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脑缺血后IκB激酶的自身磷酸化及活性调节(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第4期24卷 25-29+96-97页

作者：沈万华张春翌张光毅徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州 221002 中国

目的:观察脑缺血后IκB激酶的自身磷酸化及活性变化的调节机制。方法:采用IKKα/B抗体进行免疫印迹和免疫沉淀分析,测定IKK蛋白表达,体外激酶活性分析测定IKK的自身磷酸化及活性。结果:IKK蛋白的表达在脑缺血不同时间以及脑缺血复灌不... 详细信息

目的:观察脑缺血后IκB激酶的自身磷酸化及活性变化的调节机制。方法:采用IKKα/B抗体进行免疫印迹和免疫沉淀分析,测定IKK蛋白表达,体外激酶活性分析测定IKK的自身磷酸化及活性。结果:IKK蛋白的表达在脑缺血不同时间以及脑缺血复灌不同时间都没有明显的变化;IKK的活性在缺血30分钟时达到最高;NMDA受体拮抗剂ketamine、非NMDA受体拮抗剂DNQX和NF-κB抑制剂PDTC均能抑制IKK的自身磷酸化及活性。结论:NMDA受体和非NMDA受体介导了脑缺血后IKK的自身磷酸化及活性调控,从而介导其下游因子NF-κB的蛋白表达及活性变化,参与脑缺血的损伤调控。

关键词：脑缺血 IκB激酶核因子-κB 海马 N-甲基-D-天冬氨酸受体活性氧自由基信号传递

金雀异黄素对脑缺血/再灌注诱导大鼠海马组织STAT3激活的抑制作用(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2003年第11期24卷 69-74+112-113页

作者：李洪春张光毅徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州 221002 中国

目的:观察脑缺血/再灌注(I/R)后海马组织信号转导与转录激活子-3 (STAT3)的激活及金雀异黄素对其的影响。方法:免疫印迹测定STAT3蛋白表达及磷酸化水平,电泳迁移率改变分析STAT3的DNA结合活性。结果:I/R 3h后胞浆STAT3持续磷酸化激活,... 详细信息

目的:观察脑缺血/再灌注(I/R)后海马组织信号转导与转录激活子-3 (STAT3)的激活及金雀异黄素对其的影响。方法:免疫印迹测定STAT3蛋白表达及磷酸化水平,电泳迁移率改变分析STAT3的DNA结合活性。结果:I/R 3h后胞浆STAT3持续磷酸化激活,再灌注3h和72h达两高峰(1.7和 2.5倍);而STAT3、蛋白表达I/R 24h开始升高,72h 达高峰(1.7倍);核内STAT3的磷酸化水平及DNA结合活性缺血后即显著增高,再灌注3h和72h达两高峰(分别为2.6、3.1及3.6、4.4倍),金雀异黄素呈剂量依赖方式明显抑制I/R 72h诱导STAT3的磷酸化及DNA结合活性的升高,但不影响STAT3蛋白表达。结论:脑缺血/再灌注导致STAT3的磷酸化激活及DNA结合活性的增加,蛋白酪氨酸激酶参与STAT3的激活调控。

关键词：信号传递转录因子金雀异黄素脑缺血酪氨酸磷酸化海马

人白细胞介素18半胱氨酸的定点突变及其对活性的影响

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第1期34卷 57-61页

作者：裴冬生傅奕孙亚锋赵惠仁徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州221002

为研究IL 18结构与功能的关系 ,用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白细胞介素 18(hIL 18) 4个半胱氨酸的突变体hIL 18C74 S、C10 4 S、C112 S和C163 S。将突变体的cDNA与原核细胞表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌JM10 1。经热诱导后 ,4个... 详细信息

为研究IL 18结构与功能的关系 ,用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白细胞介素 18(hIL 18) 4个半胱氨酸的突变体hIL 18C74 S、C10 4 S、C112 S和C163 S。将突变体的cDNA与原核细胞表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌JM10 1。经热诱导后 ,4个突变体在大肠杆菌中均得到了高效表达。表达的蛋白质主要以包涵体的形式存在。包涵体经超声破碎 ,2mol/L尿素洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,SephadexG 10 0柱纯化后 ,纯度可达 90 %以上。以诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生IFN γ的能力为指标检测复性突变体的活性。结果显示除C10 4 S外 ,其他 3个突变体的生物活性均低于野生型hIL 18,C74 S、C112 S和C163 S的活性分别是野生型hIL 18活性的 5 %、5 8%和11%。证明Cys74 、Cys163 为hIL 18诱导产生IFN γ的功能所必需

关键词：白细胞介素18 半胱氨酸定点突变突变体

激动多巴胺受体抑制大鼠纹状体脑片Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性(英文)

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第11期22卷 8-12页

作者：侯筱宇唐放鸣张光毅中国 221002 徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州

目的:研究缺氧时纹状体多巴胺能神经毒性的机制。方法:采用大鼠纹状体脑片体外培养模型,以底物磷酸化32P-掺入法测定Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPKⅡ)的活性。结果:缺氧30min,纹状体脑片CCDPKⅡ活性降低75％,慢性利血平化使得缺... 详细信息

目的:研究缺氧时纹状体多巴胺能神经毒性的机制。方法:采用大鼠纹状体脑片体外培养模型,以底物磷酸化32P-掺入法测定Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CCDPKⅡ)的活性。结果:缺氧30min,纹状体脑片CCDPKⅡ活性降低75％,慢性利血平化使得缺氧诱导的酶活性降低程度减轻,与对照组相比大约降低40％。外源性多巴胺显著降低纹状体脑片CCDPKⅡ活性。去除胞外Ca2+后,多巴胺诱导的酶活性降低作用被削弱。阿扑吗啡(非特异性多巴胺受体激动剂)、SKF38393(特异性D1样受体激动剂)和喹吡罗(特异性D2样受体激动剂)均可显著降低CCDPKⅡ的活性。Sch-23390(特异性D1样受体拮抗剂)和吗丁啉(特异性D2样受体拮抗剂)均可拮抗多巴胺所诱导的酶活性的抑制作用。结论:多巴胺参与缺氧诱导的纹状体CCDPKⅡ活性抑制,其作用机制与D1样和D2样受体的激活以及胞外Ca2+的内流有关,从而导致多巴胺介导的纹状体神经损伤。

关键词：多巴胺 Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶低氧钙利血平多巴胺激动剂多巴胺拮抗剂纹状体

马里亚纳海沟深渊微生物胞外酶的保压酶活性特征

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中国科学:地球科学 2025年第1期 184-193页

作者：曹军伟王佳华张宏鸽邓俊豪潘彬彬陈家旺张利方家松上海海洋大学海洋科学与生态环境学院浙江大学海洋学院海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室

微生物胞外酶在海洋有机物的转化和矿化过程中起着至关重要的作用.然而,传统上在常压条件下测定的深海微生物胞外酶活性(Microbial ectoenzyme activities, MEAs)并不能准确反映土著微生物群落的代谢活性.为了解决这一局限性,本研究对... 详细信息

微生物胞外酶在海洋有机物的转化和矿化过程中起着至关重要的作用.然而,传统上在常压条件下测定的深海微生物胞外酶活性(Microbial ectoenzyme activities, MEAs)并不能准确反映土著微生物群落的代谢活性.为了解决这一局限性,本研究对比分析了马里亚纳海沟挑战者深渊保压和非保压海水样品中3种微生物胞外酶(氨肽酶、α-葡萄糖苷酶和β-葡萄糖苷酶)在常压和原位压力条件下的酶活性.结果显示,表层海水(50m)中氨肽酶和α-葡萄糖苷酶的保压酶活性(isobaric MEAs)最高,深海(4,000～6,000m)氨肽酶和深渊(10,903m) α-葡萄糖苷酶的保压酶活性次之,然而β-葡萄糖苷酶的保压酶活性最高值出现在深渊(10,903m).此外,深渊海水的保压酶活性通常比相应的释压酶活性(decompressed MEAs)高,这一结果突显了保压采样和保压酶活性测定的重要性.随着深度的增加,半饱和常数(Km)总体呈下降趋势,表明深海微生物可能通过增强其胞外酶对底物的亲和力来适应高压和寡营养环境.另外,与颗粒物附着胞外酶活性相比,非颗粒物附着胞外酶活性对深海总酶活性的贡献更为显著,这表明细胞附着性和溶解性胞外酶在海洋生态系统中起着重要作用.本研究为全面理解海洋微生物胞外酶活性提供了重要研究基础,有利于深入理解微生物驱动的海洋生物地球化学循环过程.

关键词：保压采样微生物胞外酶活性深海微生物高压马里亚纳海沟

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谷氨酸受体可逆磷酸化及其功能

生物化学与生物物理进展 1999年第4期26卷 315-318页

作者：高灿张光毅徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州221002

谷氨酸受体（ＧｌｕＲｓ）Ｃ端区存在被多种蛋白激酶磷酸化的位点，同时又能被多种蛋白磷酸酶去磷酸化，磷酸化的结果可使Ｃａ２＋内流增加，增强ＧｌｕＲｓ功能；去磷酸化作用则相反．正常情况下ＧｌｕＲｓ可逆磷酸... 详细信息

谷氨酸受体（ＧｌｕＲｓ）Ｃ端区存在被多种蛋白激酶磷酸化的位点，同时又能被多种蛋白磷酸酶去磷酸化，磷酸化的结果可使Ｃａ２＋内流增加，增强ＧｌｕＲｓ功能；去磷酸化作用则相反．正常情况下ＧｌｕＲｓ可逆磷酸化处于一种动态平衡状态，在突触可塑性机制如长时程增强（ＬＴＰ）中起重要作用，而在病理状态如缺血性脑损伤中。

关键词：谷氨酸受体蛋白激酶蛋白磷酸酶磷酸化

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白细胞介素18

生物化学与生物物理进展 2000年第6期27卷 576-578页

作者：裴冬生赵惠仁徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心徐州221002

白细胞介素 18 (IL 18)是新发现的细胞因子 ,具有多种生物学功能 .IL 18能促进外周血单个核细胞产生干扰素 γ (IFN γ)、IL 2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)等细胞因子 ,增强天然杀伤细胞 (NK细胞 )的细胞毒作用 .IL 18结构... 详细信息

白细胞介素 18 (IL 18)是新发现的细胞因子 ,具有多种生物学功能 .IL 18能促进外周血单个核细胞产生干扰素 γ (IFN γ)、IL 2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)等细胞因子 ,增强天然杀伤细胞 (NK细胞 )的细胞毒作用 .IL 18结构上与IL 1相似 ,而功能更接近IL 12 ,IL 18与IL 12均能诱导Th1细胞产生IFN γ ,存在协同效应 ,但它们的作用途径不同 .IL 18在抗感染抗肿瘤等方面有着潜在的应用前景。

关键词：白细胞介素18 信号转导自身免疫性疾病

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Asp126、Asp130、Asp134对人白介素18功能的影响(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第4期33卷 368-372页

作者：傅奕裴冬生赵惠仁徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心!徐州221002

为研究人白细胞介素 18(hIL 18)中一些氨基酸残基对IL 18功能的影响 ,用重叠延伸PCR定点诱变技术构建hIL 18突变体hIL 18D12 6N、hIL 18D13 0 K、hIL 18D134 K。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达 ,... 详细信息

为研究人白细胞介素 18(hIL 18)中一些氨基酸残基对IL 18功能的影响 ,用重叠延伸PCR定点诱变技术构建hIL 18突变体hIL 18D12 6N、hIL 18D13 0 K、hIL 18D134 K。将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α。经热诱导表达 ,3个突变体占菌体总蛋白质的 15 %～ 31%以上。SDS PAGE证实 ,表达的蛋白质以包含体形式存在。包含体经超声破碎 ,2mol/L尿素洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,SephadexG 75柱纯化后 ,纯度均可达 95 %以上。Western印迹表明 3个突变体与野生型hIL 18具有相同的免疫原性。纯化的突变体蛋白质经复性后 ,以诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生干扰素 γ(IFN γ)的能力为指标检测其活性 ,结果显示 3个突变体的生物学活性分别为野生型IL 18的 32 %、8%、10 % ,表明hIL 18中 12 6、130、134位的天冬氨酸 (Asp)对其功能是必需的

关键词：人白细胞介素18 蛋白质结构与功能定点诱变干扰素-γ

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大鼠βB2晶体蛋白的克隆、高效表达及纯化

生物化学与生物物理学报 2000年第1期32卷 21-25页

作者：赵惠仁胡书群裴冬生陆梁张光毅徐州医学院生物化学和分子生物学研究中心!徐州221002

β晶体蛋白是含量最高的一组晶状体结构蛋白。它的正常结构对维持晶状体的高折射系数和透明至关重要，而其结构的改变与白内障的形成密切相关。为了获得大量纯的βＢ２晶体蛋白并用定点突变的方法研究其聚合的机制，建立了大鼠β... 详细信息

β晶体蛋白是含量最高的一组晶状体结构蛋白。它的正常结构对维持晶状体的高折射系数和透明至关重要，而其结构的改变与白内障的形成密切相关。为了获得大量纯的βＢ２晶体蛋白并用定点突变的方法研究其聚合的机制，建立了大鼠βＢ２晶体蛋白的细菌表达系统及纯化方法。用ＲＴＰＣＲ的方法克隆了β晶体蛋白中含量最高的βＢ２晶体蛋白的ｃＤＮＡ。用萘啶酮酸诱导ｒｅｃＡ启动子后，蛋白质在大肠杆菌中得到了高效表达。βＢ２晶体蛋白约占菌体蛋白质的３０％。表达的蛋白质位于细胞的可溶性组分中。用ＤＥＡＥ纤维素层析和凝胶过滤纯化了重组βＢ２晶体蛋白，ＳＤＳＰＡＧＥ显示一条带。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析证明所纯化的蛋白质是βＢ２晶体蛋白。βＢ２晶体蛋白表达质粒的构建及高效表达和快速简便纯化方法的建立为进一步研究其结构和功能的关系奠定了基础。

关键词： βB2晶体蛋白表达纯化大肠杆菌