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川芎嗪对UVA诱导人皮肤成纤维细胞衰老的拮抗作用及MMP-1、MMP-3mRNA表达影响

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中华皮肤科杂志 2015年第10期48卷 700-704页

作者：赵敏玲刘仲荣陈胡林朱英杰严苗苗范秀针广州军区广州总医院皮肤科 510010

目的探讨川芎嗪对长波紫外线（UVA）诱导人皮肤成纤维细胞（HDF）衰老的拮抗作用及对基质金属蛋白酶（MMP）-1和MMP-3mRNA表达的影响。方法酶消化法分离HDF进行原代培养，用不同浓度川芎嗪分别作用UVA多次照射前后的HDF。CCK-8法检测川... 详细信息

目的探讨川芎嗪对长波紫外线（UVA）诱导人皮肤成纤维细胞（HDF）衰老的拮抗作用及对基质金属蛋白酶（MMP）-1和MMP-3mRNA表达的影响。方法酶消化法分离HDF进行原代培养，用不同浓度川芎嗪分别作用UVA多次照射前后的HDF。CCK-8法检测川芎嗪作用24、48、72h或川芎嗪预处理24h进行多次UVA照射的各组HDF体外增殖情况。光学显微镜下观察经多次UVA照射的各组细胞形态变化及β半乳糖苷酶染色情况，实时荧光定量PCR检测各组细胞内MMP-1和MMP-3mRNA相对表达量。结果浓度为20、50mg／L的川芎嗪作用HDF24、48、72h对细胞的体外增殖活性无促进或抑制作用，但100mg／L作用48h对HDF出现短暂抑制作用，与未给药组比较细胞增殖活性差异有统计学意义（P〈0．05）。20、50、100mg／L的川芎嗪预处理HDF24、48、72h对经多次UVA照射的HDF体外增殖均有一定的促进作用，各组间细胞增殖活性在3个时间点差异有统计学意义（F值分别为17．451，15．231，23．535，均P〈0．01）。多次UVA照射后HDF形态出现体积变大、颗粒增加及β半乳糖苷酶表达增加等衰老现象，接近复制性衰老的HDF（P55组）。而20、50、100mg/L的川芎嗪预处理HDF24h可减轻这种衰老现象，其中UVA组β半乳糖苷酶阳性率（68．417±1．181）％，UVA＋川芎嗪20mg／L组（58．167±5．620）％，UVA＋川芎嗪50mg／L组（45．167±5．502）％，UVA＋川芎嗪100mg／L组（43．000±2．000）％，未照射组（33．667±5．865）％，P55组（76．000±6．557）％，各组间差异有统计学意义（F=45．918，P〈0．01），且UVA＋各浓度川芎嗪组、未照射组与UVA组比较差异有统计学意义（均P〈0．05）。川芎嗪可降低多次UVA照射诱导的HDF表达MMP-1和MMP-3mRNA，且UVA＋各浓度川芎嗪组、未照射组与UVA组比较差异有统计学意义（均P〈0．05）。结论川芎嗪对多次UVA照射诱导的HDF衰老有拮抗作用，并能降低HDF衰老过程中MMP-1和MMP-3mRNA的表达。

关键词：川芎嗪成纤维细胞细胞衰老基质金属蛋白酶1 基质金属蛋白酶3 紫外线细胞增殖

腺病毒介导HSV-2 gD基因修饰的树突状细胞疫苗制备

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医学研究生学报 2015年第1期28卷 20-24页

作者：樊建勇王颖杨慧兰梁洁李翠华广州军区广州总医院皮肤科

目的生殖器疱疹尚无彻底治愈的方法。研制有效的生殖器疱疹病毒疫苗是预防和治疗HSV-2感染的关键,文中探讨制备腺病毒介导的HSV-2 g D基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗的可行性。方法将HSV-2 g D蛋白基因克隆到质粒载体Shut... 详细信息

目的生殖器疱疹尚无彻底治愈的方法。研制有效的生殖器疱疹病毒疫苗是预防和治疗HSV-2感染的关键,文中探讨制备腺病毒介导的HSV-2 g D基因修饰的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗的可行性。方法将HSV-2 g D蛋白基因克隆到质粒载体Shuttle-2,重组质粒酶切鉴定、测序鉴定后构建重组腺病毒p Adeno-HSV-2 g D。分离小鼠骨髓DC细胞,p Adeno-HSV-2 g D转染DC细胞后用流式细胞术检测DC表型,用免疫组化法、RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot方法检测HSV-2 g D的表达情况。结果以HSV-2病毒DNA为模板,采用g D基因引物扩增出相应的目的片段。琼脂糖凝胶电泳显示,PCR产物g D基因同预期的大小一致(1182 bp)。p Adeno-g D DNA用脂质体法转染293细胞10 d,反复冻融获得p AdenoHSV-2 g D重组腺病毒,活性为4×1010IU/m L。流式细胞仪检测结果显示:成熟DC和腺病毒感染后DC,CD40含量为(74.2±3.9)%、(81.3±3.1)%,CD80含量为(73.9±4.1)%、(80.4±2.9)%,CD86含量为(76.1±5.5)%、(83.7±3.9)%,均较不成熟DC的CD40、CD80、CD86含量[(9.7±0.5)%、(7.5±1.2)%、(5.2±1.1)%]升高(P0.05)。RT-PCR、免疫组织化学方法证明HSV-2 g D能在DC细胞内表达,表达产物的SDS-PAGE和Western blot分析发现,在相对分子质量为43000处有外源蛋白表达,与预期蛋白条带一致。结论成功制备了p Adeno-HSV-2 g D-DC疫苗。

关键词：单纯疱疹病毒树突状细胞疫苗

单纯疱疹病毒2gD基因的树突细胞疫苗免疫效应研究

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中华皮肤科杂志 2014年第8期47卷 574-577页

作者：樊建勇王颖杨慧兰梁洁李翠华广州军区广州总医院皮肤科 510010

目的观察单纯疱疹病毒2 gD（HSV-2 gD）基因的树突细胞（DC）疫苗在动物实验中诱发特异性免疫应答情况.方法用腺病毒介导的、HSV-2 gD基因修饰的DC（pAdeno-HSV-2 gD-DC）疫苗免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫后第10天检测小鼠血清中gD Ig... 详细信息

目的观察单纯疱疹病毒2 gD（HSV-2 gD）基因的树突细胞（DC）疫苗在动物实验中诱发特异性免疫应答情况.方法用腺病毒介导的、HSV-2 gD基因修饰的DC（pAdeno-HSV-2 gD-DC）疫苗免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫后第10天检测小鼠血清中gD IgG水平;同时,分离小鼠脾淋巴细胞,用HSV-2gD蛋白刺激,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况、乳酸脱氢酶释放法测定细胞毒性T淋巴细胞（CTL）活性及ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中干扰素γ（IFN-γ）、白介素4（IL-4）水平.实验分为4组,pAdeno-DC组、pAdeno-HSV-2 gD-DC组、DC组、空白对照组,每组10只.结果 pAdeno-HSV-2 gD-DC组小鼠血清内可检测到高滴度针对HSV-2gD蛋白的抗体（A450值为0.313±0.034）,与pAdeno-DC组（0.034±0.009）、DC组（0.028±0.009）、空白对照组（0.026±0.010）比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.pAdeno-HSV-2 gD-DC可以诱导小鼠脾淋巴细胞增殖（刺激指数为1.600±0.215）、有效杀伤靶细胞（CTL活性为37.1％）,与pAdeno-DC组（分别为1.063±0.070和16.0％）、DC组（1.056±0.063和14.9％）、空白对照组（1.020±0.051和15.7％）比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.pAdeno-HSV-2 gD-DC组小鼠分离的脾细胞培养上清可以检测到高水平IFN-γ（A450值为0.568±0.031）和IL-4（A450值为0.544±0.043）,与pAdeno-DC组（0.266±0.021和0.278±0.037）、DC组（0.271±0.023和0.275±0.044）、空白对照组（0.252±0.012和0.245±0.051）比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论构建的pAdeno-HSV-2 gD-DC疫苗可以在小鼠中产生较强的特异性免疫应答.

关键词：疱疹病毒2型,人树突细胞单纯疱疹病毒疫苗

非节段型白癜风患者外周血Th17细胞亚群及其自噬相关标记分子表达

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中国皮肤性病学杂志 2015年第10期29卷 1012-1016页

作者：朱英杰刘仲荣严苗苗陈胡林赵敏玲李翠华广州军区广州总医院皮肤科广东广州510010

目的探讨非节段型白癜风患者(non-segmental vitiligo,NSV)外周血Th17细胞亚群比例及其细胞自噬水平是否存在异常。方法分离人外周血单个核细胞(PBMC),应用流式细胞术检测40例NSV患者及20例正常人外周血Th17细胞亚群比例及其自噬相关标... 详细信息

目的探讨非节段型白癜风患者(non-segmental vitiligo,NSV)外周血Th17细胞亚群比例及其细胞自噬水平是否存在异常。方法分离人外周血单个核细胞(PBMC),应用流式细胞术检测40例NSV患者及20例正常人外周血Th17细胞亚群比例及其自噬相关标记分子的水平。结果 NSV快速进展期、稳定期至健康对照组外周血Th17细胞亚群比例逐渐降低,各组间差异有统计学意义(P<0.05);Th17细胞自噬相关标记分子LC3B和Beclin1的水平自NSV快速进展组、稳定期组至健康对照组依次降低,而Bcl-2蛋白的水平自NSV快速进展期组、稳定期至健康对照组依次升高,各组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 NSV患者外周血Th17细胞亚群计数及其自噬水平均升高,可能参与了NSV病情的发生、发展机制。

关键词：非节段型白癜风 Th17细胞自噬

Hsa-mir-634对Vero细胞增殖和凋亡的影响

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中华皮肤科杂志 2013年第11期46卷 795-799页

作者：王颖樊建勇杨慧兰广州军区广州总医院皮肤科 510010

目的探讨hsa—mir-634在Vero细胞中的功能与作用机制。方法运用生物信息学方法在线预测hsa—mir-634的潜在靶基因细胞周期蛋白Dl（CyclinDl，CCNDl）的结合位点，将含有hsa—mir-634结合位点的CCNDl的3’UTR片段连人psi—CHECK2载体，... 详细信息

目的探讨hsa—mir-634在Vero细胞中的功能与作用机制。方法运用生物信息学方法在线预测hsa—mir-634的潜在靶基因细胞周期蛋白Dl（CyclinDl，CCNDl）的结合位点，将含有hsa—mir-634结合位点的CCNDl的3’UTR片段连人psi—CHECK2载体，构建双荧光报告基因载体。通过定点突变的方法突变hsa—mir-634和CCNDl的结合位点，构建双荧光报告突变基因载体。将构建的重组质粒转染293T细胞，进行双荧光检测；将化学合成的hsa—mir-634模拟物转染Vero细胞，荧光定量PCR和Western印迹法检测hsa—mir-634对内源性CCNDlmRNA水平和蛋白水平表达的影响，MTS法检测hsa—mir-634对Veto细胞增殖能力的影响，流式细胞仪检测hsa—mir-634对Vero细胞凋亡的影响。结果用生物信息学方法成功预测到hsa—mir-634与CCNDl的结合位点；测序结果显示，野生型及突变型CCND13’UTR序列成功连接到psi—CHECK2报告基因载体；双荧光检测结果显示，过表达hsa—mir-634可以抑制荧光素酶的表达。过表达hsa—mir-634后，其靶基因CCNDl在mRNA水平上无明显变化，但可以显著影响CCNDl蛋白的表达。过表达hsa—mir-634可抑制Vero细胞增殖，这种抑制作用在转染后第4天最为明显。另外，过表达hsa—mir-634可诱导Veto细胞的凋亡，空白细胞组、阴性对照组及hsa—mir-634过表达组晚期凋亡的比例分别为8．03％、7．96％和17．33％。结论Hsa—mir-634通过影响CCND1的表达影响Vero细胞的增殖和凋亡。

关键词：细胞周期蛋白D1 Vero细胞细胞凋亡细胞增殖疱疹病毒2型人 Hsa—mir-634

线粒体DNA缺失细胞系对凋亡诱导剂敏感性的研究进展

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广东医学 2013年第18期34卷 2881-2883页

作者：陈胡林杨慧兰范秀针朱英杰赵敏玲刘仲荣广州军区广州总医院皮肤科广州510010

线粒体DNA（mtDNA）缺失细胞系及其转线粒体细胞系在一些线粒体相关疾病的研究中得到广泛的应用.凋亡是疾病发生发展过程中的重要环节,目前关于mtDNA缺失细胞对凋亡敏感性的研究结果存在较大争议.本文就mtDNA缺失细胞系对各种凋亡诱导... 详细信息

线粒体DNA（mtDNA）缺失细胞系及其转线粒体细胞系在一些线粒体相关疾病的研究中得到广泛的应用.凋亡是疾病发生发展过程中的重要环节,目前关于mtDNA缺失细胞对凋亡敏感性的研究结果存在较大争议.本文就mtDNA缺失细胞系对各种凋亡诱导剂刺激的敏感性研究进展进行综述.

关键词：线粒体DNA缺失转线粒体细胞系凋亡诱导剂凋亡敏感性 mtDNA缺失相关疾病

MedliteC6激光联合左旋维生素C治疗黄褐斑的安全性及疗效分析

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中国激光医学杂志 2016年第5期 280-281页

作者：杨慧兰广州军区广州总医院皮肤科

目的:研究Medlite C6激光联合外用左旋维生素C治疗黄褐斑的临床疗效及安全性。方法:对确诊黄褐斑的20例志愿者进行每3周一次Medlite C6激光联合日常外用左旋维生素C的治疗,并在每次治疗前使用皮肤测试仪对皮肤进行红斑、黑素、皱纹及含... 详细信息

目的:研究Medlite C6激光联合外用左旋维生素C治疗黄褐斑的临床疗效及安全性。方法:对确诊黄褐斑的20例志愿者进行每3周一次Medlite C6激光联合日常外用左旋维生素C的治疗,并在每次治疗前使用皮肤测试仪对皮肤进行红斑、黑素、皱纹及含水量的检测,同时另取20例黄褐斑患者进行外用左旋维生素C的对照治疗,检测指标相同。

关键词：黄褐斑左旋 MedliteC6 维生素激光

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皮肤Rosai-Dorfman病1例

中国皮肤性病学杂志 2016年第2期30卷 178-179页

作者：林挺杨慧兰广州军区广州总医院皮肤科广东广州510010

患者女,53岁。右面颌部起红斑、丘疹、结节和斑块3个月余。皮损组织病理示:真皮内大量的组织细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润,组织细胞内可见伸入现象。免疫组织化学示:S-100(2+),CD68(+),CD1a(-)。诊断:皮肤Rosai-Dorfman病。

关键词：皮肤Rosai-Dorfman病

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激光治疗术后皮肤损伤的处理

中国激光医学杂志 2016年第5期 281-282页

作者：杨慧兰广州军区广州总医院皮肤科

激光应用为许多以前难治性疾病的治疗带来了革命性的变化,越来越成为皮肤美容医学领域的一种重要的工具和治疗方法。但激光在治疗过程中对皮肤结构造成一定损伤,如何减少治疗后并发症,协同激光作用,在治疗疾病、美容的同时促进皮肤再生... 详细信息

激光应用为许多以前难治性疾病的治疗带来了革命性的变化,越来越成为皮肤美容医学领域的一种重要的工具和治疗方法。但激光在治疗过程中对皮肤结构造成一定损伤,如何减少治疗后并发症,协同激光作用,在治疗疾病、美容的同时促进皮肤再生、修复,值得临床医生深入探讨。激光治疗时可对皮肤不同结构产生损伤,多方面影响皮肤的保护屏障功能、表皮黑素细胞的防晒功能、皮脂膜的保

关键词：激光治疗激光术皮肤红斑局部外用维生素