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盐酸青藤碱诱导黏连性膝关节强直家兔成纤维细胞凋亡的机制研究

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生物化学与生物物理进展 2024年第4期51卷 959-968页

作者：侯新聚雷洪峰陈勇黎芙希孙敬宁刘佳铭马红梅南昌市洪都中医院南昌330008 广州中医药大学第四临床医学院广州510006 广州中医药大学第二临床医学院广州510006

目的观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因表达的影响,并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法以体外培养法培养成纤维细胞,并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞... 详细信息

目的观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因表达的影响,并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法以体外培养法培养成纤维细胞,并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞增殖的情况;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测经过盐酸青藤碱处理后,成纤维细胞相关基因mRNA表达的改变,用ELISA法检测药物的作用对血清中炎症因子等水平的影响,蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白质的表达。结果盐酸青藤碱能降低成纤维细胞存活率,且随浓度升高存活率逐渐降低。盐酸青藤碱中各个组的效果均十分明显(P<0.05)。在相关基因的mRNA表达层面,与对照组比较,盐酸青藤碱各组炎症因子均显著下调(P<0.05),凋亡蛋白的表达量显著上升、Bcl-2的mRNA表达量下降(P<0.05),而PI3K/mTOR/AKT3信号通路分子的mRNA表达量均下降(P<0.05)。在蛋白质表达层面,与对照组相比较,中、高剂量盐酸青藤碱组血清中炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TGF-β的水平均明显下调(P<0.05),凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达量均上调,并且与给药剂量成正相关,而抗凋亡蛋白Bcl-2、PI3K/AKT3/mTOR信号通路的表达量则与给药剂量成负相关。盐酸青藤碱对家兔膝关节成纤维细胞的存活表现为显著的抑制作用,作用机制或与下调炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β的表达,并促进凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,抑制其下游PI3K/AKT3/mTOR信号通路的基因表达有关。结论盐酸青藤碱可抑制黏连性膝关节强直家兔膝关节成纤维细胞的炎症反应和加速成纤维细胞的凋亡,或可通过该机制为改善和治疗黏连性膝关节强直提供新的方法。

关键词：盐酸青藤碱黏连性膝关节强直家兔成纤维细胞

补骨脂素对溃疡性结肠炎小鼠肠道屏障及继发性肝损伤的改善作用

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天然产物研究与开发 2024年第7期36卷 1121-1129,1148页

作者：曹柳唐晓晴罗青牛梦园戴卫波广州中医药大学附属中山中医院中山市中医院中山528400

研究补骨脂素(psoralen,PSO)对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠的肠道屏障及继发性肝损伤的改善作用。40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(control,Con)、模型组(model,Mod)、阳性药柳氮磺吡啶组(sulfasalazine,SASP,200 mg/kg)、PSO低剂量组(PSO-L,20 mg/kg)和PSO高剂量组(PSO-H,40 mg/kg),通过自由饮用2.25%的葡聚糖硫酸钠盐(dextran sulfate sodium salt,DSS)7 d构建UC模型。实验期间记录小鼠的体重,疾病活动指数(disease activity index,DAI)。实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerasechain reaction,RT-qPCR)检测结肠中带状闭合蛋白-1(zonula occludens-1,ZO1)、闭合蛋白-1(Claudin-1)和闭锁蛋白(Occludin)的表达。生化试剂盒检测肝脏中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量。酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测肝脏脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)、C反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)以及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)含量。蛋白印迹(Western blot)法检测肝脏Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)以及磷酸化核因子κB(phosphorylated nuclear factor kappa-B,p-NF-κB)的表达。结果显示,与Mod组相比,经PSO治疗后,UC小鼠体重下降得到缓解、DAI评分下降、缓解了结肠长度的缩短;ZO1、Claudin-1和Occludin的mRNA的表达均上调;肝脏AST、ALT、AKP和LDH含量均下降;肝脏LPS、CRP、PCT、IL-6以及TNF-α含量均下降;下调了肝脏TLR4、MyD88以及p-NF-κB蛋白的表达。以上结果表明,PSO可以改善DSS诱导的小鼠肠道屏障功能,并通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路改善继发性肝损伤。

关键词：补骨脂素溃疡性结肠炎肠道屏障继发性肝损伤炎症

清热化瘀健脾方抑制小鼠结肠炎相关性结肠癌的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第8期30卷 83-90页

作者：郑燕秋游弋晖柯俊羽宋锦彬吴永强刘昌辉李燕舞广州中医药大学科技创新中心广州510405 广州中医药大学附属高州中医院广东高州525200 广州中医药大学中药学院广州510006

目的:探讨清热化瘀健脾方(QHJ)对小鼠结肠炎相关性结肠癌(CAC)的干预作用及相关机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为4组:正常组、模型组、QHJ低剂量(QHJ-L,10 g·kg^(-1))组、QHJ高剂量(QHJ-H,40 g·kg^(-1))组,除正常组外,采用氧化偶氮甲... 详细信息

目的:探讨清热化瘀健脾方(QHJ)对小鼠结肠炎相关性结肠癌(CAC)的干预作用及相关机制。方法:将C57BL/6小鼠随机分为4组:正常组、模型组、QHJ低剂量(QHJ-L,10 g·kg^(-1))组、QHJ高剂量(QHJ-H,40 g·kg^(-1))组,除正常组外,采用氧化偶氮甲烷(AOM)和葡聚糖硫酸钠(DSS)联合化学诱导CAC小鼠模型,造模时间14周。各药物组于第5周开始按剂量灌胃给药,每天1次至14周结束,正常及模型组平行给予等体积水。评估各组小鼠的生存率、结肠长度、质量及病理形态改变;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Wnt信号蛋白3a(Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)、非磷酸化β-连环蛋白(Non-p-β-catenin)、胆固醇结合糖蛋白133(CD133)表达;免疫组化(IHC)检测分化簇80(CD80)、CD11抗原样家族成员B(CD11b)蛋白的定位及表达。分离培养CAC小鼠来源的结肠类器官,检测Wnt信号通路相关蛋白表达。结果:QHJ可明显改善CAC小鼠生存率,抑制结肠瘤状体个数。与正常组比较,模型组小鼠结肠组织中Wnt3a、β-catenin、p-β-catenin、CD133蛋白表达水平均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,QHJ-L组Wnt3a、β-catenin水平显著降低(P<0.01),QHJ-H组Wnt3a、β-catenin、Non-p-β-catenin和CD133蛋白水平明显下降(P<0.05,P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠结肠中CD11b表达水平明显升高,而CD80水平明显降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,QHJ-L、QHJ-H组CD11b均明显降低,CD80均明显升高(P<0.05,P<0.01)。CAC模型小鼠结肠类器官中Non-p-β-catenin、CD133蛋白的表达均显著升高;而QHJ干预后可抑制模型小鼠结肠类器官Non-p-β-catenin、CD133蛋白的表达(P<0.01)。结论:QHJ可抑制CAC模型小鼠结肠炎-癌进程,其机制可能与调节微环境并抑制Wnt信号过度激活有关。

关键词：结肠炎相关性结肠癌清热化瘀健脾方 Wnt信号通路结肠类器官

基于概念操作化的以证统病干预性临床研究方法学框架的构建

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中国循证医学杂志 2024年第10期24卷 1192-1197页

作者：黄仟禤美玲郭晓慧曹文聪刘冰清邱幸莹周莉温泽淮广州中医药大学第二附属医院/广东省中医院广州510120 广州中医药大学第二临床医学院广州510405

目的借鉴社会学领域的概念操作化方法,建立中医以证统病干预性临床研究方法学框架。方法对以证统病临床研究模式进行操作化定义,明确方法学框架构建的范围和方向。开展概况性评价总结以证统病临床研究的设计特征,归纳方法学框架的基本... 详细信息

目的借鉴社会学领域的概念操作化方法,建立中医以证统病干预性临床研究方法学框架。方法对以证统病临床研究模式进行操作化定义,明确方法学框架构建的范围和方向。开展概况性评价总结以证统病临床研究的设计特征,归纳方法学框架的基本结构与内容,并通过深度访谈获取中医专家的观点及建议,完善充实方法学框架。开展问卷调查初步评价方法学框架的合理性。结果共纳入74项以证统病临床研究进行分析,访谈了12位中医临床及科研领域专家,综合文献及访谈研究的结果形成了初步方法学框架;共32位专家参与问卷调查,大多数专家对方法学框架的合理性持积极评价,根据专家意见修订确立的最终方法学框架为四级结构,共25个细目。结论本研究遵循国际通用的方法学框架开发步骤,建立了合理、可行的以证统病干预性临床研究方法学框架,为未来同类研究提供了设计、实施和评价的技术参考。

关键词：异病同治以证统病临床研究概念操作化方法学框架

黄连散改善特应性皮炎模型小鼠皮肤屏障及抗炎作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 19-27页

作者：何秋婷庞彩霞陈春木孙辉谭淑慧李宜桓梁奇刘翠玲广州中医药大学附属宝安中医院深圳市宝安区中医院广东深圳518133

目的:探讨黄连散对2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导的特应性皮炎(AD)模型小鼠的治疗作用。方法:将42只雄性BALB/c小鼠,随机分为正常组、模型组、氢化可的松组、黄连散油剂低、中、高剂量(0.3、0.6、1.2 g·kg^(-1))组、黄连散水提液(0.6 g·kg... 详细信息

目的:探讨黄连散对2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导的特应性皮炎(AD)模型小鼠的治疗作用。方法:将42只雄性BALB/c小鼠,随机分为正常组、模型组、氢化可的松组、黄连散油剂低、中、高剂量(0.3、0.6、1.2 g·kg^(-1))组、黄连散水提液(0.6 g·kg^(-1))组。除正常组外,其余组均于小鼠背部涂抹DNCB以建立AD模型。在DNCB刺激后的第15天各组给予相应药物或溶剂,观察并记录小鼠皮损变化、皮炎评分、抓挠次数;苏木素-伊红(HE)染色观察皮肤和脾脏组织病理学改变;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测皮肤中丝聚蛋白(FLG)、兜甲蛋白(LOR)、内披蛋白(IVL)及脾脏免疫球蛋白E(lgE)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的mRNA水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠皮肤出现红肿、结痂等症状,皮炎评分、抓挠次数和脾脏指数均上升(P<0.05),皮肤组织中FLG、LOR、IVL的表达水平显著降低(P<0.01),脾脏中IgE、IL-4、IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达量显著升高,IFN-γ的表达量显著降低(P<0.01);与模型组比较,各药物组小鼠皮肤红斑、鳞屑及结痂等症状均有不同程度减轻,皮炎评分、抓挠次数及脾脏指数有所下降(P<0.05,P<0.01);此外,药物组小鼠皮肤中FLG、LOR、IVL的表达水平升高(P<0.05,P<0.01),脾脏中IgE、IL-4、IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达量减少,IFN-γ升高(P<0.05,P<0.01),皮肤和脾组织病变情况均有不同程度改善,以黄连散油剂中剂量组和氢化可的松组最为明显(P<0.05,P<0.01);且黄连散油剂中剂量组各指标均优于黄连散水提液组。结论:黄连散可能通过上调皮肤屏障蛋白表达水平,抑制辅助性T细胞2(Th2)相关炎症因子表达,提高辅助性T细胞1(Th1)炎症因子表达,恢复皮肤屏障功能及脾脏中Th1/Th2平衡,抑制AD小鼠脾脏组织炎症反应,从而缓解AD;黄连散油剂比水剂效果更佳。

关键词：黄连散特应性皮炎皮肤屏障脾脏辅助性T细胞(Th)1/Th2平衡炎症因子

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基于临床实践指南选择糖尿病中医研究问题

中国循证医学杂志 2024年第10期24卷 1162-1171页

作者：程婷唐淇于东东李庚温泽淮广州中医药大学第二临床医学院广州510405 安徽中医药大学第一附属医院合肥230031 广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院) 广州510120 广州中医药大学科技创新中心广州510405

目的系统分析目前中医临床实践指南中糖尿病研究证据分布情况。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library、CNKI、WanFang Data、VIP、CBM数据库及相关指南网站,搜集2023年12月之前发布的中医、中西医结合有关糖尿病的指南。对... 详细信息

目的系统分析目前中医临床实践指南中糖尿病研究证据分布情况。方法计算机检索PubMed、Embase、Cochrane Library、CNKI、WanFang Data、VIP、CBM数据库及相关指南网站,搜集2023年12月之前发布的中医、中西医结合有关糖尿病的指南。对纳入指南的证据分布信息进行系统梳理。结果27部糖尿病相关中医指南的内容主要涵盖了辨证论治、专病专药、饮食、外治法、传统功法等方面。纳入的指南涉及三种证据分级标准,其总体证据级别主要集中于中、低水平(67.3%),其中糖尿病骨质疏松症、糖尿病心肌病、糖尿病前期、糖尿病周围神经病变相关指南中高等级证据占比较低,分别仅有7.2%、7.6%、13.2%和13.3%。仅糖尿病肾病指南有关于中药毒性的证据信息,其他指南均未涉及。针刺、太极拳、八段锦等特色疗法在不同类型并发症中的证据级别存在较大差异。低级别证据主要集中于糖尿病及相关并发症的辨证论治、辨症治疗、辨体征治疗、辨指标治疗、中成药、专病专方等方面。结论目前,指南中低/无证据支持的意见、新增主题、指南间不一致内容、交叉靶点的证据源、经典名方、中药毒性、中医特色疗法等可以为今后糖尿病中医研究提供选题方向,倡议针对性解决糖尿病相关重要问题,从而提高研究价值,减少不必要、重复研究和资源浪费,推进中医糖尿病研究领域的良性发展。

关键词：糖尿病指南中医药证据问题

多组学分析揭示溃疡性结肠炎缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证间的潜在分子机制及靶向中药预测

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中草药 2024年第9期55卷 3041-3056页

作者：黎祖鸣封杰妮陈雪如陈剑坤卢月李际强冯艳广州中医药大学第二临床医学院广东广州510405 广州中医药大学第二附属医院(广东省中医院) 广东广州510006

目的综合分析溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)相关scRNA-seq和RNA-seq数据集,探讨UC缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证间的潜在分子机制,并挖掘潜在干预中药。方法运用差异基因表达分析和韦恩图鉴定出UC缓解期脾虚湿困证和活动... 详细信息

目的综合分析溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)相关scRNA-seq和RNA-seq数据集,探讨UC缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证间的潜在分子机制,并挖掘潜在干预中药。方法运用差异基因表达分析和韦恩图鉴定出UC缓解期脾虚湿困证和活动期湿热阻滞证相关基因及两者间的对话基因。通过京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)、基因集变异分析(gene set variation analysis,GSVA)及Spearman相关性分析深入探讨对话基因参与的生物过程及潜在功能。通过单细胞转录组分析探讨UC缓解期与活动期的差异情况及对话基因在其中的作用。基于循环算法构建UC缓解期脾虚湿困证向活动期湿热阻滞证发生发展的风险预测模型。运用外部数据集、动物实验与实时定量聚合酶链反应(realtime quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)进一步验证对话基因的表达情况。借助SoFDA数据库构建“基因-中医症状/现代医学症状”网络;借助TCMIP和COREMINE数据库预测对话基因的潜在靶向中药。结果鉴定出31个UC缓解期脾虚湿困证相关基因,其主要富集在代谢相关途径;鉴定出160个UC活动期湿热阻滞证相关基因,其主要富集在炎症免疫相关途径。鉴定出22个UC缓解期脾虚湿困证与活动期湿热阻滞证之间的对话基因,上调对话基因与炎症免疫相关途径呈显著相关性,下调对话基因与代谢途径呈显著相关性。单细胞转录组分析显示,相比于正常对照及UC缓解期,UC活动期中B细胞占比上调;B细胞在UC活动期湿热阻滞证中作用贡献较大,而在UC缓解期脾虚湿困证中的作用贡献较小;UC活动期B细胞的受体信号通路活性明显高于UC缓解期;上调的对话基因CD55在B细胞中表达水平较高,CD55+B细胞与CD55−B细胞之间存在差异的细胞通讯及细胞代谢水平。6个风险预测基因(CD55、PCSK1、SERPING1、ACAT1、SLC26A2、HMGCS2)可以较为准确预测UC缓解期脾虚湿困证向UC活动期湿热阻滞证发展,动物实验及RT-PCR验证了其表达水平。通过数据库检索得到人参、黄芪、枸杞子等45味潜在靶向中药。结论鉴定出22个关键对话基因,它们可能通过影响炎症免疫和代谢相关途径诱导UC缓解期脾虚湿困证向UC活动期湿热阻滞证发展。B细胞在UC缓解期脾虚湿困证向活动期湿热阻滞证发生发展过程中发挥重要作用。CD55可能通过影响炎症免疫和代谢相关途径,促进B细胞活性,从而促进UC缓解期脾虚湿困证向活动期湿热阻滞证发展。22个关键对话基因与UC相关中医症状和现代医学症状关联密切。

关键词：溃疡性结肠炎单细胞转录组转录组缓解期脾虚湿困证活动期湿热阻滞证人参黄芪枸杞子

心理一致感视角下晚期癌症患者疾病应对体验的质性研究

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中华护理杂志 2024年第5期59卷 526-532页

作者：黄咏琪田霞王峥孙咪咪周丽群肖文莉广州中医药大学护理学院广州市510006 广州中医药大学第一附属医院肿瘤中心

目的在心理一致感视角下,探索晚期癌症患者的疾病应对体验,为识别其应对资源、制订有效的应对策略提供参考依据。方法采用描述性质性研究法,通过目的抽样,于2023年3月—5月对广州市某三级甲等医院肿瘤中心收治的18例晚期癌症患者进行半... 详细信息

目的在心理一致感视角下,探索晚期癌症患者的疾病应对体验,为识别其应对资源、制订有效的应对策略提供参考依据。方法采用描述性质性研究法,通过目的抽样,于2023年3月—5月对广州市某三级甲等医院肿瘤中心收治的18例晚期癌症患者进行半结构式访谈,采用定向内容分析法对访谈结果进行归纳和提炼主题。结果共归纳出3个主题:①理解疾病经历,包括反思健康行为、正视患病事实、接受生命规律;②管理疾病威胁,包括应对多重困难、调动应对资源;③体会疾病应对意义,包括认同疾病应对意义、感知疾病获益、做好人生规划。结论有效的应对资源可帮助晚期癌症患者应对患病过程中的多重困难。医护人员应加强癌症相关知识宣教,帮助晚期癌症患者挖掘积极应对资源,并强化疾病应对意义,从而增强患者的疾病应对能力,促进其身心健康。

关键词：心理一致感晚期癌症应对体验质性研究护理

改良双反牵引技术与传统切开复位治疗胫骨平台骨折的疗效比较

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中华创伤骨科杂志 2024年第2期26卷 118-124页

作者：李焕坤李艳红黄东杰胡栢均高大伟吴宇峰唐剑邦陈红俊桑莉莉广州中医药大学附属中山中医院骨三科中山528400

目的比较改良双反牵引技术与传统切开复位治疗胫骨平台骨折的疗效。方法回顾性分析2017年1月至2022年12月广州中医药大学附属中山中医院骨三科行手术治疗的70例SchatzkerⅣ、Ⅴ型胫骨平台骨折患者资料。根据治疗方式不同分为2组:观察组... 详细信息

目的比较改良双反牵引技术与传统切开复位治疗胫骨平台骨折的疗效。方法回顾性分析2017年1月至2022年12月广州中医药大学附属中山中医院骨三科行手术治疗的70例SchatzkerⅣ、Ⅴ型胫骨平台骨折患者资料。根据治疗方式不同分为2组:观察组(使用改良双反牵引技术治疗)和对照组(采用传统切开复位治疗)。观察组37例,男20例,女17例;年龄(44.6±13.5)岁;骨折根据Schatzker分型:Ⅳ型9例,Ⅴ型28例。对照组33例,男18例,女15例;年龄(45.9±13.7)岁;骨折根据Schatzker分型:Ⅳ型10例,Ⅴ型23例。术后观察比较两组患者手术时间、主手术切口长度、术中出血量、出院前Rasmussen影像学评分、术后6个月美国特种外科医院(HSS)膝关节功能评分、术后6个月疼痛视觉模拟评分(VAS)、术后6个月骨折愈合率和并发症发生率。结果两组患者术前一般资料比较差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。所有患者术后获(14.3±1.4)个月随访。观察组患者的手术时间[(113.9±11.4)min]、主手术切口长度[4(4,5)cm]、术中出血量[30(20,35)mL]、术后6个月疼痛VAS评分[0(0,0)分]、术后6个月HSS评分[(89.8±3.1)分]均显著优于对照组[(151.8±10.4)min,6(6,7)cm、55(50,65)mL、0(0,1)分、(86.0±3.5)分],差异均有统计学意义(P0.05)。结论双反牵引技术微创治疗SchatzkerⅣ、Ⅴ型胫骨平台骨折相较于传统切开复位,手术时间更短、手术切口更小、术中出血量更少,术后疼痛评分和膝关节功能评分优势明显,疗效显著,值得临床应用推广。

关键词：膝关节胫骨骨折牵引术外科手术,微创性