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mRNA疫苗制备技术在甲型流感病毒疫苗研究中的应用

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黑龙江畜牧兽医 2024年第12期 16-22,28页

作者：张民秀谢芝勋李孟罗思思谢丽基谢志勤李丹阮志华王粲广西壮族自治区兽医研究所广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室南宁530001

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、H1N1和H3N2亚型人流感病毒(Influenza virus,IV)均属于甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)。IAV含有多种亚型,毒株变异快,因此IAV疫苗株需要根据当年的优势毒株进行相应的调整,这给疫苗的研... 详细信息

禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、H1N1和H3N2亚型人流感病毒(Influenza virus,IV)均属于甲型流感病毒(Influenza A virus,IAV)。IAV含有多种亚型,毒株变异快,因此IAV疫苗株需要根据当年的优势毒株进行相应的调整,这给疫苗的研制和生产带来巨大挑战。信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)疫苗制备工艺简单、生产时间短且容易规模化生产,在疾病预防方面具有广阔的应用前景。笔者对mRNA疫苗的种类、优化策略和IAV mRNA疫苗的研究现状进行了综述,旨在为IAV mRNA疫苗的研发提供理论参考。

关键词：甲型流感病毒(IAV) 禽流感病毒(AIV) 信使核糖核酸(mRNA) 非复制型mRNA(Nr mRNA) 自我扩增型mRNA(Sa mRNA) 疫苗

H9亚型禽流感病毒M1蛋白原核表达及免疫效果初步研究

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动物医学进展 2024年第6期45卷 1-6页

作者：李小凤谢芝勋阮志华李孟李丹张民秀谢志勤罗思思韦悠谢丽基曾婷婷张艳芳黄娇玲王盛广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西南宁530001

旨在原核表达H9亚型禽流感病毒(AIV)M1蛋白,初步探究其免疫效果,为研制AIV疫苗奠定基础。通过构建重组质粒pET-32a-M1,诱导表达,Western blot验证蛋白表达情况,将重组蛋白免疫接种小鼠,通过测定血清中IgG抗体效价,脾细胞培养上清多细胞... 详细信息

旨在原核表达H9亚型禽流感病毒(AIV)M1蛋白,初步探究其免疫效果,为研制AIV疫苗奠定基础。通过构建重组质粒pET-32a-M1,诱导表达,Western blot验证蛋白表达情况,将重组蛋白免疫接种小鼠,通过测定血清中IgG抗体效价,脾细胞培养上清多细胞因子分泌情况评价其免疫效果。结果显示,M1重组蛋白主要以可溶性蛋白存在,Western blot结果可见特异性条带。免疫接种小鼠后,血清产生IgG抗体,抗体效价为1∶30000。小鼠脾细胞上清液IL-2、IL-4、IL-6与对照组相比较,含量显著增加(P疫苗深入研究奠定了基础。

关键词：禽流感 M1蛋白原核表达免疫效果

H9N2亚型AIV NP蛋白的原核表达及其免疫效果

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中国兽医学报 2024年第6期44卷 1113-1119页

作者：李小凤谢芝勋阮志华李孟李丹张民秀谢志勤罗思思韦悠谢丽基曾婷婷张艳芳黄娇玲王盛广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室/广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

旨在探讨H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)NP蛋白对小鼠的免疫效果,为研制AIV疫苗奠定基础。试验将H9N2亚型病毒NP基因的扩增产物连接到pET-32a表达载体中,构建重组质粒pET-32a-NP,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)细胞,IPTG诱... 详细信息

旨在探讨H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)NP蛋白对小鼠的免疫效果,为研制AIV疫苗奠定基础。试验将H9N2亚型病毒NP基因的扩增产物连接到pET-32a表达载体中,构建重组质粒pET-32a-NP,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)细胞,IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blot验证蛋白表达,用NP重组蛋白免疫小鼠,测定小鼠血清中IgG抗体和脾细胞培养上清多细胞因子分泌情况评价其免疫效果。结果显示:NP基因编码区序列全长1497 bp,NP重组蛋白以可溶性和不可溶性蛋白两种形式存在,Western blot结果可见特异性条带。免疫小鼠后血清产生IgG结合抗体,抗体效价为1∶40000,与对照组相比,IL-2、IL-5、IL-13分泌量极显著提高(P0.05)。结果表明,NP重组蛋白是一种良好的免疫原,为流感疫苗的深入研究奠定了基础。

关键词： H9N2亚型禽流感 NP蛋白原核表达细胞因子

血清4型禽腺病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：杨宏春金梦云汪宏才冯贺龙姚伦曾哲张腾飞商雨罗青平欧长波温国元湖北省农业科学院畜牧兽医研究所农业农村部畜禽细菌病防治制剂创制重点实验室&畜禽病原微生物学湖北重点实验室湖北洪山实验室广西大学动物科学技术学院

自2015年以来，由血清4型禽腺病毒（Fowl Adenovirus serotype 4， FAdV-4）引起的鸡心包积液-肝炎综合征(HHS)给全球家禽业造成了巨大的经济损失。简便、快捷的抗体检测方法对于疾病的预防和疫苗的免疫评估至关重要。为了建立一种快速... 详细信息

自2015年以来，由血清4型禽腺病毒（Fowl Adenovirus serotype 4， FAdV-4）引起的鸡心包积液-肝炎综合征(HHS)给全球家禽业造成了巨大的经济损失。简便、快捷的抗体检测方法对于疾病的预防和疫苗的免疫评估至关重要。为了建立一种快速检测FAdV-4特异性抗体的方法，本研究利用原核表达系统表达了FAdV-4 HB1510株Fiber2蛋白的头节区(Knob)（847bp～1407bp）；以纯化的Konb蛋白作为包被抗原，经过对反应条件优化后，建立了一种快速检测FAdV-4抗体的间接ELISA方法。性能测试结果表明该间接ELISA方法具有敏感性高、特异性强和重复性优良的特点。用研究建立的方法与琼脂凝胶扩散试验（APG）分别检测200份湖北不同鸡场临床血清样品，间接ELISA检测阳性率为66.5%，APG检测阳性率为54%，两者符合率为87.5%。上述结果表明，本试验建立的间接ELISA检测方法可快速有效检测FAdV-4抗体水平，并且可以为FAdV-4血清流行病学调查以及疫苗的研发和免疫评估提供一定技术支撑。

关键词：血清4型禽腺病毒 Fiber2蛋白抗体检测间接ELISA

广西H9N2亚型禽流感病毒疫苗候选株的筛选

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南方农业学报 2024年第1期55卷 243-252页

作者：李孟谢芝勋李丹徐倩罗思思张民秀谢丽基黄超沈前程黄娇玲广西兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室/农业农村部中国—东盟(广西)跨境动物疫病防控重点实验室广西南宁530001 广西金陵农牧集团有限公司广西南宁530049

【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择1... 详细信息

【目的】筛选出免疫原性更优的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)疫苗候选株用于新型疫苗研发,为加强对H9N2亚型AIV的防控提供技术支持。【方法】以2000—2020年广西地区分离获得的36株H9N2亚型AIV分离株为试验材料,依据HA基因遗传进化分析选择12株不同年份、不同地域及不同宿主来源的H9N2亚型AIV代表株,与目前使用的商品化H9亚型AIV疫苗株(SS株)进行交叉血凝抑制试验(HI)及抗原性分析,根据抗原分析结果选择其中具有不同抗原差异的代表株制备油乳剂灭活疫苗,并分别与商品化H9亚型AIV疫苗(SS株)进行交叉免疫保护试验。【结果】在36株H9N2亚型AIV广西分离株中有31株属于Y280-Like(9.4.1),其中26株属于分支I、5株属于分支II,另外5株属于G1-Like(h9.4.1),与我国常用疫苗株分属于不同进化分支。12株H9N2亚型AIV广西代表性分离株灭活后的HA效价≥7 log2,病毒灭活效果良好,可用于制备油乳剂灭活疫苗,且制备的油乳剂灭活疫苗稳定性和安全性良好。根据交互HI抗体滴度计算出各毒株间的抗原相关值(R),结果发现A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株(简称C227株)与其他毒株的抗原性无明显差异,对应的R在0.72~0.93间波动;疫苗交叉保护试验结果也表明,C227株制备的油乳剂灭活疫苗对不同毒株的免疫保护率均高于80%,且免疫保护效果优于A/chicken/Guangxi/CX/2013(H9N2)株(简称CX13株),说明C227株更适合作为H9N2亚型AIV灭活疫苗的候选株。【结论】基于抗原性分析和免疫原性测定筛选出的A/chicken/Guangxi/C227/2015(H9N2)株对广西地区绝大部分H9N2亚型AIV流行株的免疫保护效果良好,可作为疫苗候选株用于研制新型H9N2亚型AIV疫苗。

关键词：禽流感病毒(AIV) H9N2亚型油乳灭活疫苗抗原相关性疫苗交叉保护

4株不同基因型新城疫病毒毒力测定及与商品疫苗株抗原性比较

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动物医学进展 2024年第2期45卷 16-21页

作者：黄青红华俊谢丽基谢芝勋曾婷婷李孟罗思思李丹谢志勤广西大学动物科学技术学院广西南宁530001 广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

为了探究不同基因型和不同来源4株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)及现有商品疫苗株的抗原性差异,测定4株新城疫病毒的鸡胚最小致死量的平均死亡时间(mean death time,MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(intracerebral pathogen... 详细信息

为了探究不同基因型和不同来源4株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)及现有商品疫苗株的抗原性差异,测定4株新城疫病毒的鸡胚最小致死量的平均死亡时间(mean death time,MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(intracerebral pathogenicity index,ICPI),分别制备油乳苗,再与商品疫苗NDV La Sota株、A-Ⅶ株分别接种SPF鸡,收集单因子血清进行HI交叉试验和细胞交叉中和试验。结果显示,基因Ⅵ型NDV B27为中等毒力毒株,基因Ⅶ型NDV B9、基因Ⅸ型NDV B14、基因Ⅻ型NDV GX01为强毒株;HI交叉试验结果显示,基因Ⅵ型NDV B27和基因Ⅸ型NDV B14抗原同源性为0.64,抗原性差异微小,其他毒株之间的抗原同源性为0.69~0.99,抗原差异不大;细胞交叉中和试验结果显示,基因Ⅵ型NDV B27和基因Ⅸ型NDV B14抗原同源性为0.42,基因Ⅵ型NDV B27和基因Ⅱ型疫苗株La Sota抗原同源性为0.47,抗原差异较大,其余毒株及疫苗株La Sota之间抗原差异微小。试验结果可为后续筛选NDV疫苗候选株提供参考。

关键词：新城疫病毒基因型抗原性致病指数

竹鼠源产纤维素酶枯草芽孢杆菌的生物学特性研究及安全性初步评价

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中国畜牧杂志 2024年第3期60卷 201-206页

作者：陈童锦悦覃绍敏韦珏刘金凤陈凤莲许力士梁晶兰干球吴健敏广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所农业农村部中国(广西)-东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001

本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。... 详细信息

本试验旨在对竹鼠肠内容物中分离出的3株产纤维素酶枯草芽孢杆菌进行生物学特性研究和安全性评价。对3株受试菌进行生长曲线测定、抗生素敏感性试验、耐药基因检测、小鼠体内安全性试验以及耐酸、耐胆盐、自凝聚性、疏水性等特性测定。结果表明:(1) GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均生长快,1.5 h即可进入对数生长期、5 h即可达到最大生长量;(2)抗逆性强:3株受试菌在pH2.5的条件下存活率均达到65%以上、在胆盐浓度0.3%和0.5%的环境下仍能继续存活增殖;(3)自凝聚及疏水能力好:孵育到24 h,3株菌的自凝聚率均达到85%以上,GL-5和GL-8的疏水率均高于40%;(4) 3株受试菌对大部分抗生素敏感,对小鼠无毒副作用。GL-4、GL-5、GL-8 3株受试菌均具有优良的生物学特性,且安全性好,可作为畜禽微生态制剂良好的益生菌候选菌株。

关键词：枯草芽孢杆菌生物学特性安全性评价

广西规模水禽养殖场鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定与耐药性分析

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江苏农业科学 2024年第9期52卷 213-219页

作者：陈晓玉谭奕舟莫智杰胡静李军李常挺白慧丽王乐平马春霞尹杨燕彭昊廖玉英广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西壮族自治区兽医研究所/广西兽医生物技术重点实验室广西南宁530001 农业农村部中国(广西)东盟跨境动物疫病防控重点实验室广西南宁530001

为了解广西地区规模化水禽养殖场鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的流行血清型、耐药情况及遗传关系,从广西南宁、贵港等地规模化水禽养殖场中临床上疑似感染RA的病死鸭、鹅体内得到5株分离菌,对分离菌进行鉴定,检测其毒... 详细信息

为了解广西地区规模化水禽养殖场鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)的流行血清型、耐药情况及遗传关系,从广西南宁、贵港等地规模化水禽养殖场中临床上疑似感染RA的病死鸭、鹅体内得到5株分离菌,对分离菌进行鉴定,检测其毒力基因,通过多重PCR检测方法鉴定血清型,并对其进行耐药性分析。经试验得到鉴定结果,RA分离菌株在血琼脂培养基上呈平滑圆润、露滴样,圆形隆起的灰白色菌落;革兰氏染色呈阴性短杆菌;5株分离菌经16SrRNA鉴定均为RA,将其命名为2022NNRA01~2022NNRA05;其中,血清鉴定2022NNRA01为血清1型,其余均为血清2型。药敏试验结果显示,5株RA对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、头孢氨苄、头孢噻呋、大观霉素、氟苯尼考、磺氨甲唑敏感,对其他抗菌药物呈不同程度的耐药。其中,对安普霉素、庆大霉素、卡那霉素氨基糖苷类药物,四环素类药物多西环素和利福霉素类药物利福平的耐药率为100%。本试验经分离鉴定成功得到5株RA,且其耐药性分析结果可为广西地区RA疾病的疫苗免疫预防选择以及药物治疗提供依据。

关键词：鸭疫里默氏杆菌分离鉴定血清型毒力因子耐药性广西

植物精油对传染性支气管炎病毒人工感染雏鸡的防治效果

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畜牧兽医学报 2024年

作者：林家杰林子学王立佳王国威黄燕萍张愉张桃妮晋英浩磨美兰广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心广西大学动物科学技术学院广西高校动物疫病预防与控制重点实验室广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室

旨在探讨植物精油（商品名：舒柠500）对禽传染性支气管炎病毒（IBV）人工感染雏鸡的防治效果。将260羽1日龄健康非免疫雏鸡分成空白组、模型对照组（A、B、C）、预防组（A、B、C）、治疗组（A、B、C）和阳性药物组（A、B、C）共13组，... 详细信息

旨在探讨植物精油（商品名：舒柠500）对禽传染性支气管炎病毒（IBV）人工感染雏鸡的防治效果。将260羽1日龄健康非免疫雏鸡分成空白组、模型对照组（A、B、C）、预防组（A、B、C）、治疗组（A、B、C）和阳性药物组（A、B、C）共13组，每组20只。除空白组外，其余各A组雏鸡均在8日龄单感染IBV毒株GX-QZ20181028（LX4型），各B组雏鸡均在8日龄单感染IBV毒株GX-NN20200723（Taiwan型），各C组雏鸡均在8日龄共感染IBV毒株GX-QZ20181028（LX4型）和GX-NN20200723（Taiwan型）。预防组在3日龄（感染前5 d）饮水给药（植物精油，1 mL/L水）；治疗组和阳性药物组（双黄连口服液，0.7 mL/L水）均在感染后半数以上的雏鸡表现临床症状时给药治疗，连续给药5 d。在雏鸡8、9、13、14、15、16、17、18、19、20日龄时，评定临床症状计分与疗效；在雏鸡19、22日龄时，观察病理组织学病变、测定免疫器官指数并检测气管和肾脏病毒载量；在雏鸡8、9、15、17、19、22日龄时，对IBV特异性抗体和血清中细胞因子IFN-γ、IL-4和IL-6进行检测。结果显示，预防组A、B和C的保护率分别为75.00%、85.00%和70.00%；治疗组A、B、C的有效率分别为92.31%、78.57%、77.78%。模型对照组雏鸡可见大量气管黏膜上皮细胞纤毛减少或消失，并发生变性坏死，肾间质淋巴细胞浸润，其余组均无明显病变。预防组、治疗组和阳性药物组气管和肾组织病毒载量均显著低于模型对照组（P＜0.05）。模型对照组胸腺与法氏囊指数显著低于其余各组（P＜0.05）。17日龄（给药后第5天），预防组、治疗组、阳性药物组抗体水平上升，至22日龄（停药后第5天），抗体水平显著高于模型对照组（P＜0.05）。13至22日龄（给药前至停药后第5天），模型对照组的IL-4、IFN-γ含量均显著低于其余各组（P＜0.05），但IL-6含量显著高于其余各组（P＜0.05）。综上，在本试验条件下，植物精油对IBV单感染和共感染雏鸡均有较好的防治作用，其防治作用主要通过抑制病毒复制、促进免疫器官发育和抗体生成、调节细胞因子来实现。本研究为禽传染性支气管炎（IB）防治提供新思路，也为其它动物冠状病毒病有效防治提供了参考。

关键词：传染性支气管炎病毒精油预防治疗