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应用Tet-On基因表达系统实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达

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第二军医大学学报 2006年第10期27卷 1092-1097页

作者：杨生生杨志峰严鸣蔡在龙焦炳华毛积芳第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室上海200433 基础医学部病理生理学教研室上海200433

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转... 详细信息

目的:应用Tet-On基因表达系统构建可调控性真核表达质粒,实现Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达。方法:采用DNA重组技术构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18(CD11b和CD18是Mac-1的两个亚基),通过脂质体介导共转染CHO细胞,用荧光显微镜观察转染后阳性细胞;应用RT-PCR和荧光强度分析观察不同浓度(0、0.01、0.1、0.5、1、2μg/ml)强力霉素(Dox)对细胞内CD11b和CD18表达水平的影响;检测PMA(1μg/ml)刺激前后CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附活性的变化。结果:酶切鉴定和测序证实,已成功构建真核表达质粒pTRE-Tight-CFP-CD11b和pTRE-Tight-YFP-CD18,在荧光显微镜下观察到转染成功的CHO细胞发出青色荧光和黄色荧光。通过荧光显微镜观察到随着培养液中Dox浓度的增加,CHO细胞内的荧光强度相应增强,同时CD11b和CD18在mRNA水平的表达也随Dox浓度的增加而增加。PMA刺激后,CHO-Mac-1-FP细胞与其配基ICAM-1黏附率增高(2 h和4 h时最高,此后逐渐下降)。结论:本研究成功实现了Mac-1-FP在CHO细胞中的可调控性表达并具有野生型Mac-1的黏附活性,为进一步开展单分子光谱(SMS)和荧光共振能量转移(FRET)技术研究活细胞内Mac-1分子的2个亚基的二聚化、群集、构象及与配基亲和力变化创造条件。

关键词： Mac-1 青色荧光蛋白黄色荧光蛋白融合蛋白可调控表达

抗肝癌抗巨噬细胞双功能抗体对荷人小鼠的抑瘤作用

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中华医学杂志 1996年第10期76卷 784-785页

作者：王茜王文亮陈志南刘智广刘成刚米力徐力青第四军医大学病理学教研室

抗肝癌抗巨噬细胞双功能抗体对荷人小鼠的抑瘤作用王茜王文亮陈志南刘智广刘成刚米力徐力青肝癌对化学药物治疗及放射治疗均不敏感。近年来，许多学者致力于肝癌导向治疗的研究。双功能抗体（ＢｓＡｂ）能同时识别两种抗原，将药物、毒... 详细信息

抗肝癌抗巨噬细胞双功能抗体对荷人小鼠的抑瘤作用王茜王文亮陈志南刘智广刘成刚米力徐力青肝癌对化学药物治疗及放射治疗均不敏感。近年来，许多学者致力于肝癌导向治疗的研究。双功能抗体（ＢｓＡｂ）能同时识别两种抗原，将药物、毒素或细胞毒性细胞直接射向瘤细胞，因...

关键词：肝肿瘤巨噬细胞抑瘤作用

松果菊苷对雨蛙素诱导的急性胰腺炎大鼠模型胰腺及肝损伤的影响与机制

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临床肝胆病杂志 2024年第4期40卷 782-790页

作者：马明和达哇卓玛刘川川樊海宁青海大学临床医学院西宁810001 青海大学附属医院肝胆胰外科西宁810001 青海省包虫病研究重点实验室西宁810001

目的通过建立急性胰腺炎(AP)大鼠模型,研究松果菊苷(ECH)对雨蛙素诱导的AP大鼠模型胰腺及肝损伤的改善作用及机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组(Con组)、对照组(Con+ECH组)、AP组和AP+ECH组4组,每组各6只。AP模型构建前7 d给予10 mg/k... 详细信息

目的通过建立急性胰腺炎(AP)大鼠模型,研究松果菊苷(ECH)对雨蛙素诱导的AP大鼠模型胰腺及肝损伤的改善作用及机制。方法24只SD大鼠随机分为空白组(Con组)、对照组(Con+ECH组)、AP组和AP+ECH组4组,每组各6只。AP模型构建前7 d给予10 mg/kg ECH腹腔注射,雨蛙素末次给药24 h后,腹主动脉取血,分离血清行ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)、GGT、ALP、Alb、TBil、胆碱酯酶(ChE)、血淀粉酶(Amy)、脂肪酶(LPS)等生化检测;HE染色检测胰腺和肝组织病理学改变;透射电镜观察胰腺和肝组织微观结构改变;ELISA检测肝组织匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组化分析胰腺和肝组织中TNF-α和p-p65 NF-κB水平;Western Blot检测肝组织中NF-κB通路蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q或Dunnett’s T3检验。结果与Con组相比,AP组大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS指标均明显增高(P值均<0.01);肝组织匀浆液IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α水平均增加(P值均<0.01)。ECH干预降低AP大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS水平,并能抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌。HE染色观察可见ECH干预后胰腺组织中腺泡细胞空泡变性和炎性细胞浸润较AP组减轻,肝细胞坏死较AP组减轻。透射电镜检查镜下见ECH干预后肝和胰腺细胞内线粒体肿胀程度较AP组减轻。ECH干预后能部分逆转AP大鼠胰腺和肝组织中p-p65 NF-κB、TNF-α的表达增加。此外,AP大鼠肝组织中MyD88、p-IκBα、p-IKKα、p-p65表达上调,而ECH干预后能部分逆转。结论松果菊苷可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB途径来改善AP诱发的胰腺和肝损伤。

关键词：松果菊苷胰腺炎大鼠,Sprague-Dawley NF-κB

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细菌感染引起大鼠气道炎症的特征

同济医科大学学报 2001年第2期30卷 93-96页

作者：熊密许浒吴焕明郝春荣华中科技大学同济医学院基础医学院病理学教研室武汉430030

为探讨细菌感染引起大鼠气道炎症的特征 ,用鼻腔注入、反复感染肺炎克雷伯杆菌建立大鼠气道炎症模型。结果在炎症反应中 ,TNF- α含量增高出现较早且与炎症病变平行。炎性细胞开始为中性粒细胞 ,随后出现 T淋巴细胞尤其是 CD8细胞及树... 详细信息

为探讨细菌感染引起大鼠气道炎症的特征 ,用鼻腔注入、反复感染肺炎克雷伯杆菌建立大鼠气道炎症模型。结果在炎症反应中 ,TNF- α含量增高出现较早且与炎症病变平行。炎性细胞开始为中性粒细胞 ,随后出现 T淋巴细胞尤其是 CD8细胞及树突细胞增多。提示在上述气道炎症过程中 ,T淋巴细胞尤其是 CD8细胞起重要作用 ,而树突细胞能激活 T淋巴细胞 ,TNF- α是中性粒细胞和 T淋巴细胞在气道聚集和活化的重要因素。

关键词：细菌感染气道炎症 T细胞大鼠

辛伐他汀抑制人非小细胞肺癌H460细胞迁移和MMP2的表达

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中国临床药理学与治疗学 2015年第7期50卷 732-735,740页

作者：王红艳龙捷涂永生广州医科大学病理学教研室广州医科大学生理学教研室

目的:观察辛伐他汀对人非小细胞肺癌H460细胞迁移的影响并探讨其作用机制。方法:CCK-8法检测辛伐他汀对H460细胞活力的影响;用划痕实验和transwell实验观察辛伐他汀对H460细胞迁移的影响;Western bolt检测H460细胞MMP2蛋白的表达。结果... 详细信息

目的:观察辛伐他汀对人非小细胞肺癌H460细胞迁移的影响并探讨其作用机制。方法:CCK-8法检测辛伐他汀对H460细胞活力的影响;用划痕实验和transwell实验观察辛伐他汀对H460细胞迁移的影响;Western bolt检测H460细胞MMP2蛋白的表达。结果:辛伐他汀浓度依赖性地抑制H460细胞迁移,1.25、2.5、5μmol/L的辛伐他汀作用H460细胞24 h,其迁移距离为对照组的79.18%、57.48%、45.34%;与对照组相比,穿过transwell小室膜的细胞数显著减少(P=0.013,P=0.001,P<0.001)。随着辛伐他汀作用浓度增加,H460细胞的MMP2表达逐渐降低。结论:辛伐他汀对人非小细胞肺癌H460细胞的迁移有显著抑制作用,该作用可能与其下调MMP2表达有关。

关键词：辛伐他汀人非小细胞肺癌细胞迁移 MMP2

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大鼠心、脑、骨骼肌毛细血管染色方法比较

第三军医大学学报 2001年第2期23卷 237-239页

作者：黄庆愿史景泉高钰琪刘福玉孙秉庸第三军医大学高原军事医学系高原医学研究室病理生理学教研室重庆400038 第三军医大学附属西南医院病理学研究所重庆400038

目的　对大鼠心、脑、骨骼肌毛细血管染色方法进行比较。方法　采用Mg2 + ATPase、碱性磷酸酶、肌球蛋白 ATPase等酶组化法及墨汁灌注法和Ⅷ 因子相关抗原免疫组化法对毛细血管进行染色。结果　心脏和脑组织毛细血管用碱性磷酸酶染... 详细信息

目的　对大鼠心、脑、骨骼肌毛细血管染色方法进行比较。方法　采用Mg2 + ATPase、碱性磷酸酶、肌球蛋白 ATPase等酶组化法及墨汁灌注法和Ⅷ 因子相关抗原免疫组化法对毛细血管进行染色。结果　心脏和脑组织毛细血管用碱性磷酸酶染色 ,而骨骼肌组织毛细血管用肌球蛋白 ATPase染色效果最好 ;Ⅷ 因子相关抗原免疫组化法用于脑组织毛细血管显示次之 ;Mg2 + ATPase法在心脏、脑、骨骼肌定位效果较差 ;墨汁灌注法只要方法掌握得当 ,各部位毛细血管显示均较好。结论　对毛细血管染色 ,不同器官和组织应采用不同的方法。在心脏和脑用碱性磷酸酶组化法显示较好 ,而在骨骼肌用肌球蛋白 ATPase酶组化法较好。

关键词：毛细血管染色方法心脏脑骨骼肌大鼠

2,6-二甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氢-3,5吡啶二羧酸二甲酯对大鼠肺动脉高压中血管内皮生长因子的影响

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陕西医学杂志 2003年第10期32卷 924-926,F003页

作者：宋景春李志超江山赵澎涛李莹第四军医大学病理生理学教研室西安710032 解放军118医院传染科

目的 :探讨钙拮抗剂 2 ,6 -二甲基 - 4- (2 -氯苯基 ) - 1 ,4-二氢 - 3 ,5吡啶二羧酸二甲酯 (DCDDP)对大鼠野百合碱 (MCT)性肺动脉高压 (PH)中血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法 :用 MCT复制大鼠慢性 PH病理模型 ,DCDDP每天 5μg... 详细信息

目的 :探讨钙拮抗剂 2 ,6 -二甲基 - 4- (2 -氯苯基 ) - 1 ,4-二氢 - 3 ,5吡啶二羧酸二甲酯 (DCDDP)对大鼠野百合碱 (MCT)性肺动脉高压 (PH)中血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法 :用 MCT复制大鼠慢性 PH病理模型 ,DCDDP每天 5μg/kg,5 0μg/kg,5 0 0μg/kg皮下注射连续 2 8d,用免疫组化法和图像分析技术测定肺组织中 VEGF的表达。结果 :发现 VEGF可在正常大鼠肺血管平滑肌、支气管平滑肌和软骨组织中表达 ,DCDDP组比 MCT组肺组织中 VEGF表达降低 ,低剂量组 (每天 5μg/kg)和中剂量组 (每天 5 0μg/kg)尤为明显。结论 :DCDDP抑制肺组织 VEGF表达可能是其防治大鼠

关键词： 2,6-二甲基-4-(2-氯苯基)-1,4-二氢-3,5吡啶二羧酸二甲酯大鼠肺动脉高压血管内皮生长因子钙拮抗剂

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Cdc42作为功能性因子调控纤维化

中国细胞生物学学报 2017年第3期39卷 348-355页

作者：张煜魏然黄萍贾茜雅熊丽霞南昌大学医学部病理生理学教研室南昌330006 南昌大学第一临床医学院南昌330006 南昌大学第一附属医院南昌330006

细胞分裂周期蛋白42(cell division control protein 42 homolog,Cdc42)是一种Rho蛋白家族的小GTPase,可与GTP或GDP结合并在其活性型或失活型之间的转换充当"分子开关",参与了细胞黏附、迁移与极化的过程。纤维化是引起器官功能丧失的... 详细信息

细胞分裂周期蛋白42(cell division control protein 42 homolog,Cdc42)是一种Rho蛋白家族的小GTPase,可与GTP或GDP结合并在其活性型或失活型之间的转换充当"分子开关",参与了细胞黏附、迁移与极化的过程。纤维化是引起器官功能丧失的重要原因之一,有许多不同的机制可以导致纤维化。以往的研究表明,Cdc42与癌症、心血管疾病、神经退行性病变等有密切的联系,却未提及Cdc42与纤维化之间存在的直接联系。该文总结最新的研究成果,讨论了Cdc42与肝、肾、肺以及心血管纤维化的关系。除此之外,该文也阐述了Cdc42通过细胞黏附迁移、上皮–间质转化等途径导致纤维化的具体机制,以及Cdc42介导的信号通路在纤维化过程中发挥的作用,同时还致力于研究各类关键因子之间的联系及与Rho蛋白质家族的"交谈(crosstalk)",更进一步完善了纤维化发生机制,并提出针对Cdc42的靶向治疗方式,以拓宽纤维化的治疗方案。

关键词： Cdc42 纤维化上皮–间质转化细胞迁移靶向治疗

地塞米松和酚妥拉明对小鼠肾上腺素过量性肺水肿的影响

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临床和实验医学杂志 2008年第1期7卷 1-2,4页

作者：华菡萏王翠魏旺谢可鸣苏州大学医学院苏州大学医学院病理生理学教研室江苏苏州215123

目的探讨地塞米松及酚妥拉明对大剂量肾上腺素引起的小鼠肺水肿的影响。方法将30只昆明种小鼠随机分为5组,分别注射肾上腺素、肾上腺素+地塞米松、肾上腺素+酚妥拉明、地塞米松、生理盐水,观察用药前后呼吸的变化,动物死亡后取完整肺脏... 详细信息

目的探讨地塞米松及酚妥拉明对大剂量肾上腺素引起的小鼠肺水肿的影响。方法将30只昆明种小鼠随机分为5组,分别注射肾上腺素、肾上腺素+地塞米松、肾上腺素+酚妥拉明、地塞米松、生理盐水,观察用药前后呼吸的变化,动物死亡后取完整肺脏称重,计算小鼠肺系数。结果肾上腺素组小鼠肺系数均值显著大于生理盐水组(P<0.05);酚妥拉明与肾上腺素合用组小鼠肺系数均值明显低于肾上腺素组者(P<0.05)。肾上腺素与地塞米松合用可促进肺水肿从而加重病情,但也可显示抑制肺水肿的现象。结论大剂量肾上腺素单用可以导致急性肺水肿,迅速给予酚妥拉明可以拮抗肾上腺素引起的急性肺水肿。该结果对于建立相应的实验动物模型及临床上肾上腺素过量中毒的治疗有一定的指导意义。

关键词：急性肺水肿肾上腺素地塞米松酚妥拉明小鼠