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基于CKB/p53信号通路探讨白花丹醌对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

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中国中药杂志 2024年第9期49卷 2345-2354页

作者：周凤玲袁彬叶一娴邓舒烨马静刘红马远征韦燕飞广西中医药大学基础医学院广西南宁530200 广西高校中药神经-代谢及免疫药理重点实验室广西南宁530200 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530024

基于CKB/p53信号通路研究白花丹醌对人肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。将白花丹醌1~12μmol·L^(-1)处理Huh-7细胞,进行细胞增殖和活性cell counting kit-8(CCK-8)实验,确定1、3、6μmol·L^(-1)为低、中、高浓度用于后续... 详细信息

基于CKB/p53信号通路研究白花丹醌对人肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。将白花丹醌1~12μmol·L^(-1)处理Huh-7细胞,进行细胞增殖和活性cell counting kit-8(CCK-8)实验,确定1、3、6μmol·L^(-1)为低、中、高浓度用于后续实验。采用规律成簇的间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associated proteins,Cas)-9基因编辑技术敲除Huh-7细胞中的脑型肌酸激酶(creatine kinase,brain type,CKB)基因;CKB过表达慢病毒转染Huh-7细胞上调CKB的表达。通过平板克隆实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测CKB的mRNA表达情况;蛋白免疫印迹(Western blot,WB)实验检测CKB、p53、双微体同源基因2(mouse double minute 2 homolog,MDM2)、B淋巴瘤细胞瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和半胱天冬酶(caspase)-3蛋白表达水平。结果显示白花丹醌显著抑制Huh-7细胞增殖,诱导细胞凋亡。与对照组比较,白花丹醌组凋亡水平显著升高,而白花丹醌联合凋亡抑制剂组凋亡水平显著降低。白花丹醌可显著下调CKB、Bcl-2和MDM2蛋白表达水平,上调p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平。敲除CKB基因后,Huh-7细胞增殖能力降低,凋亡率升高,Bcl-2和MDM2蛋白表达水平降低,p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平升高。上调CKB表达后,Huh-7细胞增殖能力增强,Bcl-2和MDM2蛋白表达水平升高,p53、Bax和caspase-3蛋白表达水平降低。而白花丹醌可逆转过表达CKB对Huh-7细胞增殖和凋亡的作用。该实验表明,白花丹醌可显著抑制Huh-7细胞的增殖能力,其机制可能是通过抑制CKB表达,激活p53信号通路,调控线粒体相关凋亡蛋白的表达,最终诱导细胞凋亡。

关键词：肝癌白花丹醌 CKB p53信号通路增殖凋亡

基于网络药理学和分子对接的逍遥散治疗肝癌并抑郁症的潜在机制探讨

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药物评价研究 2024年第6期47卷 1175-1186页

作者：黄依婷磨宁芳李妞妞秦秋云夏猛姚春广西中医药大学基础医学院广西中医肝脾藏象重点研究室广西中医药大学第一附属医院内科学教研室广西中医药通阳散结法重点研究室

目的通过网络药理学和分子对接方法，探讨逍遥散治疗肝癌并抑郁症的潜在机制。方法通过TCMSP数据库，以逍遥散组方中药中文名称为检索词，设置口服生物利用度（OB）>30%和类药性（DL）>0.18为筛选条件获取中药活性成分与靶点，从GeneC... 详细信息

目的通过网络药理学和分子对接方法，探讨逍遥散治疗肝癌并抑郁症的潜在机制。方法通过TCMSP数据库，以逍遥散组方中药中文名称为检索词，设置口服生物利用度（OB）>30%和类药性（DL）>0.18为筛选条件获取中药活性成分与靶点，从GeneCards数据库中获取肝癌和抑郁症疾病相关靶点，并将疾病靶点与药物成分靶点相互交集，获取共同交集靶点后，导入DAVID数据库进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路和基因本体（GO）功能的富集分析，并进行分子对接验证活性成分与关键靶点的亲和力。结果获得逍遥散161个活性成分和238个靶点，而疾病靶点共计11 204个；成分靶点和疾病靶点取交集得共同靶点69个；KEGG通路富集在AGEs-RAGE、癌症、HIF-1等信号通路；分子对接显示核心成分3β-乙酰氧基苍术酮与白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子（TNF）等靶点结合活性良好。结论逍遥散主要通过3β-乙酰氧基苍术酮介导ILIB、TNF、BCL2等靶标，调节AGEs-RAGE、癌症等信号通路，发挥抗炎、免疫调控、促进细胞凋亡等作用，从而改善肝癌和抑郁症的症状。

关键词：逍遥散肝癌抑郁症网络药理学分子对接 AGEs-RAGE信号通路

中医药及活性成分靶向M1/M2巨噬细胞极化平衡治疗慢性阻塞性肺疾病的研究进展

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中国中药杂志 2024年

作者：邓亚胜范燕萍郑艺清习兰花李汶玥梁天薇黄慧林江广西中医药大学基础医学院海南省中医院

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease， COPD）是一种因长期吸入有毒颗粒，特别是吸烟所导致的进行性肺功能障碍（疾病），持续接触这些有害物质会引发异常的炎症反应，进而造成呼吸系统永久性损伤，最终导致不可... 详细信息

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease， COPD）是一种因长期吸入有毒颗粒，特别是吸烟所导致的进行性肺功能障碍（疾病），持续接触这些有害物质会引发异常的炎症反应，进而造成呼吸系统永久性损伤，最终导致不可逆的病理变化。肺巨噬细胞（lung macrophages， LMs）是关键的先天免疫效应细胞，在识别、吞噬和清除病原体，以及处理吸入的有害颗粒物（如香烟烟雾和颗粒物PM）方面扮演着重要角色。LMs在炎症因子的激活下向M1或M2方向极化，分别发挥着促炎/抗炎作用，参与COPD肺实质的损伤（肺气肿）和修复（气道重塑）的全过程。它们还负责吞噬和清除凋亡或坏死的组织细胞，共同维护COPD患者肺内的微环境稳定。现代研究揭示，巨噬细胞极化在COPD的发病与发展中占据着举足轻重的地位，其具备减轻气道炎症、抑制组织重塑，以及抗氧化应激等多重功效，因此被视为COPD治疗的潜在靶点。近年来，中医药及其活性成分靶向M1/M2巨噬细胞极化平衡治疗COPD的研究成为热点领域，以巨噬细胞极化状态的调节为目标，通过中医药及其活性成分的干预平衡COPD患者肺组织中的炎症反应，并促进修复过程。本文深入探讨了近年中医药及其活性成分在这一领域的研究成果，旨在为COPD的精准诊疗策略提供新的科学依据和有力支持。

关键词：慢性阻塞性肺疾病巨噬细胞极化肺巨噬细胞中医药有效成分研究进展

敲除组织蛋白酶K基因改善高脂饮食小鼠缺血性血管生成

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生理学报 2024年第1期76卷 45-51页

作者：王心怡王旭何震杰陈士票李伟健崔仁善姜海英浙江中医药大学基础医学院杭州310000 嘉兴大学医学院嘉兴314000 延边大学生理学教研室延吉133000

本文旨在探讨组织蛋白酶K(cathepsin K,Cat K)对高脂饮食小鼠缺血性血管生成的作用及机制。利用高脂饮食Cat K基因敲除(Cat K^(-/-))小鼠制备单侧下肢缺血模型,利用激光多普勒血流测定仪观察缺血后不同时间段血流恢复程度;免疫组织化学... 详细信息

本文旨在探讨组织蛋白酶K(cathepsin K,Cat K)对高脂饮食小鼠缺血性血管生成的作用及机制。利用高脂饮食Cat K基因敲除(Cat K^(-/-))小鼠制备单侧下肢缺血模型,利用激光多普勒血流测定仪观察缺血后不同时间段血流恢复程度;免疫组织化学染色法观察缺血下肢新生毛细血管数量;免疫印迹法检测胰岛素受体底物-1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)、p-Akt、Akt及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等信号蛋白表达。首先观察高脂饮食对野生型小鼠缺血性血管生成的影响。野生型小鼠随机分为对照组和高脂饮食组,分别以普通饲料或60%高脂肪饲料饲养16周。结果表明,与对照组相比,高脂饮食组小鼠体重明显增加,缺血下肢血流恢复程度明显减弱,血浆Cat K浓度及缺血侧骨骼肌中Cat K基因表达显著升高(P<0.05)。接着利用野生型和Cat K^(-/-)高脂饮食小鼠进一步观察Cat K对高脂肪负荷下缺血性血管生成的作用及机制。结果表明,Cat K^(-/-)小鼠缺血下肢的血流恢复程度明显强于野生型小鼠,缺血14天后缺血下肢的CD31阳性细胞显著增多(P<0.05);同时观察到Cat K^(-/-)小鼠缺血侧骨骼肌IRS-1、p-Akt及VEGF蛋白表达水平显著增加(P<0.05)。上述结果提示,敲除Cat K基因可能通过IRS-1-Akt-VEGF信号通路改善高脂饮食小鼠缺血性血管生成过程。

关键词：组织蛋白酶K 高脂肪血管生成胰岛素受体底物-1

健脾益气方干预PTPN1对肝癌细胞增殖侵袭的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：孙姗姗洪静宋树蕃孙宗喜王超卓少元广西中医药大学基础医学院广西中医药大学广西高发传染病中西医结合转化医学重点实验室广西国际壮医医院

目的基于网络药理学方法探讨健脾益气治疗肝细胞癌（HCC）的核心靶点，并结合生物信息学分析和CRISPR/Cas9技术，研究该方干预潜在核心靶点蛋白酪氨酸磷酸酶N1（PTPN1）对肝癌细胞增殖侵袭的影响。方法：采用TCMSP、SwissTargetPredict... 详细信息

目的基于网络药理学方法探讨健脾益气治疗肝细胞癌（HCC）的核心靶点，并结合生物信息学分析和CRISPR/Cas9技术，研究该方干预潜在核心靶点蛋白酪氨酸磷酸酶N1（PTPN1）对肝癌细胞增殖侵袭的影响。方法：采用TCMSP、SwissTargetPrediction、GeneCards、NCBI和CTD等数据库获得健脾益气方治疗HCC的潜在作用靶点，并筛选出与PTPN1作用的健脾益气方有效成分，使用Autodock 4.0评估其对接水平。采用UALCAN、HPA和LinkedOmics等数据库分析PTPN1在肝癌组织中的表达情况以及与HCC患者总体生存期（OS）的关系。采用CRISPR/Cas9技术敲减HepG2细胞及SK-hep-1细胞的PTPN1基因，并通过测序、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）确认敲减效果。将HepG2细胞分为对照组、健脾益气方低、中、高剂量组(5.25、10.5、21 g·kg-1)和PTPN1敲减组，采用Real-time PCR和Western blot检测健脾益气方干预前后肝癌细胞PTPN1表达水平，并采用CCK-8、Transwell和Annexin V-FITC/PI法分别检测PTPN1基因敲减及健脾益气方干预对肝癌细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。结果：健脾益气方靶向PTPN1的有效成分最多，其中分子对接结合能小于-1的活性成分有31个。肝癌组织PTPN1 mRNA和蛋白水平均显著高于正常组织（P<0.01）。与正常组织相比，肝癌组织PTPN1 mRNA在病理分期I-Ⅲ期及病理分级G1-G3级中表达水平均显著升高（P<0.01），Ⅳ期和G4级表达水平差异无统计学意义；与TP53未突变肝癌组织相比，TP53突变肝癌组织PTPN1 mRNA表达水平显著升高（P<0.01）；PTPN1 mRNA高表达的肝癌患者OS显著降低（P=0.005 8）。HepG2细胞PTPN1敲减及健脾益气方含药血清干预后，细胞的增殖侵袭能力均出现显著下降（P<0.01）、凋亡能力显著升高（P<0.01）。结论：PTPN1可能是健脾益气方治疗HCC的核心靶点之一，其在肝癌组织和肝癌细胞中高表达，并与患者临床预后差相关。PTPN1在TP53突变患者肝癌组织表达水平明显升高，但TP53突变或缺失不会影响其在肝癌细胞中的表达。健脾益气方可能通过下调PTPN1表达显著抑制肝癌细胞增殖侵袭能力、诱导细胞凋亡。

关键词：健脾益气方蛋白酪氨酸磷酸酶N1 CRISPR/Cas9 肝癌细胞，增殖侵袭

多发性硬化动物模型中小胶质细胞动态变化对少突胶质细胞的影响

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中华神经科杂志 2024年第6期57卷 669-677页

作者：苑舒文齐珂瑢刘青青陈雪司建超杨胜昌山西中医药大学基础医学院晋中030619 河北中医药大学生理学教研室石家庄050091 河北中医药大学生理学教研室河北省中医药结合氢医学技术创新中心石家庄050091

多发性硬化(MS)是一种由自身免疫机制触发的中枢神经系统(CNS)慢性炎症性脱髓鞘疾病,是导致年轻人神经功能残疾的主要原因。在MS中,多种神经胶质细胞参与疾病的发生发展进程,其中少突胶质细胞(OL)和髓鞘被自身免疫介导的炎症破坏,少突... 详细信息

多发性硬化(MS)是一种由自身免疫机制触发的中枢神经系统(CNS)慢性炎症性脱髓鞘疾病,是导致年轻人神经功能残疾的主要原因。在MS中,多种神经胶质细胞参与疾病的发生发展进程,其中少突胶质细胞(OL)和髓鞘被自身免疫介导的炎症破坏,少突胶质前体细胞(OPC)生成OL受损导致持续性脱髓鞘、髓鞘碎片积聚和轴索损伤,临床表现为CNS残疾。而参与炎性反应和髓鞘碎片清除等过程的小胶质细胞对于OPC的分化和OL的成熟发挥核心作用,能够直接或间接影响髓鞘的再生进程,两者之间存在交互式影响机制。认识两者之间的联系能够更好地揭示MS的发病机制并制订新的治疗策略,解决MS临床治疗中的关键科学问题。本文通过总结小胶质细胞在MS及其经典动物模型中的动态变化,探讨这一过程中小胶质细胞与OL之间的内在联系,聚焦通过靶向调控小胶质细胞发挥有益作用,从而促进OPC分化和髓鞘再生,以期为MS治疗提供新的研究方向。

关键词：多发性硬化小胶质细胞少突胶质细胞髓鞘再生动物模型

解毒化瘀颗粒调控ROS-NLRP3信号通路缓解肝衰竭大鼠肝脏炎症应激的实验研究

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时珍国医国药 2024年第5期 1025-1029页

作者：吴智鹏张荣臻王明刚张钰琴王秀峰广西中医药大学研究生院广西中医药大学第一附属医院广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室

目的分析解毒化瘀颗粒（JDHY）通过调控ROS-NLRP3信号通路改善肝衰竭大鼠肝脏炎症反应的相关分子机制。方法将36只雄性Wistar大鼠随机分为空白组（Control）、模型组（Model）、解毒化瘀颗粒组（JDHY）,每组各12只。采用D-氨基半乳糖... 详细信息

目的分析解毒化瘀颗粒（JDHY）通过调控ROS-NLRP3信号通路改善肝衰竭大鼠肝脏炎症反应的相关分子机制。方法将36只雄性Wistar大鼠随机分为空白组（Control）、模型组（Model）、解毒化瘀颗粒组（JDHY）,每组各12只。采用D-氨基半乳糖（D-GalN）联合脂多糖（LPS）一次性腹腔注射建立急性肝衰竭大鼠模型。JDHY组在造模前给予JDHY(57.55 g·kg-1·d-1),连续灌胃72h并延续至造模后24h。造模后24h处死各组大鼠，收集血清及组织样本，采用全自动生化分析仪测定血清ALT、AST和TBIL水平，ELISA测定血清IL-1β和IL-18,评估ROS生成，免疫组织化学分析肝组织NLRP3和GSDMD表达，蛋白质印迹分析肝组织NLRP3、GSDMD、GSDMD-N、ASC和Caspase-1表达。结果 JDHY能有效改善肝衰竭大鼠肝功能（ALT、AST、TBIL）(P<0.05),减少ROS过度产生（P<0.05）和炎症因子（IL-1β、IL-18）释放。此外，与模型组比较，JDHY降低了肝衰竭大鼠肝组织中NLRP3、GSDMD、GSDMD-N、ASC和Caspase-1的表达（P<0.05）。结论 JDHY能抑制ROS-NLRP3信号通路过度激活、减少促炎因子释放，缓解肝脏炎症应激水平从而拮抗肝衰竭。

关键词：解毒化瘀颗粒 ROS-NLRP3炎症小体信号通路肝衰竭

人程序性死亡受体配体1免疫球蛋白可变区结构域基因酵母双杂交诱饵质粒的构建及其自激活检测

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中国生物制品学杂志 2024年第1期37卷 8-16页

作者：刘鹏彭岳广西中医药大学基础医学院医学创新综合实验室广西南宁530200

目的构建人程序性死亡受体配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)免疫球蛋白可变区(immunoglobulin variable region,IgV)结构域基因酵母双杂交重组诱饵质粒,检测其在酵母中的表达情况,检测PD-L1 IgV蛋白细胞毒性和自我激活,以... 详细信息

目的构建人程序性死亡受体配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)免疫球蛋白可变区(immunoglobulin variable region,IgV)结构域基因酵母双杂交重组诱饵质粒,检测其在酵母中的表达情况,检测PD-L1 IgV蛋白细胞毒性和自我激活,以及PD-L1 IgV与人硫氧还蛋白(human thioredoxin,hTrx)之间的相互作用情况。方法利用生物信息学方法对人PD-L1进行分析,并根据NCBI GenBank数据库中登录的PD-L1基因编码区序列设计扩增PD-L1 IgV结构域的引物,以pENTER-PD-L1质粒为模板进行PCR扩增,克隆至酵母双杂交诱饵载体pGBKT7。将鉴定正确的重组诱饵质粒及pGBKT7空载体分别转化至Y2HGold酵母细胞,PCR及Western blot法检测PD-L1 IgV基因及蛋白的表达;同时检测PD-L1 IgV蛋白毒性及自我激活效应,并采用滴板法检测诱饵蛋白PD-L1 IgV与hTrx相互作用情况。结果 PD-L1的生物信息学分析结果与相关报道一致;成功构建了重组诱饵质粒pGBKT7-PD-L1 IgV,并获得Y2HGold阳性克隆子,PD-L1 IgV能在其中稳定表达。空载体pGBKT7、重组诱饵质粒pGBKT7-PD-L1 IgV在SD/-Trp、SD/-Trp/X-α-Gal平板上生长良好,菌落大小、数量一致,呈白色,在SD/-Trp/X-α-Gal/AbA平板上两者均不生长,表明PD-L1 IgV蛋白对酵母无毒性且无自我激活效应;滴板法试验结果显示,所有实验组在SD/-Trp/-Leu平板上生长良好,仅阳性对照组可在SD/-Trp/-Leu/X-α-Gal/AbA平板上生长且呈蓝色,表明诱饵蛋白PD-L1 IgV、hTrx不存在自我激活现象,且两者之间也不存在相互作用。结论成功构建了重组人PD-L1 IgV酵母双杂交诱饵质粒,PD-L1 IgV蛋白对酵母细胞无毒性且无自我激活效应,且与hTrx之间无相互作用。后续可利用hTrx构建肽适体文库,从中筛选可与PD-L1 IgV特异结合的肽适体。

关键词：程序性死亡受体配体1 免疫球蛋白可变区诱饵质粒酵母双杂交系统自我激活肿瘤免疫治疗

银杏叶提取物调控PI3K/AKT信号通路对人脑血管外膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

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中国临床药理学杂志 2024年第11期40卷 1556-1559页

作者：毕晓晨孔晓彬赵娜顾晶晶浙江中医药大学基础医学院实验教学中心浙江杭州310000 浙江中医药大学基础医学院病理与病理生理教研室浙江杭州310000

目的研究银杏叶提取物(GBE)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)增殖和凋亡的影响。方法将HBVAFs分为空白组(正常培养,未做处理)和低、中、高剂量实验组(25、50和100 mg·L^(-1)的GBE处... 详细信息

目的研究银杏叶提取物(GBE)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路对人脑血管外膜成纤维细胞(HBVAFs)增殖和凋亡的影响。方法将HBVAFs分为空白组(正常培养,未做处理)和低、中、高剂量实验组(25、50和100 mg·L^(-1)的GBE处理24 h)及联合组(100 mg·L^(-1)GBE和2 nmol·L^(-1)胰岛素样生长因子-1处理24 h)。用噻唑蓝法检测细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测细胞磷酸化PI3K(p-PI3K)、PI3K、磷酸化AKT(p-AKT)及AKT蛋白的表达水平。结果低、中、高剂量实验组和联合组、空白组的细胞存活率分别为(66.78±8.21)%、(53.51±7.40)%、(42.33±6.01)%、(75.69±5.87)%和(96.77±12.80)%,细胞凋亡率分别为(24.83±2.47)%、(30.07±3.06)%、(37.02±4.66)%、(16.71±2.11)%和(8.99±0.19)%,p-PI3K/PI3K比值分别为0.75±0.07、0.62±0.06、0.43±0.04、0.72±0.05和0.90±0.09,p-AKT/AKT比值分别为0.70±0.07、0.60±0.06、0.38±0.03、0.69±0.06和0.90±0.09。低、中、高剂量实验组的上述指标与空白组比较,联合组的上述指标与高剂量实验组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论GBE可降低HBVAFs增殖,促进凋亡,其机制与抑制PI3K/AKT信号通路相关。

关键词：银杏叶提取物磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路人脑血管外膜成纤维细胞增殖凋亡