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甲胎蛋白对HeLa细胞增殖的促进作用

生物化学与生物物理学报 2002年第6期34卷 769-774页

作者：李孟森李平风李刚杜国光海南医学院生物化学教研室北京大学医学部生物化学与分子生物学系北京大学医学部生物化学与分子生物学系海口571101 北京100083

为探讨甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞增殖的促进作用。用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,通过MTT计数、[3 H] TdR参入法、流式细胞仪等研究细胞增殖 ,并用放射免疫法测定细胞内cAMP、共聚焦显微镜扫描... 详细信息

为探讨甲胎蛋白 (alpha fetoprotein ,AFP)对肿瘤细胞增殖的促进作用。用从人脐带血中提取的AFP作用于体外培养的HeLa细胞 ,通过MTT计数、[3 H] TdR参入法、流式细胞仪等研究细胞增殖 ,并用放射免疫法测定细胞内cAMP、共聚焦显微镜扫描细胞内Ca2 + 浓度等观察细胞内第二信使物质的改变及测定3 2 P转移反映细胞内蛋白激酶A(PKA)活性 ;用Western印迹分析法分析突变型 p5 3、p2 1ras蛋白表达。结果显示AFP(浓度大于 10mg/L)对HeLa细胞增殖有明显的促进作用。在AFP(2 0mg/L)作用下 ,HeLa细胞cAMP浓度升高 30 0 % ;Ca2 + 浓度最大升高 15 4 .9%、PKA活性最大升高 10 0 %。突变型 p5 3和 p2 1ras分别增高 81.1% (2 4h)和 96 .2 % (2 4h)。抗甲胎蛋白单克隆抗体能有效地阻断AFP促HeLa细胞增殖作用。以上表明 ,(1)AFP具促HeLa细胞增殖的生理功能 ;(2 )AFP促进HeLa细胞增殖的作用是通过影响细胞内cAMP和Ca2 + 浓度以及PKA活性进而促进一些原癌基因的表达来实现的。

关键词：甲胎蛋白细胞增殖信号转导基因表达

苦荞蛋白源肽AFYRW对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

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食品科学 2023年第3期44卷 155-161页

作者：肖怡左婕邓艳张礼林王筑婷莫晓川许庆忠李红梅贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025

目的:探讨苦荞蛋白源肽AFYRW在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法:采用LPS诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立血管内皮细胞炎症损伤模型;采用CCK8试剂盒检测A... 详细信息

目的:探讨苦荞蛋白源肽AFYRW在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管内皮细胞损伤中的作用。方法:采用LPS诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立血管内皮细胞炎症损伤模型;采用CCK8试剂盒检测AFYRW对细胞增殖活力的影响;Western blot检测血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhension molecule-1,VCAM-1)、细胞内黏附分子-1(intercellular adhension molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)水平及核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)p65的磷酸化水平;酶法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量变化;单核细胞黏附实验检测HUVECs的黏附性。结果:AFYRW明显提高了细胞的生存活力,降低VCAM-1、ICAM-1、IL-6、TNF-α、iNOS蛋白的相对表达量,减少了NO含量和单核细胞对内皮细胞的黏附,抑制NF-κB的活性。结论:AFYRW对LPS诱导的HUVECs炎症具有改善作用,其机制可能与抑制NF-κB的活性有关。

关键词：炎症生物活性肽苦荞脂多糖人脐静脉内皮细胞

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黄芪多糖对树突状细胞表型及功能成熟的影响

中华微生物学和免疫学杂志 2006年第7期26卷 637-640页

作者：邵鹏赵鲁杭浙江大学医学院生物化学与分子生物学教研室杭州310006

目的通过体外试验研究黄芪多糖(Astragalus mongholicus,ASP)对树突状细胞(dendrit- ic cells,DC)功能调节的机制,为进一步阐明黄芪多糖的免疫学活性提供依据。方法应用流式细胞仪检测技术、扫描电镜技术、酶联免疫吸附试验检测DC表型... 详细信息

目的通过体外试验研究黄芪多糖(Astragalus mongholicus,ASP)对树突状细胞(dendrit- ic cells,DC)功能调节的机制,为进一步阐明黄芪多糖的免疫学活性提供依据。方法应用流式细胞仪检测技术、扫描电镜技术、酶联免疫吸附试验检测DC表型和功能的各种指标。结果本实验应用小鼠骨髓来源的DC,通过体外试验证明了黄芪多糖能够提高DC表面分子CD11c和MHCⅡ的表达,并且呈黄芪多糖浓度依赖性;空白组DC的吞噬功能很强,LPS组DC和黄芪多糖处理组DC吞噬功能都明显下降;黄芪多糖能够促进DC白细胞介素-12(IL-12)的表达;电镜观察DC的超微结构,可见黄芪多糖处理组DC突起增多,形态上更加成熟。结论本实验结果证实了黄芪多糖能促进小鼠骨髓来源的DC表型及功能的成熟。

关键词：黄芪多糖树突状细胞成熟

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牛磺酸的抗肿瘤作用

肿瘤 2012年第4期32卷 308-310页

作者：张霞丽万福生南昌大学医学院生物化学与分子生物学教研室南昌330006

牛磺酸是具有简单化学结构的含硫氨基酸,也是人体的条件必需营养素。牛磺酸具有广泛的生理学功效,是机体的内源性抗损伤物质。近年来,人们发现牛磺酸在肿瘤的预测、预防和治疗中具有重要的应用价值,且牛磺酸在体内的浓度与转运都与肿瘤... 详细信息

牛磺酸是具有简单化学结构的含硫氨基酸,也是人体的条件必需营养素。牛磺酸具有广泛的生理学功效,是机体的内源性抗损伤物质。近年来,人们发现牛磺酸在肿瘤的预测、预防和治疗中具有重要的应用价值,且牛磺酸在体内的浓度与转运都与肿瘤的发生和发展密切相关。

关键词：牛磺酸肿瘤药物治疗

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河鲀毒素的检测技术与应用

生物化学与生物物理进展 2023年第9期50卷 2162-2174页

作者：杨成芳郭晗赵鲁明王梁华海军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200433

河鲀毒素(tetrodotoxin,TTX)是毒性极强的小分子生物碱类毒素,包括中国在内的亚洲沿海国家因误食TTX污染食品而中毒的事件时有发生,其发病迅速且无特效解毒剂,对环境安全、食品安全与社会安全造成极大的威胁。通过检测食品与环境中的TT... 详细信息

河鲀毒素(tetrodotoxin,TTX)是毒性极强的小分子生物碱类毒素,包括中国在内的亚洲沿海国家因误食TTX污染食品而中毒的事件时有发生,其发病迅速且无特效解毒剂,对环境安全、食品安全与社会安全造成极大的威胁。通过检测食品与环境中的TTX含量可以实现TTX的风险预警,可有效防范TTX中毒事件的发生。本文梳理了4类TTX的检测技术,分析比较了传统的生物检测法、化学检测法、免疫检测法之间的优势、不足与实际应用进展,介绍了基于适配体技术的新型检测技术的兴起、发展与广阔的应用前景,对生物安全领域中TTX风险的管理与控制有现实意义。

关键词：河鲀毒素适配体技术生物检测法化学检测法免疫检测法

褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响

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肿瘤 2008年第3期28卷 220-223页

作者：张春辉葛银林耿芳宋张金玉薛美兰青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室青岛266021

目的:研究褐藻糖胶(fucoidan)对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制。方法:应用MTT法检测细胞的增殖;Hoechst33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡;RT-PCR和Western印迹法分别检测细胞中bcl-2和bax的m... 详细信息

目的:研究褐藻糖胶(fucoidan)对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其凋亡机制。方法:应用MTT法检测细胞的增殖;Hoechst33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡;RT-PCR和Western印迹法分别检测细胞中bcl-2和bax的mRNA及其蛋白的表达。结果:不同浓度的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.01),并随其浓度增加,抑制率逐渐增大;褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加,且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带;在褐藻糖胶存在下,bcl-2基因的mRNA和蛋白表达减少,bax基因的mRNA和蛋白表达增加,bcl-2/bax比值下降(P<0.05)。结论:褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖,且诱导其凋亡,其凋亡机制可能与下调bcl-2和上调bax基因的表达有关。

关键词：乳腺肿瘤细胞增殖细胞凋亡细胞 MCF-7

CYP1A1、GSTM1基因多态性与食管癌遗传易感性的关系

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中华流行病学杂志 2000年第6期21卷 420-423页

作者：邵根泽苏艳蓉黄革温博贵汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室 515031

目的　探讨CYP1A1、GSTM 1基因多态性与食管癌遗传易感性的可能关系。方法　采用PCR法对正常人和食管癌患者基因组DNA进行CYP1A1、GSTM 1基因分型。结果　食管癌组GSTM1(- /- )型频率 (6 4% )高于正常对照组 (5 0 % ) (P <0 .0 5 ) ;食... 详细信息

目的　探讨CYP1A1、GSTM 1基因多态性与食管癌遗传易感性的可能关系。方法　采用PCR法对正常人和食管癌患者基因组DNA进行CYP1A1、GSTM 1基因分型。结果　食管癌组GSTM1(- /- )型频率 (6 4% )高于正常对照组 (5 0 % ) (P <0 .0 5 ) ;食管癌CYP1A1基因I/I、I/V、V/V基因型频率与正常组相比差异无显著性 ,尽管食管癌CYP1A1基因I/V、V/V型频率 (6 0 % )稍高于正常对照组 (5 0 % ) (P =0 .16 )。当研究对象按CYP1A1(I/I)和GSTM 1基因分类时 ,发现 :①在GSTM1(+ )人群中 ,食管癌组CYP1A1(I/V、V/V)基因型频率 (6 4% )高于正常组 (4 1% ) (P <0 .0 5 )。②在CYP1A1(I/I)型人群中 ,食管癌组GSTM 1(- /- )型频率 (6 7% )显著高于正常对照组 (4 0 % )(P <0 .0 1)。结论　GSTM 1、CYP1A1基因多态性与食管癌易感性相关 ,GSTM1(- /- )型个体食管癌易感性增高 ;GSTM 1(+ ) /CYP1A1(I/V、V/V)型和GSTM 1(- /- ) /CYP1A1(I/I)型个体比GSTM1(+ ) /CYP1A1(I/I)

关键词：食管肿瘤 CYP1A1 GSTM1 基因多态性

人白细胞介素18突变体的构建及其功能(英文)

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生物化学与生物物理学报 2003年第5期35卷 409-415页

作者：傅奕裴冬生孙兵沈万华陆梁胡书群赵惠仁扬州大学医学院生化教研室徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心苏州大学附属医院神经外科徐州医学院生物化学与分子生物学研究中心扬州225001 徐州221002 苏州215001

为研究人白细胞介素 18(hIL 18)结构与功能的关系 ,用PCR定点突变技术分别构建了N末端、C末端缺失突变体(ΔNC)和IL 1特征样序列突变体S154A/Y156F/E157P/C163 T (S)。将突变体cDNA与原核表达载体 pJW 2重组并转化大肠杆菌DH5α ,经热... 详细信息

为研究人白细胞介素 18(hIL 18)结构与功能的关系 ,用PCR定点突变技术分别构建了N末端、C末端缺失突变体(ΔNC)和IL 1特征样序列突变体S154A/Y156F/E157P/C163 T (S)。将突变体cDNA与原核表达载体 pJW 2重组并转化大肠杆菌DH5α ,经热诱导表达蛋白质 ,SDS PAGE证实表达的目的蛋白质以包涵体形式存在。菌体经超声破碎后 ,包涵体以 2mol/L尿素洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,并经SephadexG 75柱纯化 ,纯度可达 95 %以上。突变体蛋白质经逐步稀释复性后 ,以诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生干扰素 γ(IFN γ)及对核因子 κB(NF κB)的激活能力为指标 ,检测突变体的生物学活性。结果显示ΔNC、S这 2个突变体对IFN γ的诱生能力显著低于野生型hIL 18,分别为野生型hIL 18的 13%和 4 8%。同时 ,ΔNC、S对NF κB的激活能力也低于野生型hIL 18,分别为野生型hIL 18的 6 9.7%和 89.8%。这些结果表明缺失的片段或突变的位点对hIL 18的功能有重要的作用。

关键词：白细胞介素-18 结构与功能干扰素-γ 核因子-κB 定点突变

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盐析法快速提取口腔拭子DNA

第二军医大学学报 2011年第12期32卷 1370-1374页

作者：朱伟锋罗达亚涂硕张霞丽揭克敏万福生南昌大学医学院生物化学与分子生物学教研室南昌330006

目的建立盐析法快速从口腔拭子中提取基因组DNA的方法。方法首先以细胞裂解液和蛋白酶K消化口腔上皮细胞,然后用5 mol/L NaCl沉淀蛋白质,用异丙醇沉淀DNA,最后用70%乙醇洗涤得到的DNA并将其溶于TE(10mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,pH 8... 详细信息

目的建立盐析法快速从口腔拭子中提取基因组DNA的方法。方法首先以细胞裂解液和蛋白酶K消化口腔上皮细胞,然后用5 mol/L NaCl沉淀蛋白质,用异丙醇沉淀DNA,最后用70%乙醇洗涤得到的DNA并将其溶于TE(10mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,pH 8.0)中。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对TP53基因的rs1042522和CHRNA3基因的rs12910984位点进行分型。对不同基因型的样本测序验证。结果单支口腔拭子提取得到的DNA量在0.68～2.56μg之间,D260/D280比值在1.77～1.94之间。经PCR扩增和酶切消化,10个样本的两个单核苷酸多态性都得到了清楚分型。酶切结果与测序结果吻合。结论本实验所建立的盐析法可以快速、简便、经济地从口腔拭子得到高质量的基因组DNA。

关键词：盐析口腔拭子 DNA提取单核苷酸多态性