化分支，它们的内部基因都来自H9N2亚型AIV。特别是分离株AH06与人感染H10N3病毒八个基因均位于同一进化分支，而分离株AH01-AH05的PA基因与人感染H3N8和H9N2毒株、MP基因与人感染H9N2毒株的亲缘关系较近。分子遗传特征分析显示，6株H10N3 AIV的血凝素蛋白均携带G228S等哺乳动物适应性突变，提高了对人源受体的结合能力。综上，本研究证实了禽源H10N3病毒在安徽省活禽市场的持续流行，揭示了禽源H10N3病毒的遗传多样性以及新型感染人的H10N3在我国家禽中传播，强调其携带多个哺乳动物适应性突变，为评估H10N3 AIV潜在公共卫生风险提供了理论依据。

关键词：禽流感病毒活禽市场 H10N3 遗传多样性

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IL-10通过抑制IFN-γ和IL-2表达促进鼠衣原体感染

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第2期39卷 126-130页

作者：贺庆芝贺梦婷王昕罗晓清吴移谋钟光明南华大学药学与生物科学学院湖南省分子靶标新药研究协同创新中心衡阳421001 美国德克萨斯大学圣安东尼奥健康科学中心圣安东尼奥78229

目的初步探讨IL-10促进鼠衣原体感染的可能分子机制。方法鼠衣原体经灌胃或子宫内感染C57BL/6野生型和IL-10^-/-小鼠后,采用间接免疫荧光试验检测肠道和生殖道内鼠衣原体的生长情况;输卵管积水评分评估生殖道疾病严重程度;酶联免疫吸附... 详细信息

目的初步探讨IL-10促进鼠衣原体感染的可能分子机制。方法鼠衣原体经灌胃或子宫内感染C57BL/6野生型和IL-10^-/-小鼠后,采用间接免疫荧光试验检测肠道和生殖道内鼠衣原体的生长情况;输卵管积水评分评估生殖道疾病严重程度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血液中IFN-γ和IL-2的表达水平。结果与野生型小鼠相比,IL-10^-/-小鼠的肠道和生殖道均具有较强的衣原体清除能力,同时细胞因子IFN-γ和IL-2的表达显著性增加。此外,野生型小鼠表现出更严重的输卵管病理损伤。结论IL-10通过抑制IFN-γ和IL-2的表达使宿主清除衣原体能力下降,从而促进衣原体在小鼠体内生长,加重输卵管积水的发病率。

关键词：沙眼衣原体 1L-10 细胞因子免疫