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氧化苦参碱对牙周膜干细胞干性标志物表达和成骨分化的作用

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中国组织工程研究 2025年第19期29卷 3992-3999页

作者：罗晶雍敏陈琦杨长怡赵恬马静梅冬兰虎金鹏杨昭君王钰然刘博宁夏医科大学口腔医学院宁夏回族自治区银川市750004 宁夏回族自治区干细胞与再生医学重点实验室宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院口腔正畸科宁夏回族自治区银川市750004 宁夏医科大学总医院牙周病科宁夏回族自治区银川市750004

背景:人牙周膜干细胞是牙周再生组织工程潜在的功能细胞,然而长期体外培养会导致牙周膜干细胞干性减低并发生复制性衰老,从而影响其治疗效果。目的:探讨氧化苦参碱在体外对牙周膜干细胞干性维持和骨向分化的影响,并寻找潜在的影响机制... 详细信息

背景:人牙周膜干细胞是牙周再生组织工程潜在的功能细胞,然而长期体外培养会导致牙周膜干细胞干性减低并发生复制性衰老,从而影响其治疗效果。目的:探讨氧化苦参碱在体外对牙周膜干细胞干性维持和骨向分化的影响,并寻找潜在的影响机制。方法:采用组织块酶消化法从人牙周膜组织中分离、培养得到牙周膜干细胞,并使用流式细胞仪进行间充质细胞表面标志物鉴定。用0,2.5,5,10μg/mL氧化苦参碱孵育牙周膜干细胞,通过CCK8实验检测氧化苦参碱对牙周膜干细胞增殖活性的影响,筛选后续实验合适的药物质量浓度,采用Western blot检测牙周膜干细胞中干细胞非特异性蛋白SOX2和OCT4的表达,采用qRT-PCR、Western blot检测牙周膜干细胞中成骨相关基因和蛋白表达水平。结果与结论:①CCK8实验结果显示2.5μg/mL氧化苦参碱对牙周膜干细胞增殖活性有显著增强作用,后续实验选用2.5μg/mL氧化苦参碱进行干预;②与空白对照组相比,氧化苦参碱组牙周膜干细胞的干性标志物SOX2蛋白表达水平变化不明显(P>0.05),OCT4蛋白表达明显上调(P<0.05);③与成骨诱导组相比,氧化苦参碱+成骨诱导组牙周膜干细胞成骨相关基因ALP、RUNX2 mRNA表达及成骨相关蛋白ALP蛋白表达明显下调(P<0.05);④氧化苦参碱上调牙周膜干细胞干性标志物表达,抑制牙周膜干细胞骨向分化,高通量测序结果表明可能与WNT2、WNT16、COMP、BMP6有关。

关键词：牙周膜干细胞苦参碱类生物碱成骨细胞增殖氧化苦参碱干性维持高通量测序

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海洋中药治疗骨质疏松的用药规律及作用机制

中国组织工程研究 2025年第17期29卷 3713-3723页

作者：赖越林轩徐淼刘欢沈剑粦黄文华广东医科大学第一临床医学院广东省湛江市524023 莆田学院环境与生物工程学院福建省莆田市351100 福建医科大学基础医学院福建省福州市350100 西南医科大学附属中医医院骨科四川省泸州市646000 莆田学院附属医院中心实验室福建省莆田市351100 南方医科大学基础医学院人体解剖学国家重点学科广东省数字医学与生物力学重点实验室广东省医学3D打印应用转化工程技术研究中心广东省广州市510515

背景:海洋中药为治疗骨质疏松提供了一种潜在有效且不易产生不良反应的方法。目的:应用数据挖掘和网络药理学方法分析并探讨中医临床治疗骨质疏松的用药规律及作用机制。方法:采用数据挖掘和网络药理学方法,对国家知识产权局批准的治疗... 详细信息

背景:海洋中药为治疗骨质疏松提供了一种潜在有效且不易产生不良反应的方法。目的:应用数据挖掘和网络药理学方法分析并探讨中医临床治疗骨质疏松的用药规律及作用机制。方法:采用数据挖掘和网络药理学方法,对国家知识产权局批准的治疗骨质疏松的海洋中药专利处方进行用药模式和作用机制研究,并特别关注这些处方中的核心中药成分,利用超高效液相色谱串联质谱对牡蛎-续断-淫羊藿组成的复方药组核心成分进行全面的鉴定分析。结果与结论:①从国家知识产权局(SIPO)网站建立到2024-04-01,检索发现381项骨质疏松治疗的授权专利,共鉴定出48首含有海洋中药的中成药处方,这些处方包含183味中药,其中13种海洋中药用药频次共574次,单首专利组方中用药味数2-41种不等;②牡蛎是最常用的海洋中药,续断、淫羊藿、地黄、杜仲是最常用的非海洋中药;关联规则分析确定了牡蛎、续断和淫羊藿为核心药物群;网络药理学分析显示该核心药组治疗骨质疏松的核心靶点包括ALB、AKT1、TP53、PPARG和SRC;核心药组发挥疗效的核心成分为谷甾醇、甘草素、臭山羊碱、木犀草素、山奈酚;③GO与KEGG富集分析显示,Rap1/丝裂原活化蛋白激酶信号通路在核心药物组的骨质疏松作用机制中起着重要作用;④分子对接结果显示核心成分与核心靶点之间存在良好的相互作用;⑤超高效液相色谱串联质谱检测复方药组核心成分为木犀草素、谷甾醇、山奈酚等,与网络药理学鉴定的药物成分相符合;对复方药组成分进行定量分析得出,黄酮类化合物、萜类化合物以及生物碱这3类物质在药物成分占比中较大。

关键词：骨质疏松海洋中药数据挖掘网络药理学分子对接

牙龈卟啉单胞菌肽酰基精氨酸脱亚氨酶的分子特征及在相关疾病中的作用机制

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中华微生物学和免疫学杂志 2021年第8期41卷 650-655页

作者：莫嘉祥孙斯妤黄家殷管红兵方雪纯郑雁翎任赛赛广州医科大学附属口腔医院口腔基础医学教研室广州市口腔再生医学基础与应用研究重点实验室510182

牙龈卟啉单胞菌肽酰基精氨酸脱亚氨酶是动物内源性肽酰基精氨酸脱亚氨酶的同工酶,通过Por系统分泌并催化精氨酸的瓜氨酸化。近年研究发现,牙龈卟啉单胞菌肽酰基精氨酸脱亚氨酶可以影响牙龈卟啉单胞菌生物膜的形成,降低机体的免疫防御功... 详细信息

牙龈卟啉单胞菌肽酰基精氨酸脱亚氨酶是动物内源性肽酰基精氨酸脱亚氨酶的同工酶,通过Por系统分泌并催化精氨酸的瓜氨酸化。近年研究发现,牙龈卟啉单胞菌肽酰基精氨酸脱亚氨酶可以影响牙龈卟啉单胞菌生物膜的形成,降低机体的免疫防御功能,与多种疾病如牙周病及类风湿关节炎的发生发展有关。本文对于牙龈卟啉单胞菌肽酰基精氨酸脱亚氨酶的分子特征包括遗传特性和功能特征以及在炎症和自身免疫性疾病中的作用机制等方面取得的最新研究结果进行回顾和展望。

关键词：牙龈卟啉单胞菌肽酰基精氨酸脱亚氨酶瓜氨酸化牙周病类风湿关节炎

乳酸链球菌素诱导氧化应激促进人骨肉瘤MG63细胞凋亡

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中国病理生理杂志 2021年第1期37卷 84-90页

作者：张晴李泳祺孙小涵叶露雯闫勇勇黄庆东侯丹广州医科大学附属口腔医院实验室广州市口腔再生医学基础与应用研究重点实验室广州医科大学口腔医学院口腔基础医学教研室广东广州510182

目的:探讨乳酸链球菌素(nisin)对人骨肉瘤MG63细胞凋亡及其相关的氧化应激机制。方法:乳酸链球菌素单独或联合抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)处理MG63细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;annexin-V/PI双染法检测细胞... 详细信息

目的:探讨乳酸链球菌素(nisin)对人骨肉瘤MG63细胞凋亡及其相关的氧化应激机制。方法:乳酸链球菌素单独或联合抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)处理MG63细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡;2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(2',7'-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)含量;5,5',6,6'-四氯-1,1',3,3'四乙基苯并咪唑羰花青碘化物(5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethyl benzimidazolyl carbocyanine iodide,JC-1)荧光探针检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)的变化,通过Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的水平。结果:乳酸链球菌素呈浓度依赖性降低MG63细胞活力,促进细胞凋亡,上调cleaved caspase-3蛋白水平,增加Bax/Bcl-2蛋白表达的比值,并可诱导细胞内ROS大量生成,降低MMP(P<0.05)。抗氧化剂NAC能显著抑制乳酸链球菌素诱导的MG63细胞凋亡,下调cleaved caspase-3蛋白水平,降低Bax/Bcl-2蛋白表达的比值,并降低细胞内ROS水平,恢复MMP(P<0.05)。结论:乳酸链球菌素可能通过诱导人骨肉瘤细胞氧化应激,进而激活线粒体凋亡通路促进细胞凋亡。

关键词：骨肉瘤乳酸链球菌素细胞凋亡氧化应激

骨形态形成蛋白载体与可控释放系统的研究进展

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生物医学工程学杂志 2016年第4期33卷 812-815页

作者：李树祎周苗广州医科大学附属口腔医院.广州口腔病研究所.口腔医学重点实验室广州510140

骨形态形成蛋白(BMPs)是目前已知的诱导骨生成能力最强的因子之一。重组人骨形态形成蛋白(rhBMPs)的产品已经在骨科、口腔医学等领域得到广泛应用。临床使用时,需要将其与具有缓释作用的载体复合,保持作用部位的浓度以持续诱导成骨。本... 详细信息

骨形态形成蛋白(BMPs)是目前已知的诱导骨生成能力最强的因子之一。重组人骨形态形成蛋白(rhBMPs)的产品已经在骨科、口腔医学等领域得到广泛应用。临床使用时,需要将其与具有缓释作用的载体复合,保持作用部位的浓度以持续诱导成骨。本文就BMPs载体及其释放系统的研究进展作一综述。

关键词：骨形态形成蛋白载体控制释放系统骨再生

不同比例血管内皮细胞和骨髓间充质干细胞共培养系统成骨性能研究

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中华口腔医学杂志 2015年第11期50卷 675-680页

作者：刘蓉刘江峰郭吕华田爱峰广州医科大学附属口腔医院·广州口腔病研究所·口腔医学重点实验室 510140

目的观察血管内皮细胞与骨髓间充质干细胞共培养时,不同比例共培养系统的成骨性能,为体外构建血管化骨组织工程奠定基础.方法全骨髓离心贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞.骨髓间充质干细胞的内皮向诱导（M199＋体积分数为0.1的胎牛血... 详细信息

目的观察血管内皮细胞与骨髓间充质干细胞共培养时,不同比例共培养系统的成骨性能,为体外构建血管化骨组织工程奠定基础.方法全骨髓离心贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞.骨髓间充质干细胞的内皮向诱导（M199＋体积分数为0.1的胎牛血清＋体积分数为0.01的青霉素/链霉素＋2 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子bFGF＋10 μg/L的血管内皮生长因子VEGF）.建立不同比例骨髓间充质干细胞和血管内皮细胞的共培养系统（10∶0、10∶1、8∶2、7∶3、5∶5、3∶7、2∶8、1∶10、0∶10）.通过干细胞和内皮细胞的形态、免疫荧光、碱性磷酸酶活性、成骨基因表达等从酶学、组织学、基因等不同方面观察各个比例血管内皮细胞对骨髓间充质干细胞成骨活性的影响.结果第3代骨髓间充质干细胞的生长曲线显示：骨髓间充质干细胞的细胞倍增时间为39.9 h.免疫荧光染色结果显示,骨髓间充质干细胞表面特异性标志、内皮细胞表面特异性标志免疫荧光染色阳性.倒置相差显微镜观察结果显示,联合培养组不同比例的骨髓间充质干细胞和血管内皮细胞混合生长良好.共培养组茜素红染色结果显示,共培养比例为7∶3时钙结节计数为19.0±3.0,共培养比例为5∶5时钙结节计数为20.8±2.9,两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）;但均显著高于其他共培养组（P＜0.01）.成骨诱导7d,共培养比例为10∶0、10∶1、8∶2、7∶3和5∶5共培养组酶活性分别为：16.84±0.82、15.86±3.10、16.37±1.33、17.99±1.98和17.49±0.87,差异无统计学意义（P＞0.05）,但均显著高于其他共培养组（P＜0.05）;随着诱导时间延长,碱性磷酸酶活性整体升高,7：3共培养组（33.74±0.99）略高于5∶5共培养组（31.09±0.87）,二者均显著高于其他共培养组（P＜0.01）.定量PCR检测结果显示,7∶3共培养组成骨相关基因OCN和RUNX2的表达均显著高于其他共培养组（P＜0.05）.结论由骨髓间充质干细胞诱导的内皮细胞能增强骨髓间充质干细胞的成骨活性;当骨髓间充质干细胞与血管内皮细胞以7∶3比例混合时,骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性最强,成骨相关基因表达量最高,成骨能力最强.

关键词：骨髓间充质干细胞内皮细胞血管内皮生长因子碱性成纤维细胞因子共培养

上皮钙黏蛋白与β-连环素在舌鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系

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中华口腔医学杂志 2010年第5期45卷 295-298页

作者：朱锐姜小云宋晓陵张玮陈盛刘来奎南京医科大学口腔医学研究所南京医科大学附属口腔医院口腔基础教研室 210029

目的研究舌鳞状细胞癌（舌癌）中上皮钙黏蛋白（E—cadherin，E—cad）、β-连环素（β-catenin）的表达，探讨其在舌癌复发及预后中的意义。方法采用免疫组化半定量方法检测30例舌癌患者肿瘤组织中E-cad与β-连环素的表达，同时通过... 详细信息

目的研究舌鳞状细胞癌（舌癌）中上皮钙黏蛋白（E—cadherin，E—cad）、β-连环素（β-catenin）的表达，探讨其在舌癌复发及预后中的意义。方法采用免疫组化半定量方法检测30例舌癌患者肿瘤组织中E-cad与β-连环素的表达，同时通过随访资料分析其表达水平与临床病理及预后之间的关系。结果63％（19／30）的癌组织中E—cad呈低表达；60％（18／30）癌组织中β-连环素高表达。E—cad、β-连环素表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度、大小、临床分期、淋巴结转移比较，差异无统计学意义；E—cad表达与肿瘤复发比较，差异有统计学意义（P=0．007），而β-连环素表达与肿瘤复发比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。单因素Cox回归预后分析显示E—cad的表达与生存率比较，差异有统计学意义（P=0．018）。结论E—cad表达降低与肿瘤复发及术后生存率之间密切相关，可作为舌癌患者预后的预测指标。

关键词：癌鳞状细胞钙黏着糖蛋白 β连环素

负载siRNA胶原/生物活性玻璃复合材料的成骨作用

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南方医科大学学报 2018年第1期38卷 106-111页

作者：陈燕玲陈良娇李正茂兰泽栋福建医科大学附属口腔医院正畸科福建福州350004 广州医科大学附属口腔医院//广州口腔病研究所//口腔医学重点实验室广东广州510140 南方医科大学深圳口腔医院广东深圳518000

目的探讨负载si RNA胶原/生物活性玻璃复合材料的成骨作用。方法冷冻干燥法分别制备胶原/生物玻璃、负载阴性对照si RNA胶原/生物玻璃和负载noggin胶原/生物玻璃3组复合材料。用CCK8试验检测空白组上述3组不同支架材料浸提液对细胞增殖... 详细信息

目的探讨负载si RNA胶原/生物活性玻璃复合材料的成骨作用。方法冷冻干燥法分别制备胶原/生物玻璃、负载阴性对照si RNA胶原/生物玻璃和负载noggin胶原/生物玻璃3组复合材料。用CCK8试验检测空白组上述3组不同支架材料浸提液对细胞增殖的影响,ALP活性检测、q-PCR检测、茜素红染色评估3组不同支架对MC3T3细胞矿化的影响。结果材料浸提液共培养MC3T3细胞3、5 d后,胶原/生物玻璃复合材料、负载阴性对照si RNA胶原/生物玻璃复合材料和负载noggin胶原/生物玻璃支架组细胞增殖数目均明显高于空白组,差异具有统计学意义(P<0.05)。培养14 d后,负载si RNA胶原/生物玻璃支架组ALP活性高于单纯支架组,差异具有统计学意义(P<0.05)。培养14 d后,负载si RNA胶原/生物玻璃支架组ALP、Runx2、BSP表达量高于单纯支架组,差异具有统计学意义(P<0.05)。茜素红染色结果表明负载si RNA胶原/生物玻璃支架组较其余组有更多矿化结节形成,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论负载si RNA胶原/生物玻璃复合材料支架具有良好的生物相容性,胶原/生物玻璃复合材料和si RNA noggin可协同增效促进成骨。

关键词： siRNA 胶原生物活性玻璃成骨

新型硫化氢供体调控环磷酸鸟苷/蛋白激酶G信号通路对癫痫大鼠海马Kir6.2表达的影响

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中华神经科杂志 2021年第3期54卷 242-250页

作者：刘丹琼朱紫婷都昇陈佩叶郭曼茹张艺泷苏燕妹王冠淇徐评议朱晓琴广州医科大学基础医学院生理教研室 511436 广州医科大学附属第一医院神经内科 510120

目的探究硫化氢的抗癫痫机制即调控环磷酸鸟苷/蛋白激酶G(cGMP/PKG)信号通路对三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)亚基Kir6.2表达的影响。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为6个组(每组10只):(1)正常对照组;(2)癫痫组;(3)硫化氢供体干预组;... 详细信息

目的探究硫化氢的抗癫痫机制即调控环磷酸鸟苷/蛋白激酶G(cGMP/PKG)信号通路对三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)亚基Kir6.2表达的影响。方法将60只SD大鼠按随机数字表法分为6个组(每组10只):(1)正常对照组;(2)癫痫组;(3)硫化氢供体干预组;(4)硫化氢供体加PKG抑制剂(KT5823)组;(5)硫化氢供体加KATP抑制剂(格列本脲)组;(6)硫化氢供体正常对照组。采用腹腔注射戊四氮致大鼠癫痫发作,记录潜伏期、首次发作级别、持续时间;记录癫痫发作时海马脑电图的变化;采用蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应法检测海马组织中PKG、Kir6.2 mRNA和蛋白的表达水平,酶联免疫吸附测定法检测海马组织中cGMP、磷酸化PKG的浓度。结果癫痫组出现Ⅳ~Ⅴ级发作,级别为4.500(4.000,4.875)级,潜伏期短[(10.37±8.21)min],持续时间长[(69.50±24.37)s]。与癫痫组相比,硫化氢供体干预组的发作级别降低(P=0.004),潜伏期延长(P<0.001)和持续时间缩短(P<0.001)。硫化氢供体加PKG抑制剂组与硫化氢供体干预组相比,潜伏期缩短(P<0.001),持续时间延长(P<0.001)。硫化氢供体干预组癫痫波明显减少,波幅与癫痫组相比差异有统计学意义(P<0.001);硫化氢供体加PKG抑制剂组与硫化氢供体干预组相比癫痫波增加,波幅增大(P<0.001)。组间比较结果提示,各组PKG mRNA和蛋白的表达水平存在差异(分别为n=5,H=26.714,P<0.001和n=5,F=30.597,P<0.001);其中与正常对照组相比,癫痫组PKG mRNA(分别为1.000±0.001和0.782±0.064,P=0.023)和蛋白(分别为0.550±0.037和0.145±0.020,P=0.042)的表达水平显著下降。组间比较结果提示,各组Kir6.2 mRNA和蛋白的表达水平存在差异(分别为n=5,H=27.761,P<0.001和n=5,F=60.659,P<0.001);其中与正常对照组相比,癫痫组Kir6.2 mRNA(分别为1.000±0.001和0.897±0.033,P=0.004)和蛋白(分别为0.384±0.035和0.215±0.016,P=0.024)的表达水平显著下降,cGMP(P<0.001)、磷酸化PKG(P<0.001)的浓度降低;与癫痫组相比,硫化氢供体干预组PKG mRNA(P=0.047)、Kir6.2 mRNA(P=0.011)、PKG蛋白(P<0.001)和Kir6.2蛋白(P<0.001)的表达水平则上升,cGMP、磷酸化PKG的浓度升高(均P<0.001);尤其是与硫化氢干预组相比,硫化氢供体加PKG抑制剂组PKG mRNA(P=0.015)、Kir6.2 mRNA(P=0.013)、PKG蛋白(P=0.027)和Kir6.2蛋白(P=0.017)的表达水平下降,cGMP(P=0.005)、磷酸化PKG(P<0.001)的浓度降低。结论硫化氢可抑制大鼠癫痫发作,其机制之一可能与激活海马中cGMP/PKG信号通路上调KATP通道亚基Kir6.2的表达从而降低海马的兴奋性有关。

关键词：癫痫硫化氢环磷酸鸟苷蛋白激酶G 三磷酸腺苷敏感性钾通道