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地中海弧菌117-T6的溶藻活性

水产学报 2024年第2期48卷 108-118页

作者：史含梦洪帆戴应芬徐梦雅杨锐宁波大学浙江省海洋生物工程重点实验室宁波大学海洋学院

为验证地中海弧菌117-T6(Vm 117-T6)是否具有广谱溶藻性，本实验观察了其对赤潮异湾藻、颗石藻、叉鞭金藻和东海原甲藻的溶藻作用，并对其溶藻物质的特性进行了分析。结果表明，紫菜黄斑病致病菌Vm 117-T6对赤潮异湾藻、颗石藻、叉鞭金... 详细信息

为验证地中海弧菌117-T6(Vm 117-T6)是否具有广谱溶藻性，本实验观察了其对赤潮异湾藻、颗石藻、叉鞭金藻和东海原甲藻的溶藻作用，并对其溶藻物质的特性进行了分析。结果表明，紫菜黄斑病致病菌Vm 117-T6对赤潮异湾藻、颗石藻、叉鞭金藻和东海原甲藻等微藻具有较强溶藻活性，可使藻类叶绿素含量显著降低，是一株广谱性溶藻细菌。Vm 117-T6能在40 min内使赤潮异弯藻的活动能力下降，光合作用受抑，感染120 min即可导致藻体裂解并产生白色絮状沉淀。该菌株能降解卡拉胶，不能降解果胶、纤维素和几丁质。Vm 117-T6菌体、胞内及胞外提取物均具有较强的溶藻活性，其胞外溶藻物质易溶于水、不溶于石油醚和乙酸乙酯，具较强极性；耐高温、不易被活性炭吸附、乙醇处理会降低溶藻活性。Vm 117-T6在常规与易感条件下的关键差异蛋白包括大量的ABC转运蛋白、外膜蛋白、鞭毛蛋白及少量毒素。上述结果提示，Vm 117-T6毒力效应物中含有极性的内毒素物质，且与毒力因子转运、分泌以及细胞黏附相关的蛋白可能在其毒力作用中发挥重要作用。本实验为解析该菌株溶藻机制提供了证据，为该菌的防治及应用提供了参考。

关键词：地中海弧菌117-T6 溶藻细菌溶藻赤潮异湾藻

中国栽培海藻碳汇经济价值时空分异及影响因素

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水产学报 2024年第10期 171-184页

作者：余悦儒杨锐陈海敏陈娟娟骆其君宁波大学浙江省海洋生物工程重点实验室宁波大学海洋学院

工业革命以来，人类活动导致大气中的温室气体浓度迅速攀升，严重影响了全球气候。开发蓝碳产业成为人们应对气候变化的重要举措。栽培海藻碳汇是蓝碳的重要组成部分。本研究以中国8个沿海省份栽培海藻数据为基础，测算其碳汇总经济价... 详细信息

工业革命以来，人类活动导致大气中的温室气体浓度迅速攀升，严重影响了全球气候。开发蓝碳产业成为人们应对气候变化的重要举措。栽培海藻碳汇是蓝碳的重要组成部分。本研究以中国8个沿海省份栽培海藻数据为基础，测算其碳汇总经济价值，并分析其时空分异特征；采用对数平均迪氏指数法(LMDI)解析中国栽培海藻碳汇总经济价值的影响因素。结果显示，2009—2021年，中国栽培海藻碳汇量及其总经济价值整体呈上升趋势，2021年分别达到87万t和488亿元。不同栽培海藻的碳汇量，从高到低依次为海带、江蓠、紫菜、裙带菜和其他(羊栖菜、麒麟菜、石花菜和浒苔)；单位面积碳去除能力，从高到低依次为海带、江蓠、裙带菜、其他和紫菜。福建、山东和辽宁三个省份的栽培海藻碳汇总经济价值较高，其余省份则较低。养殖效率效应(EFE)和养殖面积效应(AE)是栽培海藻碳汇总经济价值的主要驱动因素。研究表明，中国栽培海藻的碳汇潜力不容忽视，能够创造巨大的经济效益。栽培海藻的碳汇能力及其总经济价值存在一定的种间差异，可通过合理调整栽培物种和结构来提高海藻碳汇及其总经济价值。应从政府部门、科研单位及从业人员和社会公众三个层面出发，重视栽培海藻碳汇等渔业碳汇的功能和价值，促进渔业高质量发展，为减缓全球气候变暖，实现“双碳”目标做出更大贡献。

关键词：栽培海藻碳汇经济价值时空分异影响因素

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大黄鱼ATG5基因的分子特征及促进病毒增殖的作用

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水产学报 2024年第2期48卷 155-165页

作者：魏祖运王珊李婉茹王胜蓝陈玉红母尹楠陈新华福建农林大学海洋学院福建省海洋生物技术重点实验室

为探究大黄鱼自噬相关基因5 (LcATG5)在病毒感染中免疫应答中的作用，本实验从大黄鱼中克隆得到了自噬相关基因ATG5 (LcATG5)，其开放阅读框(ORF)全长828个核苷酸，编码275个氨基酸的蛋白质，预测的分子量为32.3 ku，等电点为5.7。氨基... 详细信息

为探究大黄鱼自噬相关基因5 (LcATG5)在病毒感染中免疫应答中的作用，本实验从大黄鱼中克隆得到了自噬相关基因ATG5 (LcATG5)，其开放阅读框(ORF)全长828个核苷酸，编码275个氨基酸的蛋白质，预测的分子量为32.3 ku，等电点为5.7。氨基酸序列比对和系统进化分析结果显示，Lc ATG5与其他物种ATG5之间的序列一致性较高，含有1个高度保守的APG5结构域，并且与棘头梅童鱼ATG5的亲缘关系最近。荧光定量PCR结果显示，LcATG5在所检测的11个组织或器官中均有表达，在血液中表达量最高，在脾脏中表达量最低；LcATG5在来源于大黄鱼头肾组织的原代粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞以及细胞系LYCK细胞中也均有表达，在原代粒细胞中表达量相对较高，而在巨噬细胞中相对较低；病毒类似物poly(I:C)刺激后，这4种免疫细胞中LcATG5的表达水平都显著上调，其在LYCK细胞中变化最为显著，刺激后12 h上调了3.93倍。过表达Lc ATG5的鲤上皮瘤(epithelioma papulosum cyprini, EPC)细胞受鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus, SVCV)感染48 h后，细胞病变效应(cytopathic effects, CPE)明显高于对照组，细胞培养上清中SVCV的滴度为1013.82 TCID50/mL，高于对照组109.27 TCID50/mL，同时细胞内SVCV标志基因SVCV-G、SVCV-M和SVCV-P的表达量分别上调了13.77倍、15.72倍和11.39倍，表明Lc ATG5过表达促进了EPC细胞中SVCV病毒增殖，上述结果为深入研究自噬和自噬相关基因在鱼类病毒感染过程中的作用及机制奠定了基础。

关键词：大黄鱼自噬相关基因5 (ATG5) 免疫细胞病毒增殖

香鱼LECT2双抗体夹心ELISA法的建立及初步应用

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农业生物技术学报 2024年第7期32卷 1703-1714页

作者：许立琼史雨红陈炯宁波大学农产品质量安全危害因子与风险防控国家重点实验室宁波大学海洋学院生物化学与分子生物学实验室宁波大学海洋学院水产生物技术教育部重点实验室

白细胞衍生趋化因子(leucocyte cell-derived chemotaxin 2, LECT2)的表达量对鱼类健康状态具有指示作用。本研究利用毕赤酵母(Pichia pastoris)表达香鱼(Plecoglossus altivelis)重组PaLECT2蛋白(recombinant PaLECT2, rPaLECT2)，分别免疫小鼠(Mus musculus)和新西兰白兔(Oryctolagus cuniculus)制备抗血清，再用Protein G亲和层析柱纯化获得抗体。以小鼠抗PaLECT2抗体作为捕获抗体以及辣根过氧化酶(horseradish peroxidase, HRP)标记的兔抗PaLECT2抗体作为检测抗体，通过条件优化建立双抗体夹心酶联免疫吸附法(double-antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay, DAS-ELISA)。最后应用该方法检测嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染香鱼的模型和抗生素治疗的预后模型中血清PaLECT2蛋白含量。研究结果显示，小鼠和HRP-兔抗PaLECT2抗体效价分别为1∶12 800和1∶25 600。当捕获抗体浓度为8μg/mL而检测抗体稀释比例为1∶1 600时，为最佳捕获抗体包被浓度和检测抗体工作浓度。所建DAS-ELISA法的最低检测限为11.22 ng/mL，具有良好的特异性和重复性。应用本方法测得感染组中PaLECT2的含量为(412±31.5) ng/mL，极显著高于健康组(54±7.2) ng/mL (P应用于香鱼健康状况诊断和监测。

关键词：白细胞衍生趋化因子(LECT2) 双抗体夹心ELISA法(DAS-ELISA) 香鱼初步应用

外源ACC对龙须菜(Gracilariopsis lemaneiformis)果孢子放散的生理影响及转录组分析

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海洋与湖沼 2024年第5期55卷 1245-1257页

作者：周学优孙德光孙雪徐年军宁波大学海洋学院浙江宁波315211 浙江省海洋生物工程重点实验室浙江宁波315211

龙须菜(Gracilariopsis lemaneiformis)是我国产量第二大的养殖海藻,以龙须菜为材料,分别添加5种浓度的1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC),探究了其对龙须菜果孢子放散的作用,结果发现250μmol/L的ACC促进果孢子放散效果最佳。外源添加250μmol/... 详细信息

龙须菜(Gracilariopsis lemaneiformis)是我国产量第二大的养殖海藻,以龙须菜为材料,分别添加5种浓度的1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC),探究了其对龙须菜果孢子放散的作用,结果发现250μmol/L的ACC促进果孢子放散效果最佳。外源添加250μmol/L的ACC后,第2天和第5天龙须菜光合作用进一步下降,第5天后超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性以及还原型抗坏血酸(AsA)含量显著上升,表明龙须菜果孢子的放散还和抗氧化系统密切相关。转录组结果显示ACC处理后第5天光合作用相关基因表达量下调,糖酵解通量增加,TCA循环和氮代谢途径的基因表达量显著上调;外源ACC显著上调了茉莉酸合成途径相关基因的表达,但对乙烯合成途径相关基因无显著影响。研究结果验证了ACC促进龙须菜果孢子放散的作用,为龙须菜的快速繁育提供了新的技术支撑。

关键词：龙须菜果孢子放散 1-氨基环丙烷-1-羧酸转录组

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盐碱水池塘不同饵料投喂条件下拟穴青蟹生长、营养及血清生化指标的比较

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水产学报 2024年第4期48卷 350-365页

作者：周冬平刘磊付媛媛方伟王超越王春琳宁波大学海洋学院宁波海洋研究院

为探究盐碱水池塘养殖条件下投喂不同饵料对池塘水质及拟穴青蟹生长、营养品质及血清生化指标的影响，实验设置青柳蛤、矛尾复虾虎鱼、鹰爪虾3种生物饵料组和1种人工配合饲料组，各组设置3个重复，实验周期4个月，分析各组池塘水质变化... 详细信息

为探究盐碱水池塘养殖条件下投喂不同饵料对池塘水质及拟穴青蟹生长、营养品质及血清生化指标的影响，实验设置青柳蛤、矛尾复虾虎鱼、鹰爪虾3种生物饵料组和1种人工配合饲料组，各组设置3个重复，实验周期4个月，分析各组池塘水质变化，并采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)方法比较各组蟹的生长、营养及血清生化指标。结果显示，各组水温、盐度与pH差异较小，而溶解氧、氨氮、亚硝酸盐氮差异较大，其中，矛尾复虾虎鱼组溶解氧从11.5降至9.2 mg/L，而氨氮、亚硝酸盐氮分别从养殖初期0.44、0.022 mg/L上升到养殖末期的0.89、0.050 mg/L。青柳蛤组的体重(334 g)、增重率(332.7%)和特定生长率(0.076%/d)显著高于其他组，人工配合饲料组存活率最高，达到66.67%，矛尾复虾虎鱼组的肥满度(0.221 g/cm3)显著高于其他组；青柳蛤组的肌肉必需氨基酸中的缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸含量及肝胰腺呈味氨基酸总量和鲜味氨基酸总量在各组中最高，人工配合饲料组肝胰腺必需氨基酸中的苏氨酸、亮氨酸、赖氨酸、组氨酸含量在各组中最高，鹰爪虾组的肌肉呈味氨基酸总量和鲜味氨基酸总量在各组中最高，青柳蛤组的肌肉与肝胰腺饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸、脂肪酸含量均为最高；青柳蛤组的总蛋白含量显著高于其他组，矛尾复虾虎鱼组的总胆固醇显著高于其他组，人工配合饲料组的谷草转氨酶、甘油三酯、葡萄糖显著高于其他组，相关性分析显示青柳蛤等生物饵料常规营养与拟穴青蟹各生长指标存在显著正相关。研究表明，青柳蛤组拟穴青蟹在生长、营养及血清蛋白质指标上具有显著优势，可以作为盐碱水池塘养殖拟穴青蟹的适口饵料。本研究将为拟穴青蟹北方盐碱水池塘养殖和推广提供数据参考。

关键词：拟穴青蟹水质生长营养血清生化指标饵料盐碱水池塘

海洋沉积物古菌膜脂超声萃取前处理中溶剂比对古环境反演指标的影响

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海洋通报 2024年

作者：季佳慧周佳鸣董良极地生态与气候变化教育部重点实验室上海交通大学海洋学院

古菌膜脂广泛存在于海洋沉积物中，并且作为生物标志物被广泛应用于古环境重建。超声辅助萃取（UAE）是一种普遍运用于海洋沉积物中古菌膜脂萃取的技术，在萃取过程中，不同比例的超声溶剂可以影响目标物质在溶剂中的溶解度和分散程度... 详细信息

古菌膜脂广泛存在于海洋沉积物中，并且作为生物标志物被广泛应用于古环境重建。超声辅助萃取（UAE）是一种普遍运用于海洋沉积物中古菌膜脂萃取的技术，在萃取过程中，不同比例的超声溶剂可以影响目标物质在溶剂中的溶解度和分散程度，从而影响萃取效率。本研究采用不同比例超声法试剂萃取了位于东海的沉积物柱状样中广泛存在的甘油二烷基甘油四醚（glycerol dialkyl glycerol tetraethers,GDGTs），计算分析了TEX86、MI以及ACE等指标。研究结果表明，DCM/MeOH比值为5∶1 (V/V)的超声萃取法对GDGTs萃取效率最高，而DCM/MeOH比值为3∶1 (V/V)的萃取法更适用于Archaeol的萃取。此外，除DCM/MeOH (1∶1,V/V)溶剂比外，其余四种不同梯度溶剂比得到的TEX86、RI、MI和ACE指数基本相同。因此，在未来的研究中，我们建议使用5∶1的DCM/MeOH混合有机溶剂作为溶剂萃取膜脂的优选方案。本研究旨在为利用UAE技术对海洋环境样品进行靶向脂质组学分析及指标应用提供方法参考。

关键词：甘油二烷基甘油四醚(GDGTs) 脂类生物标志物脂质组学萃取古环境指标

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水稻OsCYP22互作蛋白的筛选及验证

作物学报 2024年第6期50卷 1628-1634页

作者：张小芳朱琪华芸堰贾黎惠莹邱士优陈宇杰马涛丁沃娜宁波大学科学技术学院/宁波市农业种质资源挖掘与环境调控重点实验室浙江宁波315300 宁波大学海洋学院浙江宁波315211

为了探究水稻亲环素家族基因OsCYP22的功能,构建OsCYP22酵母双杂交诱饵载体,并利用水稻酵母双杂交cDNA文库筛选与OsCYP22相互作用蛋白。自激活试验结果表明,OsCYP22诱饵载体无自激活活性,也对酵母细胞无毒性。通过对酵母双杂交文库的筛... 详细信息

为了探究水稻亲环素家族基因OsCYP22的功能,构建OsCYP22酵母双杂交诱饵载体,并利用水稻酵母双杂交cDNA文库筛选与OsCYP22相互作用蛋白。自激活试验结果表明,OsCYP22诱饵载体无自激活活性,也对酵母细胞无毒性。通过对酵母双杂交文库的筛选,共得到38个阳性菌落,结合测序结果和生物信息学的方法筛选到20个可能与OsCYP22相互作用的蛋白。进一步对OsCYP22分别与调控植物根系生长相关基因OsCSN5和OsRUB1的全长互作验证,结果显示OsCSN5与OsCYP22在酵母中相互作用。这为深入研究OsCYP22的生物学功能提供了理论依据。

关键词：水稻 OsCYP22 酵母双杂交互作蛋白

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聚球藻PCC7002 phoR基因的鉴定及其在磷稳态中的功能

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水生生物学报 2024年第8期48卷 1393-1401页

作者：孙巧伟冯苗苗陈思宁陈未中姜海波宁波大学海洋学院宁波315211 南方海洋科学与工程广东省实验室(珠海) 珠海519080

为探究蓝藻低磷适应机制,研究鉴定了海洋聚球藻PCC7002中可能的磷调控基因phoR(A2100),并通过生物信息学的方法对PhoR蛋白理化性质进行了分析,发现phoR基因长度为1296bp,编码431个氨基酸,PhoR蛋白由PAS、HisKA和HATPase_c三部分结构域组... 详细信息

为探究蓝藻低磷适应机制,研究鉴定了海洋聚球藻PCC7002中可能的磷调控基因phoR(A2100),并通过生物信息学的方法对PhoR蛋白理化性质进行了分析,发现phoR基因长度为1296bp,编码431个氨基酸,PhoR蛋白由PAS、HisKA和HATPase_c三部分结构域组成,在不同蓝藻物种中序列较为保守。随后通过原核表达获得了PhoR重组蛋白,并制备其鼠源多克隆抗体,检测了PhoR在聚球藻PCC7002中缺磷诱导时的表达变化,证明PhoR蛋白在磷缺乏时大量诱导表达。为探究PhoR在聚球藻PCC7002中的生理功能,通过缺失突变获得了Mut-phoR突变株,并分析了其生理表型,发现Mut-phoR突变株在磷限制条件下出现显著的生长缺陷及光合作用的损伤,证明PhoR是聚球藻PCC7002适应低磷环境不可缺少的。研究结果为深入认识蓝藻的低磷适应分子机制提供了科学基础。

关键词： phoR 原核表达基因敲除多克隆抗体制备聚球藻PCC7002