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罗汉果甜苷Ⅲ延缓猪卵母细胞体外老化的作用机制

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南方农业学报 2024年第07期55卷 1949-1960页

作者：赵磊曾筱乔高祖维吴诗瑶彭珂严煜钧万润田梁兴伟广西大学动物科学技术学院/广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室

【目的】验证罗汉果甜苷Ⅲ是否具有延缓猪卵母细胞体外老化进程的功效，为采用植物提取物延缓卵母细胞体外老化提供参考依据。【方法】以体外培养44 h获得的猪卵母细胞为研究对象，通过孤雌激活筛选出罗汉果甜苷Ⅲ对猪卵母细胞的有效作... 详细信息

【目的】验证罗汉果甜苷Ⅲ是否具有延缓猪卵母细胞体外老化进程的功效，为采用植物提取物延缓卵母细胞体外老化提供参考依据。【方法】以体外培养44 h获得的猪卵母细胞为研究对象，通过孤雌激活筛选出罗汉果甜苷Ⅲ对猪卵母细胞的有效作用浓度；然后设新鲜卵母细胞（Fresh）、老化卵母细胞（Aging）及老化卵母细胞添加罗汉果甜苷Ⅲ（MogⅢ）3个处理组，采用免疫荧光染色和实时荧光定量PCR等分别检测猪卵母细胞的线粒体数量和分布、腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）含量、线粒体膜电位、活性氧（ROS）水平、DNA损伤、抗氧化相关基因表达及早期凋亡水平等指标。【结果】老化导致猪卵母细胞孤雌激活后的胚胎分裂率及囊胚发育率极显著下降（P<0.01，下同），而添加罗汉果甜苷Ⅲ能有效提高老化卵母细胞孤雌激活后的胚胎分裂率和囊胚发育率，尤其以添加25.0μmol/L罗汉果甜苷Ⅲ的效果最优，故确定25.0μmol/L为罗汉果甜苷Ⅲ的有效作用浓度。与Fresh组猪卵母细胞相比，Aging组猪卵母细胞线粒体荧光强度显著下降（P<0.05，下同）、ATP含量极显著下降、线粒体膜电位显著下降、抗氧化相关基因相对表达量极显著下降，而ROS水平、γ-H2AX荧光强度和Annexin-V阳性率均极显著上升；但添加25.0μmol/L罗汉果甜苷Ⅲ后上述问题均得到有效改善，即罗汉果甜苷Ⅲ能有效缓解猪卵母细胞的老化进程。【结论】罗汉果甜苷Ⅲ通过改善老化猪卵母细胞线粒体数量和ATP含量的异常、恢复ROS平衡、上调抗氧化相关基因表达，以及缓解猪卵母细胞老化引起的DNA损伤和早期凋亡，而有效延缓猪卵母细胞的老化进程，进而提高猪卵母细胞的体外发育能力。

关键词：猪卵母细胞老化罗汉果甜苷Ⅲ 氧化应激

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EGCG对热应激诱导猪骨骼肌卫星细胞凋亡的保护作用

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南方农业学报 2024年

作者：杨豹王倩李银蒋钦杨黄艳娜广西大学动物科学技术学院广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室

【目的】探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对热应激诱导的猪骨骼肌卫星细胞凋亡的影响及潜在的保护机制，为其用于天然饲料添加剂的开发提供指导。【方法】体外培养猪骨骼肌卫星细胞，给予不同天数41.5 ℃高温和20 μmol/L EGCG处理... 详细信息

【目的】探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对热应激诱导的猪骨骼肌卫星细胞凋亡的影响及潜在的保护机制，为其用于天然饲料添加剂的开发提供指导。【方法】体外培养猪骨骼肌卫星细胞，给予不同天数41.5 ℃高温和20 μmol/L EGCG处理。通过CCK-8试剂盒测定热应激和EGCG对细胞生长的影响；倒置荧光显微镜观察Hoechest 33258细胞染色和流式细胞术判断细胞凋亡程度；提取细胞总RNA并反转录成cDNA作为模板，通过实时荧光定量PCR测定细胞中的Bcl-2、BAX、Caspase-3、Caspase-9、Cytc基因相对表达量；提取细胞总蛋白，并通过Western blotting测定Bcl-2和BAX蛋白表达水平。【结果】高温处理2 d极显著抑制细胞生长(P<0.01)，将该处理天数用于后续试验；热应激显著提高细胞的凋亡水平，并促进BAX、Caspase-3、Caspase-9、Cytc等促凋亡相关基因表达和BAX蛋白表达，抑制Bcl-2等抗凋亡基因和蛋白表达；在37.0 ℃下，20 μmol/L EGCG对猪骨骼肌卫星细胞的生长及凋亡没有显著影响；而在41.5 ℃下，EGCG有效缓解高温对细胞生长的抑制；添加EGCG后，高温下的细胞凋亡水平下降；EGCG有效抑制41.5 ℃下细胞中BAX、Caspase-3、Caspase-9、Cytc基因表达和BAX蛋白表达，并促进Bcl-2基因和蛋白表达。【结论】41.5 ℃热应激诱导猪骨骼肌卫星细胞发生凋亡，EGCG可通过调控Bcl-2、BAX等凋亡相关基因的表达减轻其诱导的细胞凋亡，以起到对细胞的保护作用。

关键词：猪表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG) 热应激凋亡骨骼肌

白藜芦醇通过ESR1-PI3K信号通路抑制3T3-L1细胞脂滴形成

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南方农业学报 2024年第07期55卷 1916-1924页

作者：王倩杨豹李银蒋钦杨黄艳娜广西大学动物科学技术学院广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室

【目的】探究白藜芦醇（RES）与雌激素受体1(ESR1)对3T3-L1细胞脂滴形成的影响及调控机制，为RES抑制脂肪沉积潜在机制的研究提供理论依据。【方法】以3T3-L1细胞为试验材料，设计并合成针对ESR1基因的小干扰RNA(siRNA)，在3T3-L1细胞... 详细信息

【目的】探究白藜芦醇（RES）与雌激素受体1(ESR1)对3T3-L1细胞脂滴形成的影响及调控机制，为RES抑制脂肪沉积潜在机制的研究提供理论依据。【方法】以3T3-L1细胞为试验材料，设计并合成针对ESR1基因的小干扰RNA(siRNA)，在3T3-L1细胞培养基中添加RES，以添加等量二甲基亚砜（DMSO）为对照，利用油红O染色、实时荧光定量PCR检测、Western blotting检测等分析RES与ESR1对3T3-L1细胞分化的影响。【结果】与对照组相比，RES能显著（P0.05，下同），ATGL、CEBPα、PPARγ及FAS基因相对表达量也均无显著差异。干扰ESR1基因能极显著（P<0.001）上调PI3K信号通路中PI3K和AKT基因相对表达量，极显著（P<0.001）下调FOXO1基因相对表达量；加入RES后，PI3K、AKT及FOXO1基因相对表达量与未加入RES相比均无显著差异。【结论】RES能通过ESR1-PI3K信号通路，上调脂肪分解关键基因ATGL相对表达量，下调脂肪合成关键基因CEBPα、PPARγ及FAS相对表达量，从而抑制3T3-L1细胞脂滴形成。

关键词：白藜芦醇雌激素受体1(ESR1) PI3K信号通路脂滴形成

广西巴马小型猪睾丸发育过程中组织形态及生殖激素水平的变化

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中国畜牧杂志 2024年第8期60卷 335-341页

作者：张坤王钰滨奉玲丽邓仲荣许迪颜港张帅徐玉培梁晶兰干球广西大学动物科学与技术学院广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室

为探究广西巴马小型猪睾丸的生长发育规律，为初情期和性成熟的判定提供依据，本实验采集广西巴马小型猪胚胎期65、90、105 d和出生后0、30、60、90、120、150、180、300 d的睾丸组织，测定睾丸长径、短径、厚径、重量等形态学指标，通... 详细信息

为探究广西巴马小型猪睾丸的生长发育规律，为初情期和性成熟的判定提供依据，本实验采集广西巴马小型猪胚胎期65、90、105 d和出生后0、30、60、90、120、150、180、300 d的睾丸组织，测定睾丸长径、短径、厚径、重量等形态学指标，通过HE染色观察其组织特征，并使用ELISA方法测定出生后不同日龄的生殖激素水平。结果显示：随着日龄增加，睾丸各形态学指标持续增大，0～30 d各项指标增长速度最快，睾丸指数呈现先升高后降低的趋势，并在出生后60 d达到最大值；睾丸的各形态学指标间均呈正相关（P实验发现，广西巴马小型猪胚胎期65～90 d和出生后0～60 d是其睾丸快速发育的时期；出生后30～60 d是精子发生的关键时期，初情期在30～60 d；巴马小型猪睾丸在60 d时已具备基本的生精能力，在150 d时基本发育成熟。

关键词：广西巴马小型猪睾丸性成熟生精小管生殖激素

广西巴马小型猪内脏器官生长发育及血清生化指标研究

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中国畜牧杂志 2024年第8期60卷 348-353页

作者：邓仲荣奉玲丽许迪王钰滨张坤徐玉培张志程兰干球梁晶广西大学动物科学技术学院广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室

本研究旨在分析广西巴马小型猪不同生长阶段内脏器官、肠道组织形态发育以及血清生化指标的变化，为保护广西地方小型猪品种、医学动物模型的开发提供参考。实验猪由广西大学巴马小型猪繁育中心实验牧场培育，在0、30、60、90、120、18... 详细信息

本研究旨在分析广西巴马小型猪不同生长阶段内脏器官、肠道组织形态发育以及血清生化指标的变化，为保护广西地方小型猪品种、医学动物模型的开发提供参考。实验猪由广西大学巴马小型猪繁育中心实验牧场培育，在0、30、60、90、120、180日龄时分别选择4头健康且体重相近的母猪进行屠宰，采集血液、心、肝、脾、肺、肾、空肠和回肠，测定不同日龄下广西巴马小型猪内脏器官的重量和血清生化指标，测定30、90、180日龄的空肠、回肠肠绒毛长度、数量和小肠腺平均直径、数量。结果表明：在所测日龄内，广西巴马小型猪内脏器官的生长强度顺序依次为肝脏、肺脏、肾脏、心脏、脾脏，其相对生长速度由快到慢依次为脾脏、肝脏、肺脏、心脏、肾脏。90日龄和180日龄广西巴马小型猪的空肠绒毛长度显著高于30日龄；180日龄的空肠绒毛数量显著高于30日龄；180日龄的空肠肠腺直径显著高于90日龄与30日龄；90日龄空肠肠腺数量达到最高后下降，180日龄的空肠肠腺数量显著低于90日龄。90日龄和180日龄广西巴马小型猪的回肠绒毛长度显著高于30日龄；30日龄的回肠绒毛数量显著高于180日龄；180与90日龄的回肠肠腺直径显著高于30日龄；随着日龄的增加，回肠肠腺数量呈上升趋势，但每个时期差异均不显著。本实验结果说明，广西巴马小型猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏与肾脏的生长速度在0～30日龄最大；广西巴马小型猪肝脏发育的基本结构单位肝小叶在30日龄左右时基本形成，其肝脏组织结构发育的稳定期推测可能在210～240日龄，由于样本有限，具体发育稳定期有待后续研究；随着日龄增长，广西巴马小型猪空肠、回肠的肠绒毛和肠腺发育不断完善，但是空肠肠绒毛与肠腺的生长发育比回肠更好，推测空肠是饲料消化吸收的主要场所。

关键词：广西巴马小型猪内脏器官肠道组织形态生长发育血清生化指标

大白猪不同脂肪部位脂质代谢相关基因的表达差异分析

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基因组学与应用生物学 2024年第4期43卷 636-645页

作者：王钰滨陈奎蓉王梦影张坤许迪兰干球梁晶广西大学动物科学技术学院广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室南宁530004

脂肪沉积决定于脂肪酸合成、转运和分解代谢的动态平衡。为比较猪(Sus scrofa domesticus)不同脂肪部位脂质代谢差异和不同性别间的差别,筛选与脂肪沉积能力显著关联的相关酶基因,本研究检测大白猪(Large White pigs)脂质代谢相关生化... 详细信息

脂肪沉积决定于脂肪酸合成、转运和分解代谢的动态平衡。为比较猪(Sus scrofa domesticus)不同脂肪部位脂质代谢差异和不同性别间的差别,筛选与脂肪沉积能力显著关联的相关酶基因,本研究检测大白猪(Large White pigs)脂质代谢相关生化指标、肌内脂肪(intramuscular fat)含量,皮下脂肪、腹部脂肪和肾周脂肪组织间脂肪酸合成酶基因ACC,脂肪酸转运酶基因CPT1A和CD36,以及脂肪酸分解酶基因HSL和LPL的转录表达水平,分析目标基因与血清生化指标和肌内脂肪含量的相关性,比较在不同脂肪组织间的基因表达差异。结果表明,血清甘油三酯(triglycerides)、总胆固醇(total cholesterol)和肌内脂肪含量在不同性别大白猪中均无显著性差异(P>0.05)。相关性分析表明,大白猪公猪腹部脂肪中ACC基因表达量与甘油三酯含量呈显著正相关(P0.05)。在大白猪母猪中,ACC基因在腹部脂肪中的表达丰度最高;CPT1A基因和HSL基因在皮下脂肪中的表达量极显著低于腹部脂肪的(P0.05)。本研究初步揭示了不同性别大白猪脂质代谢相关基因在不同脂肪部位的表达差异,提示ACC基因可能正向调控腹部脂肪沉积,HSL基因在大白猪公猪皮下脂肪分解代谢中可能发挥更重要的功能。

关键词：大白猪不同脂肪部位脂肪代谢相关性分析基因差异分析

标准全消化道可消化钙、磷含量对断奶仔猪肠-肝-肾轴钙、磷吸收的影响及机制

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动物营养学报 2024年第7期36卷 4243-4257页

作者：孙焱杰韦洋洋苗振彦熊云霞吴绮雯杨雪芬王丽蒋宗勇易宏波黄艳娜广西大学动物科学技术学院南宁530004 广东省农业科学院动物科学研究所猪禽种业全国重点实验室农业农村部华南动物营养与饲料重点实验室广东省畜禽育种与营养研究重点实验室广州510640

本试验旨在研究标准全消化道可消化钙(STTD Ca)和标准全消化道可消化磷(STTD P)含量对7~25 kg断奶仔猪钙、磷吸收的影响。选取21日龄、体重接近的杜长大杂交断奶仔猪144头,随机分为6组,每组6个重复,每个重复4头猪(阉公猪和母猪各2头)。... 详细信息

本试验旨在研究标准全消化道可消化钙(STTD Ca)和标准全消化道可消化磷(STTD P)含量对7~25 kg断奶仔猪钙、磷吸收的影响。选取21日龄、体重接近的杜长大杂交断奶仔猪144头,随机分为6组,每组6个重复,每个重复4头猪(阉公猪和母猪各2头)。第1~6组饲粮中STTD Ca和STTD P的比例均为1.2,STTD P含量分别为0.18%、0.26%、0.34%、0.42%、0.50%、0.58%,STTD Ca含量分别为0.216%、0.312%、0.408%、0.504%、0.600%、0.696%。试验期42 d。结果表明:1)随着饲粮中STTD Ca和STTD P的含量逐渐升高,血清碱性磷酸酶活性逐渐降低,但组间没有显著差异(P>0.05),血清降钙素(CT)、甲状腺素(T 4)、1,25二羟维生素D 3[1,25(OH)D 3]、甲状旁腺素(PTH)含量逐渐升高,且6组显著高于1组(P0.05)。3)所有组肠道结构完整,1和2组十二指肠绒毛高度/隐窝深度显著高于5和6组(P<0.05),2组空肠绒毛高度/隐窝深度显著低于5组(P<0.05)。4)在十二指肠中,2和3组维生素D受体(VDR)的基因相对表达量显著高于1和5组(P<0.05),1和2组钙磷结合蛋白1(CALB1)的基因相对表达量显著高于4、5和6组(P<0.05),1组细胞色素P450家族成员24A1(CYP24A1)的基因相对表达量显著高于其他组(P<0.05);在空肠中,4和6组的钙离子通道6(TRPV6)的基因相对表达量显著高于2和5组(P<0.05),6组S100钙结合蛋白G(S100G)的基因相对表达量显著高于2组(P<0.05),4组ATP酶质膜钙离子转运蛋白1(ATP2B1)的基因相对表达量显著高于2组(P<0.05),5和6组溶质载体家族蛋白34成员A3(SLC34A3)的基因相对表达量显著高于1和2组(P<0.05),1组CYP24A1的基因相对表达量显著高于其他组(P<0.05);在回肠中,CYP24A1和SLC34A3的基因相对表达量逐渐降低,1和2组CYP24A1的基因相对表达量显著高于其他组(P<0.05),2组SLC34A3的基因相对表达量显著高于其他组(P<0.05);在结肠中,1组TRPV6、ATP2B1和CALB1的基因相对表达量显著高于其他组(P<0.05)。在肾脏中,甲状旁腺素1受体(PTH1R)和钙离子通道5(TRPV5)的基因相对表达量先升高后降低,当升高到NRC(2012)推荐STTD P添加量(STTD P含量为0.34%~0.42%)时到达最大;3和4组PTH1R的基因相对表达量显著高于其他组(P<0.05),4组TRPV5的基因相对表达量显著高于其他组(P<0.05)。在肝脏中,2组SLC34A3的基因相对表达量显著高于4组(P<0.05),1组CALB1的基因相对表达量显著高于其他组(P<0.05)。综上所述,饲粮中STTD Ca和STTD P的比例为1.2时,随着饲粮中STTD Ca和STTD P的含量逐渐升高,十二指肠和结肠对钙、磷的吸收能力逐渐减弱,空肠对钙、磷的吸收能力逐渐增强,肝脏对钙、磷吸收能力逐渐降低。当饲粮中STTD Ca和STTD P的含量增加到NRC(2012)推荐的STTD P添加量(饲粮STTD P含量为0.34%~0.42%)时,肾脏对钙、磷重吸收的能力最强。结合血清钙、磷含量数据,当饲粮中STTD Ca和STTD P的含量分别在0.216%~0.312%和0.18%~0.26%时,断奶仔猪能有效利用饲粮钙、磷。

关键词：断奶仔猪 STTD Ca STTD P 肠道肾脏肝脏钙、磷吸收

中药单体组合物的筛选优化及对大肠杆菌的抑菌作用

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畜牧与兽医 2024年第8期56卷 112-120页

作者：杨蒙莫家豪张丽芳张志丹杨云乔张歌音程于梦黎江司红彬广西大学动物科学技术学院/广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室广西南宁530004

旨在研究由不同单体组成的中药单体组合物对多重耐药大肠杆菌的抑菌作用。通过最小抑菌浓度(MIC)、分级抑菌指数(FICI)、中药单体组合物的筛选、中药单体组合物的剂量配比优化等试验,获得一种由绿原酸、黄芩苷、厚朴酚按照质量比为2∶4... 详细信息

旨在研究由不同单体组成的中药单体组合物对多重耐药大肠杆菌的抑菌作用。通过最小抑菌浓度(MIC)、分级抑菌指数(FICI)、中药单体组合物的筛选、中药单体组合物的剂量配比优化等试验,获得一种由绿原酸、黄芩苷、厚朴酚按照质量比为2∶4∶1的中药单体组合物。通过测定中药单体组合物对多重耐药大肠杆菌的生长曲线、相对电导率、核酸和蛋白渗漏、胞外碱性磷酸酶(AKP)含量、胞内DNA含量变化的影响,初步探究中药单体组合物对多重耐药大肠杆菌的体外抑菌作用。结果显示:绿原酸、黄芩苷、厚朴酚、硫酸小檗碱对多重耐药大肠杆菌的MIC分别为6.25、6.25、6.25和1.25 mg/mL,不同组分之间存在协同或相加作用,其中绿原酸和厚朴酚联用的FICI为0.5。中药单体组合物可以抑制细菌的生长,破坏大肠杆菌细胞的完整性,引起细胞内容物渗漏使菌液的电导率显著升高(P<0.05),菌液OD_(260 nm)、OD_(280 nm)值显著升高(P<0.05),AKP含量显著升高(P<0.05),DNA含量变化明显。本研究表明中药单体组合物主要通过破坏多重耐药大肠杆菌的细胞膜、细胞壁的结构完整性从而实现抑菌作用,为中药复方治疗或预防细菌性疾病的药物筛选和研发奠定基础。

关键词：中药单体组合物配比优化多重耐药大肠杆菌抑菌作用

TGFA过表达对水牛卵巢颗粒细胞功能的影响

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中国畜牧杂志 2024年第5期60卷 213-218页

作者：刘青云程佳瑞秦慧婷程隽如赵子文石德顺邓彦飞广西大学动物科学技术学院广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室广西南宁530004

本试验旨在探索转化生长因子α(Transforming Growth Factor alpha,TGF-α)的编码基因TGFA对水牛卵巢颗粒细胞(BGCs)增殖、凋亡和类固醇激素分泌能力的影响,为进一步探明TGFA在调控水牛卵泡发育中的作用提供理论支持。构建TGFA过表达载... 详细信息

本试验旨在探索转化生长因子α(Transforming Growth Factor alpha,TGF-α)的编码基因TGFA对水牛卵巢颗粒细胞(BGCs)增殖、凋亡和类固醇激素分泌能力的影响,为进一步探明TGFA在调控水牛卵泡发育中的作用提供理论支持。构建TGFA过表达载体,采用脂质体将其转染至BGCs,CCK-8、EdU、流式细胞术、ELISA等技术分别检测细胞活力、增殖、凋亡和类固醇激素分泌情况,同时运用qRT-PCR和WesternBlot检测相关基因和蛋白的表达变化。结果表明,TGFA过表达后BGCs活力显著提高,EdU阳性细胞率显著升高,增殖相关基因PCNA和CyclinD1的表达量显著上调。同时,细胞凋亡率显著降低,促凋亡基因CASPASE 3、BAX和P53的表达量显著降低,促凋亡蛋白CASPASE3的表达量显著下调;雌激素(Estradiol,E2)和孕酮(Progesterone,也称黄体酮,缩写:PROG)的分泌量显著降低,类固醇激素合成相关基因3-βHSD和CYP19A1的表达量显著下调,其蛋白表达量也显著降低。综上,TGFA过表达促进BGCs增殖,抑制细胞凋亡和类固醇激素分泌,从而调节水牛卵泡发育。

关键词： TGFA 水牛卵巢颗粒细胞细胞增殖凋亡激素

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