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芍药苷调控血管内皮生长因子对小鼠宫颈癌组织病理变化的影响

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中国临床药理学杂志 2024年第19期40卷 2875-2879页

作者：程亚高伟王钟辉商丘医学高等专科学校病理教研室

目的探讨芍药苷通过靶向调控血管内皮生长因子（VEGF）对宫颈癌移植瘤小鼠肿瘤组织病理变化的影响。方法将小鼠随机分为模型组（构建宫颈癌移植瘤小鼠模型）、芍药苷组(建模后给予100 mg·kg-1芍药苷)、Vector组(建模后给予100 mg·k... 详细信息

目的探讨芍药苷通过靶向调控血管内皮生长因子（VEGF）对宫颈癌移植瘤小鼠肿瘤组织病理变化的影响。方法将小鼠随机分为模型组（构建宫颈癌移植瘤小鼠模型）、芍药苷组(建模后给予100 mg·kg-1芍药苷)、Vector组(建模后给予100 mg·kg-1芍药苷+瘤体注射Vector质粒)、VEGF组(建模后给予100 mg·kg-1芍药苷+瘤体注射过表达VEGF质粒),建模成功后每隔7 d测量肿瘤体积，用免疫组化法检测肿瘤微血管密度（MVD）,用蛋白质印迹法检测肿瘤组织增殖、凋亡及转移相关蛋白的表达水平，用原位末端转移酶标记法检测肿瘤组织的细胞凋亡率。结果模型组、芍药苷组、Vector组和VEGF组建模成功后第28天的肿瘤体积分别为（1 025.50±81.38）、（722.89±49.67）、（720.36±64.01）和（946.79±89.77） mm3,CD34-MVD水平分别为118.92±6.93、71.67±7.45、72.14±5.55和86.74±8.86,VEGF蛋白相对表达水平分别为1.08±0.09、0.56±0.09、0.54±0.06和0.88±0.13,细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）蛋白相对表达水平分别为0.93±0.14、0.44±0.03、0.46±0.07和0.81±0.09,基质金属蛋白9（MMP-9）蛋白相对表达水平分别为1.17±0.12、0.62±0.07、0.64±0.08和0.90±0.07,细胞凋亡率分别为（4.13±0.47）%、（22.16±2.84）%、（21.24±3.42）和（8.60±0.96）%;芍药苷组的上述指标与VEGF组和模型组比较，在统计学上差异均有统计学意义（均P组织病理学变化，抑制肿瘤生长，从而缓解小鼠宫颈癌进程。

关键词：芍药苷宫颈癌血管内皮生长因子组织病理抗血管生成

EGCG对小鼠糖尿病肾病的影响及对NLRP3通路的调控作用

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中国老年学杂志 2024年第17期 4306-4311页

作者：张献彩刘子宸王艳盛李永刚邢台医学高等专科学校解剖与组胚教研室

目的探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对小鼠糖尿病肾病(DN)的缓解作用及其对NOD样受体热蛋白结构域(NLRP)3通路的影响。方法雄性大鼠随机分为对照(Control)组、糖尿病肾病(DN)组、二甲双胍(Metformin)组、EGCG 50、100、200 mg/k... 详细信息

目的探究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对小鼠糖尿病肾病(DN)的缓解作用及其对NOD样受体热蛋白结构域(NLRP)3通路的影响。方法雄性大鼠随机分为对照(Control)组、糖尿病肾病(DN)组、二甲双胍(Metformin)组、EGCG 50、100、200 mg/kg组，链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导小鼠糖尿病肾病模型，在16 w内称量小鼠体质量变化，血糖仪检测空腹血糖水平，行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),取尿液及血样，试剂盒检测24 h尿白蛋白、血肌酐和尿素氮水平，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血胰岛素、8-羟基脱氧尿苷(OHdG)、单核细胞趋化蛋白(MCP)-1、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-18水平，取肾脏组织，试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)含量，苏木素-伊红(HE)染色检测肾脏组织病理变化，末端脱氧核苷酸转移酶接到dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色检测肾脏组织细胞凋亡，Western印迹检测NLRP3、胱天蛋白酶(Caspase)-1、cleaved Caspase-3、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。另设DN+EGCG、DN+MCC950、DN+MCC950+EGCG组，通过抑制NLRP3通路评估EGCG在NLRP3通路中的作用。结果与Control组相比，DN组空腹血糖水平明显升高，空腹胰岛素水平明显下降，血糖清除能力明显下降，24 h尿白蛋白、血肌酐和尿素氮水平明显升高，肾脏出现病理样改变，同时细胞凋亡增加，此外尿液8-OHdG水平明显升高，肾脏SOD含量明显减少，MCP-1、IL-6、IL-1β、IL-18水平明显升高，NLRP3和Caspase-1蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),经过二甲双胍或EGCG干预治疗后，上述指标均得到扭转。通过NLRP3抑制剂MCC950抑制NLRP3通路的激活，可抑制24 h尿白蛋白、血肌酐和尿素氮的产生，与EGCG联合使用抑制效果更为明显。结论 EGCG对小鼠糖尿病肾病的缓解作用部分与其对NLRP3通路的抑制作用有关。

关键词：糖尿病肾病表没食子儿茶素没食子酸酯 NOD样受体热蛋白结构域(NLRP)3 胱天蛋白酶1

基于生物信息分析去势抵抗性前列腺癌关键基因

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中国老年学杂志 2024年第11期44卷 2679-2683页

作者：朱宝安张军要张印坡漯河高等医学专科学校生物化学教研室漯河高等医学专科学校病理学教研室

目的基于生物信息分析去势抵抗性前列腺癌的关键基因，进而找到有效的诊断靶标和治疗方法。方法通过GEO数据库、Oncomine数据库联合分析发现潜在的关键基因受体型酪氨酸磷酸酶(PTPR)J;采用免疫组化检测去势敏感性前列腺癌和去势抵抗... 详细信息

目的基于生物信息分析去势抵抗性前列腺癌的关键基因，进而找到有效的诊断靶标和治疗方法。方法通过GEO数据库、Oncomine数据库联合分析发现潜在的关键基因受体型酪氨酸磷酸酶(PTPR)J;采用免疫组化检测去势敏感性前列腺癌和去势抵抗性前列腺癌患者肿瘤组织中PTPRJ表达水平；shRNA沉默去势抵抗性前列腺癌细胞系DU-145细胞中PTPRJ蛋白表达；采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、细胞流式、Transwell检测沉默PTPRJ基因表达对DU-145细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果通过GEO数据库生物信息学分析，发现577个基因出现差异性表达，可能与CRPC发生发展密切相关的74个基因表达上调，17个基因表达下调。使用Oncomine联合分析，与原位癌相比，PTPRJ在转移性前列腺患者中的表达显著增加(P高等级前列腺癌中的PTPRJ表达显著上调(P组织中PTPRJ蛋白表达显著高于去势敏感性前列腺癌(P<0.01);沉默PTPRJ可抑制DU-145细胞迁移和侵袭(P<0.01)。结论 PTPRJ在CRPC中高表达，PTPRJ能促进DU-145细胞迁移和侵袭；PTPRJ可能在CRPC发生发展过程中发挥重要作用，为CRPC的治疗提供潜在的治疗靶点。

关键词：生物信息分析前列腺癌受体型酪氨酸磷酸酶J

山楂叶总黄酮通过miR-21a-5p对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大的影响

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中国临床药理学杂志 2024年第15期40卷 2182-2186页

作者：田林燕朱冉代聚平王佳佳张斌南阳医学高等专科学校内科教研室河南南阳473000 南阳医学高等专科学校临床实训室河南南阳473000 南阳医学高等专科学校第一附属医院心血管内科河南南阳473000 南阳医学高等专科学校第一附属医院病理科河南南阳473000

目的探讨山楂叶总黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥大的影响,及其可能作用机制。方法将H9c2细胞分为对照组(正常培养),模型组(100 nmol·L^(-1)AngⅡ处理24 h),低、中、高剂量实验组(先给予100 nmol·L^(-1)AngⅡ处理24 h后,再分... 详细信息

目的探讨山楂叶总黄酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥大的影响,及其可能作用机制。方法将H9c2细胞分为对照组(正常培养),模型组(100 nmol·L^(-1)AngⅡ处理24 h),低、中、高剂量实验组(先给予100 nmol·L^(-1)AngⅡ处理24 h后,再分别给予25、50、100 mg·L^(-1)的山楂叶总黄酮处理24 h),anti-miR-NC、anti-miR-21a-5p组(分别转染anti-miR-NC、anti-miR-21a-5p后,给予100 nmol·L^(-1)AngⅡ处理24 h),miR-NC+高剂量组和miR-21a-5p+高剂量组(分别转染miR-NC、miR-21a-5p mimics,再给予100 nmol·L^(-1)AngⅡ+100 mg·L^(-1)山楂叶总黄酮各处理24 h)。用CCK-8法和流式细胞术检测细胞活力和凋亡情况,用实时荧光定量聚合酶链反应法检测miR-21a-5p的表达水平,用蛋白质印迹法检测环氧化酶-2(COX2)/前列腺素E2(PGE2)的表达水平。结果对照组、模型组和高剂量实验组的细胞活力分别为1.03±0.09、0.51±0.05和0.93±0.08,凋亡率分别为(7.69±0.61)%、(23.04±1.82)%和(9.43±0.71)%,miR-21a-5p表达水平分别为1.00±0.09、2.43±0.18和1.09±0.08,COX2蛋白相对表达水平分别为0.42±0.03、0.85±0.08和0.40±0.04,PGE2蛋白相对表达水平分别为0.34±0.03、0.75±0.07和0.35±0.03,模型组的上述指标与高剂量实验组和对照组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P组、anti-miR-21a-5p组、miR-NC+高剂量组和miR-21a-5p+高剂量组的细胞活力分别为0.52±0.04、1.12±0.08、0.94±0.09和0.57±0.04,凋亡率分别为(23.04±1.82)%、(9.86±0.73)%、(9.47±0.64)%和(24.96±1.94)%,miR-21a-5p表达水平分别为1.00±0.10、0.43±0.04、1.00±0.09和2.12±0.18,COX2蛋白相对表达水平分别为0.86±0.05、0.39±0.04、0.41±0.03、0.78±0.07,PGE2蛋白相对表达水平分别为0.74±0.06、0.38±0.07、0.36±0.02、0.71±0.05,anti-miR-21a-5p组的上述指标与anti-miR-NC组比较,miR-21a-5p+高剂量组的上述指标与miR-NC+高剂量组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论山楂叶总黄酮通过调控miR-21a-5p和COX2/PGE2通路的表达,从而抑制AngⅡ诱导的心肌肥大。

关键词：山楂叶总黄酮心肌肥大血管紧张素Ⅱ 细胞增殖凋亡

苦杏仁苷对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞损伤的影响

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中国临床药理学杂志 2024年第7期40卷 1019-1023页

作者：闫萌萌徐林丽刘岩岩张艳沧州医学高等专科学校内科教研室河北沧州061000 沧州医学高等专科学校外科教研室河北沧州061000 沧州医学高等专科学校儿科教研室河北沧州061000 沧州医学高等专科学校科技实验中心河北沧州061000

目的研究苦杏仁苷对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾小管上皮细胞损伤及腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物西罗莫司靶蛋白(AMPK/mTOR)通路的影响。方法将SD大鼠分为空白组、模型组、苦杏仁苷低剂量组(3mg·kg^(-1))、苦杏仁苷高剂量组(10mg·kg^(-1))... 详细信息

目的研究苦杏仁苷对糖尿病肾病(DKD)大鼠肾小管上皮细胞损伤及腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物西罗莫司靶蛋白(AMPK/mTOR)通路的影响。方法将SD大鼠分为空白组、模型组、苦杏仁苷低剂量组(3mg·kg^(-1))、苦杏仁苷高剂量组(10mg·kg^(-1))、CompoundC组(2.5mg·kg^(-1)AMPK抑制药CompoundC)、苦杏仁苷高剂量+CompoundC组(10mg·kg^(-1)苦杏仁苷+2.5mg·kg^(-1)/CompoundC),每组10只。除空白组外,其余各组大鼠用连续喂养高脂高糖饲料+腹腔注射60mg·kg^(-1)1%链脲佐菌素(STZ)方法进行DKD造模,造模成功后第2天给予相应药物处理,每天1次,持续给予8周,空白组、模型组均给予等体积0.9%NaCl。用二喹啉甲酸(BCA)法检测大鼠24h尿蛋白含量,用血糖仪检测大鼠空腹血糖,用全自动生化分析仪检测大鼠血肌酸酐和血尿素氮水平,用原位末端标记法(TUNEL)染色检测大鼠肾组织细胞凋亡情况,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平,用蛋白质印迹(WesternBlot)法测定大鼠肾组织AMPK/mTOR通路、自噬及凋亡蛋白的表达水平。结果空白组、模型组、苦杏仁苷低剂量组、苦杏仁苷高剂量组、Compound C组和苦杏仁苷高剂量+CompoundC组的肾小管损伤评分分别为(0.43±0.05)、(3.26±0.24)、(1.92±0.14)、(0.73±0.06)、(3.81±0.29)和(1.78±0.12)分,细胞凋亡率分别为(5.23±0.41)%、(26.35±2.17)%、(16.76±1.42)%、(6.13±0.53)%(35.68±3.08)%和(15.92±1.15)%,磷酸化mTOR(p-mTOR)/mTOR分别为0.31±0.03、0.80±0.08、0.60±0.06、0.38±0.04,0.92±0.08和0.69±0.07,磷酸化AMPK(p-AMPK)/AMPK分别为0.91±0.08、0.39±0.04、0.56±0.06、0.88±0.07、0.23±0.02和0.52±0.05。模型组的上述指标与空白组、苦杏仁苷低剂量组、苦杏仁苷高剂量组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P组的上述指标与苦杏仁苷高剂量+CompoundC组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论苦杏仁苷可通过激活AMPK/mTOR信号通路,从而减轻DKD大鼠肾小管上皮细胞损伤。

关键词：苦杏仁苷腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物西罗莫司靶蛋白糖尿病肾病肾小管上皮细胞

藏红花素对膝关节骨性关节炎大鼠的治疗作用及TXNIP/NLRP3信号通路的影响

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中国老年学杂志 2024年第13期44卷 3284-3288页

作者：郭晓萱雷雨颖孙培阳吴俊晓南阳医学高等专科学校河南南阳473000 南阳医学高等专科学校第一附属医院骨科

目的探究藏红花素对膝关节骨性关节炎(KOA)大鼠的治疗作用及对硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3信号通路的影响。方法构建KOA大鼠模型,48只大鼠建模成功随机分为模型组,藏红花素低(50 mg/kg)、高... 详细信息

目的探究藏红花素对膝关节骨性关节炎(KOA)大鼠的治疗作用及对硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白(NLRP)3信号通路的影响。方法构建KOA大鼠模型,48只大鼠建模成功随机分为模型组,藏红花素低(50 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量组,硫酸氨基葡萄糖(170 mg/kg)组,每组12只。另取12只作为假手术组(实验过程中仅打开关节腔不做其他处理)。各组给予对应药物灌胃28 d,1次/d。酶联免疫吸附试验检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠软骨组织病理学变化;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测大鼠软骨组织中MDA、SOD水平;荧光定量-聚合酶链反应(PCR)法检测软骨组织中TXNIP、NLRP3信使RNA(mRNA)水平;Western印迹检测软骨组织中TXNIP、NLRP3蛋白水平。结果与假手术组相比,模型组软骨组织表面不光滑且滑膜增生,软骨细胞紊乱且减少,同时有大量炎性细胞浸润,血清中TNF-α、IL-1β水平,软骨组织中MDA水平、TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平显著升高,软骨组织SOD水平显著降低(P组相比,藏红花素低、高剂量组软骨组织病理变化依次改善,血清中TNF-α、IL-1β水平,软骨组织中MDA水平、TXNIP、NLRP3 mRNA和蛋白水平显著降低,软骨组织SOD水平显著升高(P组和藏红花素高剂量组软骨组织病理变化及各项指标比较均无显著差异(P>0.05)。结论藏红花素可减轻KOA大鼠软骨损伤,改善炎症和氧化应激反应,其机制可能与抑制TXNIP/NLRP3信号通路相关。

关键词：藏红花素膝关节骨性关节炎硫氧还蛋白相互作用蛋白核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3

下调富含脯氨酸蛋白11表达对食管癌耐药细胞EC9706/DDP耐药性的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2024年第1期50卷 113-119页

作者：亢春彦张秀芝周慧聪陈洁河南医学高等专科学校病理学教研室河南郑州451191 郑州大学第二附属医院消化内科河南郑州450000

目的:探讨下调富含脯氨酸蛋白11(PRR11)表达对食管癌耐药细胞耐药性的影响,阐明其相关机制。方法:采用顺铂(DDP)浓度递增间断刺激人食管癌EC9706细胞建立DDP耐药细胞株EC9706/DDP,MTT法检测EC9706/DDP细胞药敏性,实时荧光定量PCR(RT-qP... 详细信息

目的:探讨下调富含脯氨酸蛋白11(PRR11)表达对食管癌耐药细胞耐药性的影响,阐明其相关机制。方法:采用顺铂(DDP)浓度递增间断刺激人食管癌EC9706细胞建立DDP耐药细胞株EC9706/DDP,MTT法检测EC9706/DDP细胞药敏性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测EC9706/DDP细胞及其亲本EC9706细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平。将EC9706/DDP细胞分为对照组、sh-NC组(转染sh-NC)、sh-PRR11组(转染sh-PRR11)、sh-NC+DDP组(转染sh-NC后用4 mg·L^(-1)DDP处理)和sh-PRR11+DDP组(转染sh-PRR11后用4 mg·L^(-1)DDP处理),RT-qPCR法检测各组细胞中PRR11 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中PRR11、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p110α、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:成功获得DDP耐药细胞株EC9706/DDP,耐药指数为7.23±0.86。与EC9706细胞比较,EC9706/DDP细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平升高(P组和sh-NC组比较,sh-PRR11组细胞中PRR11 mRNA和蛋白表达水平降低(P组比较,sh-NC+DDP组和sh-PRR11组细胞中PI3K p110α、p-AKT、P-gp和MRP1蛋白表达水平降低(P组和sh-PRR11组比较,sh-PRR11+DDP组细胞中PI3Kp110α、p-AKT、P-gp和MRP1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论:下调EC9706/DDP耐药细胞中PRR11基因的表达,可抑制耐药相关蛋白的表达,逆转对DDP耐药,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路激活有关。

关键词：富含脯氨酸蛋白11 食管肿瘤顺铂耐药磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路

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桃叶珊瑚苷对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响及机制

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中国药房 2024年第8期35卷 918-924页

作者：司运辉蒋凯钱立全陈永顺别会杰商丘医学高等专科学校解剖与组胚教研室河南商丘476000 商丘医学高等专科学校生理学教研室河南商丘476000 商丘医学高等专科学校药理学教研室河南商丘476000

目的探讨桃叶珊瑚苷(Auc)调节周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)/周期蛋白B1(CCNB1)/Polo样激酶1(PLK1)信号通路对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法以人乳腺癌细胞MCF-7为对象,将其分为对照组,Auc低、中、高浓度组(Auc-L、Auc-M、Auc-H组... 详细信息

目的探讨桃叶珊瑚苷(Auc)调节周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)/周期蛋白B1(CCNB1)/Polo样激酶1(PLK1)信号通路对乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响。方法以人乳腺癌细胞MCF-7为对象,将其分为对照组,Auc低、中、高浓度组(Auc-L、Auc-M、Auc-H组,20、40、80μmol/L的Auc),Auc-H+pcDNA-NC组(80μmol/L的Auc+转染pcDNA-NC质粒),Auc-H+pcDNA-CDK1组(80μmol/L的Auc+转染pcDNA-CDK1质粒),检测各组细胞的增殖、克隆形成、侵袭、迁移能力,凋亡情况及周期分布,凋亡、上皮-间充质转化(EMT)、CDK1/CCNB1/PLK1信号通路相关蛋白的表达情况。以BALB/c裸鼠为对象,通过皮下接种MCF-7细胞悬液建立移植瘤模型,并将其分为对照组和Auc组(每组12只),检测各组裸鼠肿瘤体积、质量及肿瘤组织中CDK1/CCNB1/PLK1信号通路相关蛋白的表达情况。结果与对照组细胞相比,Auc各浓度组的细胞克隆形成数、增殖率、细胞侵袭数、划痕愈合率、G1/G0期和S期细胞占比以及B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、神经钙黏素、纤维连接蛋白、CDK1、CCNB1、PLK1蛋白的表达水平均显著降低(P组细胞相比,Auc-H组细胞上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05),而Auc-H+pcDNA-CDK1组细胞上述指标则显著逆转(P组裸鼠相比,Auc组裸鼠肿瘤体积、质量以及肿瘤组织中CDK1、CCNB1、PLK1蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05)。结论Auc能抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,诱导细胞周期阻滞,抑制EMT进程,该作用可能与抑制CDK1/CCNB1/PLK1信号通路激活有关。

关键词：桃叶珊瑚苷乳腺癌恶性生物学行为 CDK1/CCNB1/PLK1信号通路

长链非编码RNA GNAQ-ASI在高雄激素多囊卵巢综合征中的机制研究

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中国临床药理学杂志 2024年第8期40卷 1170-1174页

作者：李冰刘琳赫欣漯河医学高等专科学校医疗系河南漯河462000

目的探讨长链非编码RNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控细胞分裂周期与凋亡调节蛋白2(CDCD2)在高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的作用及其机制。方法在细胞水平上,分别通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测LncRNA GNAQ-AS1和miRNA-... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控细胞分裂周期与凋亡调节蛋白2(CDCD2)在高雄激素多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠中的作用及其机制。方法在细胞水平上,分别通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测LncRNA GNAQ-AS1和miRNA-20b-5p的最佳抑制浓度,以Transwell小室检测细胞的迁移情况,并通过流式细胞术检测细胞周期。在动物水平上,将大鼠随机分为4组,分别为对照组、模型组、lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组、miRNA-20b-5p mimics组,每组10只。模型组连续灌服溶于1%羧甲基纤维素的来曲唑1 mg·kg^(-1)·d^(-1),共3周,每周3次;lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组在模型建立的基础上,用siRNA沉默lncRNA GNAQ-AS1表达,每周注射1次,共3周;miRNA-20b-5p mimics组在模型建立的基础上,用miRNA-20b-5p mimics过表达miRNA-20b-5p,尾静脉注射给药,给药量为1 mg·kg^(-1),每周注射1次,共3周。对照组注射等体积的0.9%NaCl。用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测血清促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、血清抗缪勒管激素(AMH)、促卵泡生长激素(FSH)表达水平,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测卵巢组织中lncRNA GNAQ-AS1、miRNA-20b-5p和CDCD2的表达情况,用蛋白质印迹法检测CDCD2蛋白表达水平。结果 CCK-8检测结果表明,当给予5μmol·L^(-1)lncRNA GNAQ-AS1 siRNA时,对照组和lncRNA GNAQ-AS1组的细胞存活率分别为(38.25±0.62)%和(86.14±3.13)%,当给予10μmol·L^(-1)miRNA-20b-5p mimics时,对照组和miRNA-20b-5p mimics组的细胞增殖抑制率分别为(40.70±0.32)%和(85.35±2.13)%,表明KGN细胞给予10μmol·L^(-1)miRNA-20b-5p mimics时细胞活力明显降低。在动物水平上,RT-qPCR结果显示:模型组的lncRNA GNAQ-AS1、miRNA-20b-5p和CDCD2 mRNA的表达分别为1.72±0.37、0.59±0.10和2.47±0.13,表明lncRNA GNAQ-AS1、CDCD2的表达水平在模型组中明显上调,miRNA-20b-5p表达水平较于对照组下调(P组相比,模型组大鼠血清LH、T和AMH水平明显升高,FSH和E2水平明显降低(均P组相比,lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组和miRNA-20b-5p mimics组LH、T和AMH水平显著降低,FSH和E2水平显著升高。与模型组相比,CDCD2蛋白表达水平在lncRNA GNAQ-AS1 siRNA组和miRNA-20b-5p mimics组均显著升高。结论 LncRNA GNAQ-AS1介导miRNA-20b-5p靶向调控CDCD2在PCOS中发挥重要作用。

关键词：长链非编码RNA 鸟嘌呤核苷酸结合蛋白q多肽-反义RNA1 高雄激素多囊卵巢综合征分子机制