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盐酸青藤碱诱导黏连性膝关节强直家兔成纤维细胞凋亡的机制研究

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生物化学与生物物理进展 2024年第4期51卷 959-968页

作者：侯新聚雷洪峰陈勇黎芙希孙敬宁刘佳铭马红梅南昌市洪都中医院南昌330008 广州中医药大学第四临床医学院广州510006 广州中医药大学第二临床医学院广州510006

目的观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因表达的影响,并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法以体外培养法培养成纤维细胞,并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞... 详细信息

目的观察盐酸青藤碱对膝关节黏连强直的家兔成纤维细胞增殖和相关基因表达的影响,并进一步尝试探讨其对抗膝关节黏连强直的作用机制。方法以体外培养法培养成纤维细胞,并设对照组、盐酸青藤碱低中高浓度实验组。CCK-8法检测成纤维细胞增殖的情况;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)法检测经过盐酸青藤碱处理后,成纤维细胞相关基因mRNA表达的改变,用ELISA法检测药物的作用对血清中炎症因子等水平的影响,蛋白质印迹法(Western blot)检测相关蛋白质的表达。结果盐酸青藤碱能降低成纤维细胞存活率,且随浓度升高存活率逐渐降低。盐酸青藤碱中各个组的效果均十分明显(P<0.05)。在相关基因的mRNA表达层面,与对照组比较,盐酸青藤碱各组炎症因子均显著下调(P<0.05),凋亡蛋白的表达量显著上升、Bcl-2的mRNA表达量下降(P<0.05),而PI3K/mTOR/AKT3信号通路分子的mRNA表达量均下降(P<0.05)。在蛋白质表达层面,与对照组相比较,中、高剂量盐酸青藤碱组血清中炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β、TGF-β的水平均明显下调(P<0.05),凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达量均上调,并且与给药剂量成正相关,而抗凋亡蛋白Bcl-2、PI3K/AKT3/mTOR信号通路的表达量则与给药剂量成负相关。盐酸青藤碱对家兔膝关节成纤维细胞的存活表现为显著的抑制作用,作用机制或与下调炎症因子IL-6、IL-8、IL-1β的表达,并促进凋亡蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3/7及Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,抑制其下游PI3K/AKT3/mTOR信号通路的基因表达有关。结论盐酸青藤碱可抑制黏连性膝关节强直家兔膝关节成纤维细胞的炎症反应和加速成纤维细胞的凋亡,或可通过该机制为改善和治疗黏连性膝关节强直提供新的方法。

关键词：盐酸青藤碱黏连性膝关节强直家兔成纤维细胞

皮肤黑色素瘤差异表达基因的生物信息学分析及调控中药预测

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中草药 2024年第2期55卷 551-562页

作者：王梓霞黄羽欣谢锦楠王沐瑶王文辉广州中医药大学第二临床医学院广东广州510006 广州中医药大学第一临床医学院广东广州510499 广州中医药大学东莞医院广东东莞523000

目的通过生物信息学技术分析皮肤黑色素瘤患者皮肤组织与非癌皮肤组织的基因表达微阵列数据,筛选出皮肤黑色素瘤的差异表达基因,预测可用于诊断和治疗皮肤黑色素瘤的生物标志物及潜在中药。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omni... 详细信息

目的通过生物信息学技术分析皮肤黑色素瘤患者皮肤组织与非癌皮肤组织的基因表达微阵列数据,筛选出皮肤黑色素瘤的差异表达基因,预测可用于诊断和治疗皮肤黑色素瘤的生物标志物及潜在中药。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)提取GSE3189、GSE114445、GSE46517基因芯片,使用GEO2R工具筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。利用DAVID数据库对DEGs进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析;使用String数据库构蛋白-蛋白互作网络,应用Cytoscape软件及其插件筛选PPI网络中关键基因,应用GSCA数据库进行关键基因的突变分析。通过Gepia 2.0数据库结合癌症基因组图谱数据集(Cancer Genome Atlas,TCGA)对关键基因进行生存分析。根据度(degree)值和生存分析结果综合筛选出核心基因(集),应用GSCA数据库对核心基因(集)进行泛癌分析和免疫浸润分析,并使用TIMER 2.0数据库对核心基因分别进行免疫浸润分析。使用Coremine Medical数据库预测作用于关键基因的潜在中药。结果共筛选出DEGs 114个,其中上调基因36个,下调基因78个。上调DEGs主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、Toll样受体信号等通路,下调DEGs主要富集在细胞黏附、细胞增殖的正调控等方面。15个关键基因为EGFR、KPNA2、GATA3、AURKA、TYMS、PKP1、SPP1、MMP1、KLF4、EPCAM、KIF23、DTL、CLDN1、LCP2、FGFR2,其中共3个基因KPNA2、AURKA、DTL被视为核心基因(集)。潜在治疗中药有丹参、人参、构皮、高良姜、甘草、蓖麻子、油桐叶等。结论皮肤黑色素瘤中关键基因的突变以FGFR2的错义突变为主,突变方式多为胞嘧啶(C)向胸腺嘧啶(T)的转换。EGFR、KPNA2、GATA3、AURKA、PKP1、DTL、LCP2对皮肤黑色素瘤的生存预后存在显著影响。核心基因集在多种癌症中显著上调,并与自然调节性T细胞(natural regulatory T-cells,nTreg)细胞、树突状细胞、单核细胞等免疫细胞的浸润有关。潜在调控中药包括补虚药、清热解毒药、拔毒生肌药、消肿拔毒药、温里药、健脾利湿药、利水渗湿药、活血化瘀药、安神药9类,在相关古籍中存在对应的中医内外治经验记载,其中药活性成分亦被证明对皮肤黑色素瘤存在一定的调控和抑制作用。

关键词：皮肤黑色素瘤差异表达基因核心基因中药预测生物信息学丹参人参构皮高良姜甘草蓖麻子油桐叶

电针“四白”和“颧髎”激活小鼠躯体感觉运动皮层的兴奋性神经元

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针刺研究 2024年第5期49卷 480-486页

作者：张芷晴申晨薇陈明权杜梓霏陈秋怡姬昌张文捷许能贵刘健华广州中医药大学广州510006 广州中医药大学第二临床医学院广州510120 广州中医药大学针灸康复临床医学院华南针灸研究中心广州510006 广州中医药大学基础医学院广州510006 暨南大学第一附属医院广州510630

目的:探讨电针“四白”和“颧髎”对小鼠躯体感觉皮层和初级运动皮层神经元的激活状态及其分型的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组和电针组,每组6只。电针组电针“四白”和“颧髎”,干预30 min。采用免疫荧光染色法观察躯体... 详细信息

目的:探讨电针“四白”和“颧髎”对小鼠躯体感觉皮层和初级运动皮层神经元的激活状态及其分型的影响。方法:雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组和电针组,每组6只。电针组电针“四白”和“颧髎”,干预30 min。采用免疫荧光染色法观察躯体感觉皮层和初级运动皮层即刻早期基因c-Fos的阳性细胞密度,以及c-Fos阳性细胞和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)/γ-氨基丁酸(GABA)共表达细胞的百分比,分析电针后躯体感觉皮层和初级运动皮层c-Fos神经元的类型。另取10只小鼠,采用光纤钙成像技术分别观察电针前后躯体感觉皮层和初级运动皮层兴奋性神经元钙活动的变化。结果:在躯体感觉皮层和初级运动皮层中,电针组的c-Fos阳性细胞密度显著高于空白组(P<0.05)。在躯体感觉皮层和初级运动皮层中,电针组c-Fos和CaMKⅡ共表达细胞百分比显著高于空白组(P<0.01)。光纤记录钙成像结果显示,与电针前相比,电针期间躯体感觉皮层和初级运动皮层兴奋性神经元的自发钙活动显著上升(P<0.01);电针后,其自发钙活动较电针期间显著降低(P<0.05)。结论:在生理状态下,针刺“四白”和“颧髎”能够有效激活躯体感觉皮层和初级运动皮层的兴奋性神经元。

关键词：电针躯体感觉皮层初级运动皮层四白颧髎

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基于少阳枢机理论分期辨治帕金森病“开-关”现象

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中华中医药杂志 2024年第3期39卷 1324-1327页

作者：刘鑫范靖琪严明月黎颖佳陈缘缘庄礼兴广州中医药大学第一临床医学院广州510410 广州中医药大学针灸康复临床医学院广州510006 广州中医药大学第一附属医院广州510410

帕金森病“开-关”现象是帕金森病的重要运动并发症之一,“开”期与“关”期的症状波动严重影响患者日常生活。少阳枢机不利是帕金森病“开-关”现象的根本病机,治疗上分为“开”期开折与“关”期合折两个时期,以和解枢机为主要治疗原则... 详细信息

帕金森病“开-关”现象是帕金森病的重要运动并发症之一,“开”期与“关”期的症状波动严重影响患者日常生活。少阳枢机不利是帕金森病“开-关”现象的根本病机,治疗上分为“开”期开折与“关”期合折两个时期,以和解枢机为主要治疗原则,使用小柴胡汤作为主方进行加减化裁、分期辨治,或运枢转合,或运枢转开,令枢机调畅,“开-关”自解。

关键词：帕金森病 “开-关”现象运动障碍症状波动少阳枢机

基于网络药理学、分子对接和动物实验探究柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤治疗脑卒中后抑郁的作用机制

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中国免疫学杂志 2024年第5期40卷 1082-1088,1095页

作者：马红梅刘佳铭陈奇祺张振瑜黄志强陈勇雷洪峰侯新聚南昌市洪都中医院南昌330000 广州中医药大学第二临床医学院广州510405 广州中医药大学针灸康复临床医学院广州510006 广州中医药大学第一临床医学院广州510405

目的:基于网络药理学、分子对接与动物实验探究柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤治疗脑卒中后抑郁(PSD)的作用机制。方法:利用TCMSP等数据库预测柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤的活性成分及靶点;在PharmGKB等数据库检索PSD疾病靶点,利用Cytoscape(v ... 详细信息

目的:基于网络药理学、分子对接与动物实验探究柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤治疗脑卒中后抑郁(PSD)的作用机制。方法:利用TCMSP等数据库预测柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤的活性成分及靶点;在PharmGKB等数据库检索PSD疾病靶点,利用Cytoscape(v 3.9.1)建立交集靶点网络,String(v11.5)数据库构建PPI网络,利用DAVID 6.8数据库进行GO富集及KEGG通路分析;运用AutoDock vina(v 1.1.2)软件进行分子对接,并使用Pymol(v 2.5)等软件进行可视化分析;动物实验设置空白组、模型组、盐酸氟西汀组、中药组、中药+盐酸氟西汀组,给药21 d后检测各组大鼠神经行为学评分、脑组织内神经递质以及炎症因子表达,RT-qPCR和Western blot检测关键基因PPARG、MAPK3、AKT1、PIK3CA mRNA及蛋白表达。结果:得到柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤活性成分225种,作用于PSD的靶点119个,关键靶点包括MAPK3、AKT1、PIK3CA、PPARG,关键通路包括MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等。与模型组比较,中药组与中药+盐酸氟西汀组MAPK3 mRNA及蛋白表达降低,AKT1、PIK3CA、PPARG mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。结论:柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤治疗PSD的作用机制可能与抑制MAPK3表达、促进AKT1、PIK3CA、PPARG表达,减缓脑组织炎症反应和氧化应激有关。

关键词：柴胡龙骨牡蛎合甘麦大枣汤脑卒中后抑郁网络药理学分子对接动物实验

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基于NLRP3炎症小体探讨补冲调经方对卵巢储备功能减退模型大鼠卵巢组织铁死亡的作用及机制

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：王艺绚李祖昂郑允玲李堉成罗颂平朱玲广州中医药大学第一临床医学院广州中医药大学岭南医学研究中心广州中医药大学第一附属医院

目的:从NLRP3炎症小体和铁死亡角度探讨补冲调经方对卵巢储备功能减退（DOR）大鼠的疗效作用机制。方法:将48只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、补冲调经方低、中、高剂量组和MCC950组，每组8只。除正常组外，其余各组大鼠均于颈背... 详细信息

目的:从NLRP3炎症小体和铁死亡角度探讨补冲调经方对卵巢储备功能减退（DOR）大鼠的疗效作用机制。方法:将48只雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、补冲调经方低、中、高剂量组和MCC950组，每组8只。除正常组外，其余各组大鼠均于颈背部皮下注射D-半乳糖制备DOR大鼠模型。从造模第15天起，对补冲调经方低、中、高剂量组大鼠分别以每日14.4、28.8、57.6 g·kg-1的剂量灌胃。MCC950组大鼠予腹腔注射MCC950 10 mg·kg-1，隔日1次。各组连续给药4周。阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期；HE染色观察卵巢中卵泡和黄体发育情况；生化及酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清性激素及白细胞介素1-β（IL-1β）的水平；实时荧光定量PCR（qPCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢NOD样受体热蛋白结构域蛋白3（NLRP3）炎症小体、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（ACSL4）、转铁蛋白受体1（TFR1）和谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）的mRNA和蛋白表达；氧化应激试剂盒检测卵巢超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量。结果:实验过程中补冲调经方高剂量组有1只大鼠死亡，最终共有47只大鼠纳入指标检测和统计。与空白组比较，模型组大鼠动情周期明显紊乱，闭锁卵泡数量增多，血清性激素水平明显紊乱。卵巢组织NLRP3炎症小体、ACSL4和TFR1的mRNA和蛋白表达上调，而GPX4的mRNA和蛋白表达显著下调（P＜0.01），卵巢SOD含量显著降低，MDA含量升高（P＜0.01）。药物干预后，大鼠动情周期基本恢复规律，各级卵泡结构更完整且数量明显增多，血清性激素和IL-1β水平显著改善，卵巢NLRP3炎症小体、ACSL4和TFR1的mRNA和蛋白表达下调，GPX4的mRNA和蛋白表达显著上调，卵巢氧化应激水平明显减轻（P＜0.05，P＜0.01），其中尤以补冲调经方高剂量组和MCC950组效果明显。结论:DOR大鼠卵巢发生炎性损伤和铁死亡，补冲调经方能够抑制卵巢NLRP3炎症小体，减轻卵巢铁死亡程度，提高卵巢储备。

关键词：卵巢储备功能减退补冲调经方 NOD样受体热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体铁死亡氧化应激

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“导气同精”发陈

中华中医药杂志 2024年第5期39卷 2244-2247页

作者：刘鑫孙雅雯许小燕庄礼兴贺君广州中医药大学第一临床医学院广州510410 广州中医药大学第一附属医院广州510410

导气同精为《灵枢·五乱》中所载的针刺手法,“徐入徐出,谓之导气,补泻无形,谓之同精”。历代医家对于“导气同精”有不同的理解。文章从《黄帝内经》出发,通过梳理隋代杨上善、金代李东垣、清代黄元御及现代不同医家对于“导气同精”... 详细信息

导气同精为《灵枢·五乱》中所载的针刺手法,“徐入徐出,谓之导气,补泻无形,谓之同精”。历代医家对于“导气同精”有不同的理解。文章从《黄帝内经》出发,通过梳理隋代杨上善、金代李东垣、清代黄元御及现代不同医家对于“导气同精”的见解,思考“导气同精”的内涵,认为“导气同精”不是一种针刺补泻的手法,而是一种将逆乱之气导引顺治的针刺手法。临床中可将“导气同精”这一针刺手法运用于各种气机逆乱所致之证,并选用胸、腹、头、胫四气街局部的相关穴位进行治疗,为针刺临床治疗提供另一种治疗选择。

关键词：针刺手法导气法同精法东垣针法《黄帝内经》

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人迎寸口脉针法在儿科疾病的思考及应用

中华中医药杂志 2024年第4期39卷 1835-1839页

作者：董秀兰袁靖沣刘滨赵楷波苏浩东庄礼兴广州中医药大学第一附属医院广州510405 广州中医药大学第一临床医学院广州510405 广州中医药大学第四临床医学院深圳518033 广州中医药大学深圳临床医学院深圳518116 广州中医药大学第一附属医院岭南针灸康复研究所广州510405

《黄帝内经》所载人迎寸口脉针法,是通过辨别阴阳虚实、经脉脏腑病变,用针刺补虚泻实的手法,以达到阴阳调和、邪祛正安的作用。通过对《黄帝内经》人迎寸口脉针法的操作方法和思路进行解读,有如下几个方面值得我们去思考:①人迎寸口脉... 详细信息

《黄帝内经》所载人迎寸口脉针法,是通过辨别阴阳虚实、经脉脏腑病变,用针刺补虚泻实的手法,以达到阴阳调和、邪祛正安的作用。通过对《黄帝内经》人迎寸口脉针法的操作方法和思路进行解读,有如下几个方面值得我们去思考:①人迎寸口脉的具体定位;②“盛”的界定;③“躁”的判定;④双侧脉象对比不一致时的补泻;⑤治疗时取穴方法;⑥补泻手法及治疗时间;⑦人迎寸口脉针法的禁忌。因小儿脏器轻灵,随拨即应,人迎寸口脉针刺法对儿科常见病、疑难病及急危重症的临床效果令人满意。

关键词：人迎寸口脉针法儿科《黄帝内经》调和阴阳守神

益气活血方介导巨噬细胞极化影响慢性难愈性创面的机制研究

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海南医学院学报 2024年

作者：任悦怡陈鑫球张芝桐姜自伟董航黄枫广州中医药大学第一临床医学院广州中医药大学第一附属医院

目的：基于网络药理学、分子对接及细胞实验探究黄枫教授经验方益气活血方（YQHXF）介导巨噬细胞极化治疗慢性难愈性创面（CRW）的作用机制。方法：结合网络药理学和分子对接技术，分析并验证YQHXF影响CRW潜在靶点。CCK8检测YQHXF和LPS... 详细信息

目的：基于网络药理学、分子对接及细胞实验探究黄枫教授经验方益气活血方（YQHXF）介导巨噬细胞极化治疗慢性难愈性创面（CRW）的作用机制。方法：结合网络药理学和分子对接技术，分析并验证YQHXF影响CRW潜在靶点。CCK8检测YQHXF和LPS对Raw264.7巨噬细胞和增殖活性的影响，利用LPS建立RAW264.7细胞炎症模型，并加入JAK2信号通路激活剂香豆霉素a1（C-a1)和YQHXF含药血清干预，分组如下：Raw264.7 组（对照组）、Raw264.7+LPS组（模型组）、Raw264.7+LPS+YQHXF组、Raw264.7+LPS+YQHXF+C-a1组、Raw264.7+LPS+C-a1组，流式细胞术检测Raw264.7细胞极化情况；RT-qPCR和ELISA检测炎症因子IL-4、IL-6、IL-13、TNF-α的转录及表达，Western Blot检测JAK2/STAT3通路磷酸化情况。结果：网络药理学与分子对接研究发现，YQHXF可能通过介导JAK2/STAT3信号通路调控巨噬细胞极化，调节炎症因子表达，促进CRW的愈合。细胞实验结果表明，YQHXF可显著提高巨噬细胞增殖活性（P＜0.05）；模型组和C-a1组JAK2和STAT3磷酸化、M1型巨噬细胞比例、IL-6和TNF-α转录和蛋白表达明显高于对照组（P＜0.05）；与模型组和C-a1组比较，加入YQHXF处理可显著降低JAK2和STAT3磷酸化、M1型巨噬细胞比例、IL-6和TNF-α转录和蛋白表达水平（P＜0.05），提高M2型巨噬细胞比例、IL-4、IL-13转录和蛋白表达水平（P＜0.05）。结论： YQHXF可能通过增强巨噬细胞增殖活性，抑制JAK2、STAT3磷酸化，正向调控巨噬细胞M2抗炎表型极化，抑制M1促炎表型极化，减轻炎症反应，达到治疗效果。

关键词：名医经验慢性难愈性创面网络药理学分子对接 JAK2-STAT3 巨噬细胞极化