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蛋白质精氨酸甲基转移酶1在糖尿病小鼠肠屏障功能障碍中的作用

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中国病理生理杂志 2022年第5期38卷 819-828页

作者：李晓媚陈丝秦梁雪占玉刘志华杨彬珧广州医科大学附属第五医院前沿医学交叉研究中心广州市加速康复腹部外科重点实验室广东广州510700

目的:探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶1(protein arginine methyltransferase 1,PRMT1)通过沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(peroxisome pro‐liferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)信号通路对2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)小鼠肠屏障功能损伤的作用。方法:20只8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=5)和实验组(n=15);将采用链脲佐菌素和高脂饮食构建T2DM小鼠模型的实验组,随机分为T2DM组、T2DM+PRMT1抑制剂AMI-1(arginine methyl‐transferase inhibitor 1)组和T2DM+白藜芦醇(resveratrol,Resv)组,每组5只。将对数生长期的人结肠上皮NCM-460细胞分为对照组、高糖(HG;50 mmol/L葡萄糖)组、HG+AMI-1组和HG+Resv组。采用PRMT1小干扰RNA(PRMT1-siRNA)和正常对照siRNA(non-targeting siRNA,NT-siRNA)转染NCM-460细胞后,HG处理48 h,分为NT-siRNA组、NT-siRNA+HG组、PRMT1-siRNA组和PRMT1-siRNA+HG组。采用口服葡萄糖耐量试验检测血糖;总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)测定试剂盒(COD-PAP法和GPO-PAP法)以及高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)检测试剂盒(微板法)检测血清TC、TG和HDL-C水平;异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)-葡聚糖法检测肠道通透性;Western blot法检测结肠组织和NCM-460细胞PRMT1、SIRT1、PGC-1α、ZO-1(zonula occludens-1)和occludin的表达。结果:与正常对照组相比,T2DM组模型小鼠血清葡萄糖、TG和TC水平升高,HDL-C水平降低,血清FITC-葡聚糖水平升高,结肠组织中PRMT1蛋白表达升高,SIRT1和PGC-1α及ZO-1蛋白表达均下降(P<0.05);与T2DM组模型小鼠相比,T2DM+AMI-1和T2DM+Resv组中小鼠的结肠长度均增加,血清FITC-葡聚糖水平降低,结肠组织中PRMT1蛋白表达降低,ZO-1、occludin和SIRT1及PGC-1α蛋白表达上升(P<0.05)。与对照组相比,HG处理后NCM-460细胞中PRMT1蛋白表达升高,SIRT1、PGC-1α和ZO-1及occludin蛋白表达下降(P<0.05);与HG组相比,HG+AMI-1组和HG+Resv组细胞中PRMT1蛋白表达降低,SIRT1、PGC-1α和ZO-1及occludin蛋白表达升高(P<0.05);与NT-siRNA组相比,NT-siRNA+HG组NCM-460细胞的PRMT1蛋白表达上升,SIRT1、PGC-1α和ZO-1及occludin蛋白表达均显著降低(P<0.05);与PRMT1-siRNA组相比,PRMT1-siRNA+HG组的SIRT1、PGC-1α和ZO-1及occludin蛋白表达并未发生改变。结论:PRMT1可能通过抑制SIRT1/PGC-1α信号通路损伤T2DM小鼠肠屏障功能。

关键词： 2型糖尿病蛋白质精氨酸甲基转移酶1 SIRT1/PGC-1α信号通路肠屏障功能

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蛞蝓提取物对LPS致小鼠气道及肺部急性炎症的影响

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中国现代应用药学 2021年第23期38卷 2913-2920页

作者：梁雪吴红波孙宁刘亭广州医科大学附属第五医院前沿医学交叉研究中心广州510700 广东省分子靶标与临床药理学重点实验室广州511436 广州医科大学附属第五医院康复科广州510700

目的探讨蛞蝓提取物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致小鼠气道及肺部急性炎症的影响。方法将48只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组(Ctl)、正常对照+蛞蝓干预组(Ctl+Limax)、模型组(LPS)、模型+蛞蝓干预组(LPS+Limax),每组12只。各... 详细信息

目的探讨蛞蝓提取物对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致小鼠气道及肺部急性炎症的影响。方法将48只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组(Ctl)、正常对照+蛞蝓干预组(Ctl+Limax)、模型组(LPS)、模型+蛞蝓干预组(LPS+Limax),每组12只。各蛞蝓干预组于造模前1 d起给予4.36 g·kg^(-1)蛞蝓提取物灌胃,每日1次,直至造模结束。经鼻滴入LPS对小鼠进行急性气道炎症造模,非造模组经鼻滴入同体积生理盐水。观测各组小鼠肺病理、肺的髓过氧化物酶表达;肺泡灌洗液中白细胞及IL-6、CXCL1、TNF-α、IFN-γ的分泌;采用LC-MS对蛞蝓提取物进行主成分分析,计算机模拟分子对接推测可能的活性成分。结果蛞蝓提取物可明显缓解LPS致小鼠急性气道炎症的肺组织病理,减少肺部的白细胞浸润,抑制肺部髓过氧化物酶表达,降低肺泡灌洗液中IL-6、CXCL1、TNF-α、IFN-γ含量,其中活性成分可能是黄酮Ononin,且与Siglecs受体有潜在结合可能。结论蛞蝓提取物具有明显的抑制急性气道炎症的作用,其中活性成分黄酮Ononin通过Siglecs受体抑制中性粒细胞浸润可能是其改善急性肺损伤病理的作用机制之一。

关键词：蛞蝓急性肺损伤中性粒细胞气道炎症

高盐饮食激活肠JAK1/STAT3通路诱导肠上皮屏障功能障碍

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实用医学杂志 2021年第1期37卷 35-40页

作者：李晨李晓媚刘亭雷超刘聪刘志华广州医科大学附属第五医院前沿医学交叉研究中心广州市加速康复腹部外科重点实验室广州医科大学附属第五医院肛肠科广州510700

目的探讨高盐饮食在肠道屏障功能中的作用机制与Janus激酶1和转录激活因子3(Janus kinase1⁃signal transducer and activator of transcription 3,JAK1⁃STAT3)信号通路激活的关系。方法将8周的SPF级C57BL/6小鼠随机分成正常饮食对照组(control)和高盐饮食组(high salt diet,HSD)。正常饮食对照组喂养普通饲料,高盐饮食组采用NaCl含量为8%的饲料喂养12周,收集两组小鼠肠道组织,检测屏障蛋白及JAK1/STAT3通路;将人正常结肠上皮细胞NCM⁃460细胞分组如下:(1)正常对照组(control);(2)高浓度NaCl处理组(high NaCl,50 mmol/L),处理时间均为48 h;(3)JAK1抑制剂Ruxolitinib治疗组(high NaCl+Ruxoli⁃tinib),用Ruxolitinib(50μmol/L)预处理2 h,再用NaCl(50 mmol/L)共孵育46 h,通过Western blot法检测细胞屏障蛋白及JAK1/STAT3通路蛋白变化。结果高盐饮食不仅降低小鼠体重、结直肠重和肠长度,还抑制肠屏障蛋白ZO⁃1的相对表达,并上调肠道JAK1磷酸化蛋白;细胞实验中,JAK1抑制剂Ruxolitinib可抵抗由高浓度NaCl诱导的肠屏障功能障碍。结论高盐饮食可能通过激活JAK1/STAT3信号而诱导肠屏障功能障碍。

关键词：高盐 JAK1-STAT3通路肠上皮屏障功能

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分子靶向药物治疗转移性肾细胞癌的疗效评价

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第7期 1-4页

作者：赖宇雄何庆华周新科刘兆宇广州医科大学附属第五医院前沿医学交叉研究中心·广东高校生物靶向诊治与康复重点实验室广州广东510700

探讨在转移性肾细胞癌患者治疗中,分子靶向药物的临床效果。方法选取本单位及合作单位广东省人民医院接诊转移性肾细胞癌患者64例,根据入组顺序分为对照组与观察组,各组各有患者32例,分别给予白细胞介素—2(IL—2)+重组人干扰素α—2b(... 详细信息

探讨在转移性肾细胞癌患者治疗中,分子靶向药物的临床效果。方法选取本单位及合作单位广东省人民医院接诊转移性肾细胞癌患者64例,根据入组顺序分为对照组与观察组,各组各有患者32例,分别给予白细胞介素—2(IL—2)+重组人干扰素α—2b(IFNα—2b)与舒尼替尼,对比两组患者症状变化与临床效果。结果观察组临床总有效率、生活质量评分均优于对照组,且不良反应发生率更低(P靶向药物可有效改善症状,不良反应较低,优化预后,值得广泛推广运用。

关键词：转移性肾细胞癌分子靶向药物舒尼替尼

柔嫩梭菌灌胃的高盐饮食小鼠血清炎症因子及粪便肠道菌群、短链脂肪酸水平观察

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山东医药 2022年第32期62卷 49-52页

作者：雷超刘聪刘志华广州医科大学附属第五医院前沿医学交叉研究中心广东高校生物靶向诊治与康复重点实验室广州510700 南方医科大学附属东莞医院肛肠科

目的观察柔嫩梭菌灌胃的高盐饮食小鼠血清炎症因子及粪便中肠道菌群、短链脂肪酸水平变化。方法将16只C57BL/6雄性小鼠随机分为实验组和对照组,两组均给予含8%NaCl的高盐饲料喂养共16周;实验组同时以柔嫩梭菌菌体悬液(109 CFU/mL)2 mL每... 详细信息

目的观察柔嫩梭菌灌胃的高盐饮食小鼠血清炎症因子及粪便中肠道菌群、短链脂肪酸水平变化。方法将16只C57BL/6雄性小鼠随机分为实验组和对照组,两组均给予含8%NaCl的高盐饲料喂养共16周;实验组同时以柔嫩梭菌菌体悬液(109 CFU/mL)2 mL每隔1 d灌胃,对照组以超纯水2 mL每隔1 d灌胃。采用ELISA法检测血清白细胞介素(IL)1B、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α);采集小鼠新鲜粪便样本,提取细菌总RNA进行16S rDNA高通量测序,检测肠道菌群,并进行短链脂肪酸定量检测。结果实验组血清IL-1B、IL-6、TNF-α水平低于对照组(P均实验组肠道菌群结构和多样性较对照组发生明显变化。与对照组相比,实验组拟杆菌门及变形菌门相对丰度增加,而厚壁菌门及疣微菌门相对丰度减少(P均实验组鼠乳杆菌显著富集,对照组机会致病菌木糖葡萄球菌、迟缓葡萄球菌显著富集。实验组粪便中丙酸、丁酸、己酸水平高于对照组(P均<0.05)。结论柔嫩梭菌灌胃可降低高盐饮食小鼠血清炎症因子水平,改变肠道菌群结构并影响短链脂肪酸代谢。

关键词：柔嫩梭菌高盐饮食肠道菌群短链脂肪酸炎症因子

豚草花粉-屋尘螨混合抗原诱导比格犬哮喘的探索性研究

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中国实验动物学报 2023年第4期31卷 437-444页

作者：罗钰龙陈迪非陈焕杰龙海斌刘经纬李时悦苏柱泉广州医科大学附属第五医院前沿医学交叉研究中心广东高校生物靶向诊治与康复重点实验室广州510700 广州医科大学附属第一医院国家呼吸医学中心广州呼吸健康研究院呼吸疾病国家重点实验室国家呼吸系统疾病临床医学中心广州510120 广州医药研究总院有限公司国家犬类实验动物资源库广州510240

目的本研究探索建立症状明显,稳定高效的比格犬哮喘模型。方法将屋尘螨抗原与豚草花粉抗原配制成单一或混合抗原工作液。健康比格犬在出生后24 h内和第1、4、8周注射混合抗原致敏,第1~12周每天(每日雾化组)或每周2次(间断雾化组)雾化... 详细信息

目的本研究探索建立症状明显,稳定高效的比格犬哮喘模型。方法将屋尘螨抗原与豚草花粉抗原配制成单一或混合抗原工作液。健康比格犬在出生后24 h内和第1、4、8周注射混合抗原致敏,第1~12周每天(每日雾化组)或每周2次(间断雾化组)雾化吸入豚草花粉抗原或混合抗原进行激发,第13周起每周1次雾化吸入豚草花粉抗原至第36周。在第36周和第48周进行气道反应性检测、肺泡灌洗液白细胞分类检测和病理分析考察哮喘造模效果。结果第36周每日雾化组和间断雾化组比格犬气道均出现中性粒细胞炎症、嗜酸性粒细胞炎症和气道高反应性。第48周每日雾化组和间断雾化组的气道嗜酸性粒细胞炎症和每日雾化组的气道高反应性症状仍持续存在。两组比格犬均出现哮喘相关气道重塑现象。结论使用豚草花粉抗原和屋尘螨抗原的混合抗原对新生犬进行致敏和激发,并加大吸入激发频次,可以建立比格犬哮喘模型。

关键词：比格犬哮喘豚草花粉屋尘螨动物模型

基于生物信息学分析MBD1在肝细胞癌中的表达及临床意义

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广州医科大学学报 2024年第2期52卷 1-7页

作者：彭倩陈纪涛原倩影张依刘季芳广州医科大学附属第五医院前沿医学交叉研究中心广东广州510700

目的:通过生信在线数据库分析MBD1在肝细胞癌(LIHC)中的表达及临床意义。方法:通过TIMER2.0、UALCAN、HPA、LinkedOmics数据库分析LIHC和正常肝脏组织中MBD1基因的表达水平及与患者预后的关系,并分析共表达基因和对KEGG信号通路进行富... 详细信息

目的:通过生信在线数据库分析MBD1在肝细胞癌(LIHC)中的表达及临床意义。方法:通过TIMER2.0、UALCAN、HPA、LinkedOmics数据库分析LIHC和正常肝脏组织中MBD1基因的表达水平及与患者预后的关系,并分析共表达基因和对KEGG信号通路进行富集分析。结果:MBD1在LIHC(371例)中的表达高于正常组织(50例);随着临床分期的升高,MBD1表达呈上升趋势;并且MBD1在TP53突变中表达水平较高(P<0.05)。生存分析提示,MBD1高表达的LIHC患者生存率显著降低(P<0.05)。共表达分析显示,共有6196个基因与MBD1表达呈显著正相关(P<0.05),正相关性最高的基因为PIAS2,相关系数为0.589;1946个基因与MBD1表达呈显著负相关(P<0.05),负相关性最高的是HEBP2,相关系数是-0.328。KEGG结果表明,MBD1可能与细胞周期、泛素介导的蛋白水解、核糖核酸转运、病毒性致癌等信号通路相关。结论:LIHC组织中MBD1表达增高,MBD1表达升高的LIHC患者预后较差,其可能成为LIHC治疗的新靶点。

关键词：临床预后肝细胞癌 MBD1 富集分析

基于同位素标记相对和绝对定量技术的良性气道狭窄肉芽组织成纤维细胞蛋白质组学分析

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中华生物医学工程杂志 2022年第4期28卷 361-367页

作者：罗钰龙王颖治陈小波吴宏楷朱易平钟长镐陈愉李时悦广州医科大学附属第五医院、前沿医学交叉研究中心、广东高校生物靶向诊治与康复重点实验室广州10700广州医科大学附属第一医院、国家呼吸医学中心、广州呼吸健康研究院、呼吸疾病国家重点实验室、国家呼吸系统疾病临床医学中心广州510120

目的对良性气道狭窄(BAS)患者肉芽组织成纤维细胞进行蛋白质组学分析, 以进一步揭示BAS的发病机制。方法取5例BAS患者的肉芽组织(BAS组)和3例肺癌患者的正常支气管组织(对照组)进行成纤维细胞原代培养, 用同位素标记相对和绝对定量(iTR... 详细信息

目的对良性气道狭窄(BAS)患者肉芽组织成纤维细胞进行蛋白质组学分析, 以进一步揭示BAS的发病机制。方法取5例BAS患者的肉芽组织(BAS组)和3例肺癌患者的正常支气管组织(对照组)进行成纤维细胞原代培养, 用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术分析成纤维细胞的蛋白质组表达情况, 筛选差异表达蛋白, 并使用基因本体(GO)数据库、京都基因和基因组(KEGG)数据库和重复出现邻近基因检索工具(STRING)数据库对差异表达蛋白的功能、代谢通路和蛋白相互关系进行富集分析。结果共筛选出93个差异表达蛋白。其中有36个差异表达蛋白在BAS肉芽组织成纤维细胞中显著下调, 57个差异表达蛋白显著上调。差异表达蛋白主要定位于细胞膜和细胞外区域, 参与离子结合功能、代谢活性功能, 主要参与的通路有糖酵解-糖异生代谢、细胞外基质-受体结合、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-AKT信号传导、复杂环境中的微生物代谢和次级代谢物合成。结论 BAS狭窄部位肉芽组织成纤维细胞的细胞外基质-受体结合异常、PI3K-AKT信号通路异常和代谢异常可能与BAS的发生发展有关。

关键词：蛋白质组细胞外基质信号通路代谢良性气道狭窄

探索m6A相关lncRNAs预测胃腺癌患者总体生存率

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肿瘤预防与治疗 2023年第5期36卷 373-388页

作者：潘辉姚文霞梁敏周新科广州医科大学附属第五医院前沿医学交叉研究中心广州510700 广州医科大学附属第五医院肿瘤科广州510700

目的:胃腺癌是胃癌最常见的亚型。N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)和长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)在胃腺癌的预后价值中起着至关重要的作用。因此,辨别与m6A相关的lncRNA在胃腺癌研究中至关重要。方法:本研究从TCG... 详细信息

目的:胃腺癌是胃癌最常见的亚型。N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)和长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)在胃腺癌的预后价值中起着至关重要的作用。因此,辨别与m6A相关的lncRNA在胃腺癌研究中至关重要。方法:本研究从TCGA数据库中获取了胃腺癌研究的RNA序列转录组数据、相关临床信息。使用R语言的“limma”包对15 901个lncRNAs按肿瘤组织和正常组织分组进行差异表达分析。采用单因素Cox回归分析从TCGA数据集中的347个与m6A相关lncRNAs中筛选出与预后相关的基因67个(P <0.05)。使用R包“glmnet”对67个入选lncRNAs进行LASSO Cox回归分析,确定12个m6A相关的lncRNAs与胃腺癌患者的总生存期明显相关,并采用多因素Cox回归分析建立起m6A相关的lncRNAs风险评分模型。单因素和多因素回归分析结果表明风险评分模型是患者预后的独立影响因素(HR=3.45,95%CI为2.46~4.99,P <0.001)。分析风险评分与肿瘤免疫微环境细胞浸润的关系。最后,基于独立的预后影响因素(年龄、性别、风险评分、T分期、N分期)建立列线图。结果:确定12个m6A相关的lncRNAs与胃腺癌患者的总生存期明显相关,建立起m6A相关的lncRNAs风险评分模型。并证明该模型与肿瘤微环境细胞浸润存在相关性。基于独立的预后影响因素建立列线图,模型的C-index为0.73,模型预测有效性较高。结论:通过对lncRNAs风险模型的反复验证,证实了12个m6A相关lncRNAs可以作为胃腺癌患者风险预测的指标。

关键词： m6A lncRNAs 胃腺癌预后生物标志物