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EB病毒vIL-10基因的表达与功能研究

中国病原生物学杂志 2025年第2期 131-135+140页

作者：刘瑞坪陈彦妤王俊颖孙德月辛宪云张栋薛庆节王晖济宁医学院临床医学院济宁医学院生物科学学院济宁学院附属高级中学临沂市荣军医院济宁医学院基础医学院

目的构建EB病毒vIL-10基因的原核表达载体并纯化vIL-10,进行小鼠实验探究其对MC38肿瘤细胞的作用，为进一步探究vIL-10的在机体内的作用及其机制奠定基础。方法根据vIL-10的DNA序列，设计引物并通过PCR扩增获得vIL-10基因；构建重组质... 详细信息

目的构建EB病毒vIL-10基因的原核表达载体并纯化vIL-10,进行小鼠实验探究其对MC38肿瘤细胞的作用，为进一步探究vIL-10的在机体内的作用及其机制奠定基础。方法根据vIL-10的DNA序列，设计引物并通过PCR扩增获得vIL-10基因；构建重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1,将重组质粒转化***5α;抗性平板筛选阳性菌落，提取质粒后做PCR、双酶切及测序鉴定；将鉴定正确的重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1转化***3并用氨苄西林筛选、IPTG诱导表达，超声波破碎菌体提取蛋白并做SDS-PAGE、Western blot鉴定；大量培养阳性菌株，破碎菌体后提取蛋白，利用GST标签纯化vIL-10,取少量纯化产物再次做SDS-PAGE、Western blot鉴定；凝血酶切掉GST标签，透析袋除盐、浓缩蛋白后测定蛋白含量，备用；收集MC38细胞，皮下注射6周龄体重相近的野生型、IL-10基因敲除型C57BL/6J小鼠，3周后取成功构建的肿瘤模型小鼠，按400μg/kg肿瘤周围浸润注射vIL-10,每7天注射1次，共注射2次。末次注射7 d后处死小鼠，剥离肿瘤称重并记录、分析。结果 PCR获得的vIL-10基因大小约为513 bp,重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1的PCR、双酶切结果均符合预期，基因测序结果与vIL-10模板序列相符；转化vIL-10-pGEX-4T-1的***3经IPTG诱导表达，SDS-PAGE电泳显示与对照组对比可见45 ku条带，Western blot显示该蛋白表达成功；阳性菌株经大量培养，提取蛋白后用GST标签进行纯化，Western blot结果显示该蛋白能被特异性纯化，经切割透析浓缩后测定蛋白含量为0.56 mg/mL;动物实验结果显示，野生型(C57BL/6J)小鼠注射vIL-10蛋白组比未注射组肿瘤重量明显增加(P<0.05);IL-10基因敲除(IL-10-KO)小鼠注射vIL-10组比未注射组肿瘤重量明显增加(P<0.001)。结论经Western blot鉴定含有重组质粒vIL-10-pGEX-4T-1的***3能成功表达vIL-10,动物实验表明vIL-10能够促进肿瘤生长。为探究vIL-10对肿瘤的作用研究及其机制奠定了基础。

关键词： EB病毒 vIL-10 原核表达 GST标签纯化 MC38

白花丹素通过调节TGF-β1/Smad2及Nrf2/NOX4通路改善博来霉素诱导的肺纤维化

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中国临床药理学与治疗学 2025年第1期 61-69页

作者：李慧胡恒钊俞婷婷胡慧娴王佳乐吴晶郝伟皖南医学院机能学实验实训中心皖南医学院麻醉学院皖南医学院医学影像学院皖南医学院药学院

目的：探究白花丹素（plumbagi,PL）对博来霉素诱导的肺纤维化（pulmonary fibrosis,PF）的保护作用及其可能性机制。方法：将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为：对照组（Control）、博来霉素组（bleomycin,BLM）、PL低剂量组（1 mg/kg）、P... 详细信息

目的：探究白花丹素（plumbagi,PL）对博来霉素诱导的肺纤维化（pulmonary fibrosis,PF）的保护作用及其可能性机制。方法：将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为：对照组（Control）、博来霉素组（bleomycin,BLM）、PL低剂量组（1 mg/kg）、PL高剂量组（2 mg/kg）。采用气管内注射BLM（3 mg/kg）复制小鼠PF模型，腹腔注射PL（1或2 mg/kg）3周，处死动物。HE与Masson染色观察肺组织形态学变化及胶原沉积情况。检测小鼠肺组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）和羟脯氨酸（hydroxyproline,HYP）活性或含量。酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）检测小鼠肺组织中白介素-6（interleukin-6,IL-6）含量。免疫组化检测小鼠肺组织中核因子相关因子2（nuclear factor related factor 2,Nrf2）和NADPH氧化酶4（reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase 4,NOX4）阳性细胞表达。Western blotting检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型胶原（collagen I,Col I）、Ⅲ型胶原（collagen III,Col Ⅲ）、IL-6、转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、p-Smad2、Nrf2和NOX4的蛋白表达。结果：与BLM组相比，PL治疗可减轻小鼠肺间质损伤及细胞外基质沉积，降低HYP含量（P<0.01,P<0.05），降低α-SMA、Col I和Col Ⅲ的蛋白表达（P<0.01,P<0.05），减少IL-6的分泌（P<0.01），提高机体抗氧化能力（增强SOD和GSH的活性，减少MDA含量，P<0.01,P<0.05），显著下调TGF-β1、pSmad2和NOX4阳性细胞及蛋白表达（P<0.01,P<0.05），上调Nrf2阳性细胞及蛋白表达（P<0.01,P<0.05）。结论：PL可能通过调节TGF-β1/Smad2及Nrf2/NOX4信号通路减轻炎症反应与胶原沉积，提高机体抗氧化能力，从而延缓PF进程。

关键词：白花丹素肺纤维化 TGF-β1/Smad2信号通路 Nrf2/NOX4信号通路

水凝胶:口腔颌面部组织缺损修复中的作用与问题

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中国组织工程研究 2025年第10期29卷 2178-2188页

作者：伍志鑫蒋雯雯詹健辉李杨书润任文燕王一宇济宁医学院口腔医学院山东省济宁市272067 济宁医学院临床医学院山东省济宁市272067

背景:水凝胶因优越的机械及生物性能在生物医学领域占据独特优势,已成为研究热点。目前水凝胶相关研究涉及组织工程和创口敷料等方面。目的:综述水凝胶的优势性能与在口腔颌面部缺损修复领域中的应用研究进展,探讨水凝胶目前在应用推广... 详细信息

背景:水凝胶因优越的机械及生物性能在生物医学领域占据独特优势,已成为研究热点。目前水凝胶相关研究涉及组织工程和创口敷料等方面。目的:综述水凝胶的优势性能与在口腔颌面部缺损修复领域中的应用研究进展,探讨水凝胶目前在应用推广中的局限以及在此领域所面临的挑战,为未来研究方向提供新思路。方法:利用计算机检索Pub Med、中国知网、万方数据库发表的相关文献,检索词为“水凝胶,口腔颌面部缺损,机械性能,组织工程,创口敷料”“hydrogel,oral and maxillofacial defects,mechanical properties,guided tissue regeneration,wound dressing”。通过阅读文题和摘要进行初步筛选,排除与文章主题不相关的文献,根据纳入标准和排除标准,最终纳入108篇文献进行结果分析。结果与结论:(1)水凝胶具有良好的生物学活性、机械可控性及刺激响应等优势性能。(2)聚合物、金属和陶瓷联合制备的水凝胶复合物具有适当的机械性能、生物降解性以及可控的释放速率,契合颌面骨组织工程的需求。(3)纤维蛋白基水凝胶可填充穿过神经缺损区域的中空神经导管并促进轴突再生和生长从而恢复颌面神经功能。(4)控制纳米材料和水凝胶的相互作用可以改善肌纤维定向结构的形成以促进颌面肌组织再生。(5)多糖水凝胶,因具有控制药物递送和携带生物活性分子等作用,并且与其他材料联合应用可以产生与细胞外基质相匹配的最佳支架,因此逐渐成为修复不规则牙周缺损的首选。(6)磷酸钙或碳酸钙基水凝胶中填充不规则形状或精细的组织缺损并使牙体硬组织再矿化,自组装水凝胶制备简便且生物活性优良。(7)唾液腺来源的细胞外基质样凝胶有望参与许多唾液腺疾病的治疗。(8)水凝胶可作为伤口敷料结合生物黏合剂、脱细胞生物材料、抗微生物和抗氧化剂或干细胞等而被广泛用于治疗各种伤口。(9)纤维蛋白基水凝胶在口腔颌面部缺损修复中最具潜力,其具有优良的生物相容性、柔韧性和可塑性,可与细胞、细胞外基质蛋白和各种生长因子结合,能够促进间充质干细胞的成骨分化、轴突的再生与生长、血管生成、肌管分化、唾液腺组织再生和牙周组织再生,在口腔颌面部缺损组织的修复中具有广泛前景。然而其治疗效果取决于所携带物质的功能,复杂的制备工艺、安全性和长期疗效以及口腔颌面特殊的解剖结构是阻碍推广的难题,这也为未来的研究提供了方向。

关键词：水凝胶口腔颌面部缺损骨组织工程生物材料创口敷料机械性能刺激响应综述

奥硝唑药物对牙髓再生根管内血管化的潜在影响

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中国组织工程研究 2025年第14期29卷 2892-2898页

作者：黎梓楷张程程熊嘉颖杨曦瑞阳晶石海山暨南大学口腔医学院广东省广州市510632

背景:在牙髓治疗中,组织的再生修复和根尖的进一步发育依赖于血运重建及细菌感染的有效控制。有研究报道,将奥硝唑载于盖髓材料或血管化支架材料中可控制牙髓感染,但其血管化影响有待研究。目的:探究奥硝唑在根管内的残留浓度规律,评价... 详细信息

背景:在牙髓治疗中,组织的再生修复和根尖的进一步发育依赖于血运重建及细菌感染的有效控制。有研究报道,将奥硝唑载于盖髓材料或血管化支架材料中可控制牙髓感染,但其血管化影响有待研究。目的:探究奥硝唑在根管内的残留浓度规律,评价奥硝唑对内皮细胞增殖、迁移、分化的影响以及对血管的刺激性。方法:①将奥硝唑包封于离体牙髓腔后浸泡于Hanks缓冲液中,7 d后去除髓腔内的奥硝唑并重新包封无菌水,再次浸泡于Hanks缓冲液中,采用比色法定期检测髓腔液中奥硝唑质量浓度。②将人脐静脉内皮细胞接种于孔板内,观察细胞贴壁后加入脂多糖刺激24 h,然后分别加入0,1,2,5,8,10μg/mL奥硝唑共培养,检测细胞活性与迁移能力。将人脐静脉内皮细胞接种于孔板内,分别加入不同质量浓度(0,1,2,5,8,10μg/mL)奥硝唑共培养,或者经脂多糖刺激24 h后分别加入不同质量浓度(0,1,2,5,8,10μg/mL)奥硝唑共培养,检测血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子的基因表达与血管内皮生长因子的蛋白表达。③采用鸡胚绒毛膜实验评估2,10μg/mL奥硝唑对血管的刺激性。结果与结论:①离体牙中残留的奥硝唑在最初6 d内迅速释放,随后释放速度减慢,8 d以后根尖奥硝唑质量浓度约为2μg/mL。②在脂多糖诱导的炎症条件下,CCK-8与细胞活死荧光染色显示奥硝唑(1-10μg/mL)对人脐静脉内皮细胞的活性无明显影响,细胞划痕实验显示奥硝唑(1-10μg/mL)对人脐静脉内皮细胞的迁移能力无明显影响。RT-qPCR检测显示,与单独的奥硝唑共培养后,人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达整体呈下降趋势;在脂多糖诱导的炎症条件下与奥硝唑共培养后,人脐静脉内皮细胞中两种因子的mRNA表达呈上升趋势。Western blot检测显示,在脂多糖诱导的炎症条件下与奥硝唑共培养后,人脐静脉内皮细胞中血管内皮生长因子蛋白表达呈升高趋势。③鸡胚绒毛膜实验显示2,10μg/mL奥硝唑无血管刺激性。④结果表明1-10μg/mL奥硝唑无细胞毒性及血管刺激性,可促进炎性内皮细胞中血管生成相关基因及蛋白的表达,作为一种潜在的治疗药物用于髓腔感染控制。

关键词：奥硝唑内皮细胞血管再生药物残留牙髓感染根管内血管化

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组织工程技术修复颞下颌关节:问题与挑战

中国组织工程研究 2025年第22期29卷 4804-4812页

作者：赖鹏宇梁冉沈山暨南大学口腔医学院广东省广州市510632

背景:颞下颌关节疾病的传统疗法受限于疾病严重程度和个体差异。相比之下,组织工程作为一种新兴治疗方法,可以根据患者具体情况定制个性化治疗方案,减少手术过程中的不确定性,提高治疗效果。目的:综述组织工程修复颞下颌关节的最新研究... 详细信息

背景:颞下颌关节疾病的传统疗法受限于疾病严重程度和个体差异。相比之下,组织工程作为一种新兴治疗方法,可以根据患者具体情况定制个性化治疗方案,减少手术过程中的不确定性,提高治疗效果。目的:综述组织工程修复颞下颌关节的最新研究成果和进展。方法:以“颞下颌关节,组织工程,种子细胞,支架,生长因子,动物模型”为中文检索词,以“temporomandibular joint,tissue engineering,seed cell,scaffold,growth factor,animal model”为英文检索词,分别在PubMed数据库和中国知网进行文献检索,检索时限为各数据库建库时间至2024年3月。通过分析和阅读文献进行筛选,按照排除筛选标准纳入文献,最终纳入57篇文献进行综述。结果与结论:(1)随着生物学、材料学与工程学等技术的发展,颞下颌关节组织工程己取得较大进展,例如种子细胞的筛选、新型支架的开发、生长因子作用机制的探索、多种动物模型的构建等,目前大多数研究尚处于体外实验阶段,动物实验等体内研究尚未大规模开展,组织工程修复颞下颌关节的临床应用还需更多证据支持。(2)尽管颞下颌关节组织工程研究仍存在许多问题和挑战等待解决,依然展现出广阔的临床应用前景,有望在将来成为颞下颌关节疾病出色高效的治疗方式。

关键词：组织工程颞下颌关节软骨缺损种子细胞支架水凝胶脱细胞外基质生长因子外泌体动物模型

实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠发病中Tim-3的表达及其作用

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眼科新进展 2025年第1期 10-14页

作者：吴雄飞张秋瑾郑柳杨彬彬李金清丁芝祥桂林医学院桂林医学院附属医院眼科

目的探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)发病中的表达和作用。方法选取4～5周龄雄性C57BL/6J小鼠共12只；采用随机数字表法将12只小鼠分为对照组(3只)和实验组(9只)。对照组(造模时间节点为造模... 详细信息

目的探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)发病中的表达和作用。方法选取4～5周龄雄性C57BL/6J小鼠共12只；采用随机数字表法将12只小鼠分为对照组(3只)和实验组(9只)。对照组(造模时间节点为造模后0 d)不做任何处理，实验组小鼠诱导建立EAU模型(按造模时间节点分为造模后7 d、14 d、21 d三个小组，每组3只小鼠)。将光感受器间维生素A类结合蛋白651-670和完全弗氏佐剂充分混合乳化后，在实验组小鼠的双侧大腿、尾根部及颈后部皮下注射配制好的免疫乳剂(每只注射200μL免疫乳剂，含500μg光感受器间维生素A类结合蛋白651-670),随后实验组每只小鼠腹腔注射1μg百日咳毒素。通过裂隙灯显微镜观察各组小鼠眼前节及眼底表现并采集图像。根据炎症程度采用Caspi分级标准对小鼠行临床评分及组织病理学评分。ELISA法检测小鼠血清中IFN-γ、IL-17的表达；实时荧光定量PCR法检测小鼠脾脏及眼球组织中Tim-3 mRNA的表达；Western blot法检测Tim-3蛋白的表达；免疫组织化学法检测脾脏组织Tim-3蛋白的表达。采用Graphpad Prism 9.0统计软件进行数据分析。结果造模后小鼠的眼前节临床评分、眼底临床评分、组织病理学评分均随造模后时间的延长呈升高趋势，各组间的评分差异均有统计学意义(均为P<0.05)。造模后小鼠血清中IFN-γ、IL-17的表达量均随造模后时间的延长呈升高趋势，且各组间的差异均有统计学意义(均为P<0.05)。造模后小鼠脾脏与眼球组织中Tim-3 mRNA的相对表达量均随造模后时间的延长呈下降趋势，且各组间的差异均有统计学意义(均为P<0.05)。小鼠眼球和脾脏组织中Tim-3蛋白的表达情况和mRNA相同。结论 Tim-3在EAU发病进程中的表达随着炎症的加重呈下调趋势，Tim-3在葡萄膜炎发病进程中可能发挥着负性免疫调控作用。

关键词：实验性自身免疫性葡萄膜炎自身免疫性疾病 Tim-3 干扰素-γ 白细胞介素

华支睾吸虫ESP刺激胆管上皮细胞产生IL-17A促进肝纤维化的机制研究

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中国病原生物学杂志 2025年第2期 190-194+200页

作者：刘桐彤朱浩王楠王新月胡凤爱曹璋高洪莲刘乃国柏雪莲滨州医学院附属医院医学研究中心滨州医学院附属医院病理科

目的探讨华支睾吸虫感染刺激胆管上皮细胞产生IL-17A激活HSC导致肝纤维化的机制。方法从流行区获取华支睾吸虫感染的患者血清，ELISA法检测IL-17A的表达。人工消化麦穗鱼，分离华支睾吸虫囊蚴，分别灌胃感染新西兰大白兔和BALB/c小鼠... 详细信息

目的探讨华支睾吸虫感染刺激胆管上皮细胞产生IL-17A激活HSC导致肝纤维化的机制。方法从流行区获取华支睾吸虫感染的患者血清，ELISA法检测IL-17A的表达。人工消化麦穗鱼，分离华支睾吸虫囊蚴，分别灌胃感染新西兰大白兔和BALB/c小鼠，无菌分离小鼠肝脏和血清。ELISA法、Western blot和免疫组化法检测小鼠血清和肝脏中IL-17A的表达；ESP刺激人胆管癌细胞RBE,分别应用qRT-PCR和Western blot检测RBE细胞IL-17A的表达。收集RBE细胞培养上清加入LX-2细胞培养体系，qRT-PCR和Western blot检测LX-2细胞的α-SMA和Collagen-I的表达。结果华支睾吸虫感染患者血清IL-17A水平显著高于健康体检者(t=6.536,P<0.01)。被感染的小鼠血清和肝脏中IL-17A的表达水平显著高于正常对照组(t=12.98,P<0.01;t=4.155,P<0.05)。免疫组化结果显示，感染小鼠的肝胆管上皮中IL-17A表达量增多(t=10.80,P<0.01)。ESP刺激后，RBE细胞的IL-17A表达水平显著升高(均P<0.01)。RBE细胞培养上清加入LX-2细胞培养体系后，α-SMA和Collagen-I的表达水平显著高于对照组(均P<0.01)。结论华支睾吸虫可以刺激胆管上皮细胞产生IL-17A,进一步促进炎症并激活HSC产生胶原沉积，从而促进肝纤维化的进展。

关键词：华支睾吸虫分泌代谢产物白介素17A 肝纤维化

微容量负荷试验对老年骨科患者蛛网膜下腔阻滞后低血压的预测价值

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实用医学杂志 2025年第1期 60-64页

作者：梁长宁陈小萍魏静静葛亚丽高巨扬州大学临床医学院江苏省苏北人民医院麻醉科大连医科大学扬州临床医学院

目的探讨微容量负荷试验对老年骨科患者腰麻后低血压的预测价值。方法严格按照入选和排除标准筛选出行髋关节或膝关节置换的老年患者72例，均为安排蛛网膜下腔阻滞麻醉的择期手术患者。依据研究对象接受单次细针腰麻后于仰卧位状态下1... 详细信息

目的探讨微容量负荷试验对老年骨科患者腰麻后低血压的预测价值。方法严格按照入选和排除标准筛选出行髋关节或膝关节置换的老年患者72例，均为安排蛛网膜下腔阻滞麻醉的择期手术患者。依据研究对象接受单次细针腰麻后于仰卧位状态下15 min内血压改变进行分组，参考既往文献低血压定义标准分为血压降低组（H组）和血压正常组（N组）共两组。实施细针腰麻前进行微容量负荷试验，采用无创心排血量监测仪测量每搏量指数变异度（variation of stroke volume index，ΔSVI）并记录血压及心率等循环数据的基线值。采用多因素logistic回归分析接受腰麻下行骨科关节置换手术的老年患者低血压的影响因素，绘制ΔSVI的受试者工作特征（ROC）曲线并计算曲线下面积（AUC），评价ΔSVI的预测价值。结果腰麻后有29例（40.27%）患者发生低血压。与N组相比，仰卧位状态下15 min内发生低血压的H组患者年龄更大，ASAⅢ级、合并高血压比例更高。分析结果显示ΔSVI是老年患者腰麻后低血压的独立影响因素。ΔSVI在≥0.805%时，预测腰麻后低血压的敏感度为82.8%，特异度为81.4%，曲线下面积为0.868。ΔSVI与SBP最大降低幅度呈正相关（r=0.562,P <0.01）。结论微容量负荷试验是一种有效预测老年骨科患者腰麻后低血压的方法。

关键词：老年髋关节置换术膝关节置换术蛛网膜下腔阻滞后低血压微容量负荷试验蛛网膜下腔阻滞

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3D打印技术在口腔医学、颌面外科修复重建中的作用与优势

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中国组织工程研究 2025年第22期29卷 4823-4831页

作者：宋雨菲程焕芝范海霞侯萌济宁医学院口腔医学院山东省济宁市272067

背景:3D打印技术独特的优势为口腔医学的发展开拓了新的思路。目的:总结3D打印技术在口腔医学中的应用进展。方法:利用计算机检索中国知网和PubMed数据库,以“3D打印,口腔科学”为中文检索词进行分类检索,以“Three-Dimensional printin... 详细信息

背景:3D打印技术独特的优势为口腔医学的发展开拓了新的思路。目的:总结3D打印技术在口腔医学中的应用进展。方法:利用计算机检索中国知网和PubMed数据库,以“3D打印,口腔科学”为中文检索词进行分类检索,以“Three-Dimensional printing,stomatology,Dentistry,prosthodontics,oral implant,orthodontics,oral and maxillofacial surgery,dental pulp disease,periodontitis”为英文检索词进行关键词检索,经阅读初步排除与文章主题不相符的文献,根据纳入标准和排除标准,最终纳入54篇文献进行汇总。结果与结论:在口腔医学领域,3D打印技术的应用范围正迅速拓展,逐步取代传统的临床诊断和治疗方式,通过结合数字化技术和先进的材料科学,3D打印可以精确地创建三维模型,为口腔疾病治疗提供了个性化解决方案,确保医师能够在手术前进行详尽的规划和预览,提高手术的安全性。3D打印技术在定制化义齿制作、个性化种植、无托槽隐形矫治等多方面呈现出了显著优势,基于此项技术,医师可以根据患者口腔结构和需求实行精准设计与制作,为患者带来良好的治疗体验和预后效果。3D打印技术在微创牙髓治疗及牙周组织再生方面也展现出了巨大潜力,3D打印的支架和植入物可为干细胞提供适宜环境,促进牙周组织的再生和修复,但目前3D打印在再生治疗仍处于发展阶段,还需更多的研究和实践来验证其临床应用的效果和安全性。

关键词： 3D打印技术口腔医学口腔临床口腔修复口腔种植口腔正畸口腔颌面外科牙体牙髓病学牙周组织再生术