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肝靶向干扰素(IFN-CSP)融合基因原核表达条件的优化

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生物医学工程学杂志 2014年第2期31卷 432-438页

作者：黄演婷卢雪梅汪洁金小宝朱家勇广东药学院药用生物活性物质研究所广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006

本研究目的是优化肝靶向干扰素(IFN-CSP)在大肠杆菌中的诱导表达条件,以提高蛋白表达量。通过考查培养基pH值、诱导剂IPTG浓度、诱导温度、诱导时间和起始菌浓度等五个因素对IFN-CSP融合基因原核表达量的影响,在此基础上,从上述影响因... 详细信息

本研究目的是优化肝靶向干扰素(IFN-CSP)在大肠杆菌中的诱导表达条件,以提高蛋白表达量。通过考查培养基pH值、诱导剂IPTG浓度、诱导温度、诱导时间和起始菌浓度等五个因素对IFN-CSP融合基因原核表达量的影响,在此基础上,从上述影响因素中各选取4个水平进行正交实验作进一步分析。结果表明,起始菌浓度和诱导温度为影响表达的主要因素,最佳组合诱导条件为OD600为0.8时开始诱导、诱导4h、诱导温度37℃、诱导剂IPTG浓度0.4mmol/L、培养基pH值为6.0,融合蛋白的表达量高达74.3%。通过表达优化后,IFN-CSP的产量为688.8mg/L,提高了1.2倍。这为进一步制定生产工艺和评价IFN-CSP的生物活性奠定基础。

关键词：肝靶向干扰素大肠杆菌优化表达正交设计实验

关键的信号网络节点作为五没食子酰基葡萄糖的药效靶位的研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2011年第4期25卷 407-412页

作者：石大禹金小宝朱家勇广东药学院药用生物活性研究所广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006

五没食子酰基葡萄糖(PGG)是一种来自于多种药用植物的天然多酚化合物。使用体外细胞或体内动物模型的研究表明,PGG具有抗癌、抗糖尿病以及细胞保护的药物效应。对PGG生物学活性分子机制的研究逐渐发现其在细胞中具有各种药效靶位,而这... 详细信息

五没食子酰基葡萄糖(PGG)是一种来自于多种药用植物的天然多酚化合物。使用体外细胞或体内动物模型的研究表明,PGG具有抗癌、抗糖尿病以及细胞保护的药物效应。对PGG生物学活性分子机制的研究逐渐发现其在细胞中具有各种药效靶位,而这些靶位是细胞信号转导网络中的关键节点,PGG的多靶位性与其药效多样性是相对应的。本文综述了PGG作用于细胞信号转导网络中各个节点从而实现其药学效应的研究进展。

关键词：五没食子酰基葡萄糖信号传导

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疟原虫环子孢子蛋白的研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第3期30卷 238-242页

作者：黄演婷卢雪梅金小宝朱家勇广东药学院药用生物活性物质研究所广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006

环子孢子蛋白(circumsporzoite protein,CSP)是疟原虫成熟子孢子表面的锚定蛋白,约含400个氨基酸,由N端保守I区、种属特异性的中央重复区和C端保守Ⅱ区构成。CSP在疟原虫的迁移、靶细胞入侵和增殖过程中发挥重要作用。近年研究显示,CSP... 详细信息

环子孢子蛋白(circumsporzoite protein,CSP)是疟原虫成熟子孢子表面的锚定蛋白,约含400个氨基酸,由N端保守I区、种属特异性的中央重复区和C端保守Ⅱ区构成。CSP在疟原虫的迁移、靶细胞入侵和增殖过程中发挥重要作用。近年研究显示,CSP在疟疾疫苗和靶向给药系统中具有良好的应用前景。本文对疟原虫CSP的结构特征、功能及其应用前景作一综述。

关键词：疟原虫环子孢子蛋白疟疾疫苗靶向给药系统

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蛹虫草液体发酵过程主要活性成分的代谢变化

中药材 2016年第9期39卷 1966-1970页

作者：曹灵杰卢雪梅金小宝朱家勇广东药科大学基础学院药用生物活性物质研究所/广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006

目的:研究蛹虫草在液体发酵过程中主要活性成分的累积与代谢变化。方法:选取蛹虫草菌种GIM5.270,在基本发酵条件下延长发酵时间至20 d,通过含量分析方法检测每24 h时间间隔后生物量、虫草多糖、虫草酸、腺苷、虫草素在发酵体系中的累积... 详细信息

目的:研究蛹虫草在液体发酵过程中主要活性成分的累积与代谢变化。方法:选取蛹虫草菌种GIM5.270,在基本发酵条件下延长发酵时间至20 d,通过含量分析方法检测每24 h时间间隔后生物量、虫草多糖、虫草酸、腺苷、虫草素在发酵体系中的累积与动态变化。结果:复合氮源组成的基础培养基比单一氮源组成所产生的生物量更高,随着时间发展,菌丝体生物量越来越高,虫草多糖与虫草酸(D-甘露醇)先增高后降低,腺苷逐渐降低,虫草素(3-脱氧腺苷)逐渐增高。结论:随着时间的发展,整个体系会吸收自身产生的营养物质出现自溶现象,本研究探索了主要活性成分在发酵体系中的代谢变化,确定了主要活性成分的最佳收集时间,为提高活性成分的产率提供依据。

关键词：蛹虫草发酵活性成分含量

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玛咖特征活性成分研究进展

天然产物研究与开发 2015年第12期27卷 2149-2156页

作者：邵炎李芸刘涛广东药学院药用生物活性物质研究所广东省生物活性药物研究重点实验室广东药学院中药学院广州510006

玛咖酰胺类化合物是新资源食品玛咖中特征性活性成分,目前已报道的单体化合物数目已有三十余种,它们不具有典型的生物碱特性且极性较小。在玛咖的提取物中,玛咖酰胺类化合物的含量可达0.15%~0.97%,在玛咖生物功效中发挥着微量高效的作... 详细信息

玛咖酰胺类化合物是新资源食品玛咖中特征性活性成分,目前已报道的单体化合物数目已有三十余种,它们不具有典型的生物碱特性且极性较小。在玛咖的提取物中,玛咖酰胺类化合物的含量可达0.15%~0.97%,在玛咖生物功效中发挥着微量高效的作用。基于玛咖独特的药食两用价值,其特征性活性成分已成为国内外学者和市场广泛研究和关注的热点,但在玛咖酰胺分离提取、生物功效评价和产品深度开发等领域仍存在诸多亟待解决的问题。本文综述了玛咖酰胺的结构、提取分离方法、生物功效和商业用途,并对其进一步研究和开发进行了展望,以期对玛咖保健食品和药品的研发提供有益的借鉴和思路。

关键词：玛咖玛咖酰胺保健食品

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丙型肝炎病毒入胞抑制剂的研究进展

病毒学报 2015年第1期31卷 97-105页

作者：曾文婷卢雪梅汪洁金小宝朱家勇南方医科大学广州510515 广东药学院基础学院药用生物活性物质研究所广州510006 广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006

丙肝感染是全球性的公共卫生问题之一,目前尚无预防丙肝病毒感染的疫苗,联合应用靶向丙肝不同复制阶段的药物,即所谓的"鸡尾酒"疗法可能会有更好的疗效。丙肝病毒进入宿主细胞的过程是药物干预的重要环节,这个过程是由丙肝病毒的包膜蛋... 详细信息

丙肝感染是全球性的公共卫生问题之一,目前尚无预防丙肝病毒感染的疫苗,联合应用靶向丙肝不同复制阶段的药物,即所谓的"鸡尾酒"疗法可能会有更好的疗效。丙肝病毒进入宿主细胞的过程是药物干预的重要环节,这个过程是由丙肝病毒的包膜蛋白与宿主因子作用介导的,其中病毒的包膜蛋白包括E1、E2,宿主因子包括硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS)、膜蛋白CD81、B族I型清道夫受体(Scavenger receptor class B type I,SR-BI)、两种紧密连接蛋白Occludin(OCLD)和Claudin(CLDN)、低密度脂蛋白受体(Low densitity lipoprotein receptor,LDLR)、树突细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子(Dendritic cell-specific ICAM-3-grab-bing nonintegrin,DCSIGN)、肝/淋巴细胞特异性细胞间粘附分子-3-结合整合素分子(Liver/lymph node specific ICAM-3-grabbing integrin,L-SIGN)和转铁蛋白1受体(Transferrin receptor 1,TfR1)等。病毒的包膜蛋白和这些宿主因子都可以作为靶向丙肝入胞抑制剂的作用靶点,许多研究表明丙肝入胞抑制剂作为一种新颖和有发展前景的化合物与作用于复制阶段药物联合应用能够更有效的治疗丙肝。本文综述了自20世纪90年代以来发现的靶点和靶向丙肝病毒进入宿主细胞的化合物。

关键词：丙型肝炎病毒包膜蛋白宿主因子入胞抑制剂

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天蚕素类抗菌肽分子设计研究进展

中国生物工程杂志 2016年第2期36卷 96-100页

作者：巫春旭卢雪梅金小宝朱家勇广东药学院基础学院药用生物活性物质研究所广州510006 广东省生物活性药物研究重点实验室广州510006

天蚕素是一类由31~39个氨基酸残基组成的阳离子型线性α螺旋抗菌肽,具有抗细菌、抗真菌、抗病毒以及抑制肿瘤细胞等生物活性。天蚕素与传统抗生素作用机制不同,具有不易产生耐药性的特点,因此成为解决传统抗生素多重耐药性问题的一个新... 详细信息

天蚕素是一类由31~39个氨基酸残基组成的阳离子型线性α螺旋抗菌肽,具有抗细菌、抗真菌、抗病毒以及抑制肿瘤细胞等生物活性。天蚕素与传统抗生素作用机制不同,具有不易产生耐药性的特点,因此成为解决传统抗生素多重耐药性问题的一个新突破口。然而,天蚕素在抗菌活性、选择性、毒性以及稳定性等方面还存在诸多问题,并且天然天蚕素提取工艺复杂,成本较高,不适合大规模生产,其对细菌的高毒性也限制了原核工程菌的使用。近年来多肽分子设计的研究方法颇受青睐,为解决多肽物质诸多问题开辟了新的途径。针对天蚕素类抗菌肽研究过程中面临的主要问题综述了其分子设计的研究进展。

关键词：抗菌肽天蚕素抗菌活性分子设计

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人源抗菌肽LL-37的原核表达及活性鉴定

生物技术 2012年第1期22卷 18-22页

作者：丁静沈娟朱家勇金小宝卢雪梅梅寒芳李小波广东药学院药用生物活性物质研究所广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006

目的:实现大肠杆菌高效可溶表达人源抗菌肽LL-37。方法:LL-37基因克隆至原核载体pET32a,于大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。运用相关生物信息学软件分析重组蛋白Trx-LL-37的理化性质、亲/疏水性、蛋白质二级结构及其可溶表达概率。实验还... 详细信息

目的:实现大肠杆菌高效可溶表达人源抗菌肽LL-37。方法:LL-37基因克隆至原核载体pET32a,于大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。运用相关生物信息学软件分析重组蛋白Trx-LL-37的理化性质、亲/疏水性、蛋白质二级结构及其可溶表达概率。实验还考察了不同诱导温度对重组蛋白可溶表达比例的影响。结果:生物信息学分析显示,Trx-LL-37分子量21.5kD,理论等电点6.3,物理性质稳定,二级结构简单,具有可溶表达倾向。重组蛋白最佳诱导温度为17℃,与37℃相比,可溶表达比例由37.2%提高至50.2%,并且总表达量也提高了5%左右。抑菌结果显示纯化产物对多种常见细菌的生长具有抑制作用。结论:可采用融合方式通过原核系统高效可溶表达LL-37,为LL-37的功能研究打下基础。

关键词：人源抗菌肽LL-37 生物信息学分析原核表达低温诱导抑菌活性

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人溶菌酶基因的克隆和生物信息学分析

生物技术 2010年第6期20卷 26-29页

作者：卢雪梅金小宝朱家勇沈娟梅寒芳马艳肖明珠褚夫江广东药学院药用生物活性物质研究所广东省生物活性药物研究重点实验室广东广州510006

目的:克隆人溶菌酶基因并进行生物信息学分析及构建其原核表达载体。方法:采用RT-PCR法扩增人溶菌酶基因,运用相关生物信息学软件对其理化性质、疏/亲水性、功能结构域及蛋白质二级结构等进行分析。将该基因克隆入载体pET32a,PCR、双酶... 详细信息

目的:克隆人溶菌酶基因并进行生物信息学分析及构建其原核表达载体。方法:采用RT-PCR法扩增人溶菌酶基因,运用相关生物信息学软件对其理化性质、疏/亲水性、功能结构域及蛋白质二级结构等进行分析。将该基因克隆入载体pET32a,PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定。结果:获得约400 bp的人溶菌酶基因,其序列与GenBank中公布序列完全一致。生物信息学分析显示人溶菌酶基因编码130个氨基酸,分子量为14.7 kDa,理论等电点为9.28,含有一个功能结构域,二级结构主要由α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角组成。经PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定,表明重组表达质粒构建成功。结论:该基因的克隆、生物信息学分析及原核表达质粒的构建为进一步研究其功能奠定了基础。

关键词：人溶菌酶克隆生物信息学分析原核表达载体