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青霉菌Penicillium janthinellum菌株GXCR的高抗重金属盐及其对Cu^(2+)和Zn^(2+)离子吸收的特性

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菌物学报 2006年第4期25卷 616-623页

作者：韦明肯唐华英梁铃黄素李有志广西亚热带生物资源保护利用重点实验室

从广西某矿区污泥中分离了一株高抗Cu2+的真菌,编号为GXCR,根据形态和5.8SrRNA基因的内转录间隔子区的DNA序列同源性将其鉴定为Penicilliumjanthinellum。GXCR能够耐200mmolL–1的Cu2+,在5mmolL–1Mn2+存在下,可在含800mmolL–1Cu2+的PDA上生长。在PDA培养基上,限制GXCR生长的其它金属盐的最小浓度(mmolL–1)依次为:Zn2+,>1200;Al3+,>500;Na+,>250;Mn2+,>200;Cd2+,50;Cr3+,>60;Cr6+,>3;Ni2+,20;Pb2+,50。对Cu2+、Cr6+、Pb2+和Zn2+,的抗性是pH依赖性的,在pH3~7,随着pH的升高,其抗性急剧下降。在含3种金属盐混合物的PDL(未添加琼脂的PDA)中的GXCR生长的正交实验结果表明:金属盐之间存在显著的毒性协同效应;毒性协同效应强度不仅与盐的种类也与组成盐之间的浓度相关;GXCR有较高的抗3种金属盐混合物的能力。原子吸收测定结果表明:在含20mmolL–1Cu2+去离子水溶液中,未经NaOH预处理的自然菌体的Cu2+吸收量为38.1mgg-1干菌体,经200mmolL–1NaOH预处理的菌体的吸收量为76.9mgg-1干菌体;在含1200mmolL–1Zn2+的PDL(未加琼脂的PDA)中,接种分生孢子并连续培养7d后,菌体的Zn2+吸收量为258.3mgg-1干菌体。

关键词：真菌单一金属盐金属盐混和物废水处理

Lactobacillus diolivorans二醇脱水酶激活因子基因的克隆、测序与功能鉴定

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生物化学与生物物理进展 2007年第1期34卷 87-92页

作者：孟晓蕾唐悦齐向辉韦宇拓黄日波广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室南宁530004 广西大学生命科学与技术学院南宁530004

根据二醇脱水酶与甘油脱水酶的激活因子基因序列同源性分析,设计简并引物从***基因组DNA中扩增出了假定的二醇脱水酶激活因子基因(gldG、gldH)全序列,补全了GenBank中该基因序列的未知部分,构建了表达质粒pSE-gldGH,以***21为宿主,进行... 详细信息

根据二醇脱水酶与甘油脱水酶的激活因子基因序列同源性分析,设计简并引物从***基因组DNA中扩增出了假定的二醇脱水酶激活因子基因(gldG、gldH)全序列,补全了GenBank中该基因序列的未知部分,构建了表达质粒pSE-gldGH,以***21为宿主,进行诱导表达.表达产物的变性与非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明:gldGH表达产生68ku、13ku两个蛋白质,它们经金属螯合亲和层析与凝胶过滤得到共纯化,纯化产物即假定的激活因子为分子质量约325ku的蛋白质聚合体,由这两个蛋白质以等摩尔量组成,因此假定的激活因子可能为α4β4亚基结构.以***二醇脱水酶为对象,进行激活实验,结果证实gldGH表达产物具备二醇脱水酶激活因子的功能.

关键词：二醇脱水酶激活因子功能鉴定 1,3-丙二醇 Lactobacillus diolivorans

辣椒Ca NPR1-RNAi表达载体的构建及其对辣椒的转化

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广西植物 2008年第1期28卷 107-112,99页

作者：罗欢段承杰陈保善唐纪良冯家勋广西亚热带生物资源保护利用重点实验室

从辣椒中克隆到一个与拟南芥系统获得抗性正调节基因NPR1同源的CaNPR1基因的全长cDNA。辣椒CaNPR1基因与拟南芥NPR1基因在mRNA水平上同源性为62.9%,两者的编码产物一致性为49·7%,相似性为65.7%。为鉴定该基因的功能,构建了一个以CaNPR... 详细信息

从辣椒中克隆到一个与拟南芥系统获得抗性正调节基因NPR1同源的CaNPR1基因的全长cDNA。辣椒CaNPR1基因与拟南芥NPR1基因在mRNA水平上同源性为62.9%,两者的编码产物一致性为49·7%,相似性为65.7%。为鉴定该基因的功能,构建了一个以CaNPR1基因为靶基因的RNA干涉辣椒表达载体pCaNPR1-RNAi,并用根癌农杆菌介导法转化辣椒桂研五号,共获得了6株卡那霉素抗性再生苗,经Southern杂交证实,这些再生苗均为转基因植株,为进一步鉴定该基因的功能奠定了基础。

关键词： CaNPR1基因克隆 RNA干涉辣椒遗传转化

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猪单个卵母细胞体外转录体系的建立

动物学杂志 2008年第1期43卷 31-37页

作者：杨小淦江明生卢晟盛刘红波任子利吕培茹张明陆阳清卢克焕广西亚热带生物资源保护利用重点实验室广西大学南宁530004

利用switching mechanism at 5′end of RNA transcript(SMART)技术对猪单个体外成熟培养的MⅡ期卵母细胞进行了扩增,在此基础上,利用T7体外转录技术进行体外转录,aRNA浓度达到1.962μg。通过联合SMART技术和T7体外转录技术,mRNA浓度扩... 详细信息

利用switching mechanism at 5′end of RNA transcript(SMART)技术对猪单个体外成熟培养的MⅡ期卵母细胞进行了扩增,在此基础上,利用T7体外转录技术进行体外转录,aRNA浓度达到1.962μg。通过联合SMART技术和T7体外转录技术,mRNA浓度扩增了2.3×104倍左右,这个数量级已基本能满足cDNA array等通量筛选研究的需求。本研究为珍贵和微量的生物材料进行高通量筛选研究提供了一个有效的体系。

关键词：猪卵母细胞 SMART技术 T7体外转录技术

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牛分离精子对其IVF胚胎染色体影响的研究

中国生物工程杂志 2007年第1期27卷 98-101页

作者：张明陆阳清卢克焕广西亚热带生物资源保护利用重点实验室

采用传统的细胞遗传学方法,研究了由流式细胞仪分离的、染色未分离的及作为对照用的未染色未分离的分别来自于3头公牛的精子体外授精(in vitrofertilization,IVF)后产生的6～8d囊胚的染色体异常情况,以确定流式细胞仪分离精子的过程及... 详细信息

采用传统的细胞遗传学方法,研究了由流式细胞仪分离的、染色未分离的及作为对照用的未染色未分离的分别来自于3头公牛的精子体外授精(in vitrofertilization,IVF)后产生的6～8d囊胚的染色体异常情况,以确定流式细胞仪分离精子的过程及染色对胚胎染色体异常的影响。结果显示,分离精子、染色未分离精子和未染色未分离精子的胚胎中,染色体组成均出现异常,嵌合体胚胎分别占40.7%、35.8%和37.0%,三者染色体异常的比例无显著差异。胚胎染色体异常的频率在不同公牛之间存在差异(33.0%∶44.6%)(p<0.05)。结果证明,染料和分离过程不影响精子的DNA亦不影响胚胎的染色体组成;胚胎染色体异常的频率在不同公牛之间存在差异。

关键词：牛分离精子染色体流式细胞仪

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水牛胚胎性别鉴定的PCR方法

中国兽医学报 2008年第9期28卷 1096-1100页

作者：付强张明郑海英秦文松陆阳清卢晟盛卢克焕广西亚热带生物资源保护利用重点实验室

根据荷斯坦牛SRY基因设计1对引物扩增得到水牛SRY基因的全长序列2005 bp,对该片段测序后,设计2对特异于水牛SRY基因核心区的引物用于早期胚胎性别鉴定,同时根据水牛G3PDH基因设计2对引物作为内对照共同扩增,建立了多重巢式PCR体系并进... 详细信息

根据荷斯坦牛SRY基因设计1对引物扩增得到水牛SRY基因的全长序列2005 bp,对该片段测序后,设计2对特异于水牛SRY基因核心区的引物用于早期胚胎性别鉴定,同时根据水牛G3PDH基因设计2对引物作为内对照共同扩增,建立了多重巢式PCR体系并进行优化,使用优化后的PCR体系对取样后的27枚IVF胚胎和24枚Y精子受精胚胎进行检测,并使用斑点杂交检测扩增准确率。结果表明,27枚IVF胚胎均能有效扩增,雄性、雌性比例分别为51.9%(14/27)、48.1%(13/27),斑点杂交表明扩增准确率为100%;24枚Y精子受精胚胎的雄性比例为83.3%(20/24)。该巢式多重PCR方法具有很高灵敏度和稳定性,能够在实际生产中应用。

关键词： SRY基因胚胎 PCR 性别鉴定

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猪囊胚的体外生产技术

华南农业大学学报 2005年第2期26卷 118-120页

作者：卢晟盛卢克焕广西亚热带生物资源保护利用重点实验室

利用屠宰场猪卵巢卵母细胞经体外成熟、体外受精后,体外培育至囊胚阶段,并以体外生产的猪囊胚细胞数来衡量囊胚质量.试验共对5 84 9枚猪卵母细胞进行体外成熟、体外受精,其中3974枚卵母细胞在体外受精后发生卵裂,卵裂率为6 6 4 %±1 6 ... 详细信息

利用屠宰场猪卵巢卵母细胞经体外成熟、体外受精后,体外培育至囊胚阶段,并以体外生产的猪囊胚细胞数来衡量囊胚质量.试验共对5 84 9枚猪卵母细胞进行体外成熟、体外受精,其中3974枚卵母细胞在体外受精后发生卵裂,卵裂率为6 6 4 %±1 6 % ,2 136枚发育形成囊胚,占卵裂胚数的5 6 2 %±2 4 % ,占卵母细胞数的36 7%±1 3% ;检查了98枚囊胚,其平均细胞数为4 1 6±1 8;另外又检查了4 7枚囊胚,其平均内细胞团细胞数为3 85±0 5 6、滋养层细胞数为4 4 70±2 87.

关键词：猪卵母细胞体外成熟体外受精胚胎培养囊胚体外生产

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水牛SRY基因的克隆及序列分析

中国生物工程杂志 2006年第7期26卷 69-73页

作者：付强张明秦文松郑海英卢克焕广西亚热带生物资源保护利用重点实验室

根据荷斯坦牛SRY基因设计一对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术,以中国沼泽型水牛(Swamp Buffalo)基因组DNA为模板,扩增得到SRY(Sex deterimation region of Y chromosome)全序列约2005bp,其中1-504bp为5’启动子区,1196-2005bp为3’侧翼序列,在505-1195bp为SRY的外显子,编码229个氨基酸。在SRY HMG-box区域设计探针,用地高辛标记后分别与雄性、雌性水牛基因组DNA进行Southern杂交,结果显示该段序列只在雄性DNA样本中有杂交信号,证明SRY基因为雄性特异。BLAST比对结果显示与牛属动物SRY基因的同源性为96％,其中SRY基因HMG box区域同源性高达99％,说明SRY基因具有高度的进化保守性。

关键词：水牛 SRY基因 Southem杂交

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壳聚糖超声可控降解及降解动力学研究

高分子学报 2007年第5期17卷 401-406页

作者：李瑾杜予民姚评佳魏远安武汉大学资源与环境科学学院武汉430079 广西亚热带生物资源保护利用重点实验室南宁530005

通过正交实验法考察了壳聚糖溶液浓度、反应温度、超声强度以及醋酸溶液浓度对超声降解反应的影响,确定了最佳反应条件,制备了一系列不同分子量的壳聚糖.研究了壳聚糖溶液浓度、反应温度以及壳聚糖原料分子参数与降解速率常数的关系.通... 详细信息

通过正交实验法考察了壳聚糖溶液浓度、反应温度、超声强度以及醋酸溶液浓度对超声降解反应的影响,确定了最佳反应条件,制备了一系列不同分子量的壳聚糖.研究了壳聚糖溶液浓度、反应温度以及壳聚糖原料分子参数与降解速率常数的关系.通过红外光谱、X-射线衍射和凝胶渗透色谱对降解产物进行了表征.结果表明,超声降解壳聚糖的最佳条件为10℃,壳聚糖溶液浓度2.5g/L.降解速率常数随壳聚糖溶液浓度和反应温度的降低而增大.高分子量和低脱乙酰度的壳聚糖原料有较高的降解速率和降解速率常数,壳聚糖原料的分子量对降解速率和降解速率常数的影响大于脱乙酰度对其的影响.超声波导致了壳聚糖分子量的降低和产物晶体结构的破坏,但没有改变产物的脱乙酰度和糖残基结构.

关键词：壳聚糖超声波降解分子量